[整理]1实验一培养基的制备和灭菌
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1实验一培养基的制备和灭菌实验一培养基的制备和灭菌一、实验目的(一)熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。
(二)掌握培养基和无菌水的制备方法。
(三)掌握高压蒸汽灭菌技术。
二、基本原理培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质用人工方法配制而成的基质。
其中含有水分、碳水化合物、含氮化合物、无机盐及各种必要的维生素。
培养基可以为微生物的生长提供能源、组成菌体细胞的原料以及调节代谢活动。
由于不同微生物营养类型不同，对营养物质的要求也各不相同，因此，需要配制不同种类的培养基。
一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基（或麦芽糖、蛋白胨培养基）。
培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的 pH范围，如，细菌培养基中性偏碱、放线菌培养基偏碱、霉菌、酵母菌培养基偏酸。
根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入0.5~2.0 %的琼脂，半固体加入0.3~0.5 %琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。
培养基的种类很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同。
例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽，关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
实验一 培养基的配制与灭菌
铁盐
有机物质 2,4-D
200倍液
100倍液 1.0 mg/ml
5 ml
10ml 1ml
——
5 ml
10ml ——
5 ml
10ml 1ml
NAA
KT 蔗糖
1.0 mg/ml
1.0 mg/ml 30 g
0.2ml
1.0ml 30 g
——
—— 30 g
0.1ml 30 g
琼脂
pH值
8g
5.8
8g
5.8
8g
五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题 1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱 导和培养的培养基（MS1），按MS配方（Murashige and Skoog, 1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。 2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪 些事项？
药品名称
母液倍或母 液浓度 （mg/ml）
配制1 L培养基 配制0.25 L培养基所需母液量(ml) 所需母液量(ml) 或质量（g） 或直接称量量（g） MS 1 MS 2 MS 3
大量元素 微量元素 铁盐 有机物质 2,4-D NAA KT 蔗糖 琼脂 pH值
10倍液 100倍液 200倍液 100倍液 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 30 g 8g 5.8
5.8
——
5.8
1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表 格内配方加入各种母液及激素。 2）加入蔗糖30g，待蔗糖溶解后（可搅拌）加水定容至1L。 3）调节PH值，用酸度计测量PH值至5.8，常用1mol/l的HCl或 NaOH调整。 4）在MS1和MS2中加入琼脂8g，加热溶解，溶解过程中不断 搅拌，加热时烧杯口上盖上锡箔纸，防止水分过度蒸发。 5）分装：将配好的培养基及时分装到小三角瓶中，防止凝固 ，每瓶约30ml-40ml（约覆盖瓶底），分装时不要沾壁口。 6）封口：用封口膜将将三角瓶封口。
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
实验一 培养基的制备与灭菌
实验一培养基的制备与灭菌一、实验目的1. 了解配制培养基的一般方法和步骤;掌握牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基的制备方法。
2. 了解灭菌的原理，掌握高压蒸气灭菌的操作方法。
二、实验器材1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;葡萄糖(蔗糖);琼脂;1N NaOH;1N HCl等。
2. 仪器及其他:试管;锥形瓶;量杯;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或台秤;马铃薯;电炉;铝锅;灭菌锅等。
三、实验方法(一)配制培养基的基本过程:(1)称量:按照培养基配方，称取各种原料放于锅中;(2)溶解:锅中加入所需水量(自来水)，加热溶解。
要不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分;(3)调pH值:按配方要求调节;(4)过滤:用过滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求，此步可以省去。
(5)分装:按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:斜面培养基装入的培养基约为试管高度的l/5,1/4，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
(6)加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。
制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可以用折叠卷塞法制作棉塞(见图)。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，以瓶、管不下落为准。
棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。
如制作时不慎沾上培养基则不可再用。
(7)包扎:加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中，则应以7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。
然后用笔注明培养基名称、组别、日期。
实验一、培养基制备与消毒灭菌资料
培养基
（2）半固体培养基 加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5% 作用：观察细菌的运动状况。
（3）液体培养基 不加凝固剂 用于发酵业。液体培养。
（1）基础培养基
概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。 用于普通微生物培养。
细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。 真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。
消毒与灭菌
消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病 原微生物）。
灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。
一、加热高温灭菌
消毒与灭菌
1.干热灭菌
类
▲火焰烧灼灭菌
▲热空气灭菌
2.湿热灭菌
▲常压蒸汽灭菌
▲高压蒸汽灭菌
型
▲煮沸法灭菌
▲超高温灭菌
二、紫外线灭菌
三、过滤灭菌
四、化学药剂的消毒与灭菌
消毒与灭菌
配制原则
根据营养不同配制不同培养基 注意各种营养物质的浓度及配比 调节适宜的pH值 考虑加生长因子 培养基应物美价廉 灭菌处理
培养基
培养基分类： 1 根据化学组成分类
（1）天然培养基 （2）合成培养基 （3）半合成培养基
培养基
（1）天然培养基：
完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定。 如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。 酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。 优点：配制方便，成本较低，营养丰富。生产上用 缺点：成分不确定。
利用温度的灭菌方法
消毒与灭菌
高温灭菌：蛋白质凝固变性，酶失活。
干热灭菌
火焰灭菌
高 温
烘箱内干燥热空气灭菌
灭
菌
巴斯德消毒法
湿热灭菌
间歇灭菌法 高压蒸汽灭菌法
1 干热灭菌(dry heat sterilization)
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。
本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。
一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。
本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。
1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。
首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。
然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。
最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。
2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。
首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。
然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。
接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。
最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。
二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。
1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。
将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。
加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。
待培养基冷却后，即可进行细菌接种。
2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。
将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。
然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。
待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
实验一培养基的制备和灭菌
实验一培养基的制备和灭菌一、目的要求1 掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2 学习高压灭菌锅的操作方法。
二、基本原理乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制；由于辐射能使空气中的氧电离成[O]再使O2氧化生成臭氧O3或使水H2O氧化生成过氧化氢H2O2，O3和H2O2均有杀菌作用。
紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱的空气及物体表面的灭菌。
三、器材天平，高压蒸汽灭菌锅，电烘箱，1mol/L NaOH,1mol/L HCl，培养皿，试管，吸管，酒精灯，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，接种环，牛角匙，pH试纸(pH5.5—9.0)，棉花，纱布，牛皮纸，记号笔，麻绳。
四、操作步骤1．称量（1）乳糖蛋白胨培养液：10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL（2）细菌培养液：蛋白胨10g/L；酵母5g/L；氯化钠10g/L；加蒸馏水定容至1L。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。
实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。
将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。
灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，保证培养基无菌，为微生物实验提供良好的生长条件。
一、培养基的制备。
1.1 培养基的组成。
培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，通常包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
根据不同微生物的需求，培养基的组成也有所不同。
1.2 制备步骤。
（1）称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等原料；（2）加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（3）调节pH值，通常为7.0-7.2；（4）分装至试管或培养皿中，加入琼脂（如需要固体培养基）；（5）高压蒸汽灭菌15分钟。
二、培养基的灭菌实验。
2.1 灭菌方法。
培养基的灭菌是为了保证培养基中无菌，通常采用高压蒸汽灭菌法。
在高压下，微生物及其孢子、病毒等能够被有效杀灭。
2.2 实验步骤。
（1）将制备好的培养基分装至试管或培养皿中；（2）密封好容器，放入高压灭菌锅中；（3）加水至适当高度，密封锅盖；（4）加热至121摄氏度，压力达到1.05kg/cm2后开始计时，持续15分钟；（5）关火，等待冷却后取出培养基。
实验结果，经过高压蒸汽灭菌处理后，培养基中无任何微生物生长。
证明培养基已达到无菌状态，可以用于微生物的培养和实验。
结论，通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物实验提供了良好的条件。
同时，也加深了对无菌技术的理解和应用。
参考文献：[1] 陈华. 微生物学实验指导. 北京，高等教育出版社, 2015.[2] 王明. 实验室微生物学. 上海，上海科学技术出版社, 2018.以上为培养基的制备与灭菌实验报告。
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培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。
一、培养基的制备。
1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。
2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。
3.加入适量琼脂，搅拌均匀。
4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。
二、培养基的灭菌。
1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。
2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。
3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。
4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。
5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。
三、实验结果。
1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。
2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。
3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。
4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。
四、实验结论。
本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。
培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。
通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。
五、实验注意事项。
1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。
2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。
3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。
4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。
六、实验延伸。
在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。
总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。
培养基的制备
3、调pH值 用精密pH试纸（或pH电位计、氢 pH值 离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不 符合需要，可用1mol/LNaOH或1mol/L NaCl进 行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
4、过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好 过滤 的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成 六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱 形，铺在漏斗上过滤。没有悬浮物的不用过 滤。
1、称量 称量 除琼脂外，按培养基配方比例依次准确地 称取药品，放入适当大小的烧杯中。蛋白胨 极易吸水，称量时动作要快。
2、加热溶解 向烧杯内加入所需水量的一部 分，放到电炉上加热，同时不断进行搅拌， 使其溶解，如配制固体培养基则向溶液中加 入所需的碎琼脂，在电炉上一面加热一面搅 拌，直到琼脂完全融化后才能停止搅拌，并 加入热水补足水分。
9、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50 ℃左右，将试管棉塞 左右， 端搁置在玻璃棒上， 端搁置在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管 总长度的一半为宜。 总长度的一半为宜。
10、无菌检验 将灭菌的培养基放入37 ℃的温室中培养24－48h， 以检验灭菌是否彻底。
思考题
1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何 检查灭菌后的培养菌是无菌的？ 2、加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力 表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温 度？为什么？ 3、管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或 棉皮塞代替？为什么？
5、分装 将培养基趁热加至漏 分装 斗上进行分装。如果要制作斜 面培养基，须将培养基分装于 试管中，装试管时，装量不要 超过试管的1/5；如果要制作 平板培养基或液体、半固体培 养基，则须将培养基分装于三 角瓶内，一般以其容积的1/2 为宜。注意管口不要沾上培养 基。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的1、了解培养基的制备原理和方法。
2、掌握培养基的灭菌技术和操作流程。
3、熟悉无菌操作的基本要求和注意事项。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养目的和微生物的特点来选择和配制合适的培养基。
培养基的制备一般包括以下几个步骤：计算、称量、溶解、调节pH 值、分装、包扎。
灭菌是指用物理或化学方法杀死或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的过程。
常用的灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌等。
本实验采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
三、实验材料与设备1、实验材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂1mol/L NaOH 溶液1mol/L HCl 溶液蒸馏水2、实验设备电子天平高压蒸汽灭菌锅电炉移液管锥形瓶培养皿玻璃棒pH 试纸四、实验步骤1、培养基的制备计算：根据配方计算所需各种成分的用量。
称量：用电子天平准确称量各种成分。
溶解：将称量好的成分依次加入到一定量的蒸馏水中，在电炉上加热搅拌，使其完全溶解。
调节 pH 值：用 1mol/L NaOH 溶液或 1mol/L HCl 溶液调节培养基的 pH 值至所需值（本实验中为 72-74）。
分装：将配制好的培养基趁热分装到锥形瓶和培养皿中。
锥形瓶的装量一般不超过其容积的 2/3，培养皿的装量一般为 15-20ml。
包扎：在锥形瓶口和培养皿盖上包上牛皮纸或报纸，用绳子扎紧。
2、灭菌检查灭菌锅的水位和安全阀，确保正常。
将包扎好的培养基放入灭菌锅中，注意不要摆放过于紧密。
关闭灭菌锅的盖子，拧紧螺丝。
设定灭菌条件：一般为 121℃，15-20min。
启动灭菌锅，开始灭菌。
灭菌结束后，待压力降至零，打开灭菌锅的盖子，取出培养基。
3、无菌检查将灭菌后的培养基放置在 37℃的恒温培养箱中培养 24-48h，检查有无杂菌生长。
五、实验结果与分析1、培养基的制备成功按照配方配制出了所需的培养基，外观呈均匀的液体状态，无沉淀和浑浊现象。
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实验一培养基的制备和灭菌
一、实验目的
(一)熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。
(二)掌握培养基和无菌水的制备方法。
(三)掌握高压蒸汽灭菌技术。
二、基本原理
培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质用人工方法配制而成的基质。
其中含有水分、碳水化合物、含氮化合物、无机盐及各种必要的维生素。
培养基可以为微生物的生长提供能源、组成菌体细胞的原料以及调节代谢活动。
由于不同微生物营养类型不同，对营养物质的要求也各不相同，因此，需要配制不同种类的培养基。
一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基（或麦芽糖、蛋白胨培养基）。
培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如，细菌培养基中性偏碱、放线菌培养基偏碱、霉菌、酵母菌培养基偏酸。
根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入
0.5~2.0 %的琼脂，半固体加入0.3~0.5 %琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。
培养基的种类很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同。
例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧地将锅内冷空气从排气阀中
驱尽，关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
三、实验器材
(一)药品：待配各种培养基的组成成分（牛肉膏、蛋白胨、NaCl）、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
(二)设备：高压蒸汽灭菌锅、烘箱、冰箱、电炉等。
(三)仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、玻璃棒、试管、烧杯、瓷缸、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(四)其他物品：药匙、铁架台、漏斗架、止水夹、称量纸、pH试纸、记号
笔、标签纸、纱布、棉花、牛皮纸、线绳、剪刀、镊子、白瓷盘等。
四、实验步骤
(一)玻璃器皿的洗涤和包装
1.玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装
(1)培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸或牛皮纸将几套培养皿包成一包。
(2)移液管的包扎：在移液管的上端用细铁丝塞入一小段棉花，塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
实验图-3 移液管的包扎
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧。
在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
(二)液体及固体培养基的配制过程
1.液体培养基配制
(1)称量：一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量．然后进行准确称量。
(2)溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。
(3)定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。
如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。
(4)调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。
如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。
调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。
(5)过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。
一般无特殊要求时，此步可省去。
2.固体培养基的配制
配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加入，并用玻璃棒不断搅拌，以免糊底烧焦。
继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。
(三)棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎
为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。
通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。
1.试管棉塞的制作
制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。
棉塞的2/3在试管内，1/3在试管外。
目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。
实验图-4 棉塞的制备实验图-5 正确与不正确的棉塞将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。
用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
2.三角瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。
有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。
在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。
(四)培养基的灭菌
培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行高压蒸汽灭
菌。
(五)斜面和平板的制作
1.斜面的制作
将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。
斜面长度不超过试管长度l/2为宜。
如制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。
2.平板的制作
将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。
温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应在火旁进行，右手拿三角瓶的底部或试管，左手拿培养皿，同时用小指和手掌将三角瓶棉塞打开，灼烧瓶口，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开一缝至瓶口正好伸入，将已熔化的培养基10~15mL倒入无菌平皿，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。
(六)培养基的灭菌检查
灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。
最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无菌后方可使用。
(七)无菌水的制备
在每个250mL的三角瓶内装100mL的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。
在每支试管内装4.5mL蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。
再在棉塞上包上一张牛皮纸，高
压蒸汽灭菌，0.1MPa灭菌20~30min。
1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；
2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；
2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；
4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，半固体分装试管一般以管高度三分之一为宜，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；
5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。
五、实验报告
(一)简述移液管和培养皿的包扎注意事项。
(二)简述配制培养基的基本步骤及注意事项。
(三)为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞(硅胶塞)才能使用？
(四)配制培养基时为什么要调节pH？。