高效液相色谱串联质谱法学习交流
高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪讲解
三重四级杆的概念
• 四极杆是质量分析器的一种三重四极杆也 就是一般的LC/MS/MS,一个MS就是一个四 极杆，但是第二个四极杆一般作碰撞室， 所以只有两个MS做质量分析器，即只有 MS/MS,但是一般都叫三重四极杆。当然碰 撞室也不一定是四极杆，也有六极杆的碰 撞室的，但是大家都叫习惯了
案例（目前还在探索过程中）
大气压离子化接口（API）
（1）电喷雾电离（ESI） （2）大气压化学离子化（APCI)
（1）电喷雾电离（EPI）
流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子
电喷雾电离（ ESI）的特点
➢ 通常小分子得到[M+H]+ 、[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子； ➢ 最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接
检出限的确定
配制混标溶液，在夜质连用仪器上跑出 图谱后，观察其信号和噪音的比(s/n)， 然后不断的稀释数倍，直至其很小为止 （结合色谱图综合分析）。
标准曲线的绘制
配置储备液 用储备液配置标准物质绘制峰面积和质
量浓度的标准曲线（可是由于实验仪器 出现故障实验告一段落，并未开始做）
后续工作
比较在地下水的情况下和超纯水的情况 下，混标中各物质峰面积的百分比，由 数据得出物质在超纯水在地下水中的峰 面积大约是超纯水中的98%左右，说明 地下中基质效应无明显影响
源参数的优化
考虑电喷雾电离中参数CUR,IS,TEM,GS1， GS20，依次调节发现CUR=20，IS=4500，TEM=550，GS1=50，GS2=50时 峰高最高
样品 高效液相色 谱仪
接口
真空系统
质量分析器
高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题
高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索一、实验目的1、了解LC-MS的主要构造和基本原理；2、学习LC-MS的基本操作方法；3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。
二、实验原理1、液质基本原理及模式介绍液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。
但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。
LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。
现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。
质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。
（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。
实例：（Q1 = 100-259m/z）（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。
主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。
实例：（Q1 = 259m/z）本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：质量分析器），由于多了Q2、Q3的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：（三）子离子扫描模式（Product Scan）：第一个质量分析器固定扫描电压，选择某一质量离子（母离子）进入碰撞室，发生碰撞解离产生碎片离子，第二个质量分析器进行全扫描，得到的所有碎片离子都是由选定的母离子产生的子离子，没有其它的干扰。
高效液相色谱质谱联用法实验报告
高效液相色谱质谱联用法实验报告
实验背景
高效液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种结合了高效液相色
谱（HPLC）和质谱（MS）技术的分析方法。
HPLC用于分离混合
物中的化合物，而质谱用于对这些化合物进行鉴定和定量分析。
实验目的
本实验旨在使用LC-MS方法分析给定样品中的化合物，并确
定其组成和含量。
实验步骤
1. 样品准备：将给定样品按照实验要求进行前处理，并将其溶
解于适当的溶剂中。
2. 校准仪器：使用标准品进行仪器的校准，确保LC-MS系统
正常运行，并设定适当的参数。
3. 样品进样：将样品溶液加入进样器中，并设置合适的进样量。
4. HPLC分离：使用合适的色谱柱和流动相进行HPLC分离，
使样品中的化合物逐一分离。
5. MS检测：将HPLC分离后的化合物进入质谱仪中进行检测，获取质谱图谱和相关数据。
6. 数据分析：根据质谱数据进行化合物的鉴定和定量分析。
实验结果
通过LC-MS方法，成功分离和鉴定了样品中的多个化合物。
经定量分析，确定了各化合物的含量范围和相对含量比例。
结论
LC-MS方法是一种可靠和高效的分析技术，在化合物分离和
鉴定方面具有重要应用价值。
通过本实验的结果，我们对所研究样
品的化学组成和含量有了更深入的了解，并为进一步研究提供了参
考依据。
延伸研究
在今后的研究中，可以进一步探索LC-MS方法在不同样品和
化合物类别中的应用，以及进一步提高分析的准确性和灵敏度。
同时，结合其他分析技术，如质谱成像等，可以开展更加全面和深入
的分析研究。
高效液相色谱串联质谱法学习交流
2、Agilent 6420 液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
脱气 真空泵
自动进样器
色谱柱
学习过程中主要操作和使用的仪器设备有 高效液相色谱串联质谱仪；液相色谱法；凝 胶色谱渗透净化仪；氮吹仪；旋转蒸发仪； 固相萃取装置，详细介绍如下：
1、Waters ACQUITY UPLC 沃特世超高效液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
紫外 TUV Detector
自动进样器 Sample Manager
18932.22-2003 8、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串
联质谱法 （质控-3个混标）------ GB/T 22992-2008 9、婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件（含第1号、第2号和第3号修改单，已作废） GB 10767-1997 （维生素D测定 D2、D3） 10、动物源性食品中11种激素残留检测 液相色谱-串联质谱法----------农业部1031号公告-1-2008 11、粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（凝胶色谱渗透仪净化）--GB/T 20770-2008 12、动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法---------GB/T 21312-2007 13、食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱 法（地方标准） DB31/ 2010-2012
学习提纲
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）★ ★ ★ 第二部分：微生物实验室（5.18-5.29） 第三部分：理化实验室（6.1-6.12） 第四部分：仪器操作★ ★ ★ 第五部分：资料收集★ ★ 第六部分：学习总结、心得体会
高效液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用
高效液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用随着现代医学的发展，药物的临床应用逐渐得到扩大。
为了确保药物的安全性和有效性，药物分析技术得到了越来越广泛的应用。
其中，高效液相色谱质谱联用技术被认为是一种非常有效的药物分析方法，它不仅解决了传统色谱分离技术的局限性，还添加了质谱检测的高灵敏度和特异性，成功地推动了药物分析技术的发展。
一、高效液相色谱质谱联用技术的原理1、高效液相色谱技术高效液相色谱是一种液态色谱技术，它可以将化合物从混合样品中分离出来，并通过化学吸附、亲和性、离子交换等不同的机制得到分离。
高效液相色谱还可以通过对流相与静相的优化，以及增加柱温、压力等参数的控制，从而显著提高色谱的分辨率和速度。
2、质谱技术质谱技术是一种非常高灵敏度的分析方法，它可以对样品中的化合物进行定性和定量分析。
质谱技术通常通过分子质量、碎片质量比和分子离子的内部结构等多种特征，确定分析物的化学结构和分子组成。
3、高效液相色谱质谱联用技术高效液相色谱质谱联用技术结合了高效液相色谱和质谱技术的优点。
通过将这两种技术结合起来，可以使用高效液相色谱分离化合物，并将溶液中的样品引入到质谱仪中进行检测。
在此过程中，先通过一个离子源将分离后的化合物转化为离子，然后在分析器区域将离子碎片化，最后将质谱峰与物质的质谱库进行比对，确定分析物的化学结构和分子组成。
二、1、药物结构分析高效液相色谱质谱联用技术可以用于药物结构的分析和鉴定。
在用药物分析中，“药物认证”是很重要的一环，需要对药物的化学结构进行检测，以确保药物的质量和安全性。
高效液相色谱质谱联用技术可以对药物的分子式、分子量、结构等属性进行检测，进而为“药物认证”给出准确的分析结果。
2、新药成分分析高效液相色谱质谱联用技术还可以应用于新药成分的分析。
在药物研发过程中，新药的结构和组成是需要被研究和确定的。
采用高效液相色谱质谱联用技术可以毫不费力地确定药物成分中存在的组分和精确的化学结构。
浅析高效液相色谱-_串联质谱法测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素
近年，酵素产品深受广大消费者的追捧，《 酵素产品分类导则》（QB/T 5324—2018）规定，以动物、植物、菌类等为原料，经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分的产品即为酵素。
酵素果冻口感好、体积小，具有促进肠道蠕动、改善肠道环境、改善便秘、降脂减肥等功能，受到消费者青睐[1]。
目前，市面上酵素果冻多为复合原料，高达10多种。
部分不法商家在生产过程中采用障眼法，利用决明子、芦荟等本身doi:10.16736/41-1434/ts.2023.22.067基金项目：赞宇科研基金项目（2023）。
作者简介：李远飞（1984—），男，大专，工程师，研究方向为食品安全检测。
通信作者：郑静（1990—），女，本科，工程师，研究方向为食品和农产品质量安全检测。
E -mail：*********************。
浅析高效液相色谱-串联质谱法测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素Determination of Emodin and Aloe-emodin Amounts in Enzyme Jelly by High Performance LiquidChromatography-tandem Mass Spectrometry ◎ 李远飞1,2，郑 静1，贺 璐1，魏寒桥1，林晓敏1（1.浙江宏正检测有限公司，浙江 宁波 315100；2.赞宇科技集团股份有限公司，浙江 杭州 310009）LI Yuanfei 1,2, ZHENG Jing 1, HE Lu 1,WEI Hanqiao 1, LIN Xiaomin 1 (1.Zhejiang Hongzheng Testing Co., Ltd., Ningbo 315100, China；2.Zanyu Technology Group Co., Ltd., Hangzhou 310009, China)摘 要：本文建立了高效液相色谱-串联质谱法，测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素的分析方法。
超高效液相色谱串联质谱法
超高效液相色谱串联质谱法
超高效液相色谱串联质谱法（Ultra High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，UHPLC-MS/MS）是一种结合了超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC）和串联质谱（Tandem Mass Spectrometry，MS/MS）的分析方法。
UHPLC是一种高效的液相色谱技术，它利用更小颗粒的固定
相和更高的操作压力，能够获得更高的分离效率和分析速度。
UHPLC能够提供更好的分离能力和更短的分析时间，与传统
的高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）相比，具有更高的灵敏度和解析度。
MS/MS是一种使用两个串联的质谱仪进行分析的方法。
它包
括两个主要的步骤：一是通过质谱仪进行初级质谱（MS）扫描，将样品中的化合物分离出来；二是选择其中一个离子进行碎裂，生成离子碎片，然后通过再次质谱扫描（MS/MS）来
检测和鉴定这些离子碎片。
MS/MS能够提供更丰富的质谱信息，帮助分析人员准确鉴定和定量分析样品中的目标分子。
UHPLC-MS/MS的组合可以充分发挥两种技术的优势。
UHPLC提供了高分离效率和分析速度，能够有效地分离复杂
的样品基质，减少干扰物对目标分析物的影响；MS/MS则可
以提供更准确的鉴定和定量结果，提高分析的灵敏度和选择性。
因此，UHPLC-MS/MS在生物医学、环境监测、食品安全等领域得到了广泛的应用。
超高效液相色谱-串联质谱使用流程
超高效液相色谱-串联质谱使用流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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高效液相色谱技术与质谱联用技术的应用
高效液相色谱技术与质谱联用技术的应用一、高效液相色谱技术简介高效液相色谱技术（HPLC）是一种分离化合物的方法，它利用不同化合物在流动相和固定相中的相互作用差异，将物质分离。
HPLC技术的发展历史可以追溯到20世纪60年代，它是色谱技术发展的一个重要分支。
该技术主要用于生物化学、分析化学、医药、食品及石油等行业领域。
HPLC技术具有高效率、精确度、灵敏度和选择性等优点。
它可以对不同的化合物进行快速分离、定量测定和纯化，是现代化学及生命科学研究中不可或缺的重要技术手段。
二、质谱联用技术的原理质谱联用技术是将HPLC技术与质谱技术结合使用，可以在分离化合物的同时获得高精度、高分辨率的质谱数据。
该技术的原理是在分离某一化合物时，利用HPLC技术将化合物输送至质谱仪中，通过对化合物进行分子离子化，然后用质谱仪进行扫描鉴定和分析。
质谱联用技术不仅提高了分析测试的分辨率和可靠性，而且还可以帮助化学家了解分子结构、反应机理等重要信息。
三、质谱联用技术在实际应用中的作用1.生物化学与医学领域质谱联用技术在生物化学与医学领域得到广泛应用，可以帮助研究人员确定药物代谢物的结构，研究蛋白质、核酸等生物分子结构，以及进行药物筛选和医学诊断等工作。
例如，在药物代谢研究中，常用质谱联用技术来分析药物代谢物的结构和定量测定各种代谢产物的比例，以帮助研究人员深入了解药物代谢机理。
2.环保领域质谱联用技术在环保领域的应用也十分广泛，可以用于鉴定和测定环境中污染物、有毒物质和废弃物中的化学物质种类和含量等，可以有效提高对环境中化学物质的监测和治理水平。
例如，在水产、畜牧等养殖行业中，质谱联用技术可用于鉴定和测定养殖废物中残留的激素和抗生素种类和含量等，以便进行环境监测和治理。
3.食品行业质谱联用技术在食品行业的应用主要是用于检测食品中的添加剂、农药残留、重金属等有害成分，以保证食品质量和食品安全。
例如，在农药残留检测中，常用质谱联用技术来分析农药残留物的结构和定量测定各种残留物的比例，以便更好地监测和控制食品安全问题。
高效液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用
2、高效液相色谱质谱联用技术 在药物分析中的应用
（1）药品质量检测：高效液相色谱质谱联用技术可用于对新药、仿制药以及 中药的质量进行全面检测，包括对药物中各种成分的定性定量分析、立体构型 测定等。此外，该技术还可用于筛选和优化药物候选物，提高药物研发效率。
（2）药品浓度测量：在临床药物治疗中，准确的药物浓度对于治疗效果至关 重要。高效液相色谱质谱联用技术可实现对患者血清、尿液等生物样本中药物 浓度的精确测定，为临床医生提供准确的药物治疗方案依据。
3、药物代谢研究
液相色谱质谱联用技术可以用于药物代谢的研究。通过对药物在体内的代谢过 程进行监测，可以了解药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，有助于药 物的优化设计和新药研发。
四、结论
液相色谱质谱联用技术在药物分析中具有广泛的应用前景。它不仅可以用于药 物成分的分析、质量控制和代谢研究，还可以为新药研发提供有力的技术支持。 随着技术的不断发展和完善，液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用将会 越来越广泛。
（2）上机分离：将处理后的样品通过输液泵注入色谱柱，利用高压液体流将 样品分离成不同组分；
（3）检测：将分离后的组分进入质谱仪，通过离子化、质量分析和检测器进 行检测。关键技术：高效液相色谱质谱联用技术的关键技术包括色谱分离和质 谱检测。
（1）色谱分离：通过选择合适的色谱柱填料和流动相组成，优化色谱分离条 件，提高目标物与杂质的分离效果；
4、药物代谢产物鉴定：UPLC-MS还可以用于药物代谢产物的鉴定。通过分析 药物在生物体内的代谢产物，可以了解药物的代谢途径和机制，为药物的设计 和优化提供参考。
五、总结
超高效液相色谱质谱联用技术是一种强大的分析工具，它在药物分析领域的应 用已经越来越广泛。随着科技的不断进步，我们有理由相信，这种技术将在未 来的药物分析中发挥更大的作用，为药物研发、质量控制以及临床应用提供更 多的支持。
高效液相色谱联用质谱在药物分析中的应用
高效液相色谱联用质谱在药物分析中的应用一、引言随着现代科学技术的发展，药物分析领域对于快速、准确、灵敏的分析方法提出了更高的要求。
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）联用质谱（Mass Spectrometry，MS）的出现，使得药物分析中的定性与定量分析取得了显著的突破。
本文将探讨高效液相色谱联用质谱技术在药物分析中的应用。
二、高效液相色谱和质谱的原理及特点（此处可以分段分述高效液相色谱和质谱的原理及特点，要注意叙述顺序和连贯性）三、高效液相色谱联用质谱技术的优势高效液相色谱联用质谱技术综合了HPLC和MS的优势，在药物分析领域具有许多优势，主要包括：1. 高灵敏度：质谱技术具有非常高的灵敏度，可以检测到药物的微量水平，满足药物分析中对低浓度成分的需求。
2. 高选择性：HPLC可以通过选择合适的固定相、流动相和检测波长等条件，实现对于复杂药物体系的分离和检测，保证结果准确性和可靠性。
3. 多组分分析：HPLC可以同时检测多种成分，而质谱则能够给出这些组分的分子结构信息，实现高通量的快速分析。
4. 结构鉴定：质谱技术可以通过分析分子离子峰，得到化合物的分子量及碎片离子的质谱信息，从而进行化合物的结构鉴定。
5. 定性和定量分析：通过联用HPLC和MS，可以实现药物的定性和定量分析，为药物的研究和质量控制提供了强有力的手段。
四、高效液相色谱联用质谱在药物分析中的应用（此处可以分段论述不同药物分析实例，从药物名称、样品处理、分析条件、结果分析等方面进行叙述）五、高效液相色谱联用质谱技术的挑战和发展趋势（此处可以分段阐述高效液相色谱联用质谱技术存在的挑战和所面临的发展趋势，如分辨率的提高、质谱灵敏度的进一步提升、方法的自动化等）六、结论高效液相色谱联用质谱技术作为一种先进的分析技术，在药物分析中具有广泛的应用前景。
通过充分利用其高灵敏度、高选择性和多组分分析的优势，可以实现药物的快速、准确分析。
超高效液相色谱-质谱联用法
超高效液相色谱-质谱联用法（UHPLC-MS）是一种高分辨率、高灵敏度的分析技术，常用于生物化学、药物研发、环境分析等领域。
UHPLC-MS技术的基本原理是利用超高效液相色谱（UHPLC）分离化合物，然后将分离后的化合物送入质谱仪进行分析。
UHPLC-MS技术具有以下优点：
1. 分离效率高：UHPLC技术采用高效的分离机制，能够在较短时间内分离出复杂混合物中的化合物。
2. 分析灵敏度高：UHPLC-MS技术具有高灵敏度和高选择性，可以检测出低浓度的化合物。
3. 分析速度快：UHPLC-MS技术可以实现快速分析，一般只需要几分钟到几十分钟。
4. 分析范围广：UHPLC-MS技术可以用于分析各种化合物，包括天然产物、药物、环境污染物等。
UHPLC-MS技术的应用范围非常广泛，可以用于药物研发、生物化学、环境分析、食品安全等领域。
在药物研发领域，UHPLC-MS技术可以用于药物代谢产物的鉴定、定量分析、药物相互作用的研究等；在生物化学领域，UHPLC-MS技术可以用于蛋白质组学、代谢组学的研究；在环境分析领域，UHPLC-MS技术可以用于环境污染物的分析、生物标志物的鉴定等。
高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪讲解
源参数的优化
考虑电喷雾电离中参数CUR,IS,TEM,GS1， GS20，依次调节发现CUR=20，IS=4500，TEM=550，GS1=50，GS2=50时 峰高最高
改善样品分离和缩短分析周期
采取梯度洗脱的方法 不断的尝试设置不同的梯度发现在下面这个梯
度时分析周期较短，并且物质有较好的分离 0.01min 缓冲液b为0% 3.20min缓冲液b为0% 3.21min缓冲液b为20% 9.00min缓冲液b为20% 9.01min stop
考虑地下水基质效应的影响
•
高ห้องสมุดไป่ตู้敏度
• 一广：应用范围广。
• 与气相色谱法相比：高效液相色谱法不受 试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围 广
质谱法(MS)
• 质谱法(MS)：即用电场和磁场将运动 的离子按它们的质荷比分离后进行检 测的方法。
质谱技术
• 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源， 由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）
液相色谱——串联质谱法（HPLC-MS/MS) 同时测定地表水中的2,4-二氯酚，2,4,6-
三氯酚，五氯酚，苦味酸。
实验所需要的最佳条件
从以下几个方面来综合考虑 （1）缓冲溶液的选择 （2）缓冲溶液的PH （3）缓冲溶液和流动相甲醇比例的选择 （4）缓冲溶液的浓度
得出最佳的条件
经过不断的实验，和在电脑上观察苦味 酸，2,4-二氯酚，2,4,6-三氯酚，五氯酚 以及苦味酸的峰型并用积分工具得出峰 高峰宽和峰面积，最后发现采用80%的 甲醇与20%缓冲溶液（2mM乙酸铵 PH=4.00）
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机 (Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
高效液相色谱-串联质谱法
高效液相色谱-串联质谱法高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种现代化分析技术。
它结合了高效液相色谱（HPLC）和串联质谱（MS/MS）两种分析方法，能够快速、准确、灵敏地分析复杂的混合样品中的多种化合物。
HPLC-MS/MS技术的基本原理是将样品通过高效液相色谱进行分离，然后以极高的分辨率将分离后的化合物导入串联质谱分析仪中进行质谱检测和分析。
HPLC部分能够通过改变流速、温度、化合物间隔、载气、反应物、固相分离等方法来分离样品中的成分。
MS/MS 部分则能够通过改变离子源、离子传输、离子选择和离子检测等方式检测化合物。
具体来说，HPLC-MS/MS技术的实现过程如下：需要准备一定量的样品。
样品通常是一种混合物，需要进行分离和净化。
这可以通过一系列的化学方法和生物技术实现。
将样品注入到高效液相色谱仪中进行分离。
高效液相色谱仪通过改变环境条件可以分离出复杂混合物中的单个分量，比如改变洗脱剂的浓度、PH值、离子强度来调整样品中化合物的排列顺序。
高效液相色谱仪具有高速分离和高效洗脱的特点，具有处理大量和复杂样品的能力。
接着，通过HPLC输出的流缓和制备离子源，离子源生成的离子对化合物分子进行离子化。
这个过程利用化合物分子上的R基或者H+来形成游离气态的化合物离子。
然后，将产生的离子通过串接质谱进行分析。
在离子进入串联质谱仪的离子源之前，需要将它们选择性的分离为固定质量和电荷比的离子，这可以通过一系列的电子和电场进行控制来实现。
所得到的离子被送至陷入式离子阱，通过对离子的激发和断裂等过程，形成包含多种离子片段的离子质谱图谱。
这些离子片段遵循一定的质量电荷比的规律，可以通过特征峰和离子质量比等独特的质谱性质来鉴别。
将这些片段的数据输入到质谱数据库中，与已知化合物的质谱数据进行比对。
这样，就能够得到混合物中的每个化合物的特定质谱图谱，从而通过质量分析进行结构确认和鉴定。
HPLC-MS/MS技术的优点是明显的，该技术具有高效和灵敏的特点，能够分析非常低的浓度样品成分。
《液相色谱质谱联用》课件
ABCD
方法学验证
进行充分的方法学验证，确保实验结果的可靠性 和准确性。
应用拓展
积极探索液相色谱质谱联用技术在不同领域的应 用，拓宽其应用范围。
未来展望
技术革新
期待液相色谱质谱联用技术的进一步革 新，提高检测灵敏度、分辨率和通量。
组学研究
在生命科学领域，期待液相色谱质谱 联用技术在蛋白质组学、代谢组学等
调整质谱参数，如毛细管电压、碰撞能量等，以 提高待测物的检测灵敏度和选择性。
数据采集与分析
数据采集
01
按照实验预设的色谱和质谱条件进行数据采集，确保数据的准
确性和可靠性。
数据处理
02
对采集到的数据进行适当的处理，如基线校正、峰提取和定量
分析等。
结果分析
03
根据数据处理结果，进行定性、定量分析和误差评估，得出实
液相色谱质谱联用实验操作
样品前处理
样品收集
样品处理
确保样品收集的准确性和完整性，避 免样品污染或损失。
根据实验需求，对样品进行适当的稀 释、过滤、离心或萃取等预处理。
样品保存
选择适当的保存条件和方法，确保样 品在分析前不会变质或降解。
色谱条件设置
色谱柱选择
根据待测物的性质选择合适的色 谱柱类型和填料。
应用领域与优势
1. 高分离能力
液相色谱能够分离复杂混合物 中的各组分，质谱则可对离子 进行定性和定量分析。
3. 广泛应用
适用于多种类型的化合物，如 小分子、大分子、有机物、无 机物等。
应用领域
液相色谱质谱联用广泛应用于 药物开发、临床诊断、环境监 测、食品安全等领域。
2. 高灵敏度
可检测低浓度的化合物，适合 痕量分析。
药物分析中液相色谱质谱联用法的研究
药物分析中液相色谱质谱联用法的研究在药物研究和分析领域，液相色谱质谱联用法（LC-MS）被广泛应用于药物的定性和定量分析。
这种分析方法结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）的优势，不仅能够实现高灵敏度和选择性，还能够识别和鉴定药物成分。
本文将探讨液相色谱质谱联用法在药物分析中的重要作用以及其研究进展。
1. LC-MS原理及优势液相色谱质谱联用法是一种将液相色谱技术和质谱技术相结合的分析方法。
在这种方法中，样品首先经过液相色谱柱进行分离，然后进入质谱仪进行离子化和质谱分析。
该方法的原理基于质谱的分子识别能力和高效液相色谱的物质分离能力，能够快速、高效地分析复杂样品中的组分。
液相色谱质谱联用法具有以下优势：1.1 高灵敏度：质谱仪的灵敏度相比传统检测方法更高，可以检测到低浓度的化合物。
1.2 高选择性：质谱的分子特征识别能力可确保准确定量和鉴定目标化合物。
1.3 高分辨率：液相色谱对复杂样品中各成分进行有效分离，提供更好的分辨率。
1.4 宽线性范围：液相色谱质谱联用法适用于宽线性范围内的定量分析。
2. 液相色谱质谱联用法在药物分析中的应用液相色谱质谱联用法在药物分析中得到了广泛的应用。
其主要应用领域包括但不限于以下几个方面：2.1 药代动力学研究液相色谱质谱联用法可以用于药物在体内的代谢动力学研究。
通过分析药物及其代谢产物在生物体内的变化，可以揭示药物的代谢途径、药物代谢酶的作用机制以及药物的消除动力学等信息。
2.2 药物残留分析液相色谱质谱联用法在农产品和食品安全领域有着广泛的应用，可以用于检测药物和农药在食物中的残留量。
通过这种方法，可以准确测定食品中的残留药物浓度，以保障食品的质量和安全。
2.3 新药研发在新药研发的过程中，药物的分析方法是十分关键的。
液相色谱质谱联用法可以用于新药的分子结构分析、药代动力学研究、代谢产物的鉴定等方面。
这种方法不仅可以提高药物研发的效率，还可以为新药的安全性评价提供重要数据。
高效液相色谱串联离子阱高分辨质谱
高效液相色谱串联离子阱高分辨质谱高效液相色谱串联离子阱高分辨质谱（HPLC-MS/MS）是一种集成了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）技术的分析方法，在生命科学、药学和环境科学等领域广泛应用。
它能够实现高灵敏度、高选择性和高分辨率的同时，还能够同时检测多种物质。
本文将详细介绍HPLC-MS/MS的原理、应用、优缺点等方面的内容。
一、HPLC-MS/MS的原理HPLC-MS/MS是将色谱和质谱技术相结合的一种分析方法，在这个方法中，色谱技术用于分离混合样品成分，而质谱技术则用于检测和分析分离后的各个组分，以确定它们的相对浓度和分子结构。
HPLC-MS/MS的整个过程可以被分为三个部分：1. 采样和前处理样品通常是通过提取、化学处理或其他方法从溶液、固体或气体中得到的。
在进行色谱分析之前，还需要进行预处理操作，如过滤、稀释或净化，以确保获得准确可靠的数据。
2. 色谱分离色谱分离是HPLC-MS/MS的关键过程之一，它可以将混合物中的不同化合物分离开来，并且控制它们在特定的条件下通过色谱柱。
不同的化合物在HPLC柱中的保留时间（梯度）不同，某些特定的组分可通过针对不同化合物的特殊梯度进行分离。
这样的物化条件必须能够保证所需物质的分离，且尽可能地避免同位素在色谱过程中的携带。
3. 质谱分析合适的物质分离后，就可以进行质谱分析了。
分子在离子化器中得到电离，进入质谱仪的离子阱区域。
质谱的分析是通过分析离子与分子的磁场交互作用来实现的。
分子产生的携带电荷变成离子，这些离子可以在质量和电荷状态的基础上进行分析。
根据质量和电荷状态的变化，得到的质谱图提供了关于分子的质荷比和分子的折射率的信息。
二、HPLC-MS/MS的应用1. 生物分析HPLC-MS/MS在生物分析中得到了广泛的应用。
从代谢产物、蛋白质、RNA还有DNA的分析，到药物浓度的测定，都可以使用HPLC-MS/MS进行分析。
其应用举例包括生物样本的氨基酸组分测定、癌症药物代谢产物检测、激素水平的定量测定、蛋白质定量等等。
液相色谱质谱联用的原理详解ppt课件
ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化 合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性 强的有机化合物。
ESI的最大特点是容易形成多电荷离子。目前采用电喷雾 电离，可以测量大分子量的蛋白质。
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大气压化学电离源(APCI)
APCI喷嘴的下游放置一个 针状放电电极，通过放电电 极的高压放电，使空气中某
4.流量和色谱柱的选择
不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min，应用 4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采 用 l—2.1 mm内径的微柱，TIS源最高允许lml ／min，建议使用200—400ul／min
APCI的最佳流速～lml／min，常规的直径4.6mm 柱最合适。
为了提高分析效率，常采用＜ 100 mm的短柱 （此时UV图上并不能获得完全分离，由于质谱 定量分析时使用MRM的功能，所以不要求各组分 没有完全分离）。这对于大批量定量分析可以 节省大量的时间。
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电喷雾与大气压化学电离的比较
电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而APCI电离是高压 放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。
样品流速：APCI源可从0.2到2 ml／min；而电喷雾源 允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min.
断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化 合物就足以使其分解.
一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后，再用高效率扩散 泵连续地运行以保持真空。现代质谱仪采用分子泵可获 得更高的真空度。
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离子源
离子源的作用是将欲分析样品电离，得到带有样品 信息的离子。
1.质谱检测的是离子 2.离子源=接口
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电喷雾电离（ESI）
ESI是近年来出现的一种新的电离方式。它主要应用于液相色谱-质谱 联用仪。流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气 帘；从而雾化、蒸发溶剂、阻止中性溶剂分子进入后端检测。
高效液相色谱质谱联用技术在药物代谢研究中的应用
高效液相色谱质谱联用技术在药物代谢研究中的应用引言：药物代谢研究是新药研发过程中的重要环节，也是了解药物体内动态过程的关键手段之一。
而高效液相色谱质谱联用技术（LC-MS/MS）作为一种先进的仪器分析技术，能够对药物及其代谢产物进行准确、灵敏的分析，被广泛应用于药物代谢研究领域。
第一部分：高效液相色谱质谱联用技术的原理及发展高效液相色谱质谱联用技术是将高效液相色谱（HPLC）分离技术与质谱（MS）检测技术结合而成的一种强大的分析方法。
HPLC是一种可以将复杂混合物进行有效分离的技术，而质谱则能够提供准确的分子质量信息和结构鉴定。
这种联用技术的出现，极大地拓展了药物代谢研究的深度和广度。
第二部分：高效液相色谱质谱联用技术在药物代谢研究中的应用1. 药物代谢动力学研究高效液相色谱质谱联用技术可以通过检测药物及其代谢产物在体内的浓度变化来研究药物的代谢动力学。
通过分析药物的代谢产物及其代谢速率，可以评估药物的体内排泄率、半衰期等参数，为药物的合理用药提供依据。
2. 代谢途径鉴定药物在体内通常会经过多种化学反应进行代谢，形成不同的代谢产物。
高效液相色谱质谱联用技术可以通过分析药物及其代谢产物的质谱图谱，结合专有库以及标准物质进行比对，从而鉴定药物的代谢途径。
这对于了解药物的代谢途径以及代谢酶的底物特异性具有重要意义。
3. 药物相互作用研究药物在体内代谢酶和转运蛋白的活性可能受其他药物的干扰而改变，从而导致药物代谢过程发生变化。
高效液相色谱质谱联用技术可以通过测定药物在体内的浓度变化，评估药物间的相互作用。
这对于合理选择联用药物、避免潜在的药物相互作用具有重要意义。
结论：高效液相色谱质谱联用技术作为一种先进的分析手段，在药物代谢研究中扮演着重要角色。
它不仅可以对药物及其代谢产物进行精确测定，了解药物的代谢途径和动力学，还能够研究药物相互作用，为药物合理研发和临床应用提供有力支持。
相信随着科技的不断进步，高效液相色谱质谱联用技术在药物代谢研究中的应用将不断拓展，并为人类健康事业做出更大的贡献。
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2.中性丢失扫描
在QQQ中进行中性丢失扫描，Q1和Q3分析器的结合使灵敏 度 和选择性得到最大化。Q1/Q3中性丢失扫描可监测母离子 特定的中性丢失，例如缩氨酸磷酸盐中一个磷酸根的丢失。 在这个例子中，Q1和Q3的扫描得到母离子的谱图，这张谱图 是母离子为了磷酸化，丢失了碎片98而得到的
Q1
碰撞池
在仪器实验室的两个月时间里主要学习了高效 液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法，简单的学 习了原子吸收和原子荧光法的基本原理和检测内容。 在学习液-质联用仪的过程中主要学习了样品前 处理、标准样液的配制（扩项）、流动相的配制和 仪器原理-仪器操作的学习。总计5大类，12个检测 项目，13个常用标准
第四部分：仪器操作
此次培训学习中我主要学习操作的仪器是 液相色谱-串联质谱，下面对其进行简单电系统
进样系统
离子源
质量分析器 真空系统
检测接收器
液相色谱串联质谱原理简介
三重四极杆基本功能 ● Q1 可以筛选母离子Mz1 ● Q2 通过碰撞碎裂打碎离子，形成碎片离子峰 ● Q3 筛选子离子，定量子离子碎片强度Mz2
选择m/z
子离子扫描
Q1和Q3均为选择性离子监测模式
质谱应用
1、液质联用（LC-MS）主要可解决如下几方面 的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的 分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量 化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定。 2、质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷 比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析 目的的一种分析方法。
高效液相色谱-串联质谱法 学习交流
学习提纲
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）★ ★ ★ 第二部分：微生物实验室（5.18-5.29） 第三部分：理化实验室（6.1-6.12） 第四部分：仪器操作★ ★ ★ 第五部分：资料收集★ ★ 第六部分：学习总结、心得体会
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）
抽真空泵 Binary Solvent Manger
2、Agilent 6420 液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
脱气
真空泵
自动进样器
色谱柱
学习过程中主要操作和使用的仪器设备有 高效液相色谱串联质谱仪；液相色谱法；凝 胶色谱渗透净化仪；氮吹仪；旋转蒸发仪； 固相萃取装置，详细介绍如下：
1、Waters ACQUITY UPLC 沃特世超高效液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
紫外 TUV Detector 自动进样器 Sample Manager
串联质谱QQQ几种操作方式：
1.子离子扫描 2.母离子扫描 3.中性丢失扫描 4.多重反应监测
1.子离子扫描
Q1选择某一特定质量的母离子，Q2碰撞池碰撞产 生碎片离子。Q3只分析一个碎片离子。此过程产生 一个简单的单个离子碎片谱图 Q1 Q2碰撞池 Q3
Q1只允许目标离 子210通过
Q3只检测来自母离子 210的碎片158，进行 定性定量分析
质谱的特点
1、样品必须离子化，只有离子是带电的，带电的才 有可能分析，离子化的化合物才能被移动，控制和 质量分析。 2、必须具有一定的真空（真空系统）和分子涡旋泵， 离子飞行的平均自由程需要最大化，理论上，真空 度越高越好。 3、必须测量离子的质量数、质荷比（m/z）
常见术语
1、质荷比：离子质量（以相对原子量单位计）与它所带电荷 （以电子电量为单位计）的比值，写作m/z. 2、峰：质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。 3、离子丰度：检测器检测到的离子信号强度。 4、分子离子：自由基离子M+ 很活泼，易碎裂而产生广义的 碎片离子。 5、准分子离子：由软电离技术产生的质子或其它阳离子加合 离子以及质子化或其它阴离子加合离子。 6、碎片离子：电离后具有过剩内能的分子离子能以多种方式 裂解生成碎片离子。
1、实验检测项目有
1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺嘌呤（液相）；2.豆 芽中的四氯苯氧乙酸钠（液相）；3.动物源性食品 中的激素、瘦肉精（沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸 克伦特罗）-（液质）； 4.乳制品的维生素B6（液 相）、维生素D（液相）、三聚氰胺（液质） 5.蜂 蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，粮谷中农药和 保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA) 其中最多的是：1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺 嘌呤；2.肉食品中的瘦肉精；3.乳品中的三聚氰胺 2、主要检验的方法为高效液相色谱法和液相串联质 谱法
1、四级杆分析器由四根棒状电极组成。相对两根电 极间加有电压（Vdc+Vrf）,另外两根电极间加有 -（Vdc+Vrf）,其中Vdc为直流电压，Vrf为射频电压。 四个棒状电极形成一个四级电场，下图为分析器示 意图。
（Vdc+Vrf）
-（Vdc+Vrf）
2、离子从离子源 经过离子光学系统聚焦 后进入四极电场，在四 极电场的作用下做简谐 振荡，如果质量为m， 电荷为e的离子从z方向 进入四极场。
Q3
扫描
中性丢失扫描
3.多重反应检测
Q1选择某一质量的母离子，碰撞单元产生碎片离子。Q3 用于搜寻多个选择反应监测，这就是多重反应监测（MRM）。 Q1 碰撞池 Q3
只允许目 标里子210 和350通过 Q3仅监测来自离子 210的特征碎片191和 来自离子350的特征 碎片226，进行定性 定量分析
★ ★ ★在本次仪器实验室学习的过程中，参 与了质检院的何冲老师的一个CNAS认证，加有三个 混标盲样（牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、 己烯雌酚残留量的测定 GB/T 22992-2008 ）的质控 实验。实验过程中从实验原理、样品量取、样品前 处理、净化的每一个过程中都做到认真、细心的学 习和参与，保证实验中氮吹、固相萃取柱的活化、 淋洗、洗脱以及流动相的配制等每个环节都顺利进 行，圆满的完成了质控、比对实验，提高了我对标 准的认识，注重实验过程中细节操作的重要性。
仪器实验室具体实验内容有：
1、出口水果中赤霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 ----------SN/T 0350-2012 2、无公害豆芽 第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 --------DB33/T 625.32007 3、动物源性食品中多种β -受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法（瘦肉精）--------GB/T 22286-2008 4、原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 -------GB/T 22388-2008（婴幼儿乳粉） 5、婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定--------GB 5413.13-2010 6、保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA)测定-------GB/T 5009.193-2003 7、蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法 液相色谱示差折光检测法------GB/T 18932.22-2003 8、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串 联质谱法 （质控-3个混标）------ GB/T 22992-2008 9、婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件（含第1号、第2号和第3号修改单，已作废） GB 10767-1997 （维生素D测定 D2、D3） 10、动物源性食品中11种激素残留检测 液相色谱-串联质谱法----------农业部1031号公告-1-2008 11、粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（凝胶色谱渗透仪净化）--GB/T 20770-2008 12、动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法---------GB/T 21312-2007 13、食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱 法（地方标准） DB31/ 2010-2012