大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 PPT

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实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二)

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定（二）
实验目的
1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验，掌握硅胶柱色谱的操作技术。 2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定技术。

实验原理

大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为：大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用 pH梯度萃取法分离。大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后，合并单一成分的洗脱液。来自注意事项

①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
仪器、材料与试剂

实验试剂及试药：大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2 瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液 3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。实验仪器设备： 500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10 只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（510cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1 盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴锅5台，旋转蒸发仪2台。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定

药渣（弃）
氯仿提取液
实验内容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（1）
蒽醌类成分的缓冲纸色谱
层析材料：3×12㎝滤纸样品：大黄氯仿提取液展开剂：氯仿（水饱和）显色：自然光下观察
3%NaOH 5%Na2CO3:5%NaOH(9:1) PH9.9 pH8 pH3
实验内容（二）

蒽醌苷元的分离和精制（2）
思
考
题
1.大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何排列？为什么？ 2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？
蒽醌类成分的鉴定

实验原理

提取：蒽醌苷
酸水解
氯仿提取
苷元(溶于热氯仿)
总蒽醌苷元
实验原理

分离：
OH O OH
R1 O
R2
由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱分离之。
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实验内容（二）

蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱）上样（干法上样）
洗脱剂1 石油醚-乙酸乙酯（98：2）
洗脱
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
实验内容（三）

大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定（2）色谱鉴识
实验内容（三）
A大黄酚（chrysophanol） R1=H B大黄素（emodin） R1= OH C大黄素甲醚（physcion） R1=OCH3 D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H E大黄酸（rhein） R1=H

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.

试验三大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。

大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。

已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。

大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。

（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。

（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。

残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。

提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。

本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。

我们需要准备待提取的植物材料。

大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。

为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。

接下来，我们可以选择合适的提取剂。

一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。

将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。

提取完成后，我们需要对提取液进行分离。

通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。

这样可得到含有目标成分的溶液。

为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。

这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。

通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。

在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。

常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。

红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。

质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。

核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。

还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。

如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。

大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。

通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。

这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。

蒽醌类化合物—提取分离(天然药物化学课件)

试剂：碱性试剂+活性亚甲基试剂
判断：苯醌及萘醌类化合物未取代为阳性；蒽醌为阴性。
O
O
O
O
醌环上未取代位置
在氨碱性下兰蓝绿绿色色
+ 活性次甲基试剂
或or
（丙二酸酯、乙酰醋酸脂/醇液）
兰紫色
蓝紫色
不同颜色反应鉴别特点及意义
反应类型
Feigl反应
无色亚甲蓝 Bornträge反
应
反应试剂
反应特征
鉴别特点
引力或产生氢键的结果；分子筛是其多孔性结构性质 ❖ 3、影响吸附因素：溶剂本身的性质；物质在溶剂中的
溶解度（溶解度大，树脂对其吸附力降低）；化合物的性质
五、蒽醌类化合物（三） ——显色反应
一、碱液呈色反应（ Bornträge反应）
❖ 羟基蒽醌类遇碱显红—紫红色。 ❖ 检识羟基蒽醌成分的最常用方法。 ❖ 蒽酚、蒽酮、二蒽酮类成分需氧化形成羟基
五、蒽醌类化合物（四）
一、提取方法
（一）亲脂性有机溶剂提取法 (二）醇提取法（三）碱提酸沉法（四）水蒸气蒸馏法（五）其它方法
（一）亲脂性有机溶剂提取法
（1）用于提取苷元（游离醌类）。（2）可用苯、氯仿等极性较小的溶剂提取。（3）蒽醌类在植物体内多以苷或盐的形式存在。
药材酸苷水解，盐游离
（2）色谱分离法 ❖ 多用吸附柱层析，以硅胶、磷酸氢钙、聚酰胺
粉为吸附剂，不宜用氧化铝，尤其是碱性氧化铝，因为羟基蒽醌能与氧化铝形成牢固螯合物，难以洗脱。
（3）大孔吸附树脂 ❖ 1、特点：白色球形颗粒，分为非极性和极性两类，理
化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶媒中 ❖ 2、原理：吸附性和分子筛性相结合。吸附性由范德华

大黄中大黄素的提取分离与鉴定精品PPT课件

学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。Hale Waihona Puke 南中医中药化学实验大黄素
研碎装入纸筒
索氏提取器回流
南中医中药化学实验大黄素
三.PH梯度萃取
1.实验原理根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚和大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用由弱到强加入不同碱液进行萃取的方法，分离的单大黄素粗品。
南中医中药化学实验大黄素
2.流程图
Et20提取液
用6M HCl调pH3，抽滤。得到沉淀（大黄素粗品）。
南中医中药化学实验大黄素
取大黄素粗品，进行点样。
南中医中药化学实验大黄素
四.柱色谱分离大黄素
1.实验原理根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚，大黄素甲醚等5种成分的极性大小不同，则与鬼叫吸附剂产生的吸附能力不同而分离
2.实验方法（1）.湿法装柱（2）.干法上样（3）.洗脱收集（4）.合并浓缩（5）.放置析晶
Et2O提取液（1）
NaHCO3液（大黄酸）
Et2O提取液（2）
NaCO3液
Et2O提取液（3）
NaCO3液（芦荟沉淀（芦荟大黄素）大黄素）
Et2O提取液（4） NaOH液(大黄素甲醚和大黄酚)
南中医中药化学实验大黄素
南中医中药化学实验大黄素
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中药鉴定大黄PPT课件

草酸钙结晶
草酸钙结晶呈方形、菱形或多面形，直径3-7μm。
03
中药鉴定大黄成分与药理作用
中药鉴定大黄化学成分
总结词
大黄主要含有蒽醌类化合物、多糖、氨基酸、黄酮等化学成分。
详细描述
蒽醌类化合物是大黄的主要有效成分，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用。多糖也是大黄的重要成分，能够提高机体免疫力，增强抗病能力。氨基酸和黄酮则具有抗氧化、保护心血管等作用。
等疾病。
活血化瘀
大黄具有活血化瘀的功效，可用于治疗瘀血阻滞引起的疾病
，如瘀血肿痛、痛经等。
清热利湿
大黄具有清热利湿的功效，可用于治疗湿热黄疸、热淋等病
症。
止咳化痰
大黄具有止咳化痰的功效，常用于治疗肺热咳嗽、痰多色黄
等疾病。
中药鉴定大黄配伍禁忌
避免与止血药物配伍
01
大黄具有活血化瘀的作用，应避免与止血药物配伍使用，以免
中药鉴定大黄质量控制
总结词
对大黄进行质量控制，可从产地、采收年限、药用部位、储存条件等方面进行把关。
详细描述
对大黄的质量控制应从其产地入手，选择生态环境良好、无污染的产地。同时，采收年限也是影响大黄质量的重要因素，一般认为生长年限越长的大黄质量越好。此外，药用部位也是影响大黄药效的关键因素，不同部位的大黄所含化学成分和药理作用也有所不同。在储存过程中，应严格控制储存条件，避免受潮、发霉和虫蛀等影响药品质量的情况发生。
分布地区
分布于我国甘肃、青海、西藏、四川、陕西等地，秦岭以北各地均有分布。
采收加工
秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。
中药鉴定大黄历史与文化

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。

提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。

在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。

2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。

为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。

柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。

薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。

3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。

常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。

红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。

以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。

中药中蒽醌类化学成分的提取分离技术ppt课件

三必备知识
（一）大黄中的主要有效成分及结构（二）大黄中主要有效成分的提取分离
（一）大黄中主要有效成分及结构
大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。主要
有游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷，此外还含鞣质等。游离
蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、
大黄酸。
R1
R2
大黄酚
CH3
H
大黄素
CH3
①有机溶剂作萃取剂:a从水提液中萃取亲脂性成分，一般选用苯、氯仿或乙醚等亲脂性有机溶剂；b从水提液中萃取中等极性成分，一般选用醋酸乙酯、丁醇等弱亲脂性有机溶剂或在氯仿、乙醚中加入适量乙醇以增大其亲水性。 ②用于pH梯度萃取法的萃取剂：a分离某有机溶剂中酸性强弱不同的苷元，可依次选用pH由低到高的碱液b分离碱性强弱不同的游离生物碱，可用pH由高至低的酸性缓冲溶液作萃取剂顺次萃取。
溶解性
游离蒽醌
易溶于苯、乙醚、氯仿和碱性有机溶剂中。可溶于丙酮、甲醇及乙醇，不溶或难溶于水.
蒽醌苷
极性较大，易溶于甲醇及氯仿等溶剂.
（二）生物碱类化合物的理化性质
酸碱性
游离蒽醌
蒽醌苷
蒽醌类化合物大多具有酚羟基或个别具有羧基, 故具有一定的酸性.
(大黄酚 )
CH3 O
CH3 O
（四）蒽醌的层析检识
可用
1.纸层析
游离羟基蒽醌类的纸层析一般在中性溶剂系统中进行,可用水、乙醇、丙酮等与石油醚、苯等混合，使达到饱和后取极性小的有机溶剂层进行展开。
几种蒽醌类化合物纸层析的比移值
Rf值种类
展开剂丙酮:石油醚:水(1:1:3)混合石油醚(36~60℃):97%甲醇

实验5 大黄中蒽醌类的提取与分离

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15
5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酸沉淀。
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2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大黄素沉淀。
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸附剂？Rf值顺序如何？
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26
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17
3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层，继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取，合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得芦荟大黄素沉淀。
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4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
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五、思考题
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不得超过0.5cm!），自然风干

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。

实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。

所以要用酸水解使其生成苷元。

蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。

氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。

2．总蒽醌苷元分离方案的设计1)大黄总蒽醌苷元的纸色谱2) 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验3)最佳萃取剂及其用量的确定4)蒽醌类成分各种萃取剂用量的确定5)新分离方法的设计3．蒽醌类成分的分离与精制①大黄酸的分离与精制将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。

②大黄素的分离与精制将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml 冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。

③芦荟大黄素的分离和精制余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。

仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。

三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。

其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。

大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别

为了验证分离所采用的萃取液是否合理，作如下缓冲纸色谱试验：取层析滤纸3 cm×12 cm，距下端2 cm处划一起始线，向上每隔1.5 cm划一平行线，在各条带上依pH由低至高顺次涂布实际所用的各缓冲液及碱液，涂布完后，将湿滤纸夹在两片干滤纸中吸至半干。取样品总蒽醌苷元氯仿提取液点在起始线上，用氯仿上行展开，将结果绘制在下面图中，并确定选择的萃取剂是否合理。
b.醋酸镁试验分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。
4.鉴定
(1)蒽醌类成分化学鉴定
a.碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加2％氢氧化钠溶液l ml，观察颜色变化。凡有互成邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。
b.大黄素的分离和精制
pH 8缓冲液萃取过的氯仿层，用pH 9.9缓冲液300 ml振摇萃取，静置至彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH 3，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15 ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
（2）分离与精制
a.大黄酸的分离和精制
将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。

大黄中游离开蒽醌的提取分离

3.分离大黄酸。
氯仿提取液体加pH为8的缓冲溶液。萃取
碱水液沉淀抽滤大黄酸
氯仿液1
浓盐酸调pH至3，静置
注：缓冲液为为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，并一次加入。缓冲液为为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，并一次加入。
3.1分液漏斗的使用：
① 检漏：洗净后，晾干，下口活塞涂抹凡士林，旋至透明，检漏，上口活塞包一滤纸条，放置待用。② 萃取时，两相溶液应充分混合，放气，振摇分液漏斗时，下口活塞柄应朝上。③ 放出下层液体时，应用手握住活塞旋转，以免活塞滑落使溶液漏出。④ 放出下层液体时，应打开上口活塞。
6.分离大黄酚和大黄素甲醚（同分离大黄酸）。
萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用3％氢氧化钠溶液500 m1分二次萃取，至碱水层无色为止，合并碱水层，加盐酸酸化至pH 3，析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚混合物，留作柱色谱分离的样品。余下氯仿液水洗至中性，蒸馏回收氯仿。
（二）实验内容-提取与分离
图1.大黄提取分离流程图
1.水解。
大黄加20％硫酸加热，水洗至中性。水解后大黄
注：目的。 1.水解：将大黄中蒽醌苷水解成游离蒽醌，便于有机溶剂提取。 2.水洗至中性：便于下一步用碱性缓冲溶液萃取。（或提取后用水洗去有机溶剂中余酸。）
2.提取。
水解后大黄置索氏提取器中（滤纸筒包扎），用连续提取装置提取，提取液体为氯仿。提取8h 以上，致索氏提取器中提取液体近无色为止。氯仿提取液体注：1、氯仿用量不宜超过烧瓶 2/3并应加沸石并应加沸石。的2/3并应加沸石。2、氯纸筒高度应适宜。出水连接。高度应适宜。3、进、出水连接。
氯仿液1 加pH为9.9的缓冲溶液。萃取

实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。

大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。

功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。

蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。

此外，大黄还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。

主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。

大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。

可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。

大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。

UVλmax436，289，266，253，222。

可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。

芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。

UVλmax429，287，254，225，202。

可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。

大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。

溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。

大黄中大黄素的提取分离与鉴定课件

确定鉴定方法
采用光谱、色谱等手段对大黄素进行鉴定，如高效液相色谱法、紫外光谱法等。
确定提取分离方法
根据大黄素的理化性质，选择合适的提取分离方法，如溶剂萃取、色谱分离等。
制定实验操作流程
根据确定的提取分离和鉴定方法，制定详细的实验操作流程。
实验操作流程
准备实验材料和设备
提取大黄素
准备好大黄样品、提取溶剂、色谱柱、检测器等实验材料和设备。
大黄是一种多年生草本植物，属于蓼科，主要分布在中国、朝鲜、日本等亚洲国家。
历史背景
大黄在中国已有两千多年的药用历史，被广泛应用于中医临床。
植物特点
大黄的叶片通常较大，呈椭圆形或宽椭圆形，叶脉明显。
大黄素简介
化学结构
大黄素是大黄的主要有效成分，属于蒽醌类化合物。
物理性质
大黄素为黄色针状结晶，熔点较高，难溶于水，可溶于乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂。
心血管疾病
大黄素可以用于治疗高血压、高血脂等疾病，降低血脂和血压，预防心血管事件的发生。
神经系统疾病
大黄素可以用于治疗癫痫、偏头痛等疾病，减轻神经系统症状，促进神经功能恢复。
06
大黄素提取分离与鉴定的实验方案与操作流程
实验方案设计
确定实验目的和要求
明确实验目的和要求，为大黄素的提取分离与鉴定提供指导。
适用范围
适用于实验室小规模提取，但提取效率较低。
回流法
提取原理
利用有机溶剂对大黄进行多次循环回流提取，使大黄素溶解在提
取溶剂中。
操作步骤
将大黄饮片放入提取器中，加入适量的有机溶剂，加热至沸腾，保持回流状态一定时间，收集提
取液，浓缩得到大黄素。