薄层色谱法 PPT课件
合集下载
经典色谱法分析技术—薄层色谱法(分析化学课件)

小
极性
大
薄层色谱固定相和流动相选择
2. 流动相展开剂的选择要求
薄层色谱分离中一般要求各斑点的Rf值在0.2~0.8之间,Rf值之 间应相差0.05以上.
3. 流动相展开剂的选择方法
如果单一展开剂分离效果不好,可用两种或两种以上的单一溶剂按 照一定比例混合而成的溶剂展开,可以达到较好的分离效果.
薄层色谱固定相和流动相选择 被测组分、吸附剂和展开剂的选择原则
常用溶剂的极性顺序为:
常用吸附剂的极性顺序为:
增
增
大
大
薄层色谱固定相和流动相选择
多糖、蛋白质等大分子、生物碱盐
极 性
苷类(皂苷、黄酮苷、蒽醌苷)
渐 黄酮、蒽醌等苷元、有机酸
小
香豆素、萜类、挥发油等亲脂性成分
烷烃<烯烃
<二甲胺<酯类<酮
<醚<硝基化合物
类<醛类<硫醇<胺 类
<酰胺类<醇 类<酚类<羧 酸类
分离原理
吸附薄层色谱分离原理
展开(分离)
分离过程:
制板→点样→展开→显色→定性定量分析
固定相--吸附剂
薄层色谱的固定相所用的吸附剂
流动相---展开剂
薄板的底端浸入到适当的流动相溶剂
吸附薄层色谱分离原理
薄 层 色 谱
点样
展开剂
吸附薄层色谱分离原理
分离原理:
展开剂在毛细管的 浸润作用下,带着 各组分沿着薄板向
薄层色谱固定相和流动相的选择
薄层色谱固定相和流动相选择
一、固定相(吸附剂)的选择
1. 选择原则 根据被分离组分的极性选择吸附剂:
被分离组分的极性强——弱极性吸附剂; 被分离组分的极性弱——强极性吸附剂;
薄层色谱固定相和流动相选择
《项目五TLC技术》PPT课件

– 采用多次点样法,第二次点加样应待前一次点样的溶剂 挥发后再进行。
– 同一快硅胶板上同时点多个样时,每个样需点在同一高 度
– 手工点样工具:定容玻璃毛细管(1 –5ul)。
精选ppt
10
• 展开
– 多数采用直线形上行展开,薄层板水平角度以75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
直立式层析缸示意图 1-层析缸; 精2选-薄pp层t 板 3-展开剂饱和蒸气;4-展开剂11
标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
精选ppt
7
三 、TLC操作步骤
• 薄层板活化(可直接用商品TLC,不需活化)
– 涂布后的薄层先在室温下晒干,在使用前置适当
温度烘烤一定时间进行活化,然后置干燥器中备
用。不同薄层活化条件略有不同,如:
• 硅胶
110℃
1h
• 氧化铝
110℃
30min
精选ppt
8
精选ppt
19
❖杂质检查方法 • 杂质对照品法(A) • 供试品自身对照法(高低浓度法)(B) • 对照物质法(C)
样对 A
样对 B
精选ppt
样对 C
20
精选ppt
21
任务1、检验某样品的纯度
样品1:溶解少量样品1进行薄层检测并计算Rf值
溶剂:乙醇
展开剂:石油醚:乙酸乙酯=4:6 (体积比)
任务2、混合物的分离
样品2:溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂:95%乙醇
展开剂:石油醚:乙酸乙酯=3:7(体积比)
任务3、 选择最佳Rf值(0.3-0.7)
样品3:溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂:95%乙醇展开剂:自己配置Fra bibliotek精选ppt
– 同一快硅胶板上同时点多个样时,每个样需点在同一高 度
– 手工点样工具:定容玻璃毛细管(1 –5ul)。
精选ppt
10
• 展开
– 多数采用直线形上行展开,薄层板水平角度以75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
直立式层析缸示意图 1-层析缸; 精2选-薄pp层t 板 3-展开剂饱和蒸气;4-展开剂11
标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
精选ppt
7
三 、TLC操作步骤
• 薄层板活化(可直接用商品TLC,不需活化)
– 涂布后的薄层先在室温下晒干,在使用前置适当
温度烘烤一定时间进行活化,然后置干燥器中备
用。不同薄层活化条件略有不同,如:
• 硅胶
110℃
1h
• 氧化铝
110℃
30min
精选ppt
8
精选ppt
19
❖杂质检查方法 • 杂质对照品法(A) • 供试品自身对照法(高低浓度法)(B) • 对照物质法(C)
样对 A
样对 B
精选ppt
样对 C
20
精选ppt
21
任务1、检验某样品的纯度
样品1:溶解少量样品1进行薄层检测并计算Rf值
溶剂:乙醇
展开剂:石油醚:乙酸乙酯=4:6 (体积比)
任务2、混合物的分离
样品2:溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂:95%乙醇
展开剂:石油醚:乙酸乙酯=3:7(体积比)
任务3、 选择最佳Rf值(0.3-0.7)
样品3:溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂:95%乙醇展开剂:自己配置Fra bibliotek精选ppt
第五章 薄层色谱法(共84张PPT)

荧光;银激活的ZnS和CdS, ZnS• CdS •Ag在366nm
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析,又可以进行分配层
析,主要的区别是在于活化程度不同,前者活化程 度高,后者活化程度低。 (3)纤维素
可在实验室制备,取脱脂棉或滤纸剪成小
11/20/2022
12
块加适量的5%的盐酸,加热煮沸3小时,冷却
要于150-160度干燥1-3小时,备用。
(3)薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关,
11/20/2022
25
含水量越低,吸附能力越强,其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C,氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C,活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似,首先 应该考虑应如何层析,一般的讲,非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析,水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂:
(1) 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂,直接用干
11/20/2022
8
粉铺层,得到的层析板称为“干板” 或“软 板”,但也可以加煅石膏作粘合剂,这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G,用氧化铝G加水,
3.各种特制薄层
由于工作需要,各种特制薄层相继出现,
这里介绍数种:
11/20/2022
29
(1)混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如,
为了降低硅胶的活度,可在其中加入一定量的硅藻
土铺层,也可以用硅胶:氧化铝(1:1)铺层,
对糖和醇具有较好的分离效果。 (2)酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时,为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化,克服了 技术上的困难,从此以后,薄层层析法得到 了迅速的发展。
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析,又可以进行分配层
析,主要的区别是在于活化程度不同,前者活化程 度高,后者活化程度低。 (3)纤维素
可在实验室制备,取脱脂棉或滤纸剪成小
11/20/2022
12
块加适量的5%的盐酸,加热煮沸3小时,冷却
要于150-160度干燥1-3小时,备用。
(3)薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关,
11/20/2022
25
含水量越低,吸附能力越强,其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C,氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C,活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似,首先 应该考虑应如何层析,一般的讲,非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析,水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂:
(1) 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂,直接用干
11/20/2022
8
粉铺层,得到的层析板称为“干板” 或“软 板”,但也可以加煅石膏作粘合剂,这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G,用氧化铝G加水,
3.各种特制薄层
由于工作需要,各种特制薄层相继出现,
这里介绍数种:
11/20/2022
29
(1)混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如,
为了降低硅胶的活度,可在其中加入一定量的硅藻
土铺层,也可以用硅胶:氧化铝(1:1)铺层,
对糖和醇具有较好的分离效果。 (2)酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时,为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化,克服了 技术上的困难,从此以后,薄层层析法得到 了迅速的发展。
薄层色谱应用课件.pptx

一、 实 验 目 的
❖ 了解薄层色谱的应用原理 ❖ 掌握薄层色谱的应用方法
二、实 验 原 理
二、实 验 原 理
应用薄层色谱检验、鉴定化合物的原理:
图1 365 nm下观察的结果
图2 硫酸乙醇显色结果
注:两边的是标准品,中间的是样品
二、实 验 原 理
➢ 固定相:硅胶,氧化铝,等。 ➢ 支持板:玻璃板,涤纶布,等。 ➢ 展开剂:根据样品的极性及溶解度选择,可采用单一溶剂,但更常用的
四、实 验 过 程
比移值( Rf 值)的计算:
五、 注 意 事 项
1. 制作薄层所用玻璃板要平滑、干净。 研磨要充分,保证所制的薄层面应平整均匀 存放薄层板时要注意保持干燥及避免污染。
五、 注 意 事 项
2. 样品浓度(浓度为0.01-0.1%): 太大,容易出现拖尾;
太小则会导致斑点不明显,难以观察。
五、 注 意 事 项
5. 标记斑点时:要轻轻勾画,避免铅笔将斑点处的硅胶碰掉,从而 影响后续显色结果的观察。
是混合溶剂。
三、实 验 试 剂 与 仪 器
点样样品 香草醛
间苯二酚
展开剂 石油醚 丙酮
四、实 验 过 程
薄层板 的制备
点样
展开
显色、定位
UV灯、显色剂
测定比移值
(Rf 值)
四、实 验 过 程
显色和定位 一般包括:一看、二照、三碘和四显四步。
❖ 一看:指先在自然光下观察 ❖ 二照:指分别在 254 nm 和 365 nm 下观察有无暗斑或荧光斑点 ❖ 三碘:对在自然光和紫外下均无斑点的物质可以用碘蒸汽显色 ❖ 四显:用显色剂显色 ➢ 实际操作中根据需要选择其中的两到三步。
五、 注 意 事 项
《中药制剂薄层鉴别》课件

02 中药制剂薄层鉴别的基本 原理
薄层色谱法原理
薄层色谱法是一种基于吸附、分配等 原理,将样品在固定相和流动相之间 进行分离、检测和定性的方法。
在薄层色谱法中,固定相是薄层板上 的吸附剂,流动相是展开剂。当样品 在薄层板上展开时,不同组分在固定 相和流动相之间的分配系数不同,从 而实现分离。
薄层板的制备
提取
将粉碎后的样品进行提取,以分离出所需的 成分。
干燥
将浓缩后的样品进行干燥,以便更好地进行 薄层鉴别。
点样
选择合适的点样器
根据样品的性质和薄层板的特性,选择合适的 点样器。
控制点样量
控制点样量,以确保样品在薄层板上均匀分布 。
注意点样点的间距
控制点样点的间距,以确保薄层板上的斑点清晰可见。
展开
促进中药现代化
薄层鉴别是中药现代化的重要组 成部分,通过该技术手段可以推 动中药的标准化、规范化发展。
薄层鉴别的发展历程
起步阶段
20世纪70年代,薄层色谱法开始应用于中药制剂的鉴别分析。
发展阶段
20世纪80年代,薄层色谱法逐渐完善,成为中药制剂质量控制的 重要手段。
成熟阶段
21世纪以来,随着技术的不断进步和应用范围的不断扩大,薄层 鉴别已经成为中药制剂质量控制中不可或缺的技术手段。
薄层色谱-质谱联用技术
将薄层色谱与质谱技术结合,实现中药制剂成分的快速鉴定和准 确定性。
高效薄层色谱技术
利用高效薄层色谱板,提高分离效果和检测灵敏度,缩短分析时间 。现微型化、集成化和自动化分析 。
06 中药制剂薄层鉴别相关法 规与标准
相关法规与规定
01
显色方法
显色方法是在薄层色谱法中用于检测样品组分的手段。
薄层色谱和柱层析ppt课件

氧化铝呈碱性,适用于碱性和中性物质的分离。
硅胶和氧化铝1:1量掺和使用,得中性吸附剂,或在制板 时加入稀酸或稀碱使其变性,或用酸性或碱性展开剂展开, 以改变硅胶或氧化铝原来的性质。
2021/8/9
最新
课件
9
(Ⅲ)样品的极性
物质的极性愈大,氧化铝和硅胶吸附愈牢,物质极性大小 如下:
饱和烃 < 不饱和烃 < 醚 < 酯 < 醛 < 酮 < 胺< 羟基化合物 < 酸和碱
性炭因吸附性太强和黑色,使应用受到限制。
(2)分配色谱对载体的要求
(Ⅰ)表面积大
(Ⅱ)在展开剂中不溶,与展开剂和样品组分不起化学反应或 分解作用
(Ⅲ)对样品组分无吸附性或吸附性弱
(Ⅳ)对固定液是惰性的
2021/8/9
最新
课件
8
常用的有纤维素和硅藻土。
实际工作中,吸附剂、载体等的选择,首先决定于样品成
(c)酸碱薄层板和pH缓冲薄层板:有些化合物在普通板上分 离不好时,可通过改变原来吸附剂的酸碱性,改善分离效果。 如在铺层时用稀酸(一般用1~4%的盐酸或0.1~0.25mol/L草 酸溶液)代替水制成酸性板,使生物碱形成离子对而分离。
(d)混合薄层板:两种不同吸附剂按一定比例混合,制板, 也可分段铺板,前段预处理,以吸附杂质,后段分离。
2021/8/9
最新
课件
14
(e)径向薄层板:径向板铺法与一般板不同,点样前按下法 处理:
刮去
刮去
用此板展开,可使Rf值相近的化合物得到较好的分离,且 灵敏度高。 (f)梯度薄层板:梯度是指由一种性质到另一种性质的变化。 梯度薄层与常规薄层不同,它显示出具有渐变的分离性能,如
薄层色谱法概述PPT课件【共52张PPT】

*
k 反映了两种溶质的平均迁移速度,其由流动相溶剂强度 决定 I0 -( IR + IT )=差为被介质吸收并转换为热的光强 4 丙酮 0. 氧化铝—有碱性、中性、酸性 放置时间不宜太长,否则背景吸附剂也吸附碘,使信噪比降低。 硅胶G——将硅胶置研钵中,加入少量水,研磨均匀,至无结块和气泡,再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水),迅速研磨均匀,立即涂铺。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 归一化法、内标法、外标法 这种影响一般使分配系数变小。 此外还有:化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 这类扫描仪技术上一些问题还未解决。 51 / 二氧六环 0. 展开距离一般为10-15cm。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用,选择的两个波长应接近些。 HPLC一次只能分离一个样品,通常采用反相色谱,色谱后衍生化受限制。
*
*
点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性,否则易使斑点扩展。 采用多次点加法,第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中,过载会引起斑点拖尾,分离度变差,以最小检测量的几倍~几十倍为宜。 手工点样工具:定容玻璃毛细管(1 –5ul),微量注射器。
*
*
自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层,移动板台,使在薄层上流下样品条带。 特点:适合于大量稀样品溶液的喷加;条带宽度不超过2mm,有利于改善分辨率;便于狭缝式光密度计扫描;要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定:点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
*
薄层色谱参数
保留参数(Rf值) 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子,通常称作比移值,用Rf表示。 Rf=Ls/L。,
中药材薄层层析ppt课件

3)对照品和对照药材同时对照(“双对照”) 为了准确检验制剂投料的真实性,有时仅用对照
品无法鉴别出来,这时可增加原药材作为对照药材。 例如含有黄连、黄柏的制剂,单用小檗碱对照品
来鉴别是不足足以说明的,此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致,从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性,可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
为了得到较清晰的色谱图,供试液的制备要求:被测成分 尽可能多的提取出来,杂质要尽可能多的除去。
2)薄层色谱的点样 点样是关键的一步,既关系到能否得到可重现的薄层色谱,
也关系到定量结果的准确与否,不良的点样是测定误差的主要 来源。
3)吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂,其含水量越高,吸附活性越弱,自
中药材的薄层色谱法鉴别
薄层色谱法:在中药材及其制剂的定性鉴 别中得到广泛的应用,这主要是由于其具有分 离分析双重功能,大大提高了鉴别工作的灵敏 度和专属性,成为中药鉴别的重要方法。
薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含 量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法, 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝薄层色谱
3、对照物的选择
对照物分为对照品(主要为有效成分和特征性成分的单体, 也包括对照提取物)和对照药材两种。
对照物的设置有以下三种方式: 1)对照品对照:
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制成 对照液,与样品在同一条件下层析,比较相同位置有无同一颜 色(或荧光)的斑点,来检测是否含有某原料药材。可设置一 种或数种对照品。 2)对照药材对照:缺乏对照品的情况下使用
(254nm)下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
色谱概论及薄层色谱法PPT课件

操作技巧要求高
薄层色谱法的实验操作技巧要求较高, 需要经验丰富的实验员进行操作。
对环境条件敏感
薄层色谱法的分离效果易受环境温度、 湿度等因素的影响。
薄层色谱法的展望
优化实验条件
发展新型薄层板
未来可以通过优化实验条件,提高薄层色 谱法的分离效果和定量分析精度。
研究开发新型的薄层板材料和制备方法, 提高薄层色谱法的分离速度和分辨率。
色谱概论及薄层色谱 法ppt课件
contents
目录
• 色谱概论 • 薄层色谱法 • 薄层色谱法的实验技术 • 薄层色谱法的实验结果分析 • 薄层色谱法的优缺点及展望
01
色谱概论
色谱法的定义与分类
定义
色谱法是一种分离和分析复杂混 合物中各组分的方法,基于不同 组分在固定相和流动相之间的分 配平衡原理。
分类
按分离原理可分为吸附色谱、分 配色谱、离子交换色谱和凝胶色 谱等;按操作方式可分为柱色谱 、纸色谱和薄层色谱等。
色谱法的原理
固定相
选择合适的固体或液体作为固定 相,与流动相相对静止,使混合 物中各组分在固定相中产生吸附、
溶解或分配作用。
流动相
选择合适的液体或气体作为流动 相,使混合物中的组分随流动相 通过固定相,实现各组分的分离。
合于实验室和现场分析。
分离速度快
薄层色谱法的分离时间相对较 短,可以快速得到分离结果。
适用范围广
薄层色谱法适用于各种不同性 质的混合物,如有机物、无机
物、高分子化合物等。
薄层色谱法的缺点
定量分析精度不高
由于薄层色谱法的分离原理和操作方 法的限制,其定量分析的精度相对较 低。
对样品要求较高
薄层色谱法要求样品具有一定的挥发 性、稳定性和溶解性,对于某些特殊 样品可能不太适用。
薄层色谱培训讲稿(共20张PPT)

薄层色谱培训讲稿
薄层色谱
分离原理、条件选择和操作方法
薄层色谱的概念及分离原理
薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于 固-液吸附色谱。是一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优
点。由于薄层色谱一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01 μg) 的分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条 线,则可分离多达500 mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥
性、外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以,要获得重现的比移值就比较
困难。为此,在测定某一试样时,最好用已知样品进行对照。
样品中某组分移动离开原点的距离 Rf =
展开剂前沿距原点中心的距离
solvent front
new position of comp.B new position of comp.A
• 4、追踪化学反应进程:观察一些化学反应是否完成,可以利用薄层色谱观 察原料色点的逐步消失,以证明反应完成与否。
什么是“比移值”?
在相同的展开条件下,一种化合物移动离开样品原点的距离 Li (cm 或
mm)与展开剂前沿距样品原点中心的距离 Lo (cm 或 mm )之比值,称为
相对移动值,或比移值,用Rf 表示:
薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样,主要根据样品中各组分的极 性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。展开剂的极性越大, 对化合物的洗脱力也越大 选择展开剂时,除参照溶剂极性来选择外,更 多地采用试验的方法,在一块薄层板上进行试验:
(1) 若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿,此溶剂的
极性过强;
(2)若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动,留在了原点 上,此溶剂的极性过弱。
薄层色谱
分离原理、条件选择和操作方法
薄层色谱的概念及分离原理
薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于 固-液吸附色谱。是一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优
点。由于薄层色谱一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01 μg) 的分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条 线,则可分离多达500 mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥
性、外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以,要获得重现的比移值就比较
困难。为此,在测定某一试样时,最好用已知样品进行对照。
样品中某组分移动离开原点的距离 Rf =
展开剂前沿距原点中心的距离
solvent front
new position of comp.B new position of comp.A
• 4、追踪化学反应进程:观察一些化学反应是否完成,可以利用薄层色谱观 察原料色点的逐步消失,以证明反应完成与否。
什么是“比移值”?
在相同的展开条件下,一种化合物移动离开样品原点的距离 Li (cm 或
mm)与展开剂前沿距样品原点中心的距离 Lo (cm 或 mm )之比值,称为
相对移动值,或比移值,用Rf 表示:
薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样,主要根据样品中各组分的极 性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。展开剂的极性越大, 对化合物的洗脱力也越大 选择展开剂时,除参照溶剂极性来选择外,更 多地采用试验的方法,在一块薄层板上进行试验:
(1) 若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿,此溶剂的
极性过强;
(2)若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动,留在了原点 上,此溶剂的极性过弱。
TLC(使用)精品PPT课件

硅胶为多孔性无定形粉末,表面带有硅醇基呈弱 酸性,通过硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键 而表现其吸附性能,由于各组分的极性基团与硅醇 基形成氢键的能力不同,组分被分离。
硅胶吸附水分形成水合硅醇基而失去吸附能力, 但将硅胶加热至100℃左右,该水能可逆被除去,而 提高活度,这一过程称为“活化”。
硅胶的结构为:
3.吸附剂(固定相)和展开剂(流动相) 吸附剂
决定吸附性能的因素:吸附剂的化学组成、 活性、表面积 [要求]: •合适的吸附力 •与展开剂、被吸附物质均不起化学反应 •粒度细小而且均匀(范氏方程,减少涡流扩 散项)
(1). 氧化铝 氧化铝呈微弱碱性,酸性较强的化合物
在氧化铝上吸附的很牢(所以,酸性物质分离 不好),故通常用于分离碳氢化合物、生物碱 类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物 质。
市售的供薄层色谱用的Al2O3有: Al2O3 -H 氧化铝中无粘合剂 Al2O3 -G 氧化铝中含煅石膏(一般5%煅石膏) [煅石膏CaSO4,作为粘合剂] Al2O3 -HF254 氧化铝中不含煅石膏,仅含荧光 指示剂(在254 nm下呈黄绿色荧光) Al2O3 -GF254 氧化铝中既含煅石膏又含荧光指 示剂(在254 nm下呈黄绿色荧光) 上述商品可以直接调料涂敷(1份料,2份水调合)
(3). pH:影响它们的存在状态
(4). 滤纸:质地均一、厚薄适当、具有一定机 械强度、不含杂质
(5). 温度:在层析缸中用红外灯照射。温度 会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。 层析操作应在恒温下进行,温度不超过± 0.5oC
(6). 展开方式:展开方式不同,Rf也不同。下 行法的Rf最大,上行法的Rf较小,环行法的 Rf也不大。
薄层用商品硅胶有:硅胶H(不含粘结剂)、 硅胶G(含粘结剂煅石膏CaSO4 )、硅胶HF254( 含荧光物质的硅胶)硅胶GF254(含有煅石膏 CaSO4和荧光剂)
硅胶吸附水分形成水合硅醇基而失去吸附能力, 但将硅胶加热至100℃左右,该水能可逆被除去,而 提高活度,这一过程称为“活化”。
硅胶的结构为:
3.吸附剂(固定相)和展开剂(流动相) 吸附剂
决定吸附性能的因素:吸附剂的化学组成、 活性、表面积 [要求]: •合适的吸附力 •与展开剂、被吸附物质均不起化学反应 •粒度细小而且均匀(范氏方程,减少涡流扩 散项)
(1). 氧化铝 氧化铝呈微弱碱性,酸性较强的化合物
在氧化铝上吸附的很牢(所以,酸性物质分离 不好),故通常用于分离碳氢化合物、生物碱 类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物 质。
市售的供薄层色谱用的Al2O3有: Al2O3 -H 氧化铝中无粘合剂 Al2O3 -G 氧化铝中含煅石膏(一般5%煅石膏) [煅石膏CaSO4,作为粘合剂] Al2O3 -HF254 氧化铝中不含煅石膏,仅含荧光 指示剂(在254 nm下呈黄绿色荧光) Al2O3 -GF254 氧化铝中既含煅石膏又含荧光指 示剂(在254 nm下呈黄绿色荧光) 上述商品可以直接调料涂敷(1份料,2份水调合)
(3). pH:影响它们的存在状态
(4). 滤纸:质地均一、厚薄适当、具有一定机 械强度、不含杂质
(5). 温度:在层析缸中用红外灯照射。温度 会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。 层析操作应在恒温下进行,温度不超过± 0.5oC
(6). 展开方式:展开方式不同,Rf也不同。下 行法的Rf最大,上行法的Rf较小,环行法的 Rf也不大。
薄层用商品硅胶有:硅胶H(不含粘结剂)、 硅胶G(含粘结剂煅石膏CaSO4 )、硅胶HF254( 含荧光物质的硅胶)硅胶GF254(含有煅石膏 CaSO4和荧光剂)
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
常见固定相种类:
硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类
聚酰胺—特殊类型有机薄层材料,对能形成氢键的物质
有特别的选择性
固定相要求的比表面 积; 在展开剂中不溶; 与展开剂和样品组分不发生化学反应; 具有适当的吸附能力; 机械强度和稳定性。 按固定相粒径大小分为普通薄层板(10-40μm)和高效薄层板 (5-10μm),实验室自制板固定相粒径一般要求10-40μm。
液-固吸附
三、仪器与材料
①薄层板
按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等;
按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维薄 层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等;
固定相中可根据需要加入粘合剂、荧光剂等辅助物;
可使用预制板或在保证色谱质量的前提下实验室自制的薄 层板。用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁,平整,最 好使用厚度为l-2mm的优质平板玻璃,普通窗玻璃一般不 宜用于制作薄层极,玻璃板需用洗液或碱液洗净至不挂水, 晾干,贮存于干燥洁净处备用;反复使用时应注意需再用 洗液或碱液清洗,如选用预制板应注意生产厂家提供的有 关参数,挑选,检查并试用是否符合要求。
流动相的选择:
一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷< 己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇
根据被分离物的极性,先用单一溶剂展开,若Rf值太小,则加入 一定量极性强的溶剂,如乙醇、丙酮等;如果Rf值太大,则加入适量
极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等),以降低极性。可加入一定比例 的酸或碱,使斑点集中。
玻璃喷雾瓶
显色剂可以分成两大类:一类是检查一般有机化合物的通用显色剂;另一 类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。
通用显色剂 常用的有一定比例的硫酸-水溶液、硫酸-甲醇或乙醇溶液等,喷后110℃ 烘烤,不同有机物有不同显色;碘蒸汽熏蒸, 对很多化合物显黄棕色; 5%磷钼酸乙醇溶液 喷后120℃烘烤,还原性化合物显蓝色等。
⑤记录
薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄,以光学照片或电子图像的
形式保存,也可用薄层色谱扫描或其他适宜的方式(如薄层色谱原始记 录)记录相应色谱图。
五、影响薄层色谱分析的主要因素
常规薄层色谱因为是一种"敞开系统"的色 谱技术,与柱色谱的区别之一是除材料及器 材以外,外界环境条件对被分离物质的层析 行为影响很大,分离机制也很复杂;操作技 巧也明显的影响色谱质量;为了充分发挥薄 层色谱技术在中药分析方面的优势,提高色 谱的分离度和重现性,注意控制影响色谱质 量的因素是非常重要的。以下所述的几个方 面不仅对定量分析是必须注意的问题,对提 高定性分析的质量也是不可忽视的。
实验室应用最广泛的为硅胶薄层板。常用类别有:
硅胶H:不含石膏黏合剂 硅胶G:含煅石膏(硫酸钙)粘合剂 硅胶S:用5%淀粉作黏合剂 硅胶:用羧甲基纤维素(CMC)作黏合剂 硅胶GF254:含煅石膏和一种无机荧光剂,即锰激活的硅酸锌,在254nm紫外 光下呈强烈黄绿色荧光背景。
硅胶:化学分子式为mSiO2·nH2O,多孔性微粒,表面带有硅醇基,呈弱酸性。
流动相选择与使用时需注意的问题:
许多溶剂有吸湿性,使溶剂含水量不一致,导致 实验难以重现。
溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响,应注意出 厂日期。
对于易挥发的溶剂,难于配制稳定组成的流动相。 要求操作格外小心,同时混合流动相不应重复使用。
混合流动相组分之间(或杂质)可能发生相互作 用。 混合流动相组分要充分混匀形成均相。
一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护 剂,有时需重蒸除去乙醇。
④显色装置 薄层极展开后,有的需用试剂(显色剂)显色。涂布显色剂 有喷雾法和浸渍法,以及熏蒸法。 喷雾法显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器,要求用压缩气 体是显色剂呈均匀细雾状喷出;浸渍法显色可用专用玻璃器 械或用适宜展开缸代用,将展开后的薄层板平稳放入有显色 剂的浸渍槽中数十秒至1分钟后取出(指净薄层板背后的残 存试剂)显色;熏蒸法显色可用双槽展开缸或适宜大小的干 燥器代替。
平底、双槽展开缸
水平展开室
流动相(展开剂) 要求: ①对的所需成分有良好的溶解性;
②可使成分间分开; ③待测组分的Rf在合适的范围之间(除另有规定外,在杂质检 查时,各杂质斑点的比移值Rf以在0.2-0.8之间为宜); ④不与待测组分或吸附剂发生化学反应; ⑤沸点适中,黏度较小; ⑥展开后组分斑点圆且集中; ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
必要时,可进行二次展开或双向展开,进行第二次展开前,应使薄层板残留 的展开剂完全挥干。
展开剂要求新鲜配制,如需分层则按规定要求放置分层后,分取需要的一相 (上层或下层)各用。
同时预平衡
④显色与检视
有颜色的物质可在可见光下直接检视,无色物质可用喷雾法或浸渍法 以适宜的显色剂显色,或加热显色,在可见光下检视。有荧光的物质或 显色后可激发荧光的物质可在紫外光灯(365nm或254nm)下观察荧光 斑点。对于在紫外光灯下有吸收的成分,可用带有荧光剂的薄层板(如 硅胶GF254板),在紫外光灯(254nm)下观察荧光板面上的荧光物质 淬灭形成的斑点。
为装有可见光、254nm和365nm紫外光源及相应的滤光片的暗箱,可附加摄像 设备供拍摄图像。暗箱内光源应有足够的光照度。
紫外光灯的长波段(365nm)和短波段(254nm)紫外光管:前者用于观察具 有荧光的色谱,后者一般用于观察硅胶GFS254薄层板色谱,黄绿色荧光背景下 出现的暗蓝紫色吸收斑点,选用紫外光灯应注意荧光管的功率和滤光片的性能。
四、操作方法
①薄层板的制备
市售薄层板(预制板) 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不许 活化。预制薄层板分常规薄层板及高效板两种,由于商品供应来源不一, 需注意并记录生产厂家及生产批号,必要时需测定板效,以保证较好的重 现性。在质量保证的前提下,应尽量选用预制薄层极,以提高时效和色谱 的重现性。 自制薄层板 除另有规定外,将1份固定相(如硅胶G)和3份左右的水(或 加有粘合剂的水溶液,如0.2%-0.5%的CMC-Na水溶液,或规定浓度的改性剂 溶液)在研钵中沿同一个方向充分研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂 布器中,在玻板上平稳地移动涂布器,使硅胶浆均匀地涂布,薄层厚度一 般为0.2~0.3mm,涂布好的薄层板于室温下水平台上晾干,再于110℃加热 活化约30分钟,置干燥器中备用。使用前应在反射光和透射光下检查板面 及纹理是否均匀,如不均匀,有气泡或有麻点、有破损或已污染(如灰尘、 纤维)者应弃去不用。
薄层色谱法
薄层色谱法( THIN LAYER CHROMATOGRAPHY ,TLC)
薄层色谱法,又称薄层层析(《中国药典》2015年 版四部通则0502薄层色谱法),系将供试品溶液 点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使 供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的标准 物质按同法所得色谱图对比,亦可用薄层色谱扫 描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
②点样
除另有规定外,在洁净干燥的环境下,用点样用的微
升毛细管(或其他符合要求的点样工具)点样与薄层板
上。一般为圆点状或窄细的条带状,点样基线与底边的 距离,视所用板的大小而定,如采用长度为10cm的板, 点样距离底边以10-15mm为宜,高效板一般8-10mm。圆 点状点样直径一般不大于4mm,高效板不大于2mm。如 样品容量较大,或为了改善分离度,也可点成的条带状, 条带状宽度一般为5-10mm,高效板条带宽度一般为48mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰 为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般的自 制硅胶G薄层板,板面的牢度不够,定量测定时需特别注 意小心点样,不要使原点部分的板面破损。
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中,密闭,一般采用上行展
开,薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm,展开至规 定展开距后立即将薄层权取出,晾干,以备检测。展开距离为8-15cm为宜,高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂,密闭,一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后,应迅速放入载有 供品的薄层板,立即密闭。如需达到饱和状态,可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者,应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中,平衡后再将溶剂倾入此糟中展开(如图)。
薄层色谱扫描仪
二、基本原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法,它利用各成分对同一吸 附剂吸附能力不同,使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过 程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成 分的互相分离的目的。
薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸 附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换 剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以 吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
专属性显色剂 由于化合物种 类繁多,因此专属性显色剂也是很多的,以下是列举几例 常用专属性显色剂: 改良碘化铋钾,对含氮有机化合物,如生物碱等显色,结果:呈橙红色斑 点;茚三酮,对氨基酸、胺与氨基糖类等显色,结果:呈红紫色斑点;磷 钼酸乙醇液,喷后在140℃加热5~10min,皂苷元均显深蓝色。
⑤检视装置
注意事项: ➢使用喷雾法喷洒显色剂时注意用喷雾器均匀喷洒于薄层板面; ➢浸渍法板面显色均匀是其优点,但有的样品经试剂浸渍后斑点容易被 浸润扩散,则不适用; ➢涂布试剂后如加热显色需注意控制加热温度和时间,尤其含羧甲基纤 维素钠的薄层板温度过高或加热时间过长易焦化,如用硫酸等试剂则可 使板面碳化而影响显色效果; ➢有的成分加试剂后加热温度和加热时间不同,显色效果可能有差别; ➢有的品种用蒸气熏蒸(如碘蒸气)显色者,可在密闭器皿中放置适当 时间至斑点显色清晰。
②点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。微