细胞化学技术ppt课件

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组织细胞化学染色方法分门别类有许多种,结果的显 示也不尽相同,有时即使是检测同一物质,因采取的方法 不同,其结果有可能存在一定的偏差,另一些是由于方法 学上本身的缺陷,其结果也可能产生误差,所以我们应注 意选择结果稳定、方法简便(操作步骤越繁复,结果出现 误差的可能性就越多),阳性显示明显的细胞化学染色方 法如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子 生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的 作用。
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中性粒细胞呈 粗颗粒强阳性
单核细胞呈 弥散弱阳性
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过碘酸一雪夫反应
periodic acid Schiff reaction ,PAS 此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物 质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂 类物质等，因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存 在，只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将 PAS阳性认同于糖原。 PAS染色虽然不完全代表糖原，但在血液系统疾病特 别在各类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS 染色若结合其他化学染色和细胞免疫表型检测可对部 分疾病的诊断和鉴别诊断提供一定的价值。
一．免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与 显微显示的精确性相结合。用已知的抗体在不影响其免 疫学特性的前提下与荧光素相结合。然后将结合了荧光 素标记的抗体作为一种标准试剂。对被检细胞进行检测 和鉴定。并在荧光显微镜下采用一定波长的荧光，可以 直接观察被检测中有否特异荧光的表达。目前用于标记 抗体的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC）、四乙基 罗丹明（RB200）、四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）及 藻红蛋白（PE）在流式细胞术（FCM）中较常用。较为经 典的方法有下列几种：
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组织细胞免疫标记技术的方法学建立至今仅为 短短30年左右的时间，但其发展异常迅速，检测 方法可多达20多种以上。其基本原理是将组织和 细胞作为抗原，与其相应的特异抗体产生抗原－ 抗体反应，并借助荧光色素、酶、胶体金、铁蛋 白等显示系统，在被测组织和细胞所相应的位置 显示出来。由于抗原－抗体系统具有高度的特异 性和敏感性，能够将细胞形态学和功能代谢紧密 的结合起来，进行观察和分析。
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1.原 理
过碘酸氧化多糖类中的乙二醇使之成为双醛基，后 者与无色品红结合形成紫红色化合物。定位于含多糖 类的细胞质内。多糖类物质含量决定了色泽的深浅。
2.参考范围:（正常阳性细胞）
①粒细胞系—原粒细胞多呈阴性,通常随细胞不断成 熟阳性反应由弱渐强,至细胞完全成熟后达到最大 强度。其中中性粒细胞呈胞浆内弥散状红色阳性, 嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞浆呈红色阳性,嗜碱粒 细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。
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一 组织细胞化学染色
组织细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科 学。它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下, 运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构 及生理活性物质原位地显示。因而对于探索化学成分、 生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的 意义。
组织细胞染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基 酸)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类，采用的 方法通常为化学结合物理溶解显示及酶-底物反应。
细胞化学技术
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组织化学技术: 应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物
学的原理和技术与组织学相结合而产生的技术，能在 组织切片定性、定位地显示某种物质的存在与否以及 分布状态。还可进一步用显微分光光度计或图象分析 仪测定光镜切片中该物质反应的强度，获得定量的信 息。
细胞化学技术: 应用组织化学技术于游离细胞的样品(如细胞涂 片)，则称细胞化学技术。
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常用组织细胞化学染色
过氧化物酶 peroxidase ,(POX)
1.原理 血细胞中的POX能分解H2O2而释放出新生态氧，后者
可使联苯胺氧化成联苯胺蓝沉淀于细胞质酶活力处。 2.正常阳性细胞:
①. 中性粒细胞呈均匀颗粒状蓝黑色阳性。 ②. 嗜酸性粒细胞呈均匀粗大颗粒状蓝色阳性。 ③. 单核细胞呈弥散细颗粒状蓝色阳性。
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目前实验室常用的方法有免疫荧光法， PAP法，ABC法、IGSS法等10大类。但由于各 种方法均有其特性和检测适应范围，即某一 种方法无法在所有的检测标本中被应用，我 们应充分发挥各种方法上的特点。有选择性 的将不同来源的组织和细胞标本并选用不同 的方法来进行检测。使我们的检测结果更精 确。
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中性粒细胞碱性磷酸酶
neutrophil alkaline phosphatase ,(NAP)
1.原理ห้องสมุดไป่ตู้
细胞内碱性磷酸酶在碱性环境下水解磷酸萘酚，使 之释放出萘酚，后者与重氮盐偶联形成有色沉淀物。 定位于酶活性所在处。
2.参考范围 ：
中性粒细胞碱性磷酸酶活力正常范围2%～56%, 积分 4～80 分 /100个中性粒细胞
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NAP染色结果 (+) — (++++) 固紫- B
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二 组织细胞免疫化学 标记技术
组织细胞免疫化学是细胞化学吸收了免疫 学的理论和技术而发展起来的一门重要方法学. 在现代医学领域中被广泛应用.尤其在组织细 胞学中该技术的应用是微观世界形态学研究从 单一的形态学描述上升到结构、功能和代谢为 一体的动态观察。并可对细胞的属性、分化阶 段和变异进行鉴别，有助于临床疾病的诊断。
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② 红细胞系— 幼红细胞及红细胞均呈阴性。 ③ 巨核细胞系— 从原始阶段到血小板均呈阳性。 ④ 淋巴细胞系— 大多数淋巴细胞呈阴性，小部分
淋巴细胞成阳性。 ⑤ 单核细胞系— 原始阶段呈阴性，幼稚阶段以后
可见浆内呈弥散细小颗粒状红色阳性。 ⑥ 浆细胞系— 大多数浆细胞呈阴性，小部分浆细
胞呈阳性。
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（一）直接法
是以荧光标记抗体直接与被检标本内的抗原反应。
依据荧光出现的位置及强弱对被检细胞做出判别。该法的
优点为简单特异。但其缺点也很明显即敏感性较低另需制
备大量特异性的荧光抗体。
（二）间接法
间接法采用抗球蛋白试验原理，先制成荧光素标记抗抗
体。检测中先将特异性抗体与被检标本作用一定的时间
后，充分洗去未结合的游离特异性抗体，然后添加荧光素