乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)
乙醇脱氢酶_ADH_产酶菌株的选育_问清江
作者简介：问清江男，副研究员。
主要从事发酵技术研究。
E-mail ：mujuan2008@163．com *通讯作者。
女，研究员。
主要从事酶学在医学、食品、农业及环保领域应用研究。
E-mail ：mujuan2007@163．com 收稿日期：2013-03-13；修回日期：2013-05-08乙醇脱氢酶（ADH ）产酶菌株的选育问清江1，慕娟1*，党永1，张烁2，景振龙2，贺聪莹3，颜阳欣2（1．陕西省微生物研究所，陕西西安710043；2．长安大学环境科学与工程学院，陕西西安710064；3．西北大学生命科学院，陕西西安710068）摘要从食醋生产企业的醋醅中采集样品，以乙醇为唯一碳源，用碳酸钙透明圈平板法分离出185株菌株，然后以产酸量和耐乙醇能力为标准，摇瓶发酵选育出20株ADH 产酶菌株;A5-2产酸量为49．85g /L ，耐乙醇能力强，A5-2的菌种形态学和16S rDNA 序列分析初步鉴定为巴斯德醋酸杆菌(Acetobacter pasteurianus );A5-2乙醇脱氢酶酶学性质研究表明:最适作用温度和pH 分别为45ħ和pH 4．0，具有一定的耐热性和良好的耐酸碱性;A5-2乙醇脱氢酶粗酶制备条件为硫酸铵饱和度70% 80%，回收率84%。
关键词乙醇脱氢酶;醋酸杆菌;选育;酶学性质中图分类号Q935文献标识码A文章编号1005－7021(2013)05－0054－06doi :10．3969/j．issn．1005－7021．2013．05．010Breeding of Alcohol Dehydrogenase Producing StrainsWEN Qing-jiang 1，MU Juan 1，DANG Yong 1，ZHANG Shuo 2，JING Zhen-long 2，HE Cong-ying 3，YAN Yang-xin 2（1．Shaanxi Inst．of Microbiol．，Xi'an 710043；2．Coll．Environ．Sci．＆Engin．，Changan Uni．，Xi'an 710064；3．Coll．of Life Sci．，NW Uni．，Xi'an 710068）Abstract 185alcohol dehydrogenase （ADH ）producing strains were isolated from samples collected from vinegar fermented grains in vinegar production enterprise by selective medium using ethanol as the sole carbon source ，and calcium carbonate transparent circle on plate．20high ADH producing strains were bred under shaking-flask fermenta-tion ，in which acid output and ethanol tolerance were used as standards．The acid output of A5-2achieved 49．85g /L and its capacity of ethanol tolerance was strong．A5-2was initially identified as Acetobacter pasteurianus based on its morphological characterization and 16S rDNA sequence．Study on enzyme characteristics showed that the optimal reac-tion conditions of A5-2ADH were at 45ħand pH 4．0，and it had heat tolerance and fine tolerance against acid-base．The preparation condition of crude ADH were saturated concentration of ammonium sulfate was at 70% 80%and the ADH activity recovery was at 84%．Keywordsalcohol dehydrogenase （ADH ）；Acetobacter ；breeding ；enzymological characteristics乙醇脱氢酶（Alcohol Dehydrogenase ，ADH ）广泛存在于人和哺乳动物的肝脏、植物组织及微生物细胞中，是生物体内重要的氧化还原催化剂之一，其为具有广泛专一性的含锌金属酶，以NAD +为辅酶，能够催化乙醇氧化为乙醛，乙醛经乙醛脱氢酶（Aldehyde dehydrogenase ，ALDH ）继续氧化生成乙酸，进入三羧酸循环最终生成二氧化碳和水，是人和动物体内重要的代谢酶。
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P微板法)
1.5ml
RT
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品： ①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， 室温保存 3 天，用于 LDH 的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存 3 天， 用于 LDH 的检测。 ③长期保存样品：如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法 操 作：按待测样品(如血清)：LDH 保护工作液=9:1 的比例混合，4℃避光保存。 ④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的 LDH 含量。
组成：
名称 试剂(A): NADH 试剂(B): LD-P Assay buffer 试剂(C): 丙酮酸溶液 试剂(D): 丙酮酸稀释液 试剂(F): LDH 保护稀释液 使用说明书
编号
TE01 55 100T
Storage
2 支 -20℃ 避光
100ml
RT
2×1.5ml 4℃ 避光
30ml
RT
北京雷根生物技术有限公司
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 微板法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原 子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的 酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙 酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 微板法)是利用乳酸脱氢 酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。该 LD-P 法的优点是：1、操作 比二硝基苯肼法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、适用于自动分析仪 该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
苏州科铭试剂盒总清单-5.3
咨询 800 420 2300 1200 1000 520 1100 580 1550 800 1200 620
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
抗坏血酸氧化酶（AAO）测试盒
抗坏血酸氧化酶（AAO）测试盒
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
微量法
紫外分光光度法
微量法
100管/48样 50管/24样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样
100管/96样
50管/48样
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒
醇脱氢酶（ADH）测试盒
醇脱氢酶（ADH）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒
烟酸含量测试盒
微量法 可见分光光度法 高效液相色谱法
微量法 可见分光光度法
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）测试盒
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）测试盒
体内乙醇含量测定结果的法医学评价
体内乙醇含量测定结果的法医学评价朱德全;庞华;黎锦荣【摘要】近年来涉及酒后行为的案件增多,但对体内乙醇含量及有关问题的系统性描述较少.本文从体内乙醇的分布代谢规律、毒性作用机理及体内生成机制等方面,根据乙醇含量的测定结果从酒后时间、摄入乙醇总量、精神状态与行为能力控制、死亡原因及方式等几方面系统地进行分析,找出其中蕴含的法医学信息,以供同行参考.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2006(022)001【总页数】4页(PS4-S7)【关键词】乙醇;乙醇测定;乙醇代谢动力学;乙醇的生成与减少【作者】朱德全;庞华;黎锦荣【作者单位】广州市公安局越秀分局,广东,广州,510040;广州市公安局越秀分局,广东,广州,510040;广州市公安局越秀分局,广东,广州,510040【正文语种】中文【中图分类】DF795.4与服用乙醇有关的案件在法医检案中并不少见，且近年来呈上升趋势。
法医在处理此类案件时，除作全面的现场勘查及调查外，对体内乙醇含量的测定至关重要。
随着现代科学技术的发展，气相色谱技术已能准确地对各种检材中微量乙醇进行测定。
乙醇含量测定结果中蕴含着丰富的信息，法医能否正确解读此测定结果往往成为解决问题的关键。
笔者试从乙醇的代谢规律、毒性作用机理及体内生成方面对乙醇含量测定结果进行分析，希望能供同行参考。
现代法医学、药物学在乙醇体内分布及代谢规律方面的研究成果为有关乙醇的法医学分析提供了充分的依据。
一般认为口服乙醇通过滤过和简单扩散方式主要由小肠吸收，2～5min开始入血，经1.5h血浓达到高峰，2.5h全部吸收。
乙醇饮料的体积分数、胃内容性状、个体差异等均可影响乙醇的吸收。
乙醇体积分数高，吸收快。
在空腹状态下，乙醇吸收最快，约0.5～1h即可达到血浓高峰，而脂类及富含蛋白质的食物可使吸收变慢，胃炎、胃溃疡及胃切除术后患者吸收可加快。
正确掌握乙醇代谢规律、酒后时间、胃部解剖情况，有利于根据乙醇含量测定结果进行摄入乙醇总量的分析与推断。
ALDHELISA试剂盒说明书
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
大鼠乙醛脱氢酶ELISAkit价格/ALDHELISA试剂盒说明书样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
大鼠乙醛脱氢酶ELISAkit价格/ALDHELISA试剂盒说明书试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
2μmol/L - 40μmol/L
Байду номын сангаас
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
乙醛脱氢酶测定方法
乙醛脱氢酶测定方法
需要注意的是，具体的实验步骤和条件可能因实验目的、样品类型和实验室设备而有所不 同。在进行乙醛脱氢酶测定前，应参考相关的步骤： 1. 准备一组试管，每个试管中加入以下试剂（体积可根据需要调整）： - 0.1 M 磷酸盐缓冲液 1 mL - 0.1 M 乙醛溶液 0.1 mL - 待测样品 0.1 mL（如果有） 2. 在每个试管中加入适量的乙醛脱氢酶溶液，使最终体积为2 mL。 3. 在每个试管中加入适量的NAD+溶液，使最终体积为3 mL。 4. 将试管放入37°C的恒温水浴中，孵育一定时间（通常为10-30分钟）。
乙醛脱氢酶测定方法
5. 孵育结束后，使用分光光度计测量每个试管中的吸光度。乙醛脱氢酶催化乙醛氧化生 成乙酸，同时还伴随着NAD+还原为NADH。通过测量NADH的吸光度变化，可以间接测定 乙醛脱氢酶的活性。
6. 使用一个空白试管作为对照，其中不加入乙醛溶液，其他步骤相同。
3. 数据分析： - 计算每个试管的吸光度差值（样品试管减去空白试管）。 - 根据已知的标准曲线或对照样品，将吸光度差值转换为乙醛脱氢酶的活性。
乙醛脱氢酶测定方法
乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）是一种酶，主要参与乙醛的代谢过程 。以下是一种常用的乙醛脱氢酶测定方法：
1. 材料准备： - 0.1 M 磷酸盐缓冲液（pH 7.4） - 0.1 M 乙醛溶液 - 0.1 M NAD+（辅酶）溶液 - 待测样品
乙醛脱氢酶测定方法
人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告
人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告酒精是一种常见的神经系统抑制剂，它会让人产生感觉的放松和愉悦，并且也会增加人们对危险和冒险的倾向。
然而，在接触酒精时，每个人的反应可能会存在差异，这是因为乙醇代谢速率的遗传变异可能会影响个体对酒精的敏感性和酒精耐受能力。
因此，研究乙醇代谢的相关基因变异可以为精准的药物治疗和预防酒精滥用提供重要的指导和支持。
本实验旨在通过检测人类乙醇脱氢酶（ADH）的基因型，探索ADH基因多态性对酒精代谢能力的影响，并为相关药物治疗提供参考。
实验方法本实验选取了50名年龄在18-35岁之间的健康成年人作为研究对象，均为中国汉族人。
通过采集被试者的口腔黏膜细胞，提取DNA，然后进行基因型分析。
在此基础上，分析ADH1B*1、ADH1B*2、ADH1B*3、ADH1C*1、ADH1C*2、ADH4*1和ADH4*2这7个ADH基因突变位点的基因型分布情况，并进一步分析这些基因型与乙醇代谢速率的相关性。
结果和分析实验结果表明，ADH基因突变位点的基因型频率在被试者中存在差异。
其中，ADH1B*2位点的基因型频率最高，为36%，其次是ADH1C*1和ADH1C*2位点的基因型频率，分别为26%和22%。
而ADH1B*1、ADH1B*3、ADH4*1和ADH4*2位点的基因型频率较低，分别为6%、6%、2%和2%。
进一步分析发现，ADH1B*2位点的基因型与乙醇代谢速率之间存在很大的关联性。
具体来说，该基因型的个体乙醇代谢速率较快，一般较为耐酒，容易产生饮酒后仍然保持理智和冷静的感觉。
而ADH1C*1和ADH1C*2位点的基因型与乙醇代谢速率关联性较小，可能会导致人体对酒精的摄入量有较大的差异。
结论和建议通过本实验的研究，我们可以初步认识到酒精代谢的遗传变异对人们饮酒行为的影响。
ADH基因突变位点的分布和相应基因型的差异，可能导致不同个体对酒精的代谢能力不同，甚至在同等条件下出现酒精含量差异较大的现象。
乙醇脱氢酶（ADH）活性检测试剂盒说明书
乙醇脱氢酶（ADH ）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC1085规格：100T/96S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体2 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；2、试剂一：临用前把试剂二转移到试剂一中，分装保存于-20℃。
产品说明：ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。
哺乳动物ADH 主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。
血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
ADH 催化NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD +，NADH 在340nm 处有吸收峰，而NAD +没有；测定340nm 吸光度下降速率，来计算ADH 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV 板）、可调式移液器、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、 组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。
16000g ，4℃离心20min ，取上清置冰上待测。
2、 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间3min ）；16000g ，4℃离心20min ，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
乙醇测定试剂盒(乙醇脱氢酶法)产品技术要求jiuqiang
乙醇测定试剂盒（乙醇脱氢酶法）适用范围：用于体外定量分析人血清或血浆中的乙醇含量。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 包装规格包装规格见表1。
1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异。
2. 性能指标2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.0000。
2.4 准确度用国际标准物质SRM 2896，对试剂盒进行测试，相对偏差应不超过±10.00%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为1.00 g/L时，吸光度差值应≥0.2800。
2.6 线性区间在[0.05, 3.00]g/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[0.05, 1.00] g/L区间内测定的绝对偏差应不超过±0.10 g/L，在(1.00, 3.00] g/L区间内测定的相对偏差应不超过±10.00%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的样本重复测定10次，其测定值的变异系数（CV%）应不大于10.00%。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于15.00%。
2.8 质控品赋值有效性使用质控品进行测定，所得结果应在质控范围内。
2.9 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。
在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1、2.8的要求。
2.10 溯源性按照GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供所用产品校准的来源、赋值过程以及测量不确定度，试剂盒校准品溯源至国际参考物质SRM 2896。
成都2023-2024学年度下期高2025届零诊模拟考试生物试卷含答案
成都2023-2024学年度下期高2025届零诊模拟考试生物试卷（答案在最后）试题分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分，满分100分，考试时间75分钟。
第Ⅰ卷（选择题，共48分）一、选择题(本卷共16题，每题3分，共计48分。
每小题只有一个选项符合题意)1．人类用电子显微镜观察到细胞的形态多种多样，同时也发现了细胞结构的不同，基于对原核生物和真核生物的理解，下列叙述正确的是（）A．所有真核细胞都有细胞膜、细胞质和细胞核B．颤蓝细菌和发菜均无叶绿体，但却是自养生物C．支原体自身的蛋白质均在宿主细胞核糖体上合成D．酵母菌、大肠杆菌的遗传物质分别是DNA、RNA2．下图中甲、乙、丙所示为组成生物体的相关化合物，乙为一个由α、β、γ三条多肽链形成的蛋白质分子，共含271个氨基酸，图中每条虚线表示由两个巯基（—SH）脱氢形成一个二硫键（—S—S—）。
下列相关叙述不正确的是（）A．甲为组成乙的基本单位，且乙中最多含有21种甲B．由不同的甲形成乙后，相对分子质量比原来减少了4832C．丙主要存在于细胞核中，且在乙的生物合成中具有重要作用D．如果甲中的R为C3H5O2，那么由两分子甲形成的化合物中含有16个H3．如图所示为人体肺泡结构，II型细胞主要负责分泌肺泡表面活性物质（含有部分脂质和蛋白质），降低肺泡表面张力，避免肺泡坍缩。
下列叙述错误的是（）A．I型细胞的特殊扁平形态的构建与细胞骨架有关B．红细胞无氧呼吸产生的CO2通过自由扩散进入肺泡腔C．II型细胞中含有发达的内质网和高尔基体D．II型细胞分泌肺泡表面活性物质需要消耗能量4．科学家用离心技术分离得到有核糖体结合的微粒体，即膜结合核糖体。
其核糖体上最初合成的多肽链含有信号肽（SP）以及信号识别颗粒（SRP）。
研究发现，SRP与SP结合是引导新合成的多肽链进入内质网腔进行加工的前提，经囊泡包裹离开内质网的蛋白质均不含SP，此时的蛋白质一般无活性。
大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)酶联免疫分析 试剂盒 说明书
大鼠乙醛脱氢酶（ALDH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中乙醛脱氢酶（ALDH）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中乙醛脱氢酶水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙醛脱氢酶抗原、生物素化的抗大鼠乙醛脱氢酶抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乙醛脱氢酶呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释100ng/ml，50ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50ng/ml标准品：取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
2.样品稀释液：1×20ml/瓶。
3.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
4.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
5.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
6.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
乙醛脱氢检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解乙醛脱氢酶的活性测定原理和方法。
2. 学习使用分光光度法检测乙醛脱氢酶活性。
3. 掌握实验操作技能，提高实验数据分析能力。
二、实验原理乙醛脱氢酶是一种酶，能将乙醛氧化成乙酸，同时自身被还原。
在反应过程中，NADH被氧化成NAD+，NADH在340nm处的吸光度发生变化，通过测定吸光度变化，可以计算出乙醛脱氢酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 乙醛溶液- NADH溶液- 乙醛脱氢酶- Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）- 硫酸铵- 氯化钠- 丙酮- 磷酸盐缓冲液- 光度计2. 实验仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 移液器- 离心机- 烧杯- 试管四、实验步骤1. 配制工作液：- 称取乙醛脱氢酶，用Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）溶解，配制成一定浓度的酶溶液。
- 称取NADH，用Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）溶解，配制成一定浓度的NADH溶液。
- 称取硫酸铵、氯化钠、丙酮，用Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）溶解，配制成一定浓度的底物溶液。
2. 检测乙醛脱氢酶活性：- 将乙醛溶液、NADH溶液、乙醛脱氢酶溶液、Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）按照一定比例混合，置于恒温水浴锅中保温5分钟。
- 取一定量的混合液，加入磷酸盐缓冲液，使pH值调整为7.8。
- 将混合液置于光度计中，在340nm处测定吸光度。
- 每隔一定时间，重复测定吸光度，直至吸光度变化趋于稳定。
3. 数据处理：- 根据吸光度变化，计算乙醛脱氢酶的活性。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 乙醛脱氢酶活性为XX U/mg蛋白质。
2. 分析：- 通过本实验，成功测定了乙醛脱氢酶的活性。
- 实验结果符合预期，说明实验操作正确，实验原理正确。
六、实验讨论1. 实验过程中，需要注意以下几点：- 操作要准确，避免误差。
- 控制好反应条件，如温度、pH值等。
- 定期检测吸光度，确保实验数据的准确性。
2024届福建省福州市高三下学期4月末质量检测(三模)生物试题+答案
(在此卷上答题无效)2023-2024学年福州市高三年级4月末质量检测生物试题(完卷时间75 分钟;满分 100分)友情提示：请将所有答案填写到答题卡上！请不要错位、越界答题！一、单项选择题 (1-10题每题2分，11-15每题4分，共40分。
仅有一项答案最符合题意)1.下列有关酵母菌和大肠杆菌的叙述，错误的是A.都能作为T2 噬菌体的宿主细胞B. DNA 复制时均需要 DNA 聚合酶C.都能利用核糖体合成自身蛋白质D.细胞膜均以磷脂双分子层为基本支架2.阐明生命现象的规律，必须建立在阐明生物大分子结构的基础上。
下列叙述错误的是A.蛋白质分子具有与它所承担功能相适应的独特结构B.核酸是由核苷酸连接而成的长链，是遗传信息的携带者C.糖原、淀粉、麦芽糖都是以葡萄糖为单体的生物大分子D.生物大分子是由单体连接成的多聚体，以碳链为基本骨架3.人体内环境稳态的维持离不开信息分子的作用，下列叙述错误的是A.胰高血糖素能升高血糖浓度，参与血糖平衡调节B.乙酰胆碱进入突触后膜，引发突触后膜电位变化C.细胞因子能促进 B细胞的分裂、分化的过程D.信息分子的作用方式都是直接与受体相接触4.生物膜绝大多数的功能是由各种膜蛋白完成的，下列关于膜蛋白叙述正确的是A.甲属于载体蛋白，每次转运都不会发生自身构象改变B.乙可催化特定物质转化，如线粒体外膜上的ATP 合成酶C.丙代表受体蛋白，如接受胰岛素的信号引起肝糖原分解D.膜蛋白功能多样，如某些神经递质的受体也是离子通道5.正常情况下，人体具有维持内环境相对稳定的能力。
下列调节过程叙述错误的是A.运动时体温升高，下丘脑兴奋，皮肤血管收缩B.运动时血浆渗透压升高，抗利尿激素分泌增加C.安静时副交感神经占优势，胃肠道蠕动加快D.安静时肾上腺素分泌减少，机体耗氧量减少高三生物— 1— (共8页)6.高血压病的发病机制复杂，如水钠潴留 (水和钠滞留于内环境)、肾素-血管紧张素-醛固酮系统过度激活(肾素可促进生成血管紧张素Ⅱ，血管紧张素Ⅱ引发血管收缩、醛固酮分泌增加)。
乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量
乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量12级临本二班吕梦月许力飞王雅琦王明华马翔张宇王帅实验目的：乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量实验原理：分离：加蛋白质抑制剂：竞争性或非竞争性抑制蛋白酶活性；防止蛋白酶分解；除核酸：利用核酸和蛋白质在链霉素磷酸酶中溶解度不同除去核酸；去盐：超滤液筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过度介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤液膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的净化、分离和浓缩的目的。
等电点测定法的原理：在等电点时蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子静电荷为零，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互作用之间的作用减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
提纯：醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。
它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。
它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。
太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
鉴定：乙醇脱氢酶可将乙醇分解生成乙醛定量：S D S-P A G E即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法：1. 在混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷量。
2. 在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入适量SDS (阴离子表面活性剂)，使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上(一定条件下，大多数蛋白质与之结合比为1.4g SDS/1g protein)，使各种蛋白质-SDS 复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质之间原有的电荷差别。
此时特定蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于其分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。
乙醇测定SOP_ALC临床意义_检验科生化项目SOP
4.4.1手工编排测试项目：样品按编号装入样品架，主屏幕按F1:ENTER DATA，在Position处输入样品所在样品架字母及所在位置号，按enter，在Patient Name处选择性输入病人名字，按enter，在Sample No处输入样品号，按enter，在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目，根据需要选择相应的按键改变Mode（按F7:MEXT MODE选择样品管类型）、Priority（按F4:NEXT PRIORITY选择样品的处理模式）、Fluid（按F8:NEXT FLUID选择标本类型）。
乙醇+ NAD ADH乙醛+ NADH + H+
（在340nm处不吸收）（在340nm处吸收）
乙醛+Tris复合物
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹采不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
血清标本置2~8℃保存至分析前。尿液标本置4℃保存至分析前，长期保存或不冷冻保存应加入50mg
NaF作为防腐剂。
乙醇测定
文件编号：
版本号：
页码：第页共页
Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。
5.2校准条件
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准
周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)
简介：
乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系统名为乙醇：辅酶I氧化还原酶（alcohol：NAD+oxidoreductase），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。
乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应：CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO+NADH+ H+。
在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。
作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。
丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶，无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性，影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。
Leagene乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)检测原理是在弱碱条件下，以乙醛为底物，乙醛在ADH催化下被NADH还原为乙醇，ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出乙醇脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中乙醇脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、研钵或匀浆器
2、离心管或试管
3、低温离心机
4、96孔板
5、酶标仪编号
名称TE0471
100T
Storage
试剂(A):ADH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃
试剂(C):ADH Assay buffer20ml RT
试剂(D):NADH1支-20℃
使用说明书1份
操作步骤(仅供参考)：
1、配制ADH Lysis buffer工作液：取出ADH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，ADH
Lysis buffer：PMSF按一定比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
2、准备样品：
①植物样品：取植物组织(根系)清洗干净，切碎，植物组织：ADH Lysis buffer工作液按一定的比例，加入预冷的ADH Lysis buffer工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心留取上清液即为乙醇脱氢酶粗提液。
短期4℃保存待用，长期-20℃冻存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于乙醇脱氢酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用ADH Lysis buffer工作液进行适当匀浆，离心，取上清液，冻存，用于乙醇脱氢酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的乙醇脱氢酶，可以使用ADH Lysis buffer工作液进行恰当的稀释。
3、配制NADH工作液：取出NADH，恢复至室温，准确溶解于ddH2O，混匀，预冷备
用。
-20℃保存1周有效。
注意：该NADH工作液为过量。
4、配制ADH Assay buffer工作液：取出ADH Assay buffer、NADH工作液，恢复至室
温，ADH Assay buffer：NADH工作液按一定的比例混合，混匀，即为ADH Assay buffer工作液。
最好即配即用，4℃预冷备用，-20℃保存1周有效。
5、ADH加样：按照下表设置对照孔(备选，一般可以不设对照孔)、测定孔，溶液应按照
顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的乙醇脱氢酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
加入物(μl)对照孔(备选)测定孔
ADH Lysis buffer工作液5—
待测样品—5
ADH Assay buffer工作液200200
6、ADH测定：加入ADH启动剂，立即以酶标仪测定吸光度(记为A0)并同时计时，每隔
30s测定一次吸光度，其中至1min时吸光度记为A1，记录其变化。
Leagene建议加入ADH启动剂后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1-3min内，其后反应趋于平缓。
注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，再进一步推算出乙醇脱氢酶的量。
因此加入ADH启动剂立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
计算：
乙醇脱氢酶活性定义：每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位。
液体样品ADH(U/ml·min)=ΔA/(0.01×t×0.005)
式中：ΔA=A0−A1(如有必要，可再减去对照最初1min的吸光度变化量)
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
0.005=待测样品体积(ml)
组织样品ADH(U/g·min)=ΔA/(0.01×t×W)
式中：ΔA=A0−A1(如有必要，可再减去对照最初1min的吸光度变化量)
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
W=待测样品鲜重或干重(g)
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20~-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑分光光度计的最小检
测体积。
4、该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，
再进一步推算出乙醇脱氢酶的量。
因此加入ADH启动剂立即计时很重要，每次检
测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
5、酶液的稀释度应尽量控制在A340/min下降范围在0.1-0.2之间，以便减少实验误差。
6、ΔA为反应最初1min内吸光度变化的绝对量，如有必要可减去对照液最初1min的吸
光度变化量。
7、所测样本的浓度过高，应用ADH Lysis buffer工作液稀释样品后重新测定。
有效期：6个月有效。