第三章细胞工程基本技术
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其它方法消毒的物品(如塑料培养皿等)。一般 距紫外灯2.5米范围内直接照射20分钟即可。
２、电离辐射消毒 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过的
用品。
３、湿热灭菌 湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和
最有效的一种方法。布类、胶塞、金属器械、 玻璃器皿及某些培养用液都可用此法消毒灭 菌。 各种物品有效消毒灭菌压力和时间不同， 一般培养用液、橡胶制品要求10磅(114℃)， 10～20分钟或8磅(112℃)30分钟。布类、玻 璃制品、金属器械等为15磅(12l℃)20分钟。
玻璃滤器适用于各种培养液的滤过除菌。玻璃滤 器根据滤板的孔径分为G1一G6几种规格，一般采用 G6型(孔径在1.5μm以下)，可达到除菌目的。
3、塑料器皿的清洗
细胞培养使用的塑料器皿主要有培养板、培 养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次 性商品，己消毒灭菌，打开就可使用。
如想反复使用，清洗方法如下：用后立即用 流水清洗或浸泡在水中，用脱脂棉清拭掉残留 附着物，用2％NaOH浸泡过夜，流水冲净后再 用5％盐酸浸泡30min，自来水冲洗、蒸馏水漂 洗2~3次，最后三蒸水漂洗2次，晾干备用。
② 刷洗
浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加 热）刷洗。
③ 浸酸
刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的 强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无 腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关 键环节。清洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水 按一定比例配制而成。浸泡时器皿要充满洗 液，不留气泡。浸泡时间不应少于6小时，一 般应浸泡过夜。
新配制的清洁液为棕红色，经多次使用，水份增多 或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示清洁液已失效， 应废弃而重新配置。
也可以使用10％～40％的硝酸溶液。
④ 冲洗
玻璃器皿浸酸后必须用流水充分冲洗，每 个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复十次以 上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗2~3次， 用双蒸水漂洗1次，烤干备用。
五、消毒灭菌
防止细菌、真菌和病毒等微生物的污染。 消毒灭菌的方法有多种，随物品不同，
采用不同的方法。总的来说有物理方法 和化学方法两大类。 物理法包括：湿热(高压蒸气)、干热、 过滤和紫外线等方法杀灭或去除微生物。 化学法是使用化学消毒剂、抗菌素等杀 灭微生物。
（一）物理灭菌法
1、紫外线消毒 常用来消毒空气，操作表面和一些不能用
。
４、干热灭菌
主要适用于玻璃器皿的消毒灭菌。用 电热鼓风干燥箱加温到160℃，保持1小 时或更长时间，可达到消毒目的。金属 器械和橡胶、塑料制品不能使用干热消 毒法。
灼烧也属于干热消毒灭菌方法
５、滤过除菌
大多数培养用液，如人工合成培养液、血清、酶 溶液等，在高温下会变性，失去功能，必须采用滤 过法除菌。
玻璃滤器原则上与玻璃器皿清洗相同。无 论是浸泡还是浸酸、冲洗，都需用抽滤的方 法。
2、橡塞清洗
新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自 来水冲洗。胶塞类橡胶用品，每次用后先用蒸馏水 浸泡，然后用2％NaOH煮沸10-20 min，用自来水 冲洗干净，再用1％稀盐酸浸泡30min，用自来水冲 洗、蒸馏水漂洗2-3次，最后双蒸或三蒸水漂洗1次， 晾干后备用。
清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面 三种：
强液：重铬酸钾63g，浓硫酸1000ml，蒸馏水200ml
次强液：重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水 1000ml
弱液：重铬酸钾l00g，浓硫酸l00ml，蒸馏水1000ml
配制时先将重铬酸钾完全溶解于水，然后缓慢加入 浓硫酸。
第三章 细胞工程基本技术
一、细胞工程实验室的设置
1 动物细胞工程实验室的设置
无菌操作室：更衣间、缓冲间、操作间 培养观察室 制备室 储藏室 清洗与灭菌室
2 植物细胞工程实验室的设置
除与动物细胞工程实验室相同的 设置外，还有些特殊要求，如光照、 试管苗培育和移植驯化等。
二、常用仪器与设备 超净工作台 倒置显微镜和相差显微镜 干燥箱 水纯化装置 冰箱（4 ℃、-20℃、 -70℃） 压力蒸汽消毒器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
细胞记数板和电子细胞记 数仪
过滤除菌装置 离心机 移液管、吸管 离心管 移液器 天平
动物细胞工程实验室基本设备仪器
1 培养箱
二氧化碳培养箱，提供恒定CO2（5%） 以稳定pH值，温度：哺乳类35℃-37℃， 鸟类38.5℃，气相：O2、CO2、pH7.2-7.4
2 显微操作仪
清洗的目的是清除杂质和微生物,使器 皿内不残留任何影响细胞生长的成分(有 害物质、微生物、细胞碎片及非营养性 化学成分）。
1、玻璃用品的清洗
在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清 洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油 迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百 万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此， 玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。
一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸 和冲洗四个步骤。
① 浸泡
初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水 浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃 器皿多附有大量蛋白质，用完后应立即初步刷洗， 浸泡在蒸馏水中，注意让水完全进入瓶皿中，不 要留有气泡。使用新的器皿应先用自来水简单刷 洗，然后用稀盐酸(5％)浸泡过夜或煮沸30分钟， 中和其中的碱性物质后再清洗。
一般细胞培养按一级生物安全标准，其基本要求 是：
1、限制随便出入实验室；2、操作前后要消毒； 3、不能用口吸取液体；4、禁止在室内进食、吸烟 和存放食品；5、操作时着专门实验服；6、处理细 胞前后要洗手；7、操作时在超净工作台。
四、培养用品的清洗
在培养物中无毒和无菌是保证培养细胞 生存的首要条件，因此对培养器皿的清 洗和灭菌是极为重要的环节。
3 细胞融合仪
4 细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮 罐-196℃）
5 培养用器皿 各种培养瓶、 培养皿、多 孔培养板（6、24、96）
6 手术器械等
植物细胞工程实验室基本设备仪器
光照培养箱 人工气候室 摇床 培养瓶
三、实验室的生物安全
根据密封程度的不同,将生物安全分为四个等级, 即:
P1、P2、P3、P4 （protect）
２、电离辐射消毒 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过的
用品。
３、湿热灭菌 湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和
最有效的一种方法。布类、胶塞、金属器械、 玻璃器皿及某些培养用液都可用此法消毒灭 菌。 各种物品有效消毒灭菌压力和时间不同， 一般培养用液、橡胶制品要求10磅(114℃)， 10～20分钟或8磅(112℃)30分钟。布类、玻 璃制品、金属器械等为15磅(12l℃)20分钟。
玻璃滤器适用于各种培养液的滤过除菌。玻璃滤 器根据滤板的孔径分为G1一G6几种规格，一般采用 G6型(孔径在1.5μm以下)，可达到除菌目的。
3、塑料器皿的清洗
细胞培养使用的塑料器皿主要有培养板、培 养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次 性商品，己消毒灭菌，打开就可使用。
如想反复使用，清洗方法如下：用后立即用 流水清洗或浸泡在水中，用脱脂棉清拭掉残留 附着物，用2％NaOH浸泡过夜，流水冲净后再 用5％盐酸浸泡30min，自来水冲洗、蒸馏水漂 洗2~3次，最后三蒸水漂洗2次，晾干备用。
② 刷洗
浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加 热）刷洗。
③ 浸酸
刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的 强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无 腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关 键环节。清洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水 按一定比例配制而成。浸泡时器皿要充满洗 液，不留气泡。浸泡时间不应少于6小时，一 般应浸泡过夜。
新配制的清洁液为棕红色，经多次使用，水份增多 或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示清洁液已失效， 应废弃而重新配置。
也可以使用10％～40％的硝酸溶液。
④ 冲洗
玻璃器皿浸酸后必须用流水充分冲洗，每 个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复十次以 上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗2~3次， 用双蒸水漂洗1次，烤干备用。
五、消毒灭菌
防止细菌、真菌和病毒等微生物的污染。 消毒灭菌的方法有多种，随物品不同，
采用不同的方法。总的来说有物理方法 和化学方法两大类。 物理法包括：湿热(高压蒸气)、干热、 过滤和紫外线等方法杀灭或去除微生物。 化学法是使用化学消毒剂、抗菌素等杀 灭微生物。
（一）物理灭菌法
1、紫外线消毒 常用来消毒空气，操作表面和一些不能用
。
４、干热灭菌
主要适用于玻璃器皿的消毒灭菌。用 电热鼓风干燥箱加温到160℃，保持1小 时或更长时间，可达到消毒目的。金属 器械和橡胶、塑料制品不能使用干热消 毒法。
灼烧也属于干热消毒灭菌方法
５、滤过除菌
大多数培养用液，如人工合成培养液、血清、酶 溶液等，在高温下会变性，失去功能，必须采用滤 过法除菌。
玻璃滤器原则上与玻璃器皿清洗相同。无 论是浸泡还是浸酸、冲洗，都需用抽滤的方 法。
2、橡塞清洗
新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自 来水冲洗。胶塞类橡胶用品，每次用后先用蒸馏水 浸泡，然后用2％NaOH煮沸10-20 min，用自来水 冲洗干净，再用1％稀盐酸浸泡30min，用自来水冲 洗、蒸馏水漂洗2-3次，最后双蒸或三蒸水漂洗1次， 晾干后备用。
清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面 三种：
强液：重铬酸钾63g，浓硫酸1000ml，蒸馏水200ml
次强液：重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水 1000ml
弱液：重铬酸钾l00g，浓硫酸l00ml，蒸馏水1000ml
配制时先将重铬酸钾完全溶解于水，然后缓慢加入 浓硫酸。
第三章 细胞工程基本技术
一、细胞工程实验室的设置
1 动物细胞工程实验室的设置
无菌操作室：更衣间、缓冲间、操作间 培养观察室 制备室 储藏室 清洗与灭菌室
2 植物细胞工程实验室的设置
除与动物细胞工程实验室相同的 设置外，还有些特殊要求，如光照、 试管苗培育和移植驯化等。
二、常用仪器与设备 超净工作台 倒置显微镜和相差显微镜 干燥箱 水纯化装置 冰箱（4 ℃、-20℃、 -70℃） 压力蒸汽消毒器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
细胞记数板和电子细胞记 数仪
过滤除菌装置 离心机 移液管、吸管 离心管 移液器 天平
动物细胞工程实验室基本设备仪器
1 培养箱
二氧化碳培养箱，提供恒定CO2（5%） 以稳定pH值，温度：哺乳类35℃-37℃， 鸟类38.5℃，气相：O2、CO2、pH7.2-7.4
2 显微操作仪
清洗的目的是清除杂质和微生物,使器 皿内不残留任何影响细胞生长的成分(有 害物质、微生物、细胞碎片及非营养性 化学成分）。
1、玻璃用品的清洗
在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清 洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油 迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百 万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此， 玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。
一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸 和冲洗四个步骤。
① 浸泡
初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水 浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃 器皿多附有大量蛋白质，用完后应立即初步刷洗， 浸泡在蒸馏水中，注意让水完全进入瓶皿中，不 要留有气泡。使用新的器皿应先用自来水简单刷 洗，然后用稀盐酸(5％)浸泡过夜或煮沸30分钟， 中和其中的碱性物质后再清洗。
一般细胞培养按一级生物安全标准，其基本要求 是：
1、限制随便出入实验室；2、操作前后要消毒； 3、不能用口吸取液体；4、禁止在室内进食、吸烟 和存放食品；5、操作时着专门实验服；6、处理细 胞前后要洗手；7、操作时在超净工作台。
四、培养用品的清洗
在培养物中无毒和无菌是保证培养细胞 生存的首要条件，因此对培养器皿的清 洗和灭菌是极为重要的环节。
3 细胞融合仪
4 细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮 罐-196℃）
5 培养用器皿 各种培养瓶、 培养皿、多 孔培养板（6、24、96）
6 手术器械等
植物细胞工程实验室基本设备仪器
光照培养箱 人工气候室 摇床 培养瓶
三、实验室的生物安全
根据密封程度的不同,将生物安全分为四个等级, 即:
P1、P2、P3、P4 （protect）