显微镜观察植物细胞方法

植物成分的分析

利用显微镜技术进行绵羊日粮植物学组成的分析, 并参考Sanders 等[13 ]和Vavra等[14 ]的方法, 进行载玻片的制作。主要过程为: 将适量粉碎通过1 mm 筛的粪样放入玻璃皿中, 用热水浸泡混合1～2 m in,然后用0.1 %N aOH 漂洗1 m in 左右, 再将样品倒入200 目的分样筛中, 用凉水冲洗, 滤掉碎粉沫, 分样筛内剩余的样品是比较均一的植物组织碎片。将这些碎片分别放于5 个培养皿中, 加水摇动使碎片较均匀地分布在培养皿中, 不致出现较多的重叠, 在60℃左右烘干即可镜检。

镜检前的准备及方法

为了提高辩认率, 根据Ho lechek 等[15 ]介绍的方法, 实验前进行了系统训练, 即将已知的植物粉碎过1mm 筛, 参照上述方法制作载玻片, 并与康乐[16 ]所绘制的主要植物表皮细胞特征图和检索表

进行对照辩认。实验过程中, 每个培养皿在双目显微镜下放大160 倍, 观察20 个视野, 与参考图[16 ]比较, 系统地记下所有各视野中碎片所属的植物种; 如果出现不能辩认或辩别不清的表皮细胞或碎片, 也作记录, 最后将这些辩不清的碎片按比例分给各个种。最后列表计算出每个种出现的频率并换算成每个种的相对密度[12 ] , 再用这些相对密度估测每种植物的干物质百分比, 即:DA = (A 种植物的相对密度/各种植物相对密度的总和) ×100%

2．2 显微制片

将采集的植物与粪便样本在60 ℃烘箱里烘72 h 至恒重，用筛孔为1 mm 的粉碎机粉碎，然后在40—100目分样筛中筛选，取筛上样装入信封内。制片时取大约1 g 放入培养皿内，倒入次氯酸钠约1/3 培养皿容量。用解剖针搅拌使样品完全浸泡在药液内，贴上标签。间隔3—5 h( 次氯酸钠处理时间长短和室内温度有关，室内温度越高，反应越快，细胞形态呈现的越早) 制作临时装片观察细胞形态是否清晰，并制作临时装片观察细胞形态的呈现效果。待细胞形态清晰后把培养皿内容物倒入200目的网筛冲洗2 min，移入洗净的培养皿内，滴1—2 滴番红花红染色剂。染色大约30 min。染色结束后再次冲洗 2 min 洗去染色剂。用镊子取少量置于滴有蒸馏水的载玻片上，使碎片充分展开，用滤纸吸掉水分，滴 1 滴甘油，用镊子稍微搅拌使碎片分布均匀并尽量减少卷曲和重叠。盖上盖玻片。用中性树胶封片并贴上标签待观察。每种植物和复合粪便样本均

制作3 张装片贴标签待检。

2．3 显微镜片的镜检

每张显微片在放大100倍的显微镜下检查10个视野( 避免重复)，观察每个视野中出现的可辨认植物表皮角质碎片，根据不同的细胞形态类别和特点参照植物显微装片鉴定出该植物的种并记录在视野中出现的次数。