肿瘤免疫治疗新进展_宗金宝

第十一届全国免疫学学术大会

共载11种免疫分子的PLGA微粒式人工抗原提呈细胞的

制备及其抗肿瘤作用研究

张雷 Khawar Ali Shahzad 许涛万昕汪礼敏裴伟亚沈传来

东南大学医学院 病原生物学与免疫学系 210009

目的：在磁珠或胶乳微球表面共展现pMHC分子和共刺激分子的非细胞性人工抗原提呈细胞（aAPC）是特异性免疫疗法的新策略。但其不可生物降解性阻碍了体内应用。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）具有生物降解和相容性，是被FDA批准的药物递送常用材料。本研究以PLGA微粒为载体共载11种免疫分子，制备多功能式人工抗原提呈细胞（MaAPC），验证其表面共吸附能力和包裹缓释特征；探讨其体外扩增肿瘤抗原特异性T细胞和体内抑瘤生长的能力。

方法：复乳溶剂挥发法制备内部包裹IL-2、IL-15、CCL21、anti-CTLA-4和anti-PD-1的PLGA微粒，EDC/NHS法使其表面功能化后联合共价吸附H-2Kb/TRP2180-188二聚体、H-2Db/gp10025-33二聚体、anti-CD28、anti-4-1BB、anti-CD2以及抗吞噬分子CD47-Ig，制备MaAPC；在体外，与C57BL/6鼠脾细胞共培养，流式检测TRP2和gp100抗原特异性CTL比例；尾静脉注射MaAPC至黑色素瘤皮下载瘤鼠体内，流式监测外周血，脾脏和肿瘤组织中抗原特异性CTL的频率变化，观察肿瘤生长进度。

结果：PLGA微粒对5种免疫分子的包裹率均在65%以上，均可缓慢释放，28天累积释放率大于80%。其表面对其他6种免疫分子也可有效共吸附，各分子间吸附干扰效应较小；在体外，MaAPC与C57BL/6鼠脾细胞共培养7天后使TRP2和gp100特异性CTL的比例分别提高至71%和68%；在体内，MaAPC输注可有效提升载瘤鼠外周血和脾脏中TRP2和gp100抗原特异性CTL的频率，显著提高肿瘤组织中抗原特异性CTL的浸润，明显抑制皮下瘤生长速度。

结论：PLGA微粒既可表面展现又可包裹缓释常见免疫分子，是理想的aAPC载体。共载11种免疫分子的MaAPC是一种新的、可生物降解的特异性主动免疫生物制剂。

关键词：PLGA，人工抗原提呈细胞，抗原特异性T细胞，抗肿瘤主动免疫

肿瘤免疫治疗新进展

宗金宝张晓春

青岛大学附属医院 266003

肿瘤免疫学治疗的方法种类繁多，已与现代生物高科技技术结合，发展成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗模式-肿瘤免疫治疗。以检查点抑制剂为代表的免疫疗法和嵌合抗原受体T细胞（Car-T）细胞和Car-NK细胞免疫疗法的成功运用使肿瘤免疫学得以复苏，改变了传统的免疫治疗方法。抗CTLA-4抗体是第一个临床应用有效的免疫检查点阻断药物。抗CTLA-4阻断抗体能够提升抗肿瘤免疫反应和长期生存的免疫力，使已经长成的肿瘤消退，促进了其在临床肿瘤治疗中的发展。PD-1阻断不仅影响T细胞在淋巴组织的活化，而且影响T细胞在表达PD-1配体的组织和肿瘤中的反应，减轻肿瘤微环境中的免疫抑制。嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T-Cell，Car-T）免疫治疗，Car-T免疫治疗方法，可以特异性地识别

肿瘤相关抗原，最终达到治愈肿瘤的目的。目前，Car-T细胞治疗技术在国际上还处于临床试验阶段，国内还

Day 2壁报交流

没有相关的法律规范，但Car-T 细胞已经出露锋芒，必将在肿瘤免疫治疗中发挥举足轻重的作用。 自然杀伤细胞（NK ）是固有免疫反应中非常重要的一类效应细胞，NK 细胞具有强大的抗肿瘤功能，在肿瘤免疫治疗方面发挥重要的作用。随着Car-T 技术的引人注目和初步成效，NK 细胞的Car 修饰也被推到前沿。传承经典的Car-T 研发思路，Car-NK 在自身特性的基础上创造出NK 细胞生物特性的免疫细胞疗法。鉴于Car-T 在白血病研究中取得的重大突破，及对实体瘤的治疗效果尚未如血液系统肿瘤那样具有成效，而NK 细胞具有先天的抗肿瘤优势，极有可能在Car 修饰武装下成为肿瘤细胞免疫治疗的新宠。新型的检查点CTLA-4和PD-1/PD-L1阻断治疗方案在临床上展现了令人振奋的疗效，而充满希望的Car-T 及Car-NK 细胞免疫疗法究竟能否产生同样的临床疗效，让我们拭目以待。

关键词：CTLA-4，PD-1，PD-L1，Car-T ，Car-NK

Generation of hMSH2-gene knockdown lung cancer cell model with specific siRNAs in NCI-H520 cell line

Dai Yu Mei 1, Lu Bi Chao 2, 2

1.广州市妇女儿童医疗中心；

2.北京协和医学院&中国医学科学院基础医学研究所

Objective: To generate an hMSH2-gene knockdown lung cancer cell model with small RNA interference in NCI-H520 cell line,so as to verify the underlying mechanisms in hMSH2-mediated recognition and cytolyisis of lung cancer cells by Vγ9δ2 T cells.

Methods: hMSH2 specific siRNAs were designed,synthesized and transfected into NCI-H520 cells.Gene knockdown efficiency was measured by qRT-PCR,Westernblot,flow cytometery and confocal microscopy 48 or 72 h after siRNAs transfection.

Results: Transfection efficiency was up to 93% 6 h after siRNAs treatment.48 or 72 h after specific siRNAs transfection,siRNA duplex I and II respectively resulted in 97%,88% and 98%,97% reduction in hMSH2 mRNA expres-sion when compared to mock control.Reduced hMSH2 protein expression was confirmed by Western blot.Decreased sur -face expression of hMSH2 in siRNA-treated groups was revealed by flow cytometery and confocal microscopy.

Conclusion: siRNA-hMSH2 gene knockdown lung cancer cell model was successfully generated in NCI-H520 cell line, providing a useful means to explore the recognition and cytolytic mechanism in Vγ9δ2 T cell-mediated anti-lung cancer innate immunity.

Keywords: Small RNA interference,Human MutS homolog 2,Vγ9δ2 T cells,Lung cancer