薄层色谱
色谱学 第三章 薄层色谱
在吸附色谱过程中，溶质、溶剂和吸附剂三 者是相互联系而又相互竞争的，如此构成了 整个层析分离过程 。 在薄层吸附色谱过程中，主要为物理吸附， 无选择性。因之吸附剂与多元组分溶液接触 时，一方面任何溶质都可被吸附（当然单位 重量吸附剂所能吸附物质的量，即“吸附量” 会因物质种类而异），另一方面，吸附剂也 可吸附流动相分子。由于物理吸附是可逆的， 故被吸附的分子同时也可被解吸出来。
偶氮染料 偶氮苯 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯
Ⅱ 0.61 0.28 0.18 0.11 0.04 0.01
表3-2 硅胶活度分级法 Rf Ⅲ Ⅳ 0.70 0.83 0.43 0.67 0.30 0.53 0.13 0.40 0.07 0.20 0.01 0.07
除上二种外，还有其他一些吸附剂。吸附剂品种如下： （1）硅胶：薄层色谱用为200~250目粒度，规格很多，一般如有石膏作粘 结剂，称硅胶G；石膏含量为5~20%，一般为10~13%，亦有用淀粉作粘 结剂的，称硅胶S，不加粘结剂者称硅胶H或硅胶N，为了便于观察组分的 斑点，也可在硅胶中加入荧光指示剂。如果又加有粘结剂时，则称为硅胶 GF或硅胶GF254，即吸收254nm紫外光。 （2）氧化铝：根据加有粘结剂情况不同，有H、G、HF、GF等品种。 （3）硅镁吸附剂：即费罗里硅土，使用前要在130℃下活化二小时。 （4）纤维素：长度仅为2~20微米的短纤维，分天然纤维和微晶纤维两种 形式，也可加粘合剂、一般用于亲水性物质的分离，如羟基化物等，但缺 点为不能用浓硫酸等腐蚀性溶剂进行显色。 （5）聚酰胺：这是一种使用广泛的有机吸附剂，多用于分离酚类化合物， 样品容量大，但粘结能力差，可加入纤维素或淀粉作粘结剂。 （6）烧结薄层板：这是一种多次使用的薄层板，是由200~300目石英或玻 璃粉，与200~300目硅胶或氧化铝按1：25重量混合，用乙醇调成浆料，涂 在玻璃板上。0.25~0.3毫米厚，然后在700~780℃高温下烧结，即成烧结板。 烧结板用一次后可用乙醇或其它有机溶剂洗涤，最后用水洗干净后烘干再 继续使用。
薄层色谱的原理
薄层色谱的原理薄层色谱（TLC）是一种常用的色谱分离技术，它通过在薄层固定相上进行分离，使样品中的化合物在流动相的作用下，根据其在固定相上的亲和力大小而分离出来。
薄层色谱广泛应用于化学、生物、药学等领域，是一种简单、快速、低成本的分析方法。
薄层色谱的原理主要包括样品的制备、色谱板的制备、色谱条件的选择和色谱分离的原理。
首先，样品的制备是薄层色谱的第一步，样品需要在适当的溶剂中溶解，并通过过滤等方法去除杂质。
其次，色谱板的制备是关键步骤，色谱板通常是由玻璃、铝箔或塑料基板上涂覆一层固定相而成。
然后，选择适当的色谱条件也是十分重要的，包括固定相的选择、流动相的选择和色谱板的预处理。
最后，色谱分离的原理是根据化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来进行分离，通常是通过极性差异来实现。
在薄层色谱中，固定相起着至关重要的作用。
固定相的选择决定了色谱分离的效果，通常使用的固定相包括硅胶、氧化铝、纤维素等。
不同的固定相对于化合物的亲和力也不同，因此在进行色谱分离时需要根据样品的性质选择合适的固定相。
另外，流动相的选择也是影响色谱分离效果的重要因素。
流动相的极性和流速会直接影响化合物在色谱板上的迁移速度，从而影响分离效果。
通常使用的流动相包括醇类、醚类、酮类等有机溶剂，其选择需要根据样品的性质和固定相的特性来确定。
薄层色谱的分离原理是基于化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来实现的。
当样品在色谱板上进行分离时，化合物会根据其与固定相的亲和力大小而在色谱板上形成不同的斑点。
通过观察斑点的位置和色泽，可以对样品中的化合物进行定性和定量分析。
总之，薄层色谱是一种简单、快速、低成本的色谱分离技术，其原理包括样品的制备、色谱板的制备、色谱条件的选择和色谱分离的原理。
固定相和流动相的选择是影响色谱分离效果的重要因素，而分离原理是基于化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来实现的。
薄层色谱在化学、生物、药学等领域有着广泛的应用前景，对于化合物的分离和分析具有重要的意义。
薄层色谱鉴别介绍
薄层色谱鉴别介绍薄层色谱（TLC）是一种常用的分离技术，可用于鉴别化合物的混合物。
它是一种简单易用、经济实惠、快速高效的分析方法，常用于药物分析、天然产物分析、农药残留分析等领域。
下面我将对TLC的原理、操作步骤和应用进行介绍。
一、TLC的原理TLC的原理基于色谱分离原理，利用物质在不同固定相上的亲疏性差异，通过毛细作用和扩散作用，使化合物被分离。
TLC的分析基质是通过固定相涂覆在玻璃、铝或塑料基质上，样品通过毛细作用在固定相上上升，而不同成分在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
TLC工作原理示意图如下：[示意图]二、TLC的操作步骤1.准备试剂和设备：准备TLC板、玻璃容器、色谱溶剂和样品溶液。
2.准备试样：将待测试物溶解在合适的溶剂中，得到试样溶液。
3.均匀涂布试样：将试样溶液均匀地涂布在TLC板上的出发线上。
4.选择合适的溶剂系统：根据待测试物的性质和分离要求，选择合适的色谱溶剂系统，如正己烷/乙醇（9:1）。
5. 开始分析：将TLC板放入玻璃容器中，添加色谱溶剂至约2cm高度，但不能触及TLC板。
盖上容器盖，让试剂与固定相接触，溶液会开始上升。
6. 结束分析：当溶剂上升到离TLC板顶端1-2cm时，将TLC板取出，迅速标记出相应的上升高度。
然后将TLC板晾干并进行显色。
最后使用UV灯或显色剂对TLC板进行观察和分析。
7.数据分析：根据显色结果，通过测量上升的高度和各样品的Rf值（Rf值=色谱前移距/色谱跑液的前行距离），得到鉴别结果。
三、TLC的应用1.鉴别混合物的成分：通过TLC的分离作用，可以鉴别混合物中的各个成分，可以用于检测药物中的杂质和控制药物的质量。
2.分析天然产品：可以用于从天然草药、植物中提取的混合物中分离和鉴定活性物质。
3.农药残留分析：TLC可以用于农产品中农药残留的快速筛查和定量分析，具有操作简单、快速、灵敏等优点。
4.食品和环境监测：可用于鉴别食品和环境样品中的各种组分，如食品中的添加剂和环境中的有机物。
色谱法薄层色谱和纸色谱
将固定相涂布在玻璃板或塑料 板上形成薄层，然后用合适的 溶剂展开，实现组分的分离和
分析。
纸色谱法
将固定相吸附在滤纸上，然后 用合适的溶剂展开，实现组分 的分离和分析。
气相色谱法
适用于气体和挥发性液体的分 析，通过气体流动相将样品带 入色谱柱进行分离。
高效液相色谱法
一种高效、高分辨率的色谱方 法，广泛应用于化学、生物和
相之间的分配系数不同，因此会以不同
的速度在薄层板上移动，从而实现分离。
薄层色谱法的操作步骤
点样
将待分离的样品溶液点在薄层 板的起点处。
显色
在紫外灯下观察各组分的斑点， 或者用显色剂进行染色。
制备薄层板
将固定相涂布在玻璃板、塑料 板或铝箔上，形成一层均匀的 薄层。
展开
将薄层板放入展开槽中，用适 当的流动相展开。
色谱法薄层色谱和纸色谱
目 录
• 色谱法简介 • 薄层色谱法 • 纸色谱法 • 色谱法薄层色谱和纸色谱的比较 • 色谱法薄层色谱和纸色谱的发展趋势
01 色谱法简介
定义与原理
定义
色谱法是一种分离和分析复杂混 合物中各组分的方法，通过不同 物质在固定相和流动相之间的分 配平衡实现分离。
原理
利用不同物质在两相之间的吸附 、溶解等分配平衡的差异，使不 同物质在色谱柱上移动速度不同 ，从而实现各组分的分离。
薄层色谱法的分离效率高于纸色谱法。薄层色谱法使用涂布在玻璃板或塑料板 上的固定相，能够快速、有效地分离复杂的混合物，而纸色谱法则需要较长的 时间进行分离。
分辨率
薄层色谱法的分辨率也更高，能够更好地分离出组分相近的物质，而纸色谱法 的分辨率相对较低。
操作难度的比较
操作简便性
薄层色谱
表 1 一些常用的显色剂
显色剂
配制方法
检出对象
浓硫酸
10%H2SO4
大多数有机化合物在加热后可显 出黑色斑点
碘蒸气
将薄层板放入缸内被碘蒸气饱和数 很多有机化合物显黄棕色
分钟
碘的氯仿溶液
0.5%碘的氯仿溶液
同上
5%磷钼酸乙醇溶液，喷后 120℃烘
硝酸铈铵
6%硝酸铈铵的 2mol／L 硝酸溶液 显色剂，多元醇在黄色底色上有
棕黄色斑点
香兰素-硫酸
3g 香兰素溶于 100mL 乙醇中，再加 高级醇及酮呈绿色
入 0.5mL 浓硫酸
茚三酮
0.3g 茚三酮溶于 100mL 乙醇，喷 氨基酸、胺、氨基糖
后,110℃热至斑点出现
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
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了荧光）。也可将展开完毕的薄 层板烘干后用显色剂喷雾显色。常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能 与碘生成棕色或黄色的络合物，利用这一性质，在一密闭容器中（一般用展开缸即可）放几 粒碘，将展开并干燥的薄层板放入其中，稍稍加热，让碘升华，当样品与碘蒸气反应后，薄 层板上的样品点处即可显示出黄色或棕色斑点。除饱和烃和卤代烃外，均可采用此方法。
有关，其活性随含水量的增加而下降。活化温度：硅胶板于烘箱中逐渐升温至 105～110℃ 烘 30min；氧化铝板于 150～160℃烘 4h。活化后的薄层板放在干燥器内保存备用。
（3）点样 在距薄层板底端 8~10mm 处，划一条线，作为起点线。用毛细管（内径小于 1mm）吸 取样品溶液（一般以氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、苯、乙醚或四氯化碳等作溶剂，配成 1%溶 液），垂直轻轻地接触到薄层的起点线上。如溶液太稀，一次点样不够，第一次点样干后， 再点第二次、第三次，多次点样时，每次点样都应点在同一圆心上。点样次数依样品溶液浓 度而定，一般为 2~5 次。若样品量太少时，有的成分不易显出；若量太多时易造成斑点过大， 互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离。点样后的斑点直径以扩散成 1~2mm 圆点为度。若 为多处点样时，则样点间距为 1~1.5cm。 （4）展开 薄层的展开需在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放在层析缸中，使层析缸内的空 气饱和 5~10min，再将点好试样的薄层板放入层析缸中进行展开。样点的位置必须在展开剂 液面之上。当展开剂上升到薄层的前沿（离顶端 5~10mm）或各组分已明显分开时，取出薄 层板，立即用铅笔或小针划出溶剂前沿的位置，晾干或烘干后即可显色。根据标样对照或 Rf 值的不同对各组分进行鉴定。 展开剂的选择主要是根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来综合考虑。溶剂 的极性越大，则对化合物的洗脱力越大，即 Rf 值也越大。如发现样品各组分的 R f 值 较大， 可考虑换用一种极性较小的溶剂，或在原来的溶剂中加入适量极性较小的溶剂展开，如原用 氯仿为展开剂，则可加入适量的苯。相反，如原用展开剂使样品各组分的 R f 值较小，则可 加入适量极性较大的溶剂，如氯仿中加入适量的乙醇试行展开，以达到分离的目的。 （5）显色 展开完毕，取出薄层板, 划出前沿线，如果化合物本身有颜色, 就可直接观察它的斑点。 如果本身无色，可用显色剂法或紫外光照射法显色。用硅胶 GF254 制成的薄板层，由于加入
什么是薄层色谱
什么是薄层色谱薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。
此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。
薄层色谱(Thin LayerChromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。
一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。
因此又可用来精制样品。
故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。
此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。
待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。
薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。
待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
1.仪器与材料(1) 玻板除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
(2) 固定相或载体最常用的有硅胶G、硅胶GF<[254]> 、硅胶H、硅胶HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F<[254]>等。
薄层色谱
和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得 到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近 似地判断样品中所测成分的含量。 2 测面积法
展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间，符 合一定的线性关系。 3 仪器测定法
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3 仪器测定法
用光密度计或称薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量， 该方法已成为薄层定量的主要方法。 1.吸收测定法
相对比移值，即相对于某一物质x的Rf值，用Rx 表示。 其定义为：Rx＝组分的Rf值／物质x的Rf值 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
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三.薄层色谱的操作
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
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(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
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(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
2.点样量
点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用 量为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。 总之点样量随分离目的而定。
3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
常用的点样方式
a 一般点样 b 径向点样 c 条状点样 d 线形小孔点样
薄层色谱实验报告
一、实验目的1. 掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。
2. 学习薄层色谱的操作技能，包括薄层板的制备、点样、展开和显色等。
3. 了解不同展开剂对分离效果的影响。
二、实验原理薄层色谱法是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数差异的分离方法。
固定相通常是涂布在薄层板上的吸附剂，如硅胶、氧化铝等。
流动相为有机溶剂，如乙醚、氯仿等。
当混合物在固定相和流动相之间进行分配时，不同组分的移动速度不同，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层色谱仪、点样器、展开槽、紫外灯、显色剂等。
2. 薄层板：5.0cm×15.0cm的硅胶层析板两块。
3. 展开剂：乙醚、氯仿、甲醇等。
4. 显色剂：碘蒸气、荧光剂等。
5. 样品：有机混合物。
四、实验步骤1. 薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，平均摊在两块5.0cm×15.0cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。
固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。
2. 点样：在层析板下端2.0cm处，用铅笔轻划一起始线，并在点样处用铅笔作一记号为原点。
取毛细管，分别蘸取样品和标准品，点于原点上。
3. 展开与显色：将点好的薄层板放入展开槽中，加入适量的展开剂，使溶剂前沿距离薄层板顶部1～2cm。
将薄层板放入展开槽中，待溶剂前沿到达预定位置后取出，晾干。
将晾干的薄层板放入紫外灯下观察，必要时进行显色。
4. 比移值（Rf）计算：用尺子测量原点至层析斑点中心的距离和原点至溶剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。
五、实验结果与分析1. 通过实验，成功制备了薄层板，并完成了样品的分离。
2. 通过比较样品和标准品的Rf值，初步鉴定了样品中各组分的种类。
3. 分析不同展开剂对分离效果的影响，得出以下结论：（1）乙醚：适用于分离极性较大的化合物。
（2）氯仿：适用于分离极性较小的化合物。
薄层色谱的原理
薄层色谱的原理
薄层色谱（thin layer chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，其原理基于化合物在静止相（固定在玻璃或塑料基底上）和流动相（液体或气体）之间的分配行为。
利用该分配行为，可以将不同的化合物分离并检测。
在薄层色谱中，首先需要准备一层薄的静止相涂覆在玻璃或塑料基底上，这层涂层通常是硅胶或氧化铝。
准备好的薄板即为薄层色谱板。
然后将待分离的混合物溶解在流动相中，流动相通常是有机溶剂或混合溶液。
接下来，将薄层色谱板浸入流动相中，使浸湿并等待流动相上升。
当流动相从底部向上渗透时，化合物会根据其亲水性或亲油性在静止相和流动相之间发生分配。
亲水性较强的化合物会更多地留在静止相中，而亲油性较强的化合物则会随流动相上升。
这样，不同化合物在薄层色谱板上会形成不同的斑点。
为了可视化这些斑点，通常会使用染料或化学试剂对化合物进行标记。
染料或化学试剂与化合物发生反应后，能产生明显的色斑或荧光。
通过比较样品中斑点的相对位置、颜色或荧光强度，可以对待分离的化合物进行鉴定。
薄层色谱因其简便、快速且经济的特点，在实验室常用于药物分析、有机合成、食品检测、环境监测等领域。
它不仅可以用于分离化合物，还可以确定某一物质的纯度、判断反应的进行以及监测反应的过程。
它是一种常用的分离和分析工具，广泛应用于化学、生物化学和药学等领域。
薄层色谱操作规程
薄层色谱操作规程
《薄层色谱操作规程》
一、实验目的
通过薄层色谱进行化合物分离和鉴定，掌握薄层色谱操作技术，提高实验操作能力。
二、实验仪器和试剂
1. 薄层色谱仪
2. 薄层色谱板
3. 色谱柱
4. 样品溶液
5. 各种溶剂
三、实验操作步骤
1. 准备薄层色谱板，标出样品点和色谱进样位置。
2. 准备好样品溶液，进行前处理工作，如筛选、过滤等。
3. 用吸头将样品溶液均匀地吸附在薄层色谱板上的样品点上，待干燥后再进行操作。
4. 将干燥后的薄层色谱板放置在色谱槽中，加入适量的色谱溶剂，使之在薄层色谱板上上升，直至触及顶部。
5. 将色谱板拿出，标记出色带位置，用紫外灯照射和标记，记录色带的长度和颜色。
6. 根据色带的长度和颜色，与标准色谱图对照，确定其成分。
7. 根据色带的长度和颜色，计算Rf值，并与标准值对照鉴定
成分。
四、注意事项
1. 操作过程中需轻拿轻放，避免薄层色谱板受损。
2. 使用各种溶剂时，要注意其挥发性和易燃性。
3. 色带观测和鉴定时，要在相应的波长下观察，如紫外灯波长254nm。
4. 操作结束后，要对薄层色谱仪进行清洁和维护。
通过《薄层色谱操作规程》的实验操作，可以掌握薄层色谱技术的基本操作流程，提高化合物分离和鉴定的能力。
tlc薄层色谱法
tlc薄层色谱法薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。
待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。
薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。
一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
吸附是表面的一个重要性质。
任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。
在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。
物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。
在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。
而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。
吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。
吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。
例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。
当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。
薄层色谱法
4.点样过程 确定点样位置
吸取点样溶液
点样。
a.用铅笔在距薄层底边1.5-2.0cm处画一条起始线，在起始线上作 好记号作为点样位置，每个位置之间的距离为1.0-1.5cm； b.用点样设备吸取一定量的溶液； c.于点样位置上的吸附剂轻轻接触，点样设备内的溶液就会自动被 其吸附，形成直径最好为2-4mm的圆点或宽度为5-10mm的条带，完 成一次点样。 注意：若需要在同一个位置多次点样，则每点一次，应带溶剂挥干 后再点下一次，避免斑点扩散；当一块薄层板上需点几个样品时， 点样设备不能混用。
薄层板上的斑点位置确定之后，可对物质进 行定性鉴别、杂质检查和含量测定。
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第三节 在药物分析中的应用
主要用于中药、化学药物、生物制品等的定 性鉴别、杂质检查、含量测定。
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一、在鉴别方面的应用
通常采用对照物比较法进行定性鉴别。在保证 各斑点分离度达到标准的前提下，如果样品的 Rf与对照物的Rf相同，则可认为该组分与对照 物为同一物质。 为了结果的准确可靠，应采用多种不同的展开 系统进行展开，如果所得到的Rf都与对照品一 致，则可认定两者是同一物质。
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锯齿扫描
(1)单波长扫描：使用一种波长的光线对薄 层进行扫描。 (2)双波长扫描：是采用两种不同波长的光 束先后扫描所要测定的斑点，并记录下此两 波长吸光度之差，可以消除薄层背景吸收的 干扰。
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化合物斑点的吸收光谱
单波长与双波长扫描曲线的比较
6.定量方法
2.仪器：光源、单色器、薄层板台、检测器、色谱工作站 3.测量方法：根据对光测定方式的不同，可分为三种
透射法：测量反射光的强度 反射法：测量透射光的强度
L 光源；MC 单色 器；P 薄层板； S 斑点； PD 光电 检测器
薄层色谱
薄层色谱，或称薄层层析（Thin-Layer Chromatography），是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术，是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法。
薄层色谱法是一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。
一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品，因此又可用来精制样品。
因此，薄层色谱法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。
此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
在我国新推出的2010版药典中，降低了薄层色谱分析所占的比例，这似乎表明着薄层色谱分析方法将会逐渐被替代，但是在实际的工作中，薄层色谱法以其快速、简便的优势一直活跃在分析检测的一线，加上电动点样机和薄层扫描仪的出现，加快了点样和检测的速度和质量，使得这一技术在生产分析中起到了重要作用。
一、薄层色谱的分类1、常规薄层色谱TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。
常规薄层色谱的固定相为未改性的硅胶、氧化铝、硅藻土、纤维素和聚酰胺等，平均颗粒度20μm，点样量1~5μL，展开时间30~200min，检测限1~5ng。
以正相色谱占主导地位，设备简单，所需资金投入少；不足之处是分离所需时间长，有明显的扩散效应。
2高效薄层色谱高效薄层色谱（HPTLC）采用更细、更均匀的改性硅胶和纤维素为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性，可以实现正相和反相薄层色谱分离，提高了色谱的选择性。
C2、C8和C18化学键合硅胶板为常见反相薄层板。
高效板厚平均100~250μm、点样量0. 1~0. 2μL，展距3~6cm，展开时间3~20min，最小检测量0. 1~0. 5μg，较常规TLC可改善分离度，提高灵敏度和34重现性，适用于定量测定。
薄层色谱分析主要影响因素
薄层色谱分析主要影响因素薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分析技术，特别适用于复杂样品的快速分析和监测。
薄层色谱分析主要受到以下几个因素的影响：1.薄层色谱板选择：薄层色谱板是薄层色谱分析的基础。
薄层色谱板的选择主要依据于样品的性质和分析目的。
通常使用的薄层色谱板有硅胶、聚酰胺胶、硅胶硬脂酸酯等材料。
不同的色谱板具有不同的极性和吸附性能，对分离和分析结果产生影响。
2.色谱系统：包括在色谱板上涂层样品的方法、移液器、喷雾剂和显色剂的选择等。
在涂层样品时，涂层溶剂的挥发速度和样品在色谱板上的均匀性对分析结果有重要影响。
移液器的使用应准确，不同的喷雾剂和显色剂有不同的适用范围。
3.试样处理：试样的前处理对于薄层色谱分析结果的准确性和可靠性很重要。
例如，如果样品中有多种类似成分，可以通过萃取、洗涤、净化等方法将它们分离开来，降低色谱分离过程中的干扰。
4.色谱条件：色谱条件包括色谱板的处理和展开过程中的移液时间、移液可重复性、温度、展开时间等。
这些条件会直接影响到色谱柱的分离效果和分析结果的准确性。
5.显色剂的选择：显色剂的选择是薄层色谱分析中一个关键的环节。
不同的显色剂适用于不同的化合物，通过显色剂的选择可以增加薄层色谱结果的对比度和清晰度。
常用的显色剂有碘液、紫外灯和化学显色剂等。
6.结果的解读：色谱图的结果解读是薄层色谱分析的最后环节。
正确解读色谱图可以获得样品中各个成分的定性和定量信息。
对于复杂样品的分析，由于样品中的多种组分会在色谱图上出现多个斑点，因此需要通过对照品或者参照库对结果进行解读。
总之，薄层色谱分析主要受到薄层板选择、色谱系统、试样处理、色谱条件、显色剂选择和结果的解读等因素的影响。
在进行薄层色谱分析时，我们应该综合考虑这些因素，合理选择分析方法和条件，以获得准确、可靠的分析结果。
薄层色谱的实验报告
薄层色谱的实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱的基本原理和操作方法。
2、学会利用薄层色谱进行物质的分离和鉴定。
二、实验原理薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离分析技术。
其原理是基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而在薄层板上实现分离。
固定相通常是涂敷在玻璃板或塑料板上的吸附剂，如硅胶、氧化铝等。
流动相则是一种或多种溶剂的混合物。
当样品溶液点在薄层板的一端，并置于装有流动相的层析缸中时，流动相通过毛细作用沿板上升，样品中的各组分在固定相和流动相之间不断进行吸附和解吸，导致它们在板上以不同的速度移动，最终实现分离。
通过与已知标准物质在同一条件下进行色谱分析，并比较它们的 Rf 值（比移值），可以对样品中的组分进行定性鉴定。
三、实验仪器与试剂1、仪器薄层板（硅胶 G 板或氧化铝板）层析缸点样毛细管紫外灯喷雾显色剂装置2、试剂样品溶液（待分离和鉴定的混合物）标准物质溶液展开剂（根据样品性质选择合适的溶剂系统，如石油醚乙酸乙酯、氯仿甲醇等）显色剂（如碘蒸气、硫酸乙醇溶液等）四、实验步骤1、制备薄层板选择合适的玻璃板或塑料板，洗净并干燥。
称取适量的吸附剂（如硅胶 G 或氧化铝），加入一定量的蒸馏水或粘合剂（如羧甲基纤维素钠溶液），搅拌均匀成糊状。
将糊状物均匀地涂布在玻璃板或塑料板上，厚度一般为 025 05mm。
放置在水平台上，自然晾干后，在适当温度下活化一定时间，备用。
2、点样用点样毛细管吸取少量样品溶液，在距薄层板一端 1 15cm 处轻轻接触板面，形成一个直径约 2 3mm 的圆点。
点样时应注意控制样品量，避免斑点过大或过小。
同时点上标准物质溶液作为对照。
3、展开在层析缸中加入适量的展开剂，深度约 05 1cm。
将点样后的薄层板小心放入层析缸中，使点样端朝下，确保展开剂液面低于点样线。
盖上盖子，让展开剂通过毛细作用沿板上升，直到展开剂前沿接近板的顶端（一般上升高度为 8 10cm）。
薄层色谱分类
薄层色谱分类
薄层色谱（Thin-layer chromatography，TLC）是一种常用的色谱分离技术，广泛应用于化学、生物化学和药学领域。
在薄层色谱中，样品在薄层吸附剂（如硅胶或膜）上移动，不同成分根据它们与吸附剂的亲和力而被分离。
以下是一些常见的薄层色谱分类：
1. 按吸附剂类型分类：
硅胶薄层色谱：使用硅胶作为吸附剂的薄层色谱，是最常见的形式之一。
铝箔薄层色谱：在铝箔上涂覆吸附剂进行分离，具有一定的特殊应用。
2. 按静相种类分类：
正相色谱：使用非极性吸附剂，样品按照极性被分离。
反相色谱：使用极性吸附剂，样品按照非极性被分离。
3. 按分离模式分类：
单向色谱：样品在吸附剂上一次性移动。
双向色谱：样品在吸附剂上先垂直移动，再水平移动，有助于更好地分离成分。
4. 按检测方式分类：
可见光检测：通过眼睛观察色谱板上的斑点。
紫外检测：使用紫外灯或紫外可见分光光度计检测化合物。
薄层色谱是一种简便快速的分离技术，可用于样品的初步分
析、纯度检验和混合物成分鉴定等领域。
不同的分类方式有助于更好地理解和应用薄层色谱技术。
第二章 薄层色谱
3、展开 、 吹干样点， 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开 瓶中。薄层色谱的展开， 瓶中。薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行 为使溶剂蒸气迅速达到平衡， 。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂， 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其 高度不超过1cm。将点好的薄层板小心放入层析 高度不超过 。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖 观察展开剂前沿上升到一定高度时取出， ，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快 在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位 在板上标上展开剂前沿位置。晾干， 计算Rf值 展开剂要接触到吸附剂下沿， 置，计算 值。展开剂要接触到吸附剂下沿，但 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。
第二章 食品分析中常用仪器 检测方法
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薄层色谱法
一、原理 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱 固吸附色谱。 最常用的薄层色谱也属于液 固吸附色谱。吸 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 干燥后在涂层的一端点样 涂层的一端点样， 干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少 量展开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂 量展开剂的的有盖容器中。 涂层，借毛细作用向上移动。 涂层，借毛细作用向上移动。经过在吸附剂和展 开剂之间的多次吸附 溶解作用， 多次吸附-溶解作用 开剂之间的多次吸附 溶解作用，将混合物中各组 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离 分离。 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。
薄层色谱分离原理
薄层色谱分离原理薄层色谱分离是一种常用的色谱技术，其原理基于吸附、溶解、扩散、分配和化学反应等作用。
以下是薄层色谱分离原理的详细解释：1. 吸附作用：薄层色谱分离中的吸附作用是指固定相吸附待分离组分的过程。
在薄层色谱中，固定相通常是一种固体物质，如硅胶、氧化铝等。
这些固体物质表面存在许多空隙和孔洞，能够与待分离组分发生相互作用，从而将其吸附在固定相上。
由于不同组分在固定相上的吸附能力不同，因此可以通过吸附作用实现组分的分离。
2. 溶解性能：薄层色谱分离中的溶解性能是指待分离组分在流动相中的溶解能力。
在薄层色谱中，流动相通常是一种液体或气体，如有机溶剂、水等。
不同组分在流动相中的溶解度不同，因此在流动相通过固定相的过程中，各组分会按照溶解度大小依次从固定相中被洗脱下来。
因此，溶解性能也是薄层色谱分离的一个重要原理。
3. 扩散作用：薄层色谱分离中的扩散作用是指待分离组分在固定相和流动相之间的传递过程。
当流动相通过固定相时，固定相对待分离组分的吸附作用会使其在流动相中的浓度逐渐降低。
由于浓度差的存在，待分离组分会从固定相向流动相扩散，从而实现组分的分离。
扩散作用的速度与待分离组分在固定相和流动相之间的分配系数有关。
4. 分配作用：薄层色谱分离中的分配作用是指待分离组分在固定相和流动相之间的分配过程。
当流动相通过固定相时，待分离组分会按照一定的分配系数在固定相和流动相之间进行分配。
由于不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此可以通过分配作用实现组分的分离。
分配作用与溶解性能密切相关，通常与扩散作用同时发生。
5. 化学反应：薄层色谱分离中的化学反应是指待分离组分与固定相或流动相之间发生的化学反应。
这种反应可以是酸碱反应、络合反应、氧化还原反应等。
通过选择适当的固定相或流动相，可以与待分离组分发生特异性反应，从而实现组分的分离。
化学反应在薄层色谱分离中具有重要作用，尤其适用于复杂样品的分离和纯化。
总之，薄层色谱分离的原理是基于吸附、溶解、扩散、分配和化学反应等作用。
薄层色谱法应用
薄层色谱法应用
薄层色谱法（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测、有机合成等领域。
以下是薄层色谱法的一些常见应用：
1. 药物分析：薄层色谱法可以用于药物的定性和定量分析。
通过比较样品与标准品在薄层色谱板上的迁移距离和颜色等特征，可以确定药物的成分和含量。
2. 食品检测：薄层色谱法可以用于食品中有害物质的检测，比如农药残留、食品中的添加剂等。
通过与标准品的比对，可以确定食品中是否存在有害物质及其含量。
3. 环境监测：薄层色谱法可用于环境样品中有机物的分析。
通过将样品提取后在薄层色谱板上展开，可以分离出不同成分并进行定性和定量分析，从而评估环境污染程度。
4. 有机合成中的反应监测：薄层色谱法可以用于有机合成反应的监测和优化。
通过在不同时间点采集反应物料，在薄层色谱板上进行分析，可以确定反应的进行程度和副反应产物的生成情况。
总之，薄层色谱法具有简单、快速、灵敏和经济等特点，广泛应用于各种领域的分析和研究中。
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溶剂前沿
b
色斑中心
aபைடு நூலகம்
点样原点
原点到色斑中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 =
a b
四、注意事项
• 1、薄层板的制备是实验的关键点之一。 铺板必须厚薄均匀一致，不能开裂。 • 2、点样的圆点必须小且浓度要高些，但 不能太高，以免引起拖尾现象。 • 3、点样后要等溶剂挥发尽才能将薄板放 入展开缸中展开。 • 4、展开结束后，取出薄板要立刻用铅笔 画下溶剂前沿。
• 4、点样 将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配 成1%的溶液。用一支平口的细毛细管蘸取 少量样品溶液点在薄板上，点样基线距底 边1-2cm，样点直径在1-1.5mm之间,点间 距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜， 距边缘在5mm（以免边缘效应影响分离）。 点样时必须注意勿损伤薄层表面。正常斑 点应是圆形或椭圆形色斑。
最常用的吸附剂是硅胶G（含有煅石膏作黏合 剂）、硅胶H（不黏合剂或其他添加剂）、硅 胶HF 254（含有荧光剂，可在254nm 紫外光下 观察）、硅胶GF254（含有煅石膏和荧光剂）， 其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、 微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。
吸附剂颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。 薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种; 前者系将固定相直接涂布于玻璃板上, 后者 系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常 用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小 时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维 素钠水溶液(0.5～1.0％)适量调成糊状，均 匀涂布于玻璃板上。
• 薄层层析有多中展开方式，可分为上行、 下行、双向展开等。展开时均需在密闭 的容器（展开缸）中进行，且该容器内 应使流动相的蒸气饱和。 • （1）上行法：在缸中加入足够量的展开 剂，将点好样品的薄层板放入展开缸的 展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板 底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开 剂中）,密封缸盖,待展开前沿离薄板上 端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画 下溶剂前沿，晾干。
• 2、薄板的制备 薄层板的好坏将决定分离的效果。薄层 板应该尽量均匀且厚薄一致。 （1）使用铺板器：将洁净干燥的玻璃板臵 于铺板器中间，在铺板槽中倒入糊状物， 自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃 板上。见下图：
1、吸附剂薄层，2、涂布槽，3、玻璃夹板， 4、玻璃板，5、玻璃夹板
• （2）倾注法：将调成糊状物倒在玻璃板 上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃 棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角， 轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去 糊状物中的气泡。
• 5、展开 展开剂的选择与柱色谱洗脱剂类似。展开剂的 极性增大次序为：石油醚环己烷二硫化碳 四氯化碳二氯乙烯苯二氯甲烷氯仿 乙醚四氢呋喃乙酸乙酯丙酮丁酮 正丁醇乙醇甲醇水冰醋酸吡啶有 机酸。要求所选的展开剂对薄层吸附剂有一定 亲和力，能把被分离物从吸附剂表面解析下来， 但又不能过强，否则被解析下来的物质不易再 吸附。当单一溶剂不能满足要求时，可用多元 混合溶剂作展开剂。
• 注意： • （1）点样量对分离效果影响很大，而且 还与显色剂灵敏度、吸附剂类型有关。 样品量过少，展开后斑点不清晰，影响 观察；样品量过多，展开后拖尾严重， 易造成Rf值接近的斑点相连。 • （2）样品浓度过稀，可在同一斑点处重 复多次点样（应让溶剂挥发后再点）。 • （3）点样后一定要等溶剂挥发后才能把 薄板放入层析缸中展开。
• （3）试剂显色：必须根据被分析化合物 的性质来选择某一显色剂，以喷雾方式 直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑 点。某些显色剂喷了以后还要在80-100 度加热几分钟才能显色，如茚三酮与氨 基酸的显色反应。
• （7）计算Rf值 Rf值随被分离物质的结构、固定相及流 动相的性质、温度和薄板的活化程度等 因素不同而变。当实验条件一定时，任 何一个特定化合物的Rf值是一个常数。 这也是为什么薄层色谱能定性分析的依 据。点样原点 Rf值的计算很简单，只要用尺测量原点 到色斑中心的距离除以原点到溶剂前沿 的距离即可。
• 薄层色谱是近年来发展起来的一种微量、 简单并能快速分离和定性分析少量物质 的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的 优点。适用于少量样品（几到几十微克， 甚至0.01μg）的分离；若在制作薄层板 时，把吸附层加厚，将样品点成一条线， 则可分离多达500mg的样品。因此又可用 来精制样品。故此法特别适用于挥发性 较小或在较高温度易发生变化而不能用 气相色谱分析的物质。此外，在进行化 学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑 点的逐步消失来判断反应是否完成。
• 6、显色 展开后的薄板晾干溶剂后可采取若干方 法对板上的组分进行定位。 （1）光学检测：对于无色样品，可采用带 荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外 光（254nm或365nm）下显暗色斑点。优 点是方便、不破坏被检测物质。 （2）碘蒸气法：对于在光学条件下不显色 的物质，可将薄板臵于含有少量碘晶体 的密闭容器中。许多物质能与碘可逆地 作用呈棕色斑点。
• 3、薄层板的活化 将涂好的薄层板水平放臵于室温下晾干 后（应避免阳光直射，以防开裂），放 在烘箱内加热活化。硅胶板需在烘箱内 慢慢升温至105-110度后保温30分钟；氧 化铝板需在200-220度烘4小时，可得到 活性I级的薄板，吸附层的活性随含水量 的降低而增加。活化好的薄板应保存在 干燥器中备用。
薄层色谱
一、实验目的
• 1、了解薄层色谱法分离有机物的方法。
• 2、掌握薄层色谱法的实验操作技术。
二、基本原理
• 薄层色谱法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻 璃板上制成薄层板，试样中的各组分在固定 相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶 解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。不 同物质上升的距离不同而形成彼此分开的斑 点从而达到分离。薄层色谱可分为吸附薄层 色谱（以硅胶氧化铝等吸附剂）、分配薄层 色谱（用硅藻土和纤维素等）和离子交换薄 层色谱。
• （2）下行法：在展开缸的盖子上装一个 小钩，将展开的纸片钩住，并通过一滤 纸条将展开剂和纸片连起来。待展开剂 前沿离纸片下端1cm时，取出纸片，并用 铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。 • （3）双向法：通常用于分离组分复杂的 混合物。一般操作是取一块方形的薄板， 在角上点样，展开后取出晾干。将薄板 转90度，换另一种展开剂再次展开，可 取得较好的分离效果。
五、思考题
• 1、为什么不能用开裂的薄板来展开？ • 2、薄板展开时如果展开缸不密闭会引起 什么结果？ • 3、要分离一个酸性化合物，使用哪种吸 附剂比较好？
基本操作过程
• （1）根据被分离物质的性质选择吸附剂， 最常用的是硅胶和氧化铝，其次是纤维 素、硅藻土、聚酰胺等； • （2）薄层板的制备； • （3）点样； • （4）展开； • （5）显色，Rf值计算。
三、具体操作
• 1、选择吸附剂 • （1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中 性物质分离（可制备成酸性不同或碱性硅胶扩大 使用范围）。 • （2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中 性物质分离（可制备成中性或酸性氧化铝扩大使 用范围）。 • （3）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分 类亲水性物质。 • （4）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚 类、醇类化合物的分离。