医院病理科分子病理实验室实施方案

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目录

第一部分分子病理概述 (3)

1.1分子病理诊断的应用范围 (5)

1.2常用分子病理技术 (5)

1.3 FISH-荧光原位杂交 (6)

1.4部分FISH产品对比（厂家提供，仅供参考） (7)

1.5实时荧光定量PCR (8)

1.6 基因测序 (10)

第二部分分子病理实验室设施与环境 (10)

第三部分病理科实验室质量管理标准 (11)

第四部分分子病理常用检测设备 (13)

1、荧光显微镜原位杂交图像分析系统 (13)

2、Leica Bond-Max全自动免疫组化和原位杂交多功能染色机 (16)

3、罗氏LightCycler® 480 模块式高通量实时荧光定量PCR系统 (16)

4、罗氏BenchMark GX 全自动多功能组织病理检测系统 (17)

5、Illumina HiSeq 2000高通量测序仪 (18)

6、NatureGene TermoBrite 原位杂交仪 (18)

7、力康HFsafe-1200 ClassⅡType A2 生物安全柜 (21)

8、Neofuge1600 Healforce 台式高速冷冻大容量离心机 (22)

第五部分分子病理实验室推荐设备型号及预算 (23)

方案一初级配置方案 (23)

方案二专业性配置方案 (23)

方案三科研型配置方案 (24)

第六部分分子病理常用试剂及价格 (24)

第七部分分子病理经济效益分析 (26)

7.1荧光原位杂交（FISH）检测项目的经济价值 (26)

7.2 实时荧光定量PCR项目的经济价值 (27)

第一部分分子病理概述

病理为医之本As is our pathology, so is our medicine

分子病理学中常用的分子生物学技术主要有核酸分子杂交、PCR相关技术、免疫荧光化学、基因芯片以及DNA序列分析等。由于分子病理学的应用，使得我们对疾病本质的认识更加深化，对于肿瘤的诊断和治疗也取得很大的进展。主要表现在以下几个方面：

1、肿瘤易感基因的检测：肿瘤遗传相关的易感基因检测对于肿瘤高危人群的筛检具有实用价值，已明确的肿瘤易感基因及其相关肿瘤有Rb1(视网膜母细胞瘤)、WT1(肾母细胞瘤)等。除了检测高危人群的易感基因外，有方法也应用于正常人群肿瘤易感性检测，如检测Ret基因突变用于诊断Ⅱ型多发性内分泌肿瘤，通过分析GST基因型以判断个体暴露于致癌物时的致癌危险性等。

2、肿瘤相关病毒的检测：如HPV病毒与宫颈癌的发生有很大关系，通过对HPV病毒的检测可起到预防和提早治疗的作用。而当前国际上诊断HPV感染以DNA检测为主。

3、肿瘤的早期诊断：K-ras基因突变在结肠癌、胰腺癌和肺癌等肿瘤中发生率较高。应用细针穿刺活检材料检测胰腺癌的第12密码子变突。应用PCR-RFLP方法检测结肠癌患者粪便中的Ras基因突变，其检出率与瘤组织中相似，可用于高危人群的筛选。

4、疑难肿瘤的诊断和分类：传统的病理学诊断主要通过形态学和免疫表型来判断淋巴细

胞增生与淋巴细胞性肿瘤，但对对医生的经验要求较高，且难度较大。应用RFLP分析免疫球蛋白或T细胞受体基因重排，具有鉴别诊断作用，且这种分子病理分型比免疫学分型更为准确。对Bcr 区基因重排的检测，可对慢性粒细胞性白血病和急性粒细胞性白血病进行鉴别诊断。N-myc和C-myc扩增和表达的检测，对鉴别神经母细胞瘤和神经上皮瘤具有应用价值，因前者N-myc明显扩增，而后者则为C-myc明显扩增。

5、肿瘤的预后监测：利用癌症患者的全基因序列开发出的个性化血液检测方法有助于医生调整癌症患者的治疗方案，可以监测癌症治疗后的情况以及发现癌症是否复发。

6、为肿瘤个体化和预见性治疗提供依据：肿瘤在发生、发展的不同时期，可能涉及不同基因的不同变化形式，而这种变化与肿瘤临床治疗的敏感性密切相关，如能在分子水平对肿瘤基因变化提供指标，对肿瘤的个体化和预见性治疗具有指导意义。如在90%的胰腺癌、50%的结肠癌、30%的非小细胞肺癌中存在Ras基因的激活，50%左右的肿瘤有P53基因不同形式的突变，这些基因的异常，使肿瘤对某些放疗或化疗的方法具有抵抗性，如能从基因水平上改变异常基因的状态，则可提高放、化疗的敏感性。

7、肿瘤的预后判断：肿瘤基因的突变、扩增及过表达等改变常与肿瘤的预后密切相关。如HER2基因扩增与乳腺癌发生发展及临床预后密切相关, HER2的阳性表达提示预后不良，可通过荧光原位杂交（FISH）技术进行检测，配合术后治疗，指导临床用药。

1.1分子病理诊断的应用范围

⏹人类遗传病的基因诊断和产前诊断

⏹肿瘤分子靶向治疗

⏹明确感染性疾病的病源体（细胞、真菌、病毒）

⏹多基因病研究

⏹组织器官移植配型

⏹辅助病理诊断

⏹法医学

⏹性别鉴定

⏹基础研究

◆通过PCR技术确认Ig和TCR基因是否发生重排，判定淋巴造血系统疾病的良恶性。

◆FISH法检测乳腺癌her-2基因是否发生扩增，指导临床靶向药物（赫赛汀）治疗。

◆FISH法检测滑膜肉瘤SYT基因是否发生易位，协助临床诊断。

◆通过对结直肠癌KRAS基因的突变测序分析，指导靶向用药（爱比妥）。

◆HPV多亚型检测，提示宫颈癌的发病风险。

◆肺癌分子靶向治疗EGFR酪氨酸激酶抑制剂：吉非替尼(gefitinib, 商品名Iressa) 、埃罗替尼(Erlotinib, 商品名Tarceva)

◆检测HER2状态的临床价值胃癌靶向治疗患者筛选、疗效预测

1.2常用分子病理技术

◆免疫组织化学（IHC）技术－检测蛋白

◆分子原位杂交－DNA，RNA

◆荧光原位杂交（FISH）技术－DNA，RNA

◆多聚酶链式反应PCR技术－DNA，RNA

◆荧光定量PCR－DNA，RNA

◆DNA测序技术－DNA突变

◆生物芯片技术－DNA，RNA，蛋白质等

◆DNA印迹（Southern blot）