几种溶液的配制方法

几种溶液(PBS、TBS、Citrate buffer、Trypsin、Pepsin、AEC、Blotto

A)的配制方法

1、PBS:

取 ZLI-9061 PBS 溶于 1000ml 的蒸馏水中，混匀，测 pH 值应在 7.2~7.4 之间，若偏离此范围，请用 0.1N 的 HCL 或 NaOH 调整。

2、TBS：

2.1 Tris 缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）

Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g

1N HCL 约 420ml

双蒸水加至 1000ml

Tris 缓冲液配制方法：

先以少量双蒸水（300~500ml）溶解 Tris，加入 HCl 后，用 HCl（1N）或 NaOH（1N）

将 pH 调至 7.6，最后双蒸水加至 1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。

2.2 TBS 配方：

Tris-HCI 缓冲液（0.5M pH7.6） 100ml

NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)

双蒸水加至 1000ml

TBS 配制方法：

先以少量双蒸水溶解 NaCl，再加入 Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至 1000ml，充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：

3.1 储存液：

A. 0.1M 枸橼酸溶液：称取21.01g 枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于 1000ml 蒸馏水中。

B. 0.1M 枸橼酸钠溶液：称取29.41g 枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于 1000ml 蒸馏水中。

3.2 工作液：

取 9ml A 液和 41ml B 液加入 450ml 蒸馏水中，溶液 pH 值应为6.0±0.1

4、胰酶（Trypsin）：

4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液：

常用浓度为 0.125%，即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05%（1:10 稀释）至 0.25%（1:1 稀释）。

4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶：

取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05%或0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

5、胃酶（Pepsin）：

4%胃蛋白酶，用 0.1mol/L HCL 配制。

6、DAB：6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：

使用前只需将试剂盒提供的 A、B、C 三种试剂各一滴加至 1ml 双蒸水中，即可获得 1ml DAB工作液，简单易用。

6.1 ZLI-9030 DAB：

6mgDAB 溶于 10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml 浓度为 3％的 H2O2，过滤掉沉淀物，即可。7、AEC：

4mg AEC 溶于 1ml 二甲基甲酰胺中，加入 14ml 浓度为 0.1M 的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。

8、RIPA：

1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入 RIPA 中。

8.1 10mg/ml PMSF 异丙醇溶液（用量为 10m l/ml）8.2 Aprotinin（Sigma 产品，用量为 30m l/ml）8.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液

（用量为 10m l/ml）

9、Blotto A：

常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。

10、Blotto B：

与 Phosphotyrosine 抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中 milk 可完全去除，但可能引起背景增高。