2015版药典无菌检查法与微生物鉴定

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2015版中国药典无菌检验-中翎易

2015版中国药典无菌检验-中翎易

环境及人员要求
2015版中国药典四部 9203药品微生物实验室质量管理指导原则(P388)
从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的 教育背景。 实验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训,在确认他们可以承 担某一试验前,他们不能独立从事该项微生物试验。应保证所有人员 在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术等方面的 培训,如无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、 菌种的转种、传代和保藏、微生物检查方法及鉴定基本技术等。经考 核合格后方可上岗。 实验人员应经过实验室生物安全方面的培训,保证自身安全,防止 微生物在实验室内部污染。
无菌操作:是指在无菌环境条件下,在对无菌制品或 无菌器械进行检验的过程中,能防止微生物污染与干扰 的一种常规操作方法。 培养条件:用于促进微生物发育、生长和繁殖的生 长培养基和培养方式的组合。 抑细菌/抑霉菌试验:用选定的微生物来演示某些物 质的存在能够抑制这些微生物的繁殖。 培养基: 是人工配制的生物营养物质,即用人工的 方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一 种混合营养物。
恒温培养箱(至少2台)
医疗器械无菌检验所需设备
压力蒸汽灭菌器 压力蒸汽灭菌锅
医疗器械无菌检验所需设备电热干燥箱来自医疗器械无菌检验所需设备
集菌仪
医疗器械无菌检验所需设备
医疗器械无菌检验所需设备
红外电热灭菌器
医疗器械无菌检验所需设备
电子天平 精确度:0.01g
医疗器械无菌检验所需设备
光学显微镜
培养基:可按药典中的处方制备培养基,亦 可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基 。应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的 培养基应保存在2 ℃ ~ 25℃、避光的环境, 若保存于非密闭容器中,一般在3 周内使用; 若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用。

2015版中国药典微生物检验

2015版中国药典微生物检验

• 注:方法选择原则:根据供试品理化特性和微生物限度 标准等因素选择。
培养基适用性检查
• 胰酪大豆胨琼脂:金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜 绿假单胞菌、白色 念珠菌、黑曲霉 • 胰酪大豆胨肉汤:金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草 芽孢杆菌 • 沙氏葡萄糖琼脂、玫瑰红钠琼脂 、白色念珠菌、黑曲霉。
中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查非无菌产品微生物限度检查
菌数报告规则
• 2、薄膜过滤法:计数方法同平皿计数法,每 张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告 规则以相当于 1g、1ml或10cm供试品的菌落数 报告菌数;若滤膜上无菌落生长,以﹤1报告 菌数(每张滤膜过滤1g、1ml或10cm 供试品 ),或﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 • 3、MPN法:记录每一稀释级微生物生长的管 数,从表3查对每1g或1ml供试品中需氧菌总数 的最可能数。
培养条件
• 描述方式:按计数方法适用性试验确认计 数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和 酵母菌总数测定。 • 培养条件:胰酪大豆胨琼脂平板在30~ 35℃培养3-5天,沙氏葡萄糖琼脂平板在20 ~25℃培养5~7天;MPN法和供试品接种, 所有试验管在30~35℃培养3~5天。

《2015版《中国药典》微生物检测与洁净室环境检测技术》-1

《2015版《中国药典》微生物检测与洁净室环境检测技术》-1






微生物细胞结构示意图
• 细菌细胞结构图 •
教 真菌细胞结构图 天 飞





微生物的五大共性




1、体积小,面积大; 2、吸收多,转化快;
3、生产旺,繁殖快;
4、适应强,易变异; 5、分布广,种类多。




细 菌 形 态 特 征
• 革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的细胞壁结构比较



试管
移液管
先用少许棉花塞于吸口端,然后用纸包好或装入金属吸 管筒内,于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干。




培 养 基 的 基 础 知 识

液体培养 基用滤纸 过滤,固 体培养基 用纱布块 中夹薄层 脱脂棉过 滤

校正酸碱度
(1)先将卵磷脂加入少量蒸馏水低温加 热溶解溶、再加吐温80混匀,,加入琼 脂,静置15分钟。
细胞壁结构 G+ G-




脂多糖(LPS),包括脂
厚度 强度 糖类含量 脂类含量 磷壁酸 脂多糖
20-80nm 坚韧 约45% 约2% 无
10-15nm 疏松 约15% 约20% 有 有
蛋白A,核心多糖和特异
性多糖三个部分。LPS对 动物具有毒性作用,它 牢固地结合在细胞表面,
只在菌体融解时才释放,
非细胞类:病毒、亚病毒(类病毒、朊病毒)




细菌(bacteria)
• 细菌是单细胞的原核微生物
• 细菌是所有生物中数量最多的一类,据估计,其总数约有 5×10的三十次方个。 • 细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成 • 根据形状分为三类,即:球菌、杆菌和螺形菌(包括弧菌、 螺菌、螺杆菌)

2015药典无菌、微限检验

2015药典无菌、微限检验

方法适用性试验
• 当建立产品的无菌检查法时,应进行方 法适用性试验,以确认所采用的方法适合于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生 变化可能影响检验结果时,应重新进行方法 适用性试验。方法适用性试验按“供试品的 无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对 每一试验菌应逐一进行方法确认。
方法适用性试验
光学显微镜
过滤装置(无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子)
环境及人员要求
无菌检查应在无菌条件下进行,试验环境必 须达到无菌检验的要求,检验全过程应严格遵守 无菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不 得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区 )悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现 行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按 相关的要求进行验证,其内部环境的洁净度须符 合无菌检查的要求,日常检验还需对试验环境进 行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识,并 经过无菌技术的培训。
促生长试验:用于证明生长培养基能够支持微生物 生长的技术操作。 假阴性:实际阳性的无菌试验结果被变成了阴性。 假阳性:实际阴性的无菌试验结果被变成了阳性。 需氧菌:在代谢中,有氧条件下才能生存的微生物。 厌氧菌:在代谢中,没有氧的条件下才能生存的微生物。 无菌保证水平(SAL):灭菌后产品上存在单个活微生物 的概率。“无菌医疗器械”表示为医疗器械中,有残存微生物的医疗器械的概率小于10 ,即一百万件中小于1件。
无菌检查法 试验前准备
硫乙醇酸盐流体培养基:主要用于厌氧菌的培养
,也可用于需氧菌培养。
无菌检查法 试验前准备
硫乙醇酸盐流体培养基:
在供试品接种前, 培 养基氧化层的高度不得超 过培养基深度的1/5,否则 ,须经100℃水浴加热至粉 红色消失(不超过20分钟 )迅速冷却,只限加热一次 ,并应防止被污染。其装 量与容器高度的比例应符 合培养结束后培养基氧化 层(粉红色)不超过培养 基深度的 1/2。30℃ ~ 35℃培养14天。

2015版药典无菌检查法与微生物鉴定

2015版药典无菌检查法与微生物鉴定

• 无菌技术 是指在微生物试验工作中,控制或防止各 类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施, 其中包括无菌环境设施、无菌试验器材及无菌操作。
• 无菌检查法的局限性 由于无菌是一个相对的概念, 因此,对无菌检查的结果应该有一个正确的认识-即产品 通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下,供试品未发现 有微生物污染,并不表示所有的产品都是无菌的。反之, 当供试品中检出微生物污染,则可以认为批产品的微生物 污染风险相当高。
豆木瓜蛋白酶消化物
浸出粉…….…2.0g
白酶水解物
………………………………….3.0g 葡萄糖…………....20.0g 磷 „„„„„„„„„3.0g
氯 化 钠 …..…………….…….…5.0g 酸氢二钾………..1.0g
氯化钠 „„„„„„5.0g
磷 酸 氢 二 钾 …………………....2.5g 硫酸镁 一水葡萄糖……………….……2.5g (MgSO4.7H2O)….0.5g
Dextrose(葡萄糖)............................................5.0 g Sodium Chloride(氯化钠).....................................2.5 g L-Cystine( L-胱氨酸) .......................................0.5 g Sodium Thioglycollate (硫乙醇酸钠)..........................0.5 g Agar( 琼脂).................................................0.75 g Resazurin( 刃天青) .........................................1.0 mg Water(水)............................................. ...1000ml

中国药典(2015年版)无菌检查法

中国药典(2015年版)无菌检查法

中国药典(2015年版)无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

如果供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。

只要供试品性质允许,应采用薄膜过滤法。

薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤器,无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45微米,直径约为50mm。

根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质,使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。

直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品,即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。

2015年版药典 无菌检查法

2015年版药典 无菌检查法
无 菌 性 检 查 每 批 培 养 基 随 机 取 不 少 于 5 支 ( 瓶 ),置各 培 养 基 规 定 的 温 度 培 养 1 4 天 ,应 无 菌 生 长 。
灵敏度检査 菌 种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代(从 菌 种 保 存 中 心 获 得 的 干 燥 菌 种 为 第 0 代 ),并 采 用 适 宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验 菌株的 生物 学特 性。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus aureus ) C C M C C (B) 26 003〕 铜 绿 假 单 胞 菌 (Pseudomonas aeruginosa ) C C M C C ( B) 10 104〕 枯 草 芽 孢 杆 菌 仏 5)〔C M C C ( B ) 6 3 501〕 生 抱 梭 菌 sporogenes) C C M C C ( B ) 64 941〕 白 色 念 珠 菌 albicans) C C M C C ( F ) 98 001〕 黑 曲 霉 n ig e r) C C M C C ( F ) 98 003〕 苗 液 制 备 接 种 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单 胞 菌 、枯草 芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大 豆 胨 琼 脂 培 养 基 上 ,接 种 生 孢 梭 菌 的 新 鲜 培 养 物 至 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 中 ,30〜 35°C培 养 18〜 2 4 小 时 ;接 种 白 色 念 珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖 琼 脂 培 养 基 上 ,20〜 25°C培 养 24〜 4 8 小 时 ,上 述 培 养 物 用 PH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9% 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 菌 数 小 于 lOOcfu( 菌 落 形 成 单 位 )的 菌 悬 液 。接 种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上, 20〜25*C培 养 5〜7 天 ,加 人 3〜 5 m l含 a 0 5 % (m l/m l) 聚山 梨 酯 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 ,将 孢 子 洗 脱 。然 后 ,采 用 适 宜 的 方 法 吸 出 孢 子 悬 液 至 无 菌 试 管 内 ,用 含 0.05% ( m l/m l) 聚 山 梨 醋 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 孢 子 数 小 于 lOOcfu的 孢 子 悬 液 。 菌 悬 液 若 在 室 温 下 放 置 ,应 在 2 小 时 内 使 用 ;若 保 存 在 2〜8°C可 在 2 4 小 时 内 使 用 。黑 曲 霉 孢 子 悬 液 可 保 存 在 2 〜 8°C,在 验 证 过 的 贮 存 期 内 使 用 。 培 养 基 接 种 取 每 管 装 量 为 12ml的硫乙醇酸盐流体培 养 基 7 支 ,分 别 接 种 小 于 lO O c fu 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单胞菌、生 孢 梭 菌 各 2 支 ,另 1 支 不 接 种 作 为 空 白 对 照 ,培 养 3 天 ;取 每 管 装 量 为 9 m l的 胰 酪 大 豆 胨 液 体 培 养 基 7 支 ,分 别接种小 于lOOcfu的 枯 草 芽 孢 杆 菌 、白 色 念 珠 菌 、黑 曲 霉 各 2 支,另 1 支不接种作为空白对照,培 养 5 天 。逐 日观 察结果。 结 果 判 定 空 白 对 照 管 应 无 菌 生 长 ,若 加 菌 的 培 养 基 管 均 生 长 良 好 ,判 该 培 养 基 的 灵 敏 度 检 查 符 合 规 定 。

2015版中国药典微生物限度

2015版中国药典微生物限度

1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品, 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液,或 pH7.2 磷酸盐缓冲液,或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品,可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80,使供 试品分散均匀。若需要,调节供试液 pH 值至 6~8。必要时,用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法(MPN 法)
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml
或cm²)。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数(包括真菌菌落数);
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数(包括细菌菌落数)。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求,可 使用含抗生素(如氯霉素、庆大霉素)的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基(如玫瑰红 钠琼脂培养基)进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外,取规定量供试品,按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定,每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外,胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30~35℃培养3~5天,沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20~25℃培养5 ~7天, 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数,必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后,计算各稀释级供试液的平均菌落数,按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15, 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。

9-钱文静-2015版中国药典无菌检查法

9-钱文静-2015版中国药典无菌检查法

(二)、无菌检查的特点和意义 由于抽样概率的限制,通过无菌检查发现产品 微生物污染的可能性极低,而当前坚持无菌检查的 意义在于: 产品上市前发现重大污染事件的最后一道关口; 通过无菌检查的执行情况可以窥视其无菌控制存 在的问题。
三、无菌检查法的有关概念和新理念
(三)、无菌检查的新理念 1.全过程控制
2014-9-16
(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 3、培养基 ⑶灵敏度检查- ②菌液制备用培养基的修订
2010年版 1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物 ——至营养肉汤培养基中或营养琼脂培 养基上; 2、接种生孢梭菌的新鲜培养物 ——至硫乙醇酸盐流体培养基中; 3、接种白色念珠菌的新鲜培养物 ——至改良马丁培养基中或改良马丁琼 脂培养基; 4、接种黑曲霉的新鲜培养物至 ——改良马丁琼脂斜面培养基上 ;
2010年版 1、硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌、 生孢梭菌 2、改良马丁培养基 ——白色念珠菌、黑曲霉 2015年版 1、硫乙醇酸盐流体培养基 ——生孢梭菌、金黄色葡萄球 菌、铜绿假单胞菌 2、胰酪大豆胨液体培养基 ——枯草芽孢杆菌、白色念珠 菌、黑曲霉
30
悬浮粒子最大允许数/立方米 洁 净 度 级 别 A级 B级 C级 D级 静态 ≥0.5 μm 3520 3520 352000
3520000
微生物监测的动态标准(1) 浮游 菌 cfu/ m3 1 10 100 200
沉降 菌 ( 90m m) cfu /4h(2)
动态 ≥5.0 μm 20 29 2900 ≥0.5 μm 3520 352000 3520000 ≥5.0 μm 20 2900 29000
2014-9-16

2015版药典微生物相关知识

2015版药典微生物相关知识

2015年版微生物检查培训微生物检验包含微生物限度检查和控制菌检查微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求,检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染,防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

供试品检查时,应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法,检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定,所选的方法适用性须经确认。

供试品检查:1.供试液的制备:稀释剂为pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,取10g供试品稀释成1:10 1:100的供试液。

2.微生物限度检查:计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法(MPN法)。

①平皿法又包括倾注法和涂布法。

每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

需氧菌总数:胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)在30~35℃培养3~5天;霉菌和酵母菌总数:沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)在20~25℃培养5~7天,观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数,计数并报告。

菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。

点计菌落数后,计算各稀释级供试液的平均菌落数。

若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

菌数报告规则:需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级,作为菌数报告的依据.取最高的平均菌落数计算1g,1ml或10cm2供试品中所含的微生物数,取两位有效数字报告。

如各稀释级的平板均无菌落生长,或仅最低稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小于1时,以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

②薄膜过滤法:取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液,加至适量稀释液中,立即过滤,冲洗,冲洗后取出滤膜,菌面朝上贴于TSA或SDA上培养。

培养条件和计数方法同平皿法,每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

2015版《中国药典》四部介绍及其在中药分析鉴定中的应用

2015版《中国药典》四部介绍及其在中药分析鉴定中的应用

2015 年版《中国药典》四部介绍及其在中药分析鉴定中的应用李峰2015年版《中国药典》已于2015年6月5日由国家食品药品监督管理总局正式颁布。

2015年版《中国药典》最大的变动之一是将原药典各部附录整合,并与药用辅料标准单立成卷,首次作为《中国药典》第四部,解决了长期以来药典各部共性检测方法重复收录、彼此之间方法不协调、不统一、不规范,给药品检验实际操作带来不便的问题。

2015年版《中国药典》四部是保证《中国药典》执行的重要基础,是2015年版《中国药典》水平和特色的重要体现,也是系统阐述药品检测技术、传播药典知识的良好教科书,对于强化药品监管手段,保障药品质量不断提高,促进先进检测技术应用和行业健康必将发挥积极的作用。

一、2015年版《中国药典》四部介绍2015年版《中国药典》四部内容包括凡例、通则和药用辅料。

药典通则涵盖了通用性要求、检验方法、指导原则以及试剂和标准物质等药品标准的共性要求,是药典标准的基础,不但反映了我国药品质量控制整体状况和药品检验技术水平;同时也对规范药品研究、生产、检验、加强药品监管发挥重要作用。

现就2015年版《中国药典》四部整体情况简要介绍如下。

1.2015年版《中国药典》四部增修订整体情况2015年版《中国药典》四部收载通则总数317个,将药典一部、二部、三部制剂整合后共计38个,检测方法附录287个,其中新增通则28个 (检定方法通则27个、制剂通则1个),整合通则63个,修订通则 67 个;新增生物制品总论3个;指导原则共计30个,其中新增15个,修订10个。

辅料收载总数约270个品种,其中新增137 个,修订97个,不收载2个。

2.2015年版《中国药典》四部主要特点2.1 整体提升质控水平《中国药典》凡例、通则、总论是药典的重要组成部分,对药品标准的检测方法和限度进行总体规定,对药典以外的其他药品国家标准具同等效力。

通过对2010年版《中国药典》相关内容的全面增修订,全面完善了药典标准基本共性规定,从整体上提升对药品质量控制的要求,形成了以凡例为统领,通则为同类药品基本准则、各论作为基本要求的药典标准体例。

《中国药典》2015年版微生物测定修订情况

《中国药典》2015年版微生物测定修订情况

常州药检
一、微生物计数法
分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平 板,每一试验菌株平行制备2个平皿,30~35℃培养 不超过3天。同时,用相应的对照培养基代替被检培 养基进行上述试验。 分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌液至 胰酪大豆胨琼脂培养基平板,每一试验菌株平行制备 2个平皿,30~35℃培养不超过5天。同时,用相应 的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。
常州药检
一、微生物计数法 计数培养基适用性检查
菌种:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉,不得超过5代。
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
取其新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。黑曲霉制 备时在缓冲液或氯化钠溶液中加入0.05%(v/v)聚山 梨酯80。 菌液在室温下2小时内使用,2~8℃时可在24h内使用, 黑曲霉孢子悬液可2~8℃保存,在验证过的贮存期内 使用。
MPN法
常州药检
一、微生物计数法
平皿法:包括倾注法和涂布法。每株菌每种培养基 至少制备2个平皿,以算术平均值计算。使用涂布 法应采用适宜的方法使培养基表面干燥,且每个 平皿接种的供试液不少于0.1ml。
常州药检
一、微生物计数法
薄膜过滤法:一般取相当于1g(ml、10cm2)的供试 品,(若供试品中所含的菌数较多时,供试液可 酌情减量)加至适量稀释液中,混匀,过滤。用 适量冲洗液冲洗。 每株菌每种培养基至少制备一张滤膜。 同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
常州药检

中国药典2015版-微生物限度检查解析

中国药典2015版-微生物限度检查解析

*
*
注*:限度未做统一规定。
控制菌
*
不得检出沙门菌 (10g) ; 耐胆盐革兰阴性菌应小 于104(1 g)
执行及制定标准的注意事项
执行范围: 生产、贮存、销售过程中的药品 药用原料、辅料 中药提取物、中药饮片 新药标准 进口药品标准复核 药品质量考察及仲裁
标准执行的注意事项: 药典标准出处:中国药典通则项下【微生
或菌株已无使用需要时应及时灭菌销毁”; • 管理:应有程序文件,包括申购、操作、转种传代、纯度特性确认记录,注明名称、标准号、
接种日期、代数、培养基和培养条件、保藏的位置和条件等。
环境
• 实验室的布局和运行 • 环境监测 • 清洁、消毒和卫生
设备
建立仪器设备管理制度 清洁保养制度 操作规程 使用、监控的记录
器、天平、量器等等) 3.供应商评估与现场审计 使用正确的、有严格质量保障的产品
《中国药典》2015年版-微生物限度标准修订解析
标准修订内容 修订思路1 《中国药典》2010年版一、二、三部限度标准的相关内容合并。 修订思路2 参考EP7.0,USP35,JP X V标准,修订中国药典的微生物限度标准。
胆盐革兰阴性菌应小102
不含豆豉、神曲等发酵 5×102 原粉
102
液体口服给药
制剂
含豆豉、神曲等
发酵原粉
103
102
不得检出大肠艾希菌 不得检出沙门菌
耐胆盐革兰阴性菌应小 于 101
固体局部给药 表皮或粘膜不完整
104
102
不得检出金黄色葡萄球
制剂
菌、
表皮或粘膜完整
103
102
铜绿假单胞菌 ;阴道、
药品微生物检验的现状与发展

药典三部(2015版)-通则-1101微生物检查法

药典三部(2015版)-通则-1101微生物检查法

1101 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行,试验环境必须达到无菌检查的要求,检验全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。

隔离系统应定期按相关的要求进行验证,其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

日常检验还需对试验环境进行监控。

培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养,也可用于需氧菌培养;胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备,亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。

配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基应保存在2~25℃、避光的环境,若保存于非封闭容器中,一般在3周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基胰酪胨15.0g 氯化钠2.5g酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青溶液1.0ml无水葡萄糖 5.0g 琼脂0.75gL-胱氨酸0.5g 水1000ml硫乙醇酸钠0.5g(或硫乙醇酸)(0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。

分装至适宜的容器中,其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的1/2。

灭菌。

在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止污染。

2015年版中国药典微生物限度检查法

2015年版中国药典微生物限度检查法

1.1 总则:
• 环境: – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版:在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染 ,防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级,作为 菌数报告(取两位有效数字)的依据。取最 高的平均菌落数,计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长,或仅最低 稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小 于1 时,以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品,用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液,或pH7.2 磷酸盐缓冲液,或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要,调节供试液 pH 值至 6 ~8。必要时,用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC(B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版:营养肉汤或营养琼脂培养基】 30~35℃,18~24小时

中国药典2015版无菌检查方法适用性试验(直接接种法)

中国药典2015版无菌检查方法适用性试验(直接接种法)

中国药典2015版⽆菌检查⽅法适⽤性试验(直接接种法)*********公司*********产品⽆菌检查⽅法适⽤性试验1、样品信息2、培养基及试剂3、菌种基本信息:4、菌液制备:2.1接种⾦黄⾊葡萄球菌、⼤肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨培养基中或胰酪⼤⾖胨脂培养基上,30~35℃培养18~24⼩时,培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.2接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中,30~35℃培养18~24⼩时,培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.3接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基或沙⽒葡萄糖琼脂斜⾯培养基上,20~25℃培养24~48⼩时,培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.4接种⿊曲霉菌的新鲜培养物接种⾄沙⽒葡萄糖琼脂斜⾯培养基上,20~25℃培养5~7天,加⼊3~5ml含0.05%(ml/ml)聚⼭梨酯80的0.9%⽆菌氯化钠溶液,将孢⼦洗脱。

然后,采⽤适宜的⽅法吸出孢⼦悬液⾄⽆菌试管内,⽤含0.05%(ml/ml)聚⼭梨酯80的0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌孢⼦悬液。

6、⽆菌检查直接接种法⽅法适⽤性试验6.1供试品制备:描述供试品制备过程(主要为每个样品的取样部位及⽤量)。

6.2试验组:取装量为 ml硫⼄醇酸盐流体培养基,接种规定的供试品量(同6.1),并接种⼩于100cfu的⾦黄⾊葡萄球菌;⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌、枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉按照上述步骤操作,其中⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌加⼊硫⼄醇酸盐流体培养基,枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉加⼊胰酪⼤⾖胨液体培养基。

6.3对照组:取装量为 ml硫⼄醇酸盐流体培养基3管,分别接种⼩于100cfu的⾦黄⾊葡萄球菌、⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌;取相同装量的胰酪⼤⾖胨培养基3管,分别接种⼩于100cfu枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉。

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μm
A级 3520准(1)
浮游 菌 cfu/ m3
沉降 表面微生物
菌 接触碟 (f9 / 0mm)(f55 cfu mm) /4h(2) cfu /
5指手 套 cfu /手 套
<1 <1 <1 <1
B级 3520
29
352000 2900
10 5
5
5
C级 352000 2900 3520000 29000 100 50 25
2015版中国药典通则
9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则
GMP2010年版对洁净度的规定及确认标准
悬浮粒子最大允许数/立方米
洁 静态 净
动态

级 ≥0.5
≥5.0 ≥0.5
≥5.0
别 μm
μm μm
比较项目
检验条件规定 人员要求 培养基、培养 条件与时间
培养基灵敏度 检查与方法验 证用菌株 检验方法 稀释剂与薄膜 过滤冲洗液
结果判断与复 试规定
ChP2010
USP35
EP7.0
总体10000级、局部100级
应在无菌条件下进行。
应在无菌条件下进行。
具备微生物专业知识,并经过无 经培训和认可 菌技术的培训
经培训和认可
硫乙醇酸盐流体培养基
30~35℃;20~25℃(三部 )
改良马丁培养基 23~28℃
均培养14天,
转种后细菌培养2天、真菌培 养3天
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基
20~25℃ 培养不少于14天 转种后培养不少于4天
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基
• 无菌技术 是指在微生物试验工作中,控制或防止各 类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施, 其中包括无菌环境设施、无菌试验器材及无菌操作。
• 无菌检查法的局限性
由于无菌是一个相对的概念,
因此,对无菌检查的结果应该有一个正确的认识-即产品
通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下,供试品未发现
应在洁净度10000级背景下的局 应在受控洁净环境下(不低于D
部100级单向流空气区域内进行。 级)的局部不低于B级单向流空
气区域内进行。
修订的依据
修订依据及意义:2010版GMP附录一《无菌药品》和附录三 《生物制品》中均规定,非最终灭菌产品各工序关键操作环 境应为B级背景下的A级。无菌检查的洁净环境不得低于生产 关键区的洁净环境要求! ICH:检查方法中要求“试验应在无菌条件下进行,防止微 生物污染的措施不得影响供试品中微生物的检出”。
20~25℃ 培养不少于14天 转种后培养不少于7天
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌 、黑曲霉
只要供试品性状允许,应采用薄 膜过滤法
1、0.1%蛋白胨水溶液; 2、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 3、其他经验证过的溶液
性状允许的样品采用薄膜过滤 ,利于抗菌影响去除
1.0.1%蛋白胨水溶液; 2.0.1%蛋白胨水溶液+1ml 吐温80 3.动物组织消化液+牛肉浸 膏+吐温80
培养基的主要修订
2010年版 硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃(20~25℃)
改良马丁培养基 23~28℃
营养肉汤培养基
营养琼脂培养基 改良马丁琼脂培养基
2015年版
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃(20~25℃) 胰酪大豆胨液体培养基
有微生物污染,并不表示所有的产品都是无菌的。反之,
当供试品中检出微生物污染,则可以认为批产品的微生物
污染风险相当高。
从理论上来说,要确定某批产品的无菌性,应对每个容器 进行无菌检查。但是无菌试验对样品是破坏性的,因此不 可能对每一最小包装的产品进行检查。
统计概率的局限性 :对于低污染水平的产品,其局限性 在统计学上更为明显。
2015版药典无菌检查法与 微生物鉴定方法
药品检验与研究所 抗生素室
• 无菌 是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。
• 无菌检查法 用于检查药典要求无菌的药品、生物制 品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种 方法。
• 无菌操作 是指在无菌环境条件下,在对无菌制品或 无菌器械等 进行检验的过程中,能防止微生物污染与干 扰的一种常规操作方法。
所以在评价某个无菌制品的某个批的无菌状态时,仅依靠 最终产品的无菌检查是不充分的,局限性较大。对无菌制 品来说,生产最终产品的所有系统的工艺才是最重要的。
2015版中国药典无菌检查法
• 2015版中国药典无菌检查法的修订 • 无菌检查法的方法适用性试验 • 无菌检查法的注意事项
2015版中国药典无菌检查法的修订
采用薄膜过滤,利于抗菌 影响去除 1.0.1%蛋白胨水溶液
2.0.1%蛋白胨水溶液+ 0.1%(聚乙氧基乙醇、0.1 %吐温-80) 3.十四烷酸异丙酯。
一次检出结果为准 (设备及环境不符合要求、实验过程有可能引起污染的因素、阴性对照有菌 生长、分离微生物可明确归因于无菌实验过程中所用的材料或技术错误造成的。单倍量重试)
检验条件的局限: 样品中污染的微生物的检出受多种因 数的影响,只有在各检验条件符合污染微生物的修复和生 长时,才能保证被检样品的无菌检验结果的准确性。
污染的检出率要比实际产品的污染率低。
无菌检查存在检查失误的可能性:这可能是因为污染菌浓 度太低,或是污染菌生长太慢,或是因为培养基不良等原 因,在培养期间污染菌根本就不生长。产品的染菌率愈小, 错判合格的可能性就愈大。

D级 3520000 29000 不作规定 不作规定 200 100 50

无菌隔离系统的使用及验证
9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 •1.操作验证 •2.完整性验证 •3.灭菌验证 •4.灭菌循环验证 •5.内部洁净度验证 •6.仪器仪表验证
培养基的修订
• 我国药典无菌检查法与欧美药典的差异 • 2015版药典的修订
• 实验环境的修订 • 检查用培养基的修订 • 具体修订内容
实验环境的修订
2010年版
无菌检查: 应在洁净度10000级背景下的局 部100级单向流空气区域内或隔 离系统中进行。
2015年版
无菌检查: 应在洁净度B级背景下的局部A级 单向流空气区域内或隔离系统中 进行。
微生物限度检查:
微生物限度检查:
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