食品中总黄酮的测定
黑木耳中总黄酮提取及含量测定
液及 不 同 黑木 耳 粒 度 对 总 黄酮 提 取 测定 的影 响 ，确 定 黑木 耳 中总 黄 酮 最佳 提 取 方 案 ，该 结 果 作 为 测 定黄 酮 含 量 较 少 的保 健 食 品 中 的黄 酮 含 量 具有 参 考 意 义 。
１０ 的 提 取 液 ， ０ ％） 提取 方法 同 １ ．。每 组 设 ３ 重 复 ， 果 取 ．１ ４ 个 结
２１（ ０ ４ ０）
龟 同菌
黑 木 耳 中 总 黄 酮 提 取 及 含 量 测 定
张 丕奇 孔 祥辉 刘佳 宁 张介驰 于德 水
（ 龙 江 省 科 学 院 微生 物 研 究 所 ， 龙 江 哈 尔 滨 １０ １ ） 黑 黑 ５ ０ ０
摘
要 针 对 黑 木 耳 等 含 少 量 黄 酮 的 样 品 ， 过 比较 不 同黑 木 通
平均数。
２ 结 果 和分 析
２１ 标 准 曲线 建 立 ． 用 芦 丁 标 准 溶 液 建 立标 准 曲线 ， 计算 出 线 性 回归 方 程 ， 测样 品结 果 带 入 回 归方 程 ， 所 计算 得 出 黑 木耳 中 的总 黄 酮 含 量 。
表 １ 芦 丁 标 准 曲 线 建 立
铝吸 光度 法目 检 测黑 木耳 中的 总黄 酮 ， ， 获得 了满意 的结 果 。
取 样 粉 碎 （ 成 四种 粒 度 ：３ 目 、０ ５ 目 、０ ６ 目和＜ ５ 分 ＞０ ３￣０ ５￣５ ６ 目） 准 确 称 取 ５０ ， ． ｇ于 ２ ０ｍ ｏ ５ Ｌ三 角 瓶 中 ， ５ ０ 加 ０ｍＬ１ ％乙 ０
醇 ， 取 方 法 同 １ ．。 每组 设 ３个 重 复 ， 果取 平 均 数 。 提 ．１ ４ 结
１ ． 不 同浓 度 乙醇 提 取 液 对 黑木 耳 黄 酮 提 取 与 测 定 影 响 ．５ ４ 准 确 称 取 粒 度 为 ５ － ５ 目黑 木 耳 粉 ５ ０ｇ于 ２ ０ｍＬ三 ０６ ． ０ ５
总黄酮含量测定
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
总黄酮测定
总黄酮测定蕨菜中总黄酮和多糖的还原力测定一．前言1.项目的意义蕨菜是采自蕨科蕨属中蕨的幼嫩叶。
近年来已成为深受人们喜爱的山野菜。
蕨菜还具有清热化痰、利尿安神等功效,经常食用蕨菜会有一定的保健作用。
蕨菜中所含黄酮类化合物具有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗炎、抗氧化、抗衰老、降血脂、治疗心脑血管疾病等药用保健功能,也是一类具有广阔开发前景的天然抗氧化剂。
文中对蕨菜黄酮的含量测定、抗氧化作用等方面进行了研究,为蕨菜的保健功能研究,更为蕨菜的深度加工与开发提供依据。
2.黄酮的研究进展由于黄酮具备广谱的药理作用，特别是在抗癌、防癌和抗炎自由基方面的促进作用，引发人们很大的研发兴趣。
微波、超声波、酶求解、金属粉末和超临界抽取等几种黄酮的抽取方法可以单独采用，也可以相互辅助采用。
黄酮的拆分和鉴别方法主要存有高效率液相色谱法、紫外分光光度法和颜色辨别法。
测量黄酮的活性时，主要就是测量其抗氧化性能。
近年来，研究黄酮的学者越来越多，坚信黄酮可以更多地应用领域至医药、化妆、食品等领域。
3.实验内容首先采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定样品中总黄酮含量。
利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色络合物,以芦丁为标准在510nm处测吸光度,进行黄酮含量的测定[然后通过对蕨菜中总黄酮还原力测定[阴离子清除能力的测定[张建平，2021]李进,2021]陈乃富,2021]和dpph自由基清除能力的测定[李波，2021]及超氧对黄酮的抗氧化能力展开测量。
二、项目实施环节及实施方案1.材料与方法1.1材料蕨菜（天水市购）1.2试剂磷酸缓冲液、六氰合铁酸钾溶液、三氯乙酸溶液、三氯化铁溶液、dpph乙醇溶液、无水乙醇、水杨酸-乙醇溶液、硫酸亚铁溶液、水杨酸、30%双氧水、vc、bht、tris-hcl缓冲液、hcl溶液、邻苯三酚1.3仪器紫外可知分光光度仪，超声波水解仪、干燥箱、恒温水浴锅、电磨机、离心机、索氏抽取器等。
1.4方法通过对蕨菜中总黄酮还原力测定[李进,2021]和dpph自由基清除能力的测定[李波，2021]及超氧阴离子清除能力的测定[张建平，2021]对黄酮的抗氧化能力进行测定。
锁阳黄酮咀嚼片中总黄酮含量的测定
ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｉ ｔ ｙ ｗｅ ｒ ｅ ｙ ＝ ｌ １ ． ９ ２ ０ ｘ ＋ ０ ． ０ ０ ７ ２， ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ４， ４ ． ０ ２ Ｉ － ￣ ｇ ／ ｍＬ 一 ６ ４ ． ３ ２ Ｉ ￣ ｇ ／ ｍＬ， ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ（ Ｒ Ｓ Ｄ％）
ｌ ｆ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｔ ｂｌ ａ ｅ ｔ ｓ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ． ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｅ ｑ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ． ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｃ ｏ ｅ ｆｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ
Ｇａ ｎ ｓ ｕ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ２． Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｆ Ｃｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｎｏ ｒ ｔ ｈ ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ Ｐ ｌ ａ ｎｔ Ｒｅ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｌａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｃｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ
Ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ｓ ， ａｎ Ｌ ｚ ｈ ｏ ｕ ７ ３ ０ ０ ０ ０ ， Ｇ ａ ｎ ｓ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ Ｃ ｙ ｎ ｏ ｍｏ ｎｕ ｍ Ｓ ｏ ｎ ｇ ａ ｒ ｉ ｃ ｕ ｍ ｌ ｆ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｔ ｓ ．Ｌ ｕ ｔ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ．ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｅ ｏ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ Ｃｙ ｎ ｏ ｍｏ ｒ ｉ ｕ ｍ Ｓ ｏ ｎ ｇ ａ ｒ ｉ ｃ ｕ ｍ
保健食品中总黄酮的测定
1 总黄酮的测定（来源于《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版））1.1 试剂
1.1.1 聚酰胺粉
1.1.2 芦丁标准溶液：称取5.0mg芦丁，加甲醉溶解并定容至100mL，即得
50μg/mL。
1.1.3 乙醇：分析纯。
1.1.4 甲醇：分析纯。
1.2 分析步驟
1.2.1 试样处理：称取一定量的试祥，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置.吸取上清液1.0 mL，于蒸发皿中，加lg聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。
先用20 mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。
此液于波长360nm测定吸收值。
同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。
1.2.2 芦丁标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL 比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。
求回归方程，计算试样中总黄酮含量。
1.3计算和结果表示：
A × V2 × 100
X = -------------------------
V1 × M ×1000
式中：
X---试样中总黄酮的含量，mg/100g；
A---由标准曲线算得被测液中总黄酮量，μg；
M---试样质量，g；
V1---测定用试样体枳，mL；
V2---试样定容总体枳，mL。
计算结果保留二位有效数字。
保健食品 总黄酮测定方法
保健食品总黄酮测定方法
保健食品是指具有保健功能的食品，其中总黄酮是一种常见的保健成分。
总黄酮是指一类具有黄酮骨架结构的化合物，包括黄酮类、异黄酮类、花青素类等多种物质。
总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健作用，因此被广泛应用于保健食品中。
为了保证保健食品中总黄酮的含量符合标准，需要进行总黄酮测定。
总黄酮测定方法主要有两种：分光光度法和高效液相色谱法。
其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，适用于大批量样品的测定。
该方法的原理是利用总黄酮与铝离子形成络合物，使样品溶液的吸光度增加，从而测定总黄酮的含量。
该方法的操作简单，但对样品的前处理要求较高，需要去除干扰物质，否则会影响测定结果的准确性。
高效液相色谱法是一种准确、灵敏、选择性好的测定方法，适用于复杂样品的测定。
该方法的原理是利用高效液相色谱仪对样品中的总黄酮进行分离和检测。
该方法的优点是测定结果准确可靠，但需要较长的分析时间和较高的仪器成本。
总黄酮测定方法的选择应根据实际情况进行，以保证测定结果的准确性和可靠性。
同时，保健食品生产企业应严格按照国家标准进行总黄酮含量的测定，确保产品质量符合标准，保障消费者的健康。
总黄酮含量测定方案
总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。
取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。
使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。
二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。
制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。
三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。
2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。
3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。
4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。
四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。
六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。
次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法主要包括以下几种：
1. 酸性条件下的比色法：将样品与酸反应生成有色化合物，测定其吸光度。
如盐酸或硫酸与总黄酮反应生成有色化合物，可通过紫外可见光谱测定吸光度，进而计算总黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：使用高效液相色谱仪进行分离和测定。
通过采用特定的色谱柱和流动相，分离出总黄酮，并通过检测器测定其峰面积或峰高值，并与已知标准品进行比较，计算样品中总黄酮的含量。
3. 薄层色谱法：将总黄酮的样品与色谱载体共同涂布在薄层板上，通过色谱柱法进行有效分离。
然后，利用染色剂，如硼酸或铝酸盐等，在紫外或可见光下观察或测定样品斑点的强度，从而计算总黄酮的含量。
4. 毛细管电泳法：通过毛细管电泳仪将总黄酮进行分离，并通过测定峰面积或峰高值，配合已知标准曲线，计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同样品中总黄酮的化学结构和含量可能存在差异，因此在选择测定方法时应根据具体的样品特性和仪器设备的可用性做出选择。
分光光度法测定保健食品中总黄酮
２９１ 前言总黄酮是很多保健食品中的重要功效成份，能促进胰岛素的亲和力，在降压、降脂、降血糖方面有显著效果，同时还具有增强毛细血管通透性等作用。
因此，测定其含量对于保健食品的品质和功效具有重要的意义。
但目前国内还没有保健食品中总黄酮测定方法的国家标准。
国内外对保健食品中总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及平行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。
但是，总黄酮这种天然植物的组分非常复杂，分光光度法在实测过程中会产生各种干扰，影响结果的准确性，本方法有针对性地对此开展了研究，进行了创新并取得了较好的结果，建立了一个高效、准确的测定方法。
目前总黄酮的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、聚酰胺薄层分析法等。
但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免实测过程中会产生各种干扰。
因此比较而言，本方法立足于用常规的化学及物理检测方法，采用了超声波提取、聚酰胺吸附法经过改进系统，试验得到了快速、简易、良好的效果，在实际测定、应用中，具有更大的意义。
２ 检测方法２．１ 试剂与仪器２．１．１ 试剂与材料ａ）无水甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯甲烷，均为分析纯，以下用水除特殊说明外，均为ＧＢ／Ｔ ６６８２－２００８中规定的三级水。
ｂ）聚酰胺粉：过８０目～１００目筛。
ｃ）５ ％亚硝酸钠溶液：称取５．００ ｇ亚硝酸钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀，当天配制。
分光光度法测定保健食品中总黄酮孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心黑龙江）ｄ）１ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４．００ ｇ氢氧化钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｅ）１０％硝酸铝溶液：称取１０．００ ｇ硝酸铝，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｆ）３０ ％乙醇溶液：吸取３０．０ｍｌ无水乙醇，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｇ）芦丁标准对照品：９９．５％ｈ）芦丁标准溶液：精确称取经１０５℃干燥至恒重并按其纯度折算为１００ ％质量的芦丁标准对照品０．０１５０ ｇ，加无水甲醇溶解并定容至１００ｍｌ，此溶液浓度为１５０ μｇ／ｍｌ，０℃～４℃密封保存，保存期为两个月。
食品中总黄酮的测定
食品中总黄酮的测定（－）目的意义黄酮类化合物（flavonoids）是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。
其分析方法有多种,对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析,常采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）；而对于总黄酮含量的测定,则主要采用分光光度法。
通过本方法的学习,可以掌握食物中总黄酮的测定方法.（二)高效液相色谱法1。
原理植物类样品用石油醚脱脂后,经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离,在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪(2）紫外检测器（3)层析柱（4）超声波清洗仪（5)索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0。
45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚,盐酸,磷酸（分析纯）。
(10）去离子水(11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15。
0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液。
3。
操作步骤（1)样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分,弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25%HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0。
45um滤膜过滤,供分析用。
2)液体样品：准确吸取样品2。
0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后,以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜(0.45um）滤过后供测定用。
(2)色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm,5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V：V）＝40：80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长:360nm；灵敏度:0.02AUFS;进样量：20ul。
总黄酮测定
1.总黄酮含量测定（回流）对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取样品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。
取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H3006)计，不得少于7.0%。
2.总黄酮含量测定（天南星）对照品溶液的制备取芹菜素对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1ml含12ug的溶液，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加1%三乙胺溶液至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法，在400nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品粉末（过四号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
蒙药安神补心六味丸中总黄酮的含量测定
蒙药安神补心六味丸中总黄酮的含量测定摘要：目的：对安神补心六味丸进行总黄酮含量的测定。
方法：以芦丁为对照品，通过紫外可见分光光度法测量总黄酮含量。
结果：在0.0085mg/mL～0.0513mg/mL范围内总黄酮与吸光度呈良好线性关系，平均加样回收率为96.04%，RSD值为0.66%。
结论：该方法灵敏度高, 重复性好, 可以用作蒙药安神补心六味丸中总黄酮的含量测定。
关键词：安神补心六味丸；紫外可见分光光度法；总黄酮含量安神补心六味丸又名吉如和-6,此方由牛心、肉豆蔻、广枣、丁香、木香、枫香脂共6味单味药组成,具祛“赫依”，镇静功能，主治心慌，气短之症［1］。
临床上用于治疗冠心病心绞痛，疗效显著［2］。
目前对该药研究甚少，本实验通过紫外可见分光光度法测定总黄酮的含量为此方进一步研究奠定基础。
1.仪器与试药1.1仪器Cary 60型紫外可见分光光度计（Agilent）， SQP型十万分之一电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；KQ-200VDV型双频数控超声波清洗器（昆山）。
1.2试药蒙药安神补心六味丸（奥特奇蒙药股份有限公司：批号190722、190913、191219）；芦丁（批号100080-200707，纯度92.5%）购自于中国食品药品检定研究院；其他试剂为分析纯，水为超纯水。
1.3试剂的配制、5% NaNO2的配制：准确称取5.0g亚硝酸钠，再加入95ml去离子水，搅拌溶解即得。
10%AL(NO3)3的配制：准确称量硝酸铝10.0g放入150ml锥形瓶中，然后用移液管移取90ml去离子水，用玻璃棒搅匀即得。
4%NaOH的配制准确称取4.0g氢氧化钠固体，加入96g去离子水中，搅拌、溶解即得。
1.方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品10mg置于50mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，加70%乙醇定容至刻度，即为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备精密称取样品 2.0g，加入石油醚20ml（60～90℃）摇匀，静置过夜，滤过，弃去滤液，残渣挥干，加70%乙醇20ml，超声处理30min，过滤，取滤液定容至25ml量瓶中，即为供试品溶液。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定呀，有几种常见方法呢。
紫外- 可见分光光度法。
先得把样品处理好，就像给食材做前期准备一样。
把含有总黄酮的样品进行提取，提取液要纯净呀，不能有太多杂质干扰，杂质多了就像炒菜的时候锅没洗干净，那肯定做不出好菜。
然后在特定波长下测定吸光度，这个波长就像一把专门开总黄酮这把锁的钥匙，得找对喽。
这方法安全性挺高的，只要按照正常操作流程，不会有啥危险情况，稳定性也不错呢，只要仪器正常工作，数据偏差不会太大。
在食品、药品检测领域应用可广泛了，能快速知道产品里总黄酮的大概含量。
我知道一家小型制药厂，想检测新研发的药品里总黄酮含量，就用这个方法，快速得到结果，他们高兴得不得了，就像挖到宝藏一样。
还有高效液相色谱法。
这得把样品制成合适的溶液，溶液就像一支整齐有序的队伍，不能乱哄哄的。
然后注入色谱仪，色谱仪就像一个超级严格的裁判，把不同成分分得清清楚楚。
测定过程中要保证仪器的清洁和稳定，这可不能马虎呀，不然数据就乱套了。
这个方法安全性也还好，就是操作要细心些。
在科研中用得很多，能精确测定总黄酮含量，优势就是精准度高呀。
有个科研团队研究植物中的总黄酮含量，用这个方法得到准确数据，他们兴奋地说这简直是找到了解开谜团的密码。
我觉得这些总黄酮含量测定方法各有各的好，在合适的场景下都能发挥大作用，就像不同的工具在不同的工作里都能大显身手。
橙汁饮料中总黄酮含量测定
橙汁饮料中总黄酮含量测定1 概述橙、柑、桔中的黄烷酮类（橙皮甙、新橙皮甙等）与碱作用，开环生成2、6-二羟基-4-环氧基苯丙酮和对甲氧基苯甲醛；在二甘醇环境中遇碱缩合生成黄色橙皮素查耳酮，其生成量相当于橙皮甙的量。
在波长420nm处比色测定吸光度，扣除本底后，与芦丁标准系列比较定量。
即可测出其中的总黄酮量。
2 实验原理2.1 朗伯—比尔定律多数天然有机化合物在紫外-可见光范围内(200nm～750nm)有明显的特征吸收,根据朗伯-比尔定律，对在紫外可见光区有吸收的物质进行含量的测定.朗伯—比耳定律数学表达式:A=lg(1/T)=KbcA为吸光度,T为透射比,是投射光强度比上入射光强度c为吸光物质的浓度 b为吸收层厚度2.2 TU-1810pc 紫外-可见分光光度计结构简介紫外-可见分光光度计一般包括光源,单色器,样品室,检测器,显示装置。
光源:氘灯,为紫外光谱区提供稳定的光源,发射185～400 nm的连续光谱。
钨灯, 为可见光谱区提供稳定的光源, 辐射波长范围在320～2500 nm。
本仪器的换灯波长通常设置为359.90nm,一般情况下,尽量不要在包含此波长的范围内进行扫描。
单色器:采用光栅将复合光分解成单色光,狭缝的固定宽度为2nm。
样品池:在紫外光区需采用石英池,而在可见光区需采用玻璃池。
检测器:利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用光电倍增管。
显示记录系统:检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理。
2.3仪器使用的具体方法仪器的操作具体方法参见《TU-1810PC型紫外可见分光光度计操作规程》3实验仪器与试剂3.1 仪器、试剂和样品试剂：氢氧化钠溶液（0.1mol/L）、甲醇、乙醇、试剂空白溶液、芦丁标准溶液、柠檬酸溶液（200g/L）、5％NAN02、l0％ A1(N03)3溶液仪器与设备：紫外分光光度计；酸度计：精度0.1pH 单位；恒温水浴：温控±1℃；具塞试管与试管架；分析天平：感量0.1mg；天平：感量10mg。
总黄酮含量的测定原理
总黄酮含量的测定原理
总黄酮含量的测定原理是通过化学分析方法，利用黄酮类物质与特定试剂发生化学反应产生显色或荧光物质，并据此测定总黄酮含量的多少。
常用的测定方法包括铝盐显色法、氧化还原法和高效液相色谱法。
其中，铝盐显色法是最常用的一种方法。
铝盐显色法基于黄酮类物质与铝离子（如铝酸盐）形成的稳定络合物可以表现出明显的颜色。
具体操作时，首先将样品提取物与铝试剂混合，在适当的条件下（如合适的温度、酸碱度等），黄酮类物质与铝离子发生络合反应，生成显色物质。
然后，使用分光光度计等仪器测定样品的吸光度或荧光强度，通过与标准曲线比对，计算出样品中总黄酮含量的浓度。
铝盐显色法测定总黄酮含量的原理基于黄酮类物质的结构特点，常规黄酮类物质中含有酚羟基（-OH）和芳香环。
铝离子与酚
羟基结合形成络合物，可以通过吸收特定波长的光线而显色。
反应的稳定性取决于黄酮对铝离子的亲合性，不同黄酮类物质的亲合性不同，因此测定不同种类黄酮的总含量时，可能需要根据不同物质的特性进行修正。
总之，总黄酮含量的测定原理是基于黄酮类物质与铝离子的化学反应，并据此测定样品中总黄酮含量的浓度。
不同的测定方法略有差异，但原理基本相同。
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实验九食品中总黄酮的测定
（－）目的意义
黄酮类化合物（flavonoids）是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。
其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。
通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。
（二）高效液相色谱法
1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂
（1）高效液相色谱仪
（2）紫外检测器
（3）层析柱
（4）超声波清洗仪
（5）索氏提取器
（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）
（7）甲醇（色谱纯）
（8）芦丁标准品
（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水
（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液。
3. 操作步骤
（1）样品处理
1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件
色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;
流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；
流速：lml／min；
柱温：40℃；
检测波长：360nm；
灵敏度：0.02AUFS；
进样量：20ul。
（3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10ul，注入高液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样品中总黄酮的含量。
4．结果计算
（三）分光光度法
1．原理黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。
黄酮类化合物的3—羟基、4—羟基或5—羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。
本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光光度法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。
2．仪器和试剂
（1）722分光光度计
（2）索氏提取器
（3）真空泵，盐基交换管等。
（4）恒温水浴，分液漏斗。
（5）芦丁标准品
（6）亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠（分析纯）。
（7）氯仿，无水乙醇，甲醇（分析纯）。
（8）5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml。
（9）聚酰胺树脂
（10）去离子水
（11）同前
3．操作步骤
（1）样品处理
1）固体样品：称取1～2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器中，加入50～100ml 70％乙醇溶液浸润后，在80℃水浴下回流3h，至提取液无色为止。
粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。
在50℃下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。
倒出容器内溶液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下层水溶液并定容至50ml。
称取1～2g经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱，用水饱和。
吸取上述脱脂后的水溶液1～2ml，沿层析柱漫漫滴人柱内，放置一定时间，待测液被充分吸附后，用70％乙醇或甲醇洗脱，流速为1.0ml／min，至流出液基本无色，一般收集10ml即可。
上述洗出液用洗脱剂定容后即可用于测定。
2）液体样品：准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，其余步骤同上。
（2）标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、
⒋00ml（相当于芦丁0、75、150、300、450、600ug），移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，振摇后放置5min，加入10％硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置6min，加1.0mol／L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度。
摇匀，放置15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量（ug）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关系数（r）。
（3）样品测定：根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。
4.结果计算根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含量，按下式求出总黄酮含量：
（四）说明
1．HPLC法与分光光度法比较，HPLC法相对干扰少，重现性好，测定结果更为准确可靠；但其操作较为烦琐，费用较高。
分光光度法操作简便、快速、易行，所需费用不高；但易受杂质干扰，稳定性稍差。
2．样品水解后随着放置时间的延长，总黄酮的含量可能会发生变化，因此样品水解后应尽快测定。
3. 随着显色时间的延长，吸光度将略有下降，因此应尽快进行测定。