免疫抑制法测定CK-MB活性假性增高的原因分析

免疫抑制法测定CK-MB活性假性增高的原因分析
发表时间：2016-04-15T14:25:50.793Z 来源：《航空军医》2015年18期作者：张凤华
[导读] 江苏射阳县人民医院通过对CK-MB异常升高的病例进行分析，探讨用免疫抑制法检测CK-MB活性假性升高的原因及实验对策。

江苏射阳县人民医院江苏盐城 224300
【摘要】的：通过对CK-MB异常升高的病例进行分析，探讨用免疫抑制法检测CK-MB活性假性升高的原因及实验对策。

方法：对本院2014年1月～12月临床上遇到的48例CK-MB异常升高的病例进行回顾性分析，探讨用免疫抑制法检测CK-MB活性假性升高的原因。

结果：48例非心肌梗死的病例中，出现CK-MB/CK﹥30%的有24例，出现CK-MB大于CK即比例倒置的有24例。

结论：CK-MB异常升高出现最多的是在肿瘤患者当中，其次是儿科患者，提示在一些恶性肿瘤，婴幼儿患者体内可能存在异常干扰成分。

【关键词】肌酸激酶；活性假性增高；原因分析及临床意义
[Abstract]Objective：To analyze the abnormal elevation of CK-MB cases，investigate immunosuppressive activity of CK-MB assay falsely elevated causes and countermeasures experiment.Methods：The hospital in January 2014 ~ 48 cases of abnormal elevation of CK-MB in patients experiencing clinically December were retrospectively analyzed to explore falsely elevated CK-MB activity detected by reason immunosuppression.Results：48 cases of non-myocardial infarction patients，the emergence of CK-MB / CK> 30% of the 24 cases，the emergence of CK-MB is greater than the proportion of inversion of CK namely 24 cases.Conclusion：CK-MB is the most frequent abnormal increase in cancer among patients，followed by pediatric patients，suggesting that in some malignant tumors，may interfere with abnormal body composition of infant patients.
[Key words]creatine kinase；false increase activity；Cause Analysis and Clinical Significance
正常人CK-MB主要存在于心肌细胞内，血清中CK的存在形式主要是CK-MM，只有少量的CK-MB，不超过总CK的5%，AMI时最高也不超过30%。

在AMI时CK和CK-MB往往同时升高，CK的水平会显著高于CK-MB。

但在日常的工作中我发现用免疫抑制法测定CK-MB有假性增高的现象，即少数临床标本CK的结果在正常范围内，而CK-MB却明显偏高甚至会出现CK-MB大于CK却无AMI的依据，与临床体征明显不符，因此给我们检验人员和临床医生造成一定的困扰，并且干扰了疾病的正确诊断和治疗。

从理论上来说，CK-MB的活性是不可能大于总CK活性的。

1 资料和方法
1.1 一般资料 CK-MB异常升高的患者48例，心电图和临床症状未显示有心肌梗死，其中13例为儿科患者，其余35例为成人患者。

1.2 仪器与试剂使用东芝TBA-120FR全自动生化分析仪，正常进行维护和保养，性能良好；CK和CK-MB试剂均由上海科华生物有限公司提供，各项参数设置准确，试剂均在保质期内。

1.3 方法 CK为速率法，CK-MB为免疫抑制法，严格按试剂盒说明书操作，采集的血1h内分离血清，室温避光放置，避免溶血，4h内完成测定。

2 结果
48例非心肌梗死的病例中，出现CK-MB/CK﹥30%的有24例，出现CK-MB大于CK即比例倒置的有24例，不同的疾病类型和具体例数见下表。

3 讨论
肌酸激酶（CK）广泛分布于体内需要大量能量供应的组织内，如心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要的能量调节酶。

CK是一种二聚体，由M和B两个亚基组成，并以此分为三个最基本的同工酶：肌肉型（CK-MM）、脑型（CK-BB）、杂化型（CK-MB）。

这三种同工酶分子量相同，催化相同的化学反应，但其分子结构和组织来源不同：CK-BB主要存在于脑组织、胃肠道、子宫平滑肌中，脑组织中几乎都是CK-BB；CK-MM存在于各种肌肉组织中，骨骼肌中（除外腓肠肌）98%-99%为CK-MM；而CM-MB来源于心肌，心肌中CK-MB约占CK总量的15%-25%。

在正常人体血清中主要是CK-MM和少量CK-MB，几乎不见CK-BB［1］。

CK-MB是临床应用最广泛的心肌损伤标志物，曾被认为是诊断急性心肌梗死（AMI）和心肌炎的金指标[2]。

在心肌坏死症状发作4-5小时达正常上限，12-24小时达高峰，72小时逐步恢复。

目前基层实验室多采用免疫抑制法测定CK-MB的活性，对不同病程的心肌病提供较特异性诊断。

由于CM-BB在正常人体血清中的含量极微，免疫抑制法的原理就是建立在CK-BB含量可以忽略不计的基础上，用抗CK-M单体的抗体抑制M亚基活性，CK-MM就全部失去活性，而CK-MB活性失去一半，这样测出的CK活性实际就是CK-MB的一半，所以CK-MB活性应该为测定的2倍。

用免疫抑制法检测CK-MB活性迅速、简便、省时，有较高的敏感性，但是影响因素和缺陷也很多。

从上述表中我们可以看出CK-MB异常升高出现最多的是在肿瘤患者当中，其次是儿科患者，提示在一些恶性肿瘤，婴幼儿患者体内可能存在异常干扰成分。

我科室由于实验条件有限，具体干扰成分的确认实验无法进行，现我将部分文献资料提示的干扰成分总结如下： 1．CK-BB的干扰：
免疫抑制法检测CK-MB活性的原理是把标本中的CK-BB忽略不计掉，从这个原理我们不难分析如果血清中存在多量CK-BB（如脑损
伤，脑组织中有大量的CK-BB释放入血），其CK-BB中的B亚基活性同CK-MB中的B亚基一起检测后乘以2，会导致测定的CK-MB活性大于
CK活性[3]。

有研究发现CK-BB是CK中唯一随年龄变化的CK亚型，且在一周岁以内的婴幼儿中水平最高。

对于儿童来说，其B亚基在总CK 中的活性较成人高，因此采用免疫抑制法测定儿童CK-MB的绝对活性在总CK中的比例高于成人，甚至可能出现倒置现象。

2.巨CK的干扰：
巨CK是巨分子酶，比正常情况下相应的酶有着高分子团。

有文献报道在体质较差的人群、妇女及老人体内存在着巨CK1，巨CK1是一种CK同工酶与其自身抗体的复合物。

而在一些恶性肿瘤、肝硬变患者体内中可能存在巨CK2，巨CK2是线粒体CK相互聚集合成的大分子寡聚体复合物。

由于巨CK1和巨CK2中M亚基的活性均不受抗CK-M单体的抗体抑制，因此测得的CK-MB结果都会假性增高，甚至高于CK。

3.溶血的干扰：
测定CK-MB活力尽量不用溶血标本。

标本溶血可导致红细胞释放腺苷酸激醇（AK）催化ADP反应生成ATP，引起NADPH吸光度的改变，导致CK与CKMB结果假性偏高。

CK-MB的结果是CK-B乘以2，假性偏高较CK更明显，同时CK-MB参考范围较小，可能出现CK-MB大于CK，CK结果在正常范围内，而CK-MB结果却明显偏高。

4．其他
部分O型或B型血肿瘤患者的免疫系统出现混乱，肿瘤刺激产生的免疫球蛋白会作为底物或辅酶参与免疫抑制法CK-MB试剂反应，从而也会引起CK-MB检测值大于CK[4]。

用免疫抑制法检测血清CK-MB活性，观察其活力单位及与CK的比值关系作为诊断AMI的相对特异性指标、预测冠状动脉再通的治疗效果和观察病情变化等，已被临床广泛应用。

CK-MB作为心肌梗死标志物有很多优点，能快速、有效、经济、准确地诊断AMI。

由于CK-MB 具有上述优点，所以对CK-MB测定方法的研究更是不断发展，经历了从早期的离子交换色谱和电泳法，到后来的免疫抑制法，至新一代的方法用单克隆抗体测量CK-MB的质量[5]。

由于免疫抑制法检测CK-MB具有迅速、简便的特点，可上全自动生化仪操作而被广大医院采用。

在绝大多数的情况下使用该法测定的CK-MB的结果是正确的，但该法易受CK-BB及巨CK成分的干扰而影响测定结果，使CK-MB假性增高，易误导临床诊断，有条件的实验室应做进一步的确诊检查试验。

进一步的鉴定方法有：
①琼脂糖凝胶电泳分析。

将可疑血清进行琼脂糖凝胶电泳结合荧光染色扫描分析，正常CK电泳图谱主要是两条区带，从阳极到阴极分别是CK-MB、CK-MM，CK-BB位于阳极侧近白蛋白区域，巨CK1位于CK-MM与CK-MB之间，巨CK2位于CK-MM的阴极侧。

②热失活法。

将可疑血清置于45℃20min测定CK活性，发现CK-BB和CK-MB几乎完全失活，而CK不受影响。

③免疫学结合电泳法。

将可疑血清先与抗人IgG或IgA的抗血清进行混合，置4℃过夜，离心取上清液进行CK同工酶电泳，观察与Ig反应前后电泳区带的变化。

巨CK2无任何变化，但巨CK1则不同。

只要与相应的抗IgG或IgA抗血清发生反应后，原有的异常带减弱或消失，则提示有巨CK1的存在，其形成与该免疫球蛋白有关。

④免疫学测定。

用FEIA或CLIA等技术直接测定CK-MB质量，观察有无非CK-MB存在。

目前建议在AMI的诊断中用肌钙蛋白如cTnI/cTnT，如用CK-MB则建议测定CK-MB质量，而不要用免疫抑制法进行测定。

因此，我认为在实际工作中若发现用免疫抑制法检测CK-MB活性假性增高时，切不可盲目的发出报告，不能认为结果无意义而私自将结果改为CK高于CK-MB，我们应慎重考虑并如实报告临床，及时与临床医师取得联系，有条件的话检测CK-MB的质量或电泳分析CK同工酶的不同组分含量，也可计算CK-MB/CK比值，CK-MB/ CK比值不在5%-30%范围以内，则可能是AMI以外的原因引起的偏高。

如小于5%，多考虑骨骼肌损伤；如大于30%则要警惕有无CK-BB或巨CK的存在，因此我们要综合分析，尽所能地为临床医生提供正确的检验结果。

参考文献：
[1]徐国宾，黄燕，王蕴峰。

CK及同工酶CK-MB测定的方法学进展和临床应用［J］.中华医学检验杂志，2008，31（12）：1418-1421.
[2]中华医学会儿科学分会心血管组.病毒性心肌炎诊断标准［J］.中华儿科杂志，2000，38（2）：75.
[3]免疫抑制法检测肌酸激酶同工酶活性高于肌酸激酶的临床价值分析［J］.检验医学与临床，2011，8（14）：1687-1688
[4]血清肌酸激酶同工酶假性增高8例分析［J］.临床荟萃，2009，24（10）：901-902
[5]府伟灵徐克前.临床生物化学检验［M］，第5版，北京：人民卫生出版社，2012：218-219.。