紫外可见分光光度法

远红外
10nm~200nm 200nm 380nm 780 nm 2.5 m
50 m
~380nm ~ 780nm ~ 2.5 m ~ 50 m ~300 m
2、光的种类 （1）单色光和复合光 （2）可见光和互补光
对顶即互补
互补光：如果把适当颜色的两种光按一定强度比例 混合，可合成白色光，这两种颜色的光称为互补光。
紫外可见分光光度计基本组成
钨灯卤素 灯或氘灯
棱镜或光 栅，玻璃 或石英
玻璃或 石英比 色皿
光电池 或光电 管
对数转 换或不 转换
模拟或数 字，微机 处理与否
光源 单色器 比 检测器 放大器 显示 色 皿
稳压电源
二、紫外可见分光光度计类型 按波长范围划分： ➢ 可见分光光度计（400-780nm） ➢ 紫外可见分光光度计(200-780nm)
第二章 紫外可见分光光度法
主要内容
1 紫外可见分光光度法概述 2 紫外可见分光光度计的基本操作 3 紫外可见分光光度法的定性依据 4 紫外可见分光光度法的定量依据 5 紫外可见分光光度法的条件选择
第一节 紫外可见分光光度法概述 一、光的认识 1、光的基本性质
远紫外 近紫外 可见 近红外 中红外
（真空紫外）
2、要求：在仪器操作所需的光谱区域内能够连续 辐射，有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的 使用寿命。
远紫外 近紫外 可见 近红外 中红外
（真空紫外）
远红外
10nm~200nm 200nm 380nm 780 nm 2.5 m
50 m
wk.baidu.com
~380nm ~ 780nm ~ 2.5 m ~ 50 m ~300 m
适用范围 可见光区，不适于紫外光区。
紫外、可见光区
λ1 λ1
白光 入射狭缝 准直透镜
棱镜
λ2
λ2
聚焦透镜 出射狭缝
转为平行光
单色器主要由狭缝、准直镜、色散元件（棱镜） 和透镜系统组成。其中色散元件是单色器的核心部 分，起分光作用； 狭缝和透镜系统用于控制光的方 向。
光栅单色器
➢光栅：在玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、 1200、2400条/mm )。刻痕为不透光部分，两刻痕之间的 光滑部分可以透光，相当于一狭缝。
3、分类： （1）可见光光源：
①钨丝灯：是最常见的可见光光源，它可发射波长 为325-2500nm范围的连续光谱，其中最适宜的使 用范围是320-1000nm，除用作可见光源外，还可 用作近红外光源。
②卤钨灯
在钨丝中加入适量的卤化物或卤素，灯泡用石 英制成，具有较长的寿命和高的发光效率。
（2） 紫外光光源： 多为气体放电光源，其中应用最多的是氢灯和
定性分析： 1、与标准品或标准图谱对比，鉴定未知物； 2、鉴别异构体 如：顺反异构、互变异构（如酮-烯醇式） 3、纯度检查
定量分析： 1、单一组分测定 2、多组分同时测定
第二节 紫外可见分光光度计
一、紫外可见分光光度计的构造
光源
单色器 吸收池
检测 系统
信号显 示系统
（一）光源
1、作用：提供符合要求的入射光。
波长和颜色的关系
λ（nm） 400-450 450-480 480-490 490-500 500-560 560-580 580-610 610-650 650-760
颜色 紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 橙 红
互补光 黄绿 黄 橙 红 红紫 紫 蓝 绿蓝 蓝绿
二、物质对光的选择性吸收
1、物质对光的吸收的本质
溶液对光的吸收：
入射光 I0
透射光 It
4、注意：
（1）手执吸收池两侧的毛面； （2）盛放液体高度不能超过比色皿高度的3/4。 （3）使用配套吸收池。
（四）检测系统 1、作用：用于检测光信号，并将光信号转变为电信号 2、种类：光电池、光电管、光电倍增管等。
光电池
光电管
光电倍增管
（五）信号显示系统 1、作用：显示并记录信号。 2、显示形式：指针显示、数字显示。
722型可见分光光度计
752型紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度法的特点
灵敏度较高：10-6g级； 准确度高，相对误差为1-3%。特别适合于测定低含量 组分和微量组分，而不适合于中、高含量组分的测定。 分析速度快，操作简便； 价格低廉，应用广泛：医药、食品、化工、环境……
紫外可见分光光度法的应用
氘灯，其使用波长范围为185-375nm。
（二）单色器 单色器：将来自光源的复合光分解成单色光的光 学装置。
单色光：具有同一波长的光称为单色光。（红、蓝、 黄等）
复合光：含有多种波长的光称为复合光。（白光）
单色器分类 棱镜单色器
利用不同波长的 光在棱镜内折射率不 同将复合光色散为单 色光。
棱镜 玻璃 石英
入射光 I0
透射光 It
完全吸收
光谱示意 复合光 表观现象示意
完全透过 吸收黄色光
三、分光光度法的概念
根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同 而对物质进行定性和定量分析的方法称为分光光 度法。
按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光 度法、可见分光光度法和红外分光光度法。其中， 紫外分光光度法、可见分光光度法合称紫外可见 分光光度法。
当白光照射物质时，物质分子吸收某些波长 的光的能量，使得物质分子从基态E跃迁到激发态 E’，所吸收的光的能量就等于激发态与基态的能 量之差：△E= E’－E 。物质就会吸收光。
物质结构不同，物质会选择性地吸收某一波长 的光的能量，而导致不同的物质具有不同的颜色。
2、物质呈现颜色的原因
当白光照射到物质上时，物质选择吸收白光中 某一波长的光，物质呈现出吸收光颜色的互补色。
按光路划分： ➢ 单光束分光光度计 ➢ 双光束分光光度计 ➢ 双波长分光光度计
三、紫外可见分光光度计的操作步骤 分光光度计操作流程图
开机预热
选择λ
遮挡光路， 调T=0%
参比液对准 光路，调
T=100%
测试样 A=？
实验完毕 清洁整理
清洗 比色皿
装液
第三节 紫外可见分光光度法定性分析 一、吸光度和透光率
➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面 凹面光栅）
（三）吸收池（又称比色皿）
1、作用：盛装被测溶液和参比溶液。 2、分类： （1）玻璃比色皿：适用于可见光区。（能否用于紫 外光区？） （2）石英比色皿：适用于紫外及可见光区。
3、主要规格： 0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm等。