流感嗜血杆菌

嗜血杆菌（学名Haemophilus influenzae）是流感嗜血杆菌的简称，前称费佛氏杆菌（或译拜菲尔氏菌）或流感杆菌，属孤菌科嗜血杆菌属。

是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。

嗜血杆菌是1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现。

嗜血杆菌一般都是好氧生物，但可以成长为兼性厌氧生物。

流感嗜血杆菌最初被误认为是流行性感冒的病因，但直至1933年，当发现流行性感冒的病毒性病原后，才消除了这种误解。

不过，流感嗜血杆菌仍是会导致其他不同种类的病症。

因其稀少的基因体，流感嗜血杆菌是第一种排列全数基因体，而又能自由生存的生物。

它的基因体包含了1,830,140的DNA碱基对及1740个基因。

流感嗜血杆菌的基因排序计划由基因组研究所策划，于1995年完成及刊登于《科学》杂志上。

流感嗜血杆菌生长所需的V因子为NADH，X因子为血红素，凝血因子V和X均为肝脏产生的球蛋白。

流感嗜血杆菌需要Х、Ⅴ两种因子，Ⅹ因子是高铁血红素，Ⅴ因子是辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ，两者为细菌呼吸所必需.比较常见的需要V因子和X因子的细菌是嗜血杆菌属的细菌，如流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌（软下疳的病原体)、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、嗜泡沫嗜血杆菌、副嗜泡沫嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌等.我们一直在用英国Oxoid公司的V因子、X因子、V+X因子纸片，还有Optochin纸片，质量很好的。

Chocolate II Agar 第二巧克力琼脂生长因子(growthfactor)是一类对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物。

它的需要量一般很少。

广义的生长因子除了维生素外，还包括碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类、C4～C6的分枝或直链脂肪酸，以及需要量较大的氨基酸；而狭义的生长因子一般仅指维生素。

生长因子虽是一种重要的营养要素，但它与碳源、氮源和能源不同，并非任何一种微生物都须从外界吸收的。

各种微生物与生长因子的关系可分以下几类：(1)生长因子自养型微生物(auxoautotrophs)多数真菌、放线菌和不少细菌，如E．coli(大肠杆菌)等都是不需要外界提供生长因子的生长因子自养型微生物。

(2)生长因子异养型微生物(auxoheterotrophs) 它们需要多种生长因子，如乳酸细菌、各种动物致病菌、原生动物和支原体等(表5-5)。

例如，一般的乳酸菌都需要多种维生素；许多微生物及其营养缺陷型(突变株)都需要不同的嘌呤、嘧啶碱基；Haemophilusinfluenzae(流感嗜血杆菌)需要卟啉及其衍生物作为其生长因子；支原体常需要甾醇；Haemophilusparahaemolyti-cus(副溶血嗜血菌)需要胺类；一些瘤胃微生物需要C4～C6分枝或直链脂肪酸；某些厌氧菌如Bacteroidesmelaninogenicus(产黑素拟杆菌)需要维生素K和氯高铁血红素，等等。

生长因子异养型的微生物可用作维生素等生长因子生物测定时的试验菌。

(3)生长因子过量合成微生物有些微生物在其代谢活动中，会分泌出大量的维生素等生长因子，因此，它们可以作为维生素等的生产菌。

最突出的例子是生产维生素B2的Eremothe-ciumashbya(阿舒假囊酵母，其B2产量可达2.5g/L发酵液)和Ashbyagossypii(棉阿舒囊霉)；生产维生素B12的Propionibacteriumshermanii(谢氏丙酸杆菌)、一些链霉菌(如Streptomycesolivaceus[橄榄色链霉菌，3.3mg/L]，S．griseus[灰色链霉菌，0.3mg/L])和产甲烷菌等。

在配制微生物培养基时，如果配制的是天然培养基(详后)，则可加入富含生长因子的原料——酵母膏(yeastextract)、玉米浆(cornsteepliquor)、肝浸液(liverinfusion)、麦芽汁(maltextract)或其他新鲜的动植物组织浸液(表5-6，5-7)；如果配制的是组合培养基，则可加入复合维生素溶液The stored isolates were grown overnight on chocolate agar plates (BD Diagnostics, Sparks,MD) at37 C with 5%CO2 in a humid environment.H.influenzae isolates, maintained with Minimal passaging, were stored in skim milk at 80°C and were cultured for testing on chocolate II agar (BD Diagnostics) at 37°C in the presence of 5% CO2.卫星现象:当流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，能促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离金黄色葡萄球菌菌落较远的流感嗜血杆菌菌落越小，此为“卫星现象”。

X因子、V因子生长试验：在以酵母浸出粉、牛肉浸出粉、酪蛋白水解物为基础培养基上，未加X因子和V因子时，流感嗜血杆菌不生长，将分别浸有X因子V因子的纸片贴于该基础培养基上，单贴有X因子或单贴有V因子纸片的平碟流感嗜血杆菌不生长，同时贴有X 因子和V因子纸片的平碟，流感嗜血杆菌可生长，在两纸片中线附近菌落较大。

此两项试验均为证实培养基中需含有X、V因子，流感嗜血杆菌才能生长，本质上没有区别。

卫星现象（satellite phenomenon）概念：当将金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌在同一血琼脂平板上共同培养时，由于前者能合成较多的V因子，促进后者生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离越远的菌落越小，此现象称为“卫星现象”（satellite phenomenon）方法：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上和M-H平板上，再将金黄色葡萄球菌点种或划种于其上，35℃孵育24 h结果：如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即卫星试验阳性注意点：在血平板上点种葡萄球菌时，X、V因子都具备；在M-H平板上接种葡萄球菌时，只具备V因子；流感嗜血杆菌生长需要X和V因子；副流感嗜血杆菌生长只需要V因子；意义：能在M-H平板上呈卫星生长的菌为副流感嗜血杆菌不能在M-H平板上呈卫星生长的菌为流感嗜血杆菌苛养菌是一大类对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长。

体外培养需需添加特殊因子或其他营养成分。

常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。

2 主要苛养菌介绍嗜血杆菌属（1）分类与人类密切相关的嗜血杆菌有8种，比较常见的是流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。

（2）细菌特性嗜血杆菌培养时必须供给X、V因子，新鲜血液含X、V因子，但V因子处于抑制状态，必须将其加热80℃～90℃才能释放出来，故巧克力琼脂适合于嗜血杆菌生长。

不同的嗜血杆菌对X、V因子需求有所不同。

将流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌共同培养后，后者合成较多V因子，可促进流感嗜血杆菌生长，靠近金黄色葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较大，反之，菌落较小，称之为卫星现象。

（3）临床意义嗜血杆菌常寄居于正常人上呼吸道，可引起上呼吸道、泌尿生殖道感染、脑膜炎、中耳炎、心内膜炎、菌血症。

流感嗜血杆菌主要引起原发性化脓感染和继发性感染，其荚膜b型株毒力最强。

杜克雷嗜血杆菌为软下疳病原菌。

（4）微生物检验采集脑脊液、血液、脓液、痰液、咽拭子等标本进行检查，因苛养菌不易存活，标本宜保持湿润，及时送检血平板（1）成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），脱纤维羊血（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。

冷却至50℃，加入一定量（5%）的羊血，倾注平板。

（3）用途：适于各类细菌的生长。

巧克力平板（1）成份：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），氯化血红素，万古霉素，辅酶A（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。

冷却至60℃左右加入一定量的羊血，置85℃水浴中摇动10-15分钟，冷却到50℃左右后加入相应量的万古霉素和辅酶A，摇匀后倾注平板。

（3）用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，而非楼主所说的可用血平板来替代。

血液中有V，X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。

一般来说，临床上分离细菌用血平板可满足大多数细菌的营养要求，因此一般首选血平板分离培养临床标本，但是由于需要X因子和V因子的流感嗜血杆菌在血平板上不能生长。

因此要分离到流感嗜血杆菌或其他嗜血杆菌，必须接种巧克力平板。

这也就是说，在巧克力平板上生长的细菌比血平板要多，因此巧克力平板当然可以替代血平板作为分离培养用，其营养价值比血平板要高些。

有谁遇到过在血平板上卫星试验阴性，而在琼脂平板上卫星试验阳性？bjyy老师：这个有可能！嗜血杆菌须在含有新鲜血液（因其含有X因子和V因子）的培养基（血平板，实际上主要是巧克力平板）才能生长，在普通琼脂平板中是不能生长的（除非加入上述两因子）。

在血平板和普通琼脂平板（已加入X因子和V因子）上进行卫星试验出现两种不同的结果，我想：血平板所产生的V因子需要经金黄色葡萄球菌的合成。

而普通琼脂平板中的V因子是现成的，不需要经金黄色葡萄球菌合成的这一个步骤，违背了卫星试验的原理。

所以在琼脂平板上进行的实际上并不是卫星试验。

在普通琼脂平板上（已加入X因子和V因子），为了生长发育，两种细菌展开了竞争培养基营养的过程，在金黄色葡萄球菌菌落附近，由于金黄色葡萄球菌势力强大，竞争力强，所以嗜血杆菌生长受到抑制，菌落细小，越远离金黄色葡萄球菌菌落其菌落（嗜血杆菌）越大。

形成了假的卫星试验现象．请指教．谢谢！普通巧克力平板与血平板的区别是：巧克力平板配制时在加入血液后再次加温至80度15分钟，血红素及辅酶释放出来，RBC 破裂，此平板适合一些需特殊生长因子细菌生长；但在此过程中同样破坏血液中的某些成分，也许会影响某些细菌的生长，所以应该有在血平板生长良好的，而在巧克力平板生长不好的细菌；现在一些专用淋球菌平板，加入万古、多粘菌素等抗生素，抑制了大量杂菌生长，此平板与血平板相差远矣！1892 年，费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现了流感嗜血菌，这种微生物是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。