流感嗜血杆菌

嗜血杆菌（学名Haemophilus influenzae）是流感嗜血杆菌的简称，前称费佛氏杆菌（或译拜菲尔氏菌）或流感杆菌，属孤菌科嗜血杆菌属。是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。

嗜血杆菌是1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现。嗜血杆菌一般都是好氧生物，但可以成长为兼性厌氧生物。流感嗜血杆菌最初被误认为是流行性感冒的病因，但直至1933年，当发现流行性感冒的病毒性病原后，才消除了这种误解。不过，流感嗜血杆菌仍是会导致其他不同种类的病症。

因其稀少的基因体，流感嗜血杆菌是第一种排列全数基因体，而又能自由生存的生物。它的基因体包含了1,830,140的DNA碱基对及1740个基因。流感嗜血杆菌的基因排序计划由基因组研究所策划，于1995年完成及刊登于《科学》杂志上。

流感嗜血杆菌生长所需的V因子为NADH，X因子为血红素，凝血因子V和X均为肝脏产生的球蛋白。流感嗜血杆菌需要Х、Ⅴ两种因子，Ⅹ因子是高铁血红素，Ⅴ因子是辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ，两者为细菌呼吸所必需.比较常见的需要V因子和X因子的细菌是嗜血杆菌属的细菌，如流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌（软下疳的病原体)、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、嗜泡沫嗜血杆菌、副嗜泡沫嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌等.

我们一直在用英国Oxoid公司的V因子、X因子、V+X因子纸片，还有Optochin纸片，质量很好的。Chocolate II Agar 第二巧克力琼脂

生长因子(growthfactor)是一类对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物。它的需要量一般很少。广义的生长因子除了维生素外，还包括碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类、C4～C6的分枝或直链脂肪酸，以及需要量较大的氨基酸；而狭义的生长因子一般仅指维生素。

生长因子虽是一种重要的营养要素，但它与碳源、氮源和能源不同，并非任何一种微生物都须从外界吸收的。各种微生物与生长因子的关系可分以下几类：

(1)生长因子自养型微生物(auxoautotrophs)多数真菌、放线菌和不少细菌，如E．coli(大肠杆菌)等都是不需要外界提供生长因子的生长因子自养型微生物。

(2)生长因子异养型微生物(auxoheterotrophs) 它们需要多种生长因子，如乳酸细菌、各种动物致病菌、原生动物和支原体等(表5-5)。例如，一般的乳酸菌都需要多种维生素；许多微生物及其营养缺陷型(突变株)都需要不同的嘌呤、嘧啶碱基；Haemophilusinfluenzae(流感嗜血杆菌)需要卟啉及其衍生物作为其生长因子；支原体常需要甾醇；Haemophilusparahaemolyti-cus(副溶血嗜血菌)需要胺类；一些瘤胃微生

物需要C4～C6分枝或直链脂肪酸；某些厌氧菌如Bacteroidesmelaninogenicus(产黑素拟杆菌)需要维生素K和氯高铁血红素，等等。

生长因子异养型的微生物可用作维生素等生长因子生物测定时的试验菌。

(3)生长因子过量合成微生物有些微生物在其代谢活动中，会分泌出大量的维生素等生长因子，因此，它们可以作为维生素等的生产菌。最突出的例子是生产维生素B2的Eremothe-ciumashbya(阿舒假囊酵母，其B2产量可达2.5g/L发酵液)和Ashbyagossypii(棉阿舒囊霉)；生产维生素B12的Propionibacteriumshermanii(谢氏丙酸杆菌)、一些链霉菌(如Streptomycesolivaceus[橄榄色链霉菌，3.3mg/L]，S．griseus[灰色链霉菌，0.3mg/L])和产甲烷菌等。

在配制微生物培养基时，如果配制的是天然培养基(详后)，则可加入富含生长因子的原料——酵母膏(yeastextract)、玉米浆(cornsteepliquor)、肝浸液(liverinfusion)、麦芽汁(maltextract)或其他新鲜的动植物组织浸液(表5-6，5-7)；如果配制的是组合培养基，则可加入复合维生素溶液

The stored isolates were grown overnight on chocolate agar plates (BD Diagnostics, Sparks,MD) at37 C with 5%CO2 in a humid environment.

H.influenzae isolates, maintained with Minimal passaging, were stored in skim milk at 80°C and were cultured for testing on chocolate II agar (BD Diagnostics) at 37°C in the presence of 5% CO2.

卫星现象:当流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，能促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离金黄色葡萄球菌菌落较远的流感嗜血杆菌菌落越小，此为“卫星现象”。

X因子、V因子生长试验：在以酵母浸出粉、牛肉浸出粉、酪蛋白水解物为基础培养基上，未加X因子和V因子时，流感嗜血杆菌不生长，将分别浸有X因子V因子的纸片贴于该基础培养基上，单贴有X因子或单贴有V因子纸片的平碟流感嗜血杆菌不生长，同时贴有X 因子和V因子纸片的平碟，流感嗜血杆菌可生长，在两纸片中线附近菌落较大。

此两项试验均为证实培养基中需含有X、V因子，流感嗜血杆菌才能生长，本质上没有区别。

卫星现象（satellite phenomenon）概念：当将金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌在同一血琼脂平板上共同培养时，由于前者能合成较

多的V因子，促进后者生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的

流感嗜血杆菌菌落较大，距离越远的菌落越小，此现象称为“卫星

现象”（satellite phenomenon）

方法：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上和M-H平板上，再将金黄

色葡萄球菌点种或划种于其上，35℃孵育24 h

结果：如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌落

邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即卫星试验阳性

注意点：在血平板上点种葡萄球菌时，X、V因子都具备；在M-H

平板上接种葡萄球菌时，只具备V因子；流感嗜血杆菌生长需要X

和V因子；副流感嗜血杆菌生长只需要V因子；

意义：能在M-H平板上呈卫星生长的菌为副流感嗜血杆菌不能在

M-H平板上呈卫星生长的菌为流感嗜血杆菌

苛养菌是一大类对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境

中不能或难以生长。体外培养需需添加特殊因子或其他营养成分。

常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、

脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。

2 主要苛养菌介绍

嗜血杆菌属

（1）分类

与人类密切相关的嗜血杆菌有8种，比较常见的是流感嗜血杆

菌和副流感嗜血杆菌。

（2）细菌特性

嗜血杆菌培养时必须供给X、V因子，新鲜血液含X、V因子，但V因子处于抑制状态，必须将其加热80℃～90℃才能释放出来，故巧克力琼脂适合于嗜血杆菌生长。不同的嗜血杆菌对X、V因子

需求有所不同。