第五章-植物组织培养技术实验方案
植物组织培养试验
植物组织培养试验《植物组织培养技术》实验指导实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌一、目的要求：1.通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2.通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、材料用具：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。
三、说明：在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的,总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染,第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒,使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。
四、方法和步骤：首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。
此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。
每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净一泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷f清水反复冲洗f蒸馏水淋一遍f烘干备用。
然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净f晾干一侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定f清水反复冲洗干净f蒸馏水淋洗一遍f烘干备用。
带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时,再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
植物组织培养实验计划
植物组织培养实验计划实验目的：植物的组织培养实验原理：细胞的全能性实验用品：乙醇、吲哚乙酸（或萘乙酸（NAA）、氯化汞（升汞）或次氯酸钠、苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、溶液、0.1 mol/L HCl或80、洗衣粉、石炭酸、无菌水实验器材：烧杯、电子秤、玻璃棒、药匙、胶头滴管、量筒、容量瓶、移液管、水浴锅、无菌操作台、100mL 锥形瓶、封口膜、棉线、牛皮纸、恒温箱、培养室、喷壶、枪型镊子、酒精灯、软刷、橡胶手套、口罩、剪刀、解剖刀、高压灭菌锅、手表、培养皿、无菌吸水纸、采集袋、消毒毛巾实验过程：1、采集植物材料（要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。
因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。
）除去不用的部分，将生长旺盛的部分仔细洗干净，用适当的刷子刷洗。
把材料切割成适当大小（即灭菌容器能放人为宜）。
流水冲洗20分钟左右，冲洗时间视材料清洁程度而宜。
易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
（流水冲洗在污染严重时特别有用。
洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。
最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温）。
过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。
PS：组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化。
3、分装培养基。
将配置好的培养基溶液煮开，调节pH至5.5-5.8，趁热分装于锥形瓶中，每个锥形瓶装入50mL4、准备消毒。
用封口膜和棉线封好锥形瓶，并用牛皮纸包好瓶口。
将其他需要消毒的用品处理好，一并放入高压灭菌锅消毒。
5、消毒。
在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
植物组织培养技术实验
《植物组织培养技术》课程实验实训教学大纲(2004级食用菌与蔬菜专业适用)生物工程与农业经济系濮阳职业技术学院2005年9月说明本大纲是根据2004级三年制食用菌与蔬菜专业教学计划而制订的。
一、课程性质和任务植物组织培养技术实验实训课程是食用菌与蔬菜专业专业的主要专业基础课程之一。
植物组织培养是在无菌条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞和原生质体进行培养的技术，是现代生物技术的核心技术之一。
在植物的优良品种快速繁殖，脱毒苗木生产、缩短育种进程、种质资源保存等方面具有其它技术无法比拟的优势。
植物组培实验实训课程的教学任务在于使学生掌握组织培养的基本操作技能和技巧，为进一步开展组培实训及从事组织培养工作奠定基础。
为适应高职高专教育改革的要求、突出高职高专教育的特点，适应本地农村产业结构调整的需要，本大纲以2003年的教学大纲为蓝本，在教学内容上进行了调整。
2、本课程教学的基本内容：本课程是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。
重点是植物的快速繁殖技术和组培苗工厂化生产技术。
并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。
3、内容安排与学时分配本大纲将教学内容分为实验教学、实训教学两个模块。
实验教学结合理论讲授，在第三学期开设，共22学时。
实训教学在第三、四学期开设，每学期为期一周。
具体教学内容和学时分配见下表：（一）、实验教学时数分配表（二）、实训教学安排4、考核办法根据学生的实验实训操作、实验报告记载情况及结果来衡量学生的成绩，占总成绩的30%。
5、执行本大纲时应注意的事项1)、注意对实验原理的讲解，真正使学生掌握实验的原理。
2)、实验过程要认真设计，精讲多练，注意关鍵技术环节的把握。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是指在无菌条件下，利用植物组织的分裂与增殖能力，通过培养基的营养供应和激素的调控，使植物组织在体外生长和繁殖的技术。
其目的是快速繁殖、改良和培育优良品种的植株。
以下是一种基于组织培养的设计方案。
一、实验目的本实验旨在通过植物组织培养技术，研究植物愈伤组织的诱导和增殖条件，以期实现快速繁殖和培育优良品种的目的。
二、实验材料和仪器1.实验材料：植物组织外植体（如茎段、叶片等）；MS培养基（含植物生长素和激素）；蔗糖、琼脂、无菌水等。
2.实验仪器：无菌工作台、培养箱、显微镜、天平、恒温水浴器等。
三、实验步骤1.无菌处理：将实验材料的外植体进行无菌处理，去除外界的微生物污染。
首先，在无菌条件下，进行消毒处理，常用消毒剂为70%酒精或过氧化氢；然后，对外植体进行表面消毒，常用浸泡过氧化氢或次氯酸钠溶液进行处理；最后，在无菌条件下，进行洗涤，用干燥的无菌棉纸吸干多余的溶液。
2. 骨干培养基配制：根据原料的组成，配制适宜的骨干培养基。
常用的骨干培养基是Murashige和Skoog培养基（简称MS培养基），其中含有必需的无机盐、有机物和其他辅助物质。
3.愈伤组织诱导：将外植体放置在含有适当激素的MS培养基中，以诱导植物组织的增殖。
一般而言，气体激素如生长素（IAA）、激动素（NAA）和细胞分裂素（BA）等，能够促进植物组织的分裂与增殖。
4.愈伤组织转接：将完成诱导的愈伤组织从MS培养基中转移到新的MS培养基上，以促进组织的进一步分裂和生长。
将愈伤组织转移到含有较高激素浓度的培养基中，能够提高组织增殖的速度。
5.愈伤组织分化：在转接的培养基上，通过调节培养基的激素浓度，将愈伤组织分化为不同的细胞和组织类型，如根、茎和叶等。
6.幼苗培养：将完成分化的组织培养在不含激素的MS培养基上，使其进一步生长和发育。
在培养的过程中，观察和记录植株的生长状况。
四、实验结果分析通过上述的植物组织培养的实验过程和步骤，可以获得大量繁殖的植株，从而达到快速繁殖和培育优良品种的目的。
第五章植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。
2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。
3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。
二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。
设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。
三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。
b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。
c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。
2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。
b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。
3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。
b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。
4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。
b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。
c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。
5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。
b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。
c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。
d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。
四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。
2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。
4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。
五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。
六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。
第五章 植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术一、植物组织培养中的基本概念(1) 植物组织培养技术:在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。
(2) 理论依据：植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。
(3) 外植体：从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。
一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。
(4) 分化：在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。
(5) 脱分化：已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。
(6) 愈伤组织：在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。
（具有细胞分裂能力）。
(7) 再分化：已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。
(8) 不定芽：在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。
所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。
与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。
(9) 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。
二、植物组织培养过程（菊花为例）1、培养基的配制:方法：培养基干粉配制法称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。
（其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml）用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。
植物组织培养技术实验指导
T植物细胞组织培养技术实验指导书中国计量学院生命科学学院二零零六年七月《植物细胞组织培养》实验指导目录实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制实验三、康乃馨的离体快繁实验四、胡萝卜愈伤组织的建立实验五、组织培养物的继代培养实验一组织培养基母液的配制一、仪器及药品冰箱、天平（0.0001g）容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水二、方法和步骤：按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml或50 ml。
微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。
逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1 L N6培养基需吸取该母液10 ml或者1 ml。
铁盐：在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）2.78 g 和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA）3.73 g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上，冷却后定容至1 L。
植物组织培养实验教案
实习二营养培养基配制一、培养基母液配制为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液，现以MS 培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母液的配制方法。
MS培养基母液配制（单位：毫克mg）注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物分别置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，混合定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中加热，不断搅拌，溶解后两液混合，调PH5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
6.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
7.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、养培养基配制程序(一)母液吸取量的计算配制培养基的升数公式1：母液吸取量= 母液体积×——————————母液浓缩倍数培养基要求的含量公式2：母液吸取量=———————————（各种生长调节剂）母液每CC的含量（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G.细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验教案实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验四动物细胞培养的培养基配制灭菌与仪器操作培训实验五鸡胚原代细胞的培养实验六动物细胞的传代培养实验七动物细胞的冻存与复苏实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是一种繁殖植物的方法，通过在无菌条件下培养植物的组织或细胞，可以获得大量的健康无病害的植株。
植物组织培养广泛应用于植物保护、育种、快速繁殖和基因转化等领域。
本文将重点介绍植物组织培养的设计方案。
1.实验材料准备：-植物种子或幼苗：选择优良品种的无病害种子或幼苗作为材料。
- 生长基质：常用的基质包括MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamely和Ribble培养基）等。
根据不同的植物种类和实验目的，选择适宜的培养基。
2.无菌操作：-实验室要保持高度的无菌操作环境，使用无菌操作台、无菌培养器等工具设备。
-使用无菌操作工具，如无菌钳、无菌刀片等进行操作。
-使用无菌材料：培养基、培养瓶、培养器等都要在高温高压下灭菌处理。
3.组织处理和培养：-种子处理：以浓度为0.1%的漂白水处理种子表面，去除外层的外壳，并在无菌条件下接种到培养基上。
-组织切割：从植株中选择新鲜、无病害的茎、叶、根等组织切取，注意避免外界微生物的污染。
-培养基配制：根据实验目的和植物种类，调整培养基的配方，添加适量的植物生长调节剂（如激素）。
-培养条件控制：控制培养瓶内温度、光照强度和光周期，以及湿度等因素，提供适宜的生长环境。
4.培养过程监测与处理：-观察细胞分裂和不定芽发生情况，根据需要进行不定芽分离和转移。
-监测培养器内的细菌和真菌污染，及时采取措施防止蔓延。
-过程中温度、光照等条件的调节，根据实验需要和细胞、组织的生长情况进行调整。
5.培养结束处理：-移除培养器中的植株，将其进行除菌处理，避免对环境产生影响。
-将培养基进行无菌处理，以免细菌或真菌残留造成二次污染。
-对根据实验结果分析，总结经验教训，为后续的实验提供参考。
总之，植物组织培养设计方案需要从材料选择、无菌操作、组织处理和培养、监测与处理以及培养结束处理等方面进行全面考虑。
只有在严格的无菌条件下进行操作，并根据实验需求和植物特性进行科学的调控和管理，才能获得高效的植物组织培养。
植物组织培养技术实验指导书
《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、 Ms成分19种（N6同）2、蔗糖3、琼脂4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等）电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶（棕色）、蒸馏水二、无菌室所需物品1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式镊子（16 cm,20cm）、尖镊（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴• 3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）(15mm*145mm试管)2、电炉3、烧杯（1000ml）移液管（ 10ml、5ml、2ml、1ml）、吸球4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸（5.4-7）6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸馏水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒四、消毒剂（处理外植体）升汞（氯化汞）、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第二个因素就是培养基。
应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。
另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。
一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器•高压灭菌锅、天平、电炉2 、玻璃器皿•烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂•Ms母液（见表1-1）氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2，4-D（1mg/ml）、NAA（1mg/ml）、蒸馏水三、实验方法（一）、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。
《植物组织培养技术的应用》 作业设计方案
《植物组织培养技术的应用》作业设计方案一、作业目标1、让学生深入了解植物组织培养技术的原理和操作流程。
2、培养学生的科学探究能力和实践操作能力。
3、引导学生关注植物组织培养技术在农业、园艺、医药等领域的应用，增强学生对生物科学的兴趣和社会责任感。
二、作业内容（一）知识巩固1、要求学生复习植物组织培养技术的相关概念，包括外植体、愈伤组织、脱分化、再分化等。
2、让学生总结植物组织培养技术的基本流程，包括材料选择、消毒处理、培养基制备、接种培养、移栽等环节，并绘制流程图。
（二）实验设计1、假设学生是一名植物组织培养实验室的工作人员，要求他们设计一个利用植物组织培养技术繁殖某种花卉的实验方案。
实验方案应包括实验目的、实验材料、实验步骤、预期结果等内容。
2、提供几种常见的植物材料（如马铃薯、草莓、菊花等），让学生选择其中一种，设计一个通过植物组织培养技术改良其品种的实验方案，重点关注如何诱导变异和筛选优良变异株。
（三）案例分析1、给学生提供一些植物组织培养技术在农业生产中的应用案例，如快速繁殖优良种苗、脱毒苗培育等。
要求学生分析这些案例中植物组织培养技术的优势和局限性，并提出改进的建议。
2、介绍植物组织培养技术在药用植物资源保护和开发中的应用案例，如红豆杉细胞培养生产紫杉醇。
让学生探讨植物组织培养技术在解决药用植物资源短缺问题方面的潜力和面临的挑战。
（四）拓展阅读1、推荐学生阅读一些关于植物组织培养技术最新研究进展的文献，如利用基因编辑技术改良植物组织培养体系、植物组织培养与生物反应器结合等。
要求学生撰写一篇读书报告，总结文献的主要内容和自己的心得体会。
2、引导学生关注植物组织培养技术相关的科普文章和新闻报道，如植物工厂中植物组织培养技术的应用、植物组织培养技术在太空农业中的探索等。
让学生选择一篇感兴趣的文章，写一篇评论，分析其科学性和社会意义。
三、作业形式1、书面作业（1）完成知识巩固部分的概念复习和流程图绘制，以书面形式提交。
植物组织培养方案设计
植物组织培养方案设计
植物组织培养是一种人工控制环境下培养植物细胞或组织的方法，用于繁殖植物、进行基因转化和生物技术研究等。
设计一个植物组织培养方案需要考虑以下几个方面：
1. 原料准备：选择优质的植物种子或组织样品作为培养材料，并进行消毒处理，以去除外来的微生物。
2. 培养基配方：设计适合植物生长和发育的培养基配方，包括基础培养基和添加物。
基础培养基主要包括植物营养物质（如无机盐和糖）、植物生长调节剂（如植物激素和维生素）和琼脂等。
添加物可以根据实验需要进行调整，例如抗生素、激素和诱导剂等。
3. 培养条件调控：根据植物种类和培养目的，设置适当的培养条件，包括光照、温度、湿度和pH值等。
光照可以使用植物
生长灯提供，温度和湿度需根据植物的适宜生长条件进行调控。
4. 培养过程管理：培养过程中需定期对培养基进行补充和调整，并观察培养物的生长情况。
如有需要，可以进行子培养和分化培养等操作。
5. 培养物处理：根据实验目的，对培养物进行不同处理，如增殖、分化、转染等。
处理过程需要注意操作无菌技术，以防止外部微生物的污染。
6. 培养物保存：培养成功后，可以选择将培养物进行保存。
保
存方式可以是继续培养，也可以是冷冻保存或冷藏保存。
总之，设计一个植物组织培养方案需要根据具体实验目的和植物种类进行合理的选择和操作，提供适宜的营养、环境和处理条件，以确保培养物的生长和发育。
同时，注意无菌操作和风险防范，确保实验的成功和安全进行。
培养基制备 — 植物组织培养实验方案
培养基制备 — 植物组织培养实验方案•从包装粉末制备•从基础盐溶液制备•香蕉粉的制备和使用•椰子水的制备和使用从包装粉末制备粉末极易吸湿，必须防止空气中的水分对其潮解。
单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。
不建议以浓缩形式制备培养基，否则一些盐复合物可能会沉淀。
添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。
制备培养基的基本步骤如下：1. 量出组织培养级纯水（产品编号：W3500）最终所需体积的90％左右，举例来说，如果最终体积为1000 mL，则量出900 mL。
选用两倍于最终体积大小的容器。
2. 在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。
某些情况下可能需要加热将粉末溶解。
3. 用少量组织培养级纯水冲洗原始容器，以去除痕量的粉末。
添加到步骤2的溶液中。
4. 加入所需的热稳定补剂（例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等）。
5. 添加额外的组织培养级纯水，使培养基达到最终体积。
6. 一边搅拌，一边添加NaOH、HCl或KOH，以将培养基调节至所需pH。
7. 如果加入胶凝试剂，则加热直至溶液澄清。
8. 根据需要，在高压灭菌之前（或之后）将培养基加样到培养皿中。
高压灭菌后加入热不稳定的组分。
9. 在经过验证的杀菌釜中，以1 kg/cm2（15 psi）、121°C对培养基进行灭菌，持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。
10. 待培养基冷却后使用。
粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。
不适用于医用、家用或其他用途。
未提供的材料•去离子组织培养级水（货号W3500）• 1 N盐酸(HCl)（货号H9892）• 1 N氢氧化钠(NaOH)（货号S2770）储存将干燥培养基储存于0-5°C的干燥器中。
粉末培养基变质可以通过以下方式识别：1）颜色变化；2）粉末中的颗粒化、结块或颗粒物；3）不溶性；4）pH变化；或5）正确使用时无法促进生长。
培养基中的沉淀植物组织培养基中随着时间推移会产生沉淀。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是一种通过从原植物体中取样并将其放入适当培养基中，以便在无菌条件下培养和繁殖植物的方法。
这种技术可用于繁殖和繁殖珍稀植物、繁殖病毒和病原体的植物、选择特定性状的植物、研究植物生理和生物学等方面。
植物组织培养分为外植体培养和内源性植株再生两个步骤。
外植体培养是从植物中取得外植体（例如种子、根、茎、叶等）并将其在培养基中进行培养，以促进发根和再生植株。
内源性植株再生是通过取得植物中的原始细胞并在无菌培养条件下培养和分化成植株。
下面是一个植物组织培养的设计方案：1.实验目标：-繁殖珍稀植物-研究植物生理和生物学-选择特定性状的植物2.实验材料：-外植体（种子、茎、叶等）-无菌工作台-清洁工具（灭菌剪刀、火柴、酒精等）-培养基（包括植物激素和营养物质）3.实验步骤：a.外植体处理：-选择适当的外植体并将其取下-用酒精擦拭工具以维持无菌条件-对外植体进行消毒，例如将外植体浸泡在消毒液中或在火焰中消毒-切割外植体并将其转移到培养基中b.培养基准备：-准备含有植物激素和营养物质的培养基-调整pH值并添加琼脂以固化培养基-使用高压灭菌器灭菌培养基c.培养基接种：-将外植体放置在无菌工作台上-使用灭菌工具将外植体放置在培养基上-盖上培养基容器并将其放入培养箱中d.培养条件：-确保培养箱的温度、湿度和光照条件适宜-定期观察外植体的生长情况并记录e.植株再生：-观察外植体开始发芽和生根-将发芽的植株转移至新的培养基容器进行进一步培养4.结果和分析：-观察不同外植体在培养基上的生长情况-分析不同培养基对植株再生的影响-记录植株的生长速度、株高和叶片数量等指标5.结论：-总结不同外植体和培养基条件下植株再生的效果-提出优化实验设计的建议-总结实验的应用前景和潜在问题以上是一个简单的植物组织培养设计方案，可以根据具体实验要求和植物种类进行适当调整。
在实际操作中需要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可重复性。
植物组织培养实验设计
植物组织培养一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法；2.了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（二）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（三）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验材料杉木的茎段四.实验器具高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室。
镊子、解剖刀、接种针、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿。
五.实验药品与试剂1．药品2．70% 酒精3．0.1% 升汞六.实验方法（一) 培养基的配制1.母液配制母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。
2.培养基的配制与分装3.培养基的灭菌( 二) 取材、消毒与接种杉木芽增殖①清洁超净工作台，打开风机和紫外灯，打开培养皿和培养物瓶，取出无菌苗于培养皿上，剪取杉木茎段约2cm左右接入新MS培养基，封口。
②全部接种工作都是在严格无菌条件下进行的, 所以要特别认真、仔细、以防杂菌污染。
(三) 培养与观察（1）接种完毕后取出培养瓶, 置26-28℃恒温培养室内,照光条件下培养,定期进行观察。
培养3-4周时进行观察。
（2）取出增殖培养的杉木无菌苗，最后计算增殖系数（增殖系数=增殖后的芽数/接种芽数）。
七、实验分析1. 观察植物组织培养的培养物在培养中的生长情况，5周后统计增殖系数。
植物组织培养实验
实验一植物组织培养实验室的构造和功能一、目的要求：掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。
三、方法步骤1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。
2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。
3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养室的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。
四.实验报告1.将本次实验内容整理成实验报告2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二 MS培养基母液的配制与保存一、目的要求通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
二、材料与用具配制MS培养基所需的药品（见附表）。
植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、标签、冰箱等。
三、方法与步骤1.母液的配制(将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制)2.植物生长调节物质母液的配制①称量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。
②溶解：生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。
③定溶：将溶解的植物生长调节物质倒入50ml容量瓶，用水冲洗小烧杯数次，最后加蒸馏水定容至50ml，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
3.母液的保存①装瓶：将配好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液号、配制倍数（或浓度）以及配制日期。
②储藏：将母液瓶储放在4℃冰箱内备用。
四、实验报告将本次实验内容整理成实验报告（叙述母液配置过程）。
组培实验方案
组培实验方案一、实验目的本实验旨在通过组织培养技术，观察不同生长因子及生长环境对植物生长的影响，了解植物发育的基本过程和规律。
二、实验原理组织培养技术是一种利用高分子基质负责支持和保护植物细胞体的组合细胞培养方法，常用于植物生长和发育的研究。
本实验以豆科代表植物——草履菜为实验材料，采用MS(g)+6-BA、MS(g)+NAA、MS(g)+6-BA+NAA三组处理与对照组，观察不同生长因子及生长环境对植物生长的影响。
三、实验步骤1.培养环境准备：洗涤无菌器、洗手间、超净台、塑料夹子、菌种、MS培养基、琼粉、平板；2.实验前准备：检查装备是否需要消毒，准备组织培养所需物品；3.实验操作步骤：a)将草履菜的种子放置在MS培养基上，放置条件为25±1℃，光照16h/8h黑暗；b)昼夜光周期：草履菜的种子苗维持每日光照12小时和黑暗12小时，温度为25±1℃；c)处理组：将MS(g)+6-BA、MS(g)+NAA、MS(g)+6-BA+NAA均匀滴在琼粉带菌器平板上（除对照组），半透明装入不同的草履菜苗上，放置在培养箱中；d)对照组：将简单培养基MS涂在层面带菌装置上，放置在培养箱中。
4.实验后处理：观测组织生长情况，记录草履菜苗高度及芽数量；四、实验注意事项1.操作前必须穿戴干净的实验服，并洗手消毒；2.操作过程中尽可能避免造成细菌的传播；3.实验室内为严密环境，减小人员出入次数；4.实验后务必清理完毕，保持实验室环境清洁卫生。
五、实验结果分析根据实验结果表明，添加6-BA及NAA处理的草履菜显著高于对照组，且MS(g)+6-BA+NAA的处理效果更佳。
说明在特定的生长因子及环境下，能够改变植物生长与发育进程。
六、实验结论本实验说明了组织培养技术的基本原理和操作方法，通过评估实验结果证明了豆科代表植物——草履菜在不同的生长因子及环境下，对其生长和发育有显著影响。
本实验为今后相关领域开展研究提供了理论和实践基础。
植物的组织培养技术
此外，pH、温度、光照等外界条件对植物组织培养也很重要。
月季的快速繁殖
月季是我国常见的庭院花卉植物，分布广泛(图 5-1-5)。用月季进行组织培养，不仅材料易得，而且 成功率高。
1.植物组织培养的培养基中加有植物激素。下表 是培养基中两种激素在不同比例时的实验结果。请 分析回答：
实验分组 激素的种类 及浓度关系
结果
1
细胞分裂素 组织块产生
愈伤组织
2
细胞分裂素 >生长素 愈伤组织 分化出芽
3
细胞分裂素 = 生长素 愈伤组织 不断生长
4
细胞分裂素 <生长素 愈伤组织
有长根的趋势
得各种营养成分。培养基中添加的生长素和细胞分
图 5-1-3 生根的玉米苗
裂素，在启动细胞分裂、脱分化和再分化过程中起 着重要作用。
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第一节 植物快速繁殖技术
常用的植物激素
生长素：吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-
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第五章植物组织培养技术
一、植物组织培养中的基本概念
(1) 植物组织培养技术:
在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。
(2) 理论依据：
植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。
(3) 外植体：
从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。
一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。
(4) 分化：
在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。
(5) 脱分化：
已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。
(6) 愈伤组织：
在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。
（具有细胞分裂能力）。
(7) 再分化：
已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。
(8) 不定芽：
在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。
所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。
与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。
(9) 胚状体：
在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。
二、植物组织培养过程（菊花为例）
1、培养基的配制:
方法：培养基干粉配制法
称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。
（其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml）
用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。
将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。
2、菊花接种与培养：
（1）取材：
取菊花生长旺盛的嫩枝。
（2）消毒：(省略)
①流水冲洗后，加少许洗衣粉刷洗，流水冲20分钟；
②放入70﹪～75%酒精中摇动2~3次，持续30秒，无菌水冲洗2~3次，用无菌吸水纸吸干;
③在2﹪~10%的次氯酸钠溶液中消毒8~10分钟，无菌水冲洗2~3次，无菌吸水纸吸干。
接种：减去嫩枝3-4厘米（带有3-4片嫩叶）接到培养基中（注意：不能将一片叶子接入进去并务必要提前做好杀菌、消毒、灭菌措施）
培养：将无菌苗培养到光照培养箱中，条件温度：25度、光照：12小时，每隔一周观察幼苗生长情况
（3）愈伤组织与不定芽的诱导培养
选用合适的培养基分别对植物材料进行愈伤组织和不定芽的诱导。
（4）继代培养
继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程，目的在于繁殖出相当数量的无菌苗。
（5）生根培养
当无菌苗长到2～3cm时，选用生根培养基剪取无菌苗转接至生根培养基中进行生根诱导培养。
（6）炼苗、移栽
炼苗：当无菌苗根系长出约3cm，把无菌苗进行炼苗适应外界环境。
先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天（以培养基上开始长出菌为宜）。
移栽：去净培养基，可先在灭过菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。
【注意事项】
1、实验所使用的器材要严格灭菌，注意无菌操作，避免因染菌导致实验失败；
2、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值；
操作不当引起的杂菌污染实验结果，
被杂菌污染培养基
3不要将一片叶子接入到培养基中
拓展实验：选取不同外植体诱导愈伤组织和不定芽
不同外植体的培养基激素配比如下：
叶片：6—BA : 2mg/L
NAA: 0.5mg/L
将叶片切成0.5cm*0.5cm小块
茎段：6—BA : 3 mg/L
NAA: 0.2 mg/L 将嫩枝切成1cm 茎段
腋芽：6—BA : 3 mg/L
NAA: 0.2 mg/L 将嫩枝切成1—2cm带腋芽的茎段
最后调节PH值至6.0
（1）20天后，菊花不同外植体培养情况，见图5：
图5 20天后菊花不同外植体形态
（从左往右分别为：叶片愈伤、茎段愈伤、腋芽培养形态）（2）50天后，菊花不同外植体培养情况，见图6
图6 50天后菊花不同外植体形态
（从左往右分别为：叶片愈伤、茎段愈伤、腋芽培养形态）。