秀丽线虫基因敲除突变库中sec-10突变种系的筛选

１ 材 料 与 方 法
１ １ 酶 和试剂 ． Ｔｑ酶 （ａ Ｃ ｓ ｒ ｘＴＡ Ｇ ＮＫＴ ０）单虫裂 解液 ： ｓｐ ８０３ ｌＬ ａ ＴｑＰ Ｒ Ｍａｔ ， ＩＮ Ｅ ２１． ｅ Ｍｉ 商 Ｈ ．，Ｏｍｍｏ ； ／ Ｅ Ｔ ８ｍｍ ｌＩＮａ ｉ０ｍｎ ｌＬＮ ４ ． ９；ｗ ｅ２ ． ． 白酶 Ｋ，０ｒ ／ ， ｅ￣￣ｇ． Ｄ Ａ ｏ／ ａ ０ ＇ ／ ；Ｐ ００７／Ｔ ｅｎ ００７ 蛋 ； ￣ ６ １ ｇｍＥ － ０ ａ Ｃ
第３ 第３ ２卷 期
２ １ 年 ９月 ００
湖北大学学报（ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨ ｕ ｅ Ｕｎｖ ｒｉｙ Ｎａｕ ａ ｃｅ ｃ ） ｏ ｒ ａ ｂ ｉ ｉｅｓｔ （ ｔ ｒｌ ｉｎ ｅ ｏ Ｓ
Ｖｏ１ ２ Ｎ ｏ ．３ ．３ Ｓｅ ．，２ ０ ｐ ０１
基 因组序列 及其具 有约 ４ 与 人类 基 因组 同源 的基 因 ， 因为 它 具备 作 为模 式 动 物 所 必需 的多 个 特 ０ 还 征 ： 养方便 廉价 ； 饲 可像其 他动 物细胞 一样在 － ８ ０℃保存 ； 长周期 短 ， 生 传代 快 ； 体小 ， 体透 明 ， 通 易于 在 显微镜 下对 活体组织 和细胞 进行 跟踪 观察． 外 ， 此 由于具 有 雄性 和 雌 雄 同体 两种 性 别特 征 ， 仅 可 以允 不
套针对不 同靶点 的含干扰引物的巢式 引物 ， 通过凝胶 电泳正确判断扩增产物的特异性 和干扰 引物对长 片段 产 物的抑制特性 ， 以选择有效 的检测引物． 简化 了线虫复苏后 的饲养 方法 ， 以取代恒温恒湿 培养箱 的使 用． 过 通 纯和致死平衡子 的引入 ， 克服 了 ｓｅ Ｏ基 因突变致死所导致 的无 法稳 定传代 的问题． ｅｌ 总结 了从 秀丽线虫基 因
第 ３ 期
李江丽等 ： 秀丽线虫基 因敲除突变库 中 ｓ￣ Ｏ突变种系 的筛选 ｅｌ
文章 编 号 ：０ ０ ３ ５ ２ １ ）３ ３８— ５ １０ —２ ７ （０ ０ ０ —０ １ ０
秀 丽 线 虫基 因敲 除 突 变 库 中 ｓｅ Ｏ突 变 种 系 的筛 选 ｅ－ ｌ
李江 丽， 张蓉 颖
（ 华中科技大学 生命科学与技术学院 ， 湖北 武汉 ４ ０ ７ ） ３ ０ ４
摘 要 ： 秀 丽 隐杆 线虫 （ ａ ｎｒａｄ ｔ ｅａ ｓ 的基 因 突 变 库 中 筛 选 出 目的 基 因 的 突 变 种 系 ， 对 其 进 从 Ｃ ｅｏｈ ｂ ｉ ｓ ｌ ｎ ） ｉｅ ｇ 并
突变库 中筛选 突变种系 的注意要点 ， 国内其它线 虫基 因突变库 的筛选提供重要的参考 意见 ． 为
关键 词 ： 丽 隐杆 线 虫 ；基 因 敲 除 ；筛 选 ； Ｃ 秀 Ｐ Ｒ检 测 ；ｓ ｌ ｅ Ｏ ￣ 中 图分 类 号 ： ３ ； ９ Ｑ １Ｑ２ １ 文献 标 志 码 ： Ａ
模 式生 物秀丽 隐杆线 虫在生 命科 学研究 中发挥 着举 足轻 重 的作 用． 这不 仅 由于其 已经被 解析 的全
研 究 ＿ ｊ通 过基 因敲 除可 以得 到遗传 背景 中完 全 没有Fra Baidu bibliotek目的基 因表 达 产 物 的突 变种 系 ， 服 了 Ｒ １． 克 ＮＡｉ 过
程 中有 残余 蛋 白质 作 用 的缺 陷 ； 于 改 变 了 基 因 组 序 列 ， 除 所 得 的 突 变 可 以无 限遗 传 ， 不 同 于 由 敲 而 Ｒ ＮＡｉ 技术 的瞬 时干扰 ； 通过 基 因敲除得 到 的特 定基 因 的突变 体 线虫 可 以和 其 他基 因的 突 变体 线 虫 进
行 杂交 获得双 突变甚 至多 突变 的种系 ， 以便进 行多个 蛋 白质相 互作 用 的研 究 ． 因此 ， 作为 一 个经 典 的反
向遗传方法， 基因敲除技术依然保持着其无可取代的地位．
本文中以我们实验室构建 的线 虫基 因突变库 为对 象 ， 在简单 描述基 本原理 的基础上 ， 将前 人 的研 究方
许不 同遗传 背景 的线 虫进行 遗传 交配 ， 而且也 可 以仅 以雌雄 同体 的形 式传 代 从 而保 持 其单 纯 的遗 传 背 景 ， 一点使 其在遗 传研究 上具 有其他 模式 动物无 可 比拟 的优势 ． 这 基 因敲 除是线虫 研究 过程 中的重 要 技术 之 一 ， 即通 过分 子 操作 改 变 生 物体 内某 已知 基 因 的 Ｄ ＮＡ 序列 ， 基 因进 行完 全或不 完全 的去除致 使其 功能丧 失 ， 对 以便 对 目的基 因在生 物体 内的功 能 开展进 一 步
行分子机制的研究 ， 是研究不 同基 因及其蛋 白产物作用机制 的一项基 本技术． ｓ￣ Ｏ突变种 系的成功筛 选 以 ｅｌ
为例 ， 详细描述如何通过 Ｐ Ｒ检测方法从 笔者实 验室所构建的 国内第一个秀丽线虫基 因敲除 突变库 （ Ｃ 可进 行
多 达 几百 次 的筛 选 量 ） 中筛 选 出 目的 基 因 的 突 变种 系 ， 时 证 明 突变 库 的可 用 性 ． 据 ｓ ｌ 同 根 ｅ Ｏ基 因 序 列 设 计 多 ｅ
法［和我们 自己的实验经验相结合 ， ３ ］ 介绍从线虫库 中筛选 目的基 因的方法 ， ｓ－Ｏ为例 ， 以 ｅｌ ｃ 总结 了该过程的实
验技巧和可能 出现的问题 以及相应 的解决策略． 线虫 中的 ｓ － ｅｌ ｃ Ｏ与人 的 ｓｃ Ｏ蛋 白有着高达 ３ 的序列相似 ｅｌ ￣ ７ 性［ ， ４ 是高度保守的蛋 白质复合体 ｅｏｙｔ ］ ｘｃｓ 的八组分之 一， 在分泌途径中起着囊泡栓 系的作用 ］ ．
收稿 日期 ：２ ０ —１ —０ ０９ １ ７ 基金 项 目 ：国家 自然 科 学 基金 （０ ０ １ ７ 资 助 ３５０１）
作者简介 ： 李江丽 （９ １ ）女 ， １８ 一 ， 博士生 ； 张蓉颖 ， 通信作者， ｍａ ：ｙｈ ｎ ＠ｍａ． ｕｔｅｕ ｃ Ｅ ｉ ｒｚａ ｇ ｌ ｉ ｈ ｓ．ｄ ． ｎ ｌ