人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
APTT纠正试验
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APTT纠正试验
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全自动化、快速、重复性好、易于标准化 易受干扰
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抑制物定义： 将受检血浆与或正常人血浆混合， 37℃温育2h后，
检测剩余因子Ⅷ的活性，以Bethesda单位（BU）来计算 抑制物的含量，1BU相当于灭活50%因子Ⅷ的量。 检测方法： 1. APTT纠正试验 2. Nijmegen 法、Bethesda法、ELISA法等
经典方法，耗时费力，重复性差，标准化程度差
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重复性
定量检测性能评价
N=10 Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Level 5 Level 6 Mean 0.12 0.68 6.30 16.76 21.10 63.31
SD 0.01 0.09 0.40 0.79 1.68 5.04 CV% 11.23 13.46 6.29 4.72 7.96 7.96
凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
南方医科大学南方医院检验科
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FⅧ抑制物检测的临床意义： 1. 替代治疗并发症（20%～30% ） 2. 监测出血倾向 3. 指导免疫抑制剂的合理使用 4. 因子剂量的使用指导 5. 获得性血友病的诊断
血凝效价的简易计算法
血凝效价是衡量生物体血液中凝血因子活性的重要指标，通常用于评估凝血功能是否正常。
在实际应用中，血凝效价的计算常常采用一些简易方法，以便更快速地得出结果，为临床应用提供参考。
下面是血凝效价的简易计算法的介绍。
一、试管法
试管法是一种常用的血凝效价计算方法。
该方法需要使用凝血酶原时间（PT）试剂和凝血酶时间（TT）试剂。
首先将待测血浆与PT试剂混合，记录凝血时间。
然后将待测血浆与TT试剂混合，同样记录凝血时间。
最后通过计算公式，即可得出血凝效价。
二、机械法
机械法是一种自动化程度较高的血凝效价计算方法。
该方法需要使用自动凝血分析仪，将待测血浆加入分析仪中，由仪器自动完成凝血过程并计算出凝血时间。
该方法具有操作简便、结果准确等优点，因此在临床应用中越来越广泛。
三、比色法
比色法是一种基于光学原理的血凝效价计算方法。
该方法需要使用特定的比色试剂，将待测血浆与试剂混合后，通过比色计测量光密度变化，从而计算出凝血时间。
该方法具有灵敏度高、结果稳定等优点，但需要较为精密的仪器和操作技巧。
以上三种方法均为简易计算法，相对于传统的复杂计算方法具有更高的效率和实用性。
但需要注意的是，这些方法仅适用于特定的凝血因子检测，对于某些凝血因子缺陷或异常的情况可能无法得出准确结果。
因此，在实际应用中需要结合患者的具体情况选择合适的方法进行血凝效价的计算和评估。
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2005(026)007
【摘要】目的明确由于标准品不同及样品的处理不同而带来的差异,建立一种重复性好、可行性强的凝血因子Ⅷ效价测定的适宜方法.方法采用部分凝血活酶时间(APTT)法测定人凝血因子Ⅷ效价,同时对该方法的精密度、准确度进行分析.结果凝血因子Ⅷ为预稀释液效价检测回收率为1.0102,高于白蛋白CA BUFFER(回收率=1.0605);冷冻人干凝血因子Ⅷ为标准品明显低于标准血浆(t=8.536,P＜0.000 5).结论对于凝血因子效价检测,标准品及样品处理的统一规定是必要的.
【总页数】2页(P474-475)
【作者】胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【作者单位】232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R5
【相关文献】
1.人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
2.交沙霉素效价测定实验条件的探讨
3.醋酸麦迪霉素颗粒剂微生物效价测定实验条件的探讨
4.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
5.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
人凝血因子Ⅷ效价测定一步法1 试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
凝血因子Ⅷ定性检测试剂盒(凝血块溶解法)
凝血因子Ⅷ定性检测试剂盒(凝血块溶解法)简介：凝血因子Ⅷ在Ca 2+的参与下，能使可溶于尿素或单氯乙酸溶液的可溶性纤维蛋白单体聚合物变为纤维蛋白，因此含因子Ⅷ的血浆凝固后不再溶解于上述溶液。
如果待检血浆中缺乏因子Ⅷ，则聚合物可溶解于上述溶液。
Leagene 因子Ⅷ用于定性检测人、动物血浆中凝血因子Ⅷ。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心机2、 计时器3、 水浴锅操作步骤(仅供参考)：1、 制备待测血浆：取新鲜待测静脉血，与柠檬酸钠抗凝剂混合，轻轻混匀。
离心，收集上层液(缺乏血小板的血浆)，转移至塑料试管或离心管，以防止血小板被激活。
同时应设正常对照血浆。
2、 取待测血浆(包括正常对照血浆)、CaCl 2(25mM) l ，混匀。
3、 置于水浴，期间轻轻混匀数次，直至凝块形成。
4、 将凝块转移至F Ⅷ溶液，每5min 观察1次，共计2h ；2h 后每2～4h 观察1次，共计24h 。
参考区间： 24h 内纤维蛋白凝块不溶解则为阳性注意事项： 编号 名称 TC0321 100T Storage 试剂(A): 柠檬酸钠抗凝剂 30ml RT 试剂(B): CaCl 2(25mM) 10ml 4℃ 试剂(C): F Ⅷ溶液 10ml 4℃ 使用说明书 1份1、以上操作，应同时测定正常对照。
2、获得样本后，应及时检测，一般不应超过1h，4℃不应超过4h。
3、应精确控制孵育温度在37±1℃，过高或过低均会影响结果。
4、抽血要顺利，抗凝要充分。
5、分离血浆应在3000g离心10min，务必去除血小板。
6、本检测试剂盒敏感性低，特异性高。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)CS0201 细胞线粒体分离试剂盒DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)DM0002 姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)PW0040 Western blot一抗稀释液TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
凝血因子活性测定
凝血因子活性测定凝血因子活性测定介绍：凝血因子活性测定是对人体内的各种凝血因子进行活性测定，凝血因子在血液凝固过程中，起着非常重要的作用，测定各个凝血因子的活性，有助于判断血友病的类型，血友病的轻重程度以及某些病理情况下的凝血状况。
凝血因子活性测定正常值：因子Ⅱ：C 、因子Ⅴ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅸ：C、因子Ⅹ：C、因子Ⅺ：C、因子Ⅻ：C均为 0.80～1.20因子Ⅷ：C为 0.60～1.60凝血因子活性测定临床意义：异常结果：降低：1. Ⅷ：C降低见于血友病A，血管性血友病，弥散性血管内凝血等;2.因子Ⅸ：C降低见于血友病C，肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药等;3.因子Ⅺ：C降低可见于先天性因子Ⅺ缺乏，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血等;4.因子Ⅻ：C降低可见于先天性因子Ⅻ缺乏，弥散性血管内凝血，肝脏疾病等;5.因子Ⅱ：C ，因子Ⅴ：C ，因子Ⅶ：C ，因子Ⅹ：C降低，见于先天性凝血因子缺乏或获得性凝血因子降低，如肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药及血液中存在抗凝物质等。
升高：见于血液高凝状态和血栓性疾病，如深部静脉血栓形成，肺栓塞，肾病综合征，妊娠高血压综合征，恶性肿瘤等。
因子Ⅷ也见于肝脏疾病。
需要检查的人群：患有血液病的人群。
凝血因子活性测定注意事项：不合宜人群：长期服用阿司匹林的人群。
检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食。
禁止服用阿司匹林，检查前禁止服用各种药物，以免造成影响。
检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。
凝血因子活性测定检查过程：取标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。
另取1×10 cm的塑料试管6支，各加入0.1 %纤维蛋白原溶液450 μl，置37℃水浴预热5 min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50 μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。
医学检验·检查项目：凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C)_课件模板
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ห้องสมุดไป่ตู้临床意义：
∶C或Ⅸ∶C小于2%，中型2%～5%，轻型 5%～25%，亚临床型25%～45%。因子Ⅷ∶C 降低还见于血管性血友病、DIC和抗因子 Ⅷ∶C抗体所致的获得性血发病甲;因子 Ⅸ∶C降低还见于肝脏疾病、维生素K缺乏 症、DIC和口服抗凝剂等。
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临床意义：
(1)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C水平增高：见 于高凝状态和血栓性疾病。尤其是静脉血 栓形成，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾 病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合 征、恶性肿瘤以及肝功能衰竭时因子 Ⅷ∶C水平增高。 (2)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C 水平降低：见于血友病甲或血友病乙，按 其降低程度分为：重型Ⅶ
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正常值： 因子Ⅷ∶C 78%～128%；因子Ⅸ∶C
68%～128%。
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相关检查： 维生素E、红细胞聚集性、血小板聚集试 验（PAgT）、血清黏度（SV）、乙醇凝胶 试验、活化部分凝血活酶时间（APTT）。
谢谢！
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相关症状： 拔牙后伤口经久不愈、弥漫性出血、血液 粘滞度增高、凝血因子功能的障碍、延髓 出血、面颊及上胸部充血。
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相关疾病：
丘疹紫癜性手套和短袜样综合征、妊娠合 并血栓性疾病、产科播散性血管内凝血、 肝硬化、小儿播散性血管内凝血、丘疹性 血管增生、皮肤骨髓纤维化。
人凝血因子Ⅷ效价凝固检测法的验证及应用
２ ４・
微生物学免疫学进展
２ ０ １ ３年第 ４ １卷第 ３期
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人 凝 血 因子 Ⅷ效 价凝 固检 测 法 的 验 证 及 应 用
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人凝血因子效价检验标准操作规程
人凝血因子效价检验标准操作规程人凝血因子ⅷ效价检验标准操作规程1目的严苛规范操作者的检测方法，并使操作者能快速有效率和安全精确地顺利完成检验操作方式，特制订本操作规程。
2适用范围本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子ⅷ的供试品效价检测。
3制定依据《中华人民共和国药典》（2021年版）三部，第三章3521人凝血因子ⅷ效价测定法（一期法）。
4职责4.1检验人员按本sop对供试品进行检验和计算。
4.2复核人对检验中的计算进行复核。
4.3证实人按本sop对检验过程及结果展开适当证实和认定。
5仪器及器具5.1仪器5.1.1凝血仪5.1.2电子天平5.1.3电子分析天平5.1.4漩涡混匀器5.2器具5.2.1微量移液器5.2.2吸头5.2.3移液管5.2.4洗耳球5.2.5试管5.2.6试管架5.2.7砂轮5.2.8凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）6试剂及试液6.1试剂6.1.1人凝血因子viii国家标准品6.1.2人凝血因子viii比较品6.2试液6.2.1人凝血因子ⅷ缺乏血浆6.2.2稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）6.2.3转化成的部分促发展凝血酶原激酶时间试剂6.2.4氯化钙溶液7操作步骤7.1供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备7.1.1供试品及比较品溶液的制备7.1.1.1供试品及比较品的预稀释用人凝血因子ⅷ缺少血浆将可供试品进度表吸收成约1iu/ml（冻干制品先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g，加水溶解约为20倍。
具体稀释过程如下：人凝血因子人凝血因子ⅷ供试品区分热结晶ⅷ洗清原半成品、成品、冻干液、原液及比较品供试品1~2g100μl100μl人凝血因子ⅷ缺少血浆19~38g提纯水300μl100μl吸收倍数2042挑莲塘稀释液---50μl50μl人凝血因子ⅷ缺少血浆---450μl450μl总预吸收倍数2040207.1.1.2供试品进度表稀释液的工作吸收（供试品溶液）将上述含人凝血因子ⅷ约1iu/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。
冻干人凝血因子Ⅷ使用说明
冻干人凝血因子Ⅷ【用法用量】用法：将装有冻干人凝血因子Ⅷ和灭菌注射用水的制剂瓶加温至25-37℃。
开启铝塑组合盖，露出橡皮塞。
用消毒剂如酒精消毒橡皮塞的暴露部分。
瓶塞上勿残留消毒剂。
取下配制用针一端的塑料套。
将配制用针短的一端插入稀释液瓶的瓶塞中央。
去掉配制用针另一端长针的塑料外套。
倒转稀释液瓶和配制用针并将配制用针的长针一端插入因子Ⅷ制剂瓶的瓶塞中央。
待稀释液完全流入因子Ⅷ制剂瓶内。
取下稀释液瓶，排气后拔去配制用针。
轻轻转动瓶子使产品完全溶解。
不得剧烈摇动以免产生泡沫及引起蛋白变性。
用注射器进行静脉注射用法如下：将过滤针头装在注射器上，通过过滤针将人凝血因子Ⅷ溶液吸入注射器。
偶尔溶液中会有微量细小蛋白颗粒，可被滤去而不影响制剂的效价。
拔去过滤针，代之以输注装置。
配制好的制剂需立即输用，并在一小时内用完。
给药速度宜慢，不要超过10ml/分。
如果病人的用药量超过一瓶，可用同一套输注装置经一次静脉穿刺给药。
配制好的溶液不可再冷藏。
使用完毕后丢弃一切输液用装置。
如静脉滴注，用于输注的输液器必须带有滤网装置以去除溶解液中可能存在的微量细小颗粒。
滴注速度一般以每分钟60滴为宜。
用量：给药剂量必须参照体重、是否存在抑制物，出血的严重程度等因素。
下列公式可用于计算剂量：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×患者体重(kg)×需提升的因子Ⅷ活性水平（正常的%）例：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×50(kg)×30(%)-750IU一般推荐剂量如下：1．轻度至中度出血：单一剂量10-15IU/kg体重，将因子Ⅷ水平提高到正常入水平的20-30%。
2．较严重出血或小手术：需将因子Ⅷ水平提高到正常人水平的30～50%，通常首次剂量15-25IU/kg体重。
如需要，每隔8-12小时给予维持剂量l0-15IU/kg体重。
3．大出血：危急生命的出血如口腔、泌尿系统及中枢神经系统出血或重要器官如颈、喉、腹膜后，骼腰肌附近的出血：首次剂量40IU/kg体重，然后每隔8-12小时给予维持剂量20-25IU/kg体重。
人凝血因子Ⅷ的应用
ห้องสมุดไป่ตู้ 生产工艺
? 采用低温乙醇法或冷冻法制得冷沉淀，经抽 提、吸附、精制。
? 1.分批 2.添加稳定剂 3.除菌过滤及分装 4.半 成品鉴定 5.冻干 6.规格 7.成品鉴定
质量检测
? 用人凝血因子 VIII缺乏血浆为基质血浆，采用一期 法测定供试品人凝血因子 VIII效价。
? 溶解时间： 25-37℃ 30分钟内溶解 ? 水分：含量 ≤3% ? PH：20 ℃ 6.8~7.6 ? 钠离子测定：含量 ≤ 160mmol/L ? 枸椽酸离子测定：含量 ≤ 25mmol/L ? 效价测定：不低于标示量的 80% ? 比活性：每 mg蛋白质所含人凝血因子 8的效价应大
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人凝血因子Ⅷ的作用及制备
凝血因子 Ⅷ简介
凝血因子Ⅷ的性状是乳白 色疏松体，复溶后溶液应 为无色澄清液体，可带轻 微乳光。参与血液凝固过 程的各种蛋白质组分，又 叫抗血友病球蛋白。正常 人血浆中的Ⅷ因子是一种 分子量高达 100万～200万 的糖蛋白，含低分子量及 高分子量两种成分。
生理作用：
? 它的生理作用是，在血管出血时被激活，和 血小板粘连在一起并且补塞血管上的漏口， 这个过程被称为凝血。它们部分由肝生成， 可以为香豆素所抑制。有2332个氨基酸残基， 在人体内的半衰期8～12小时，作为凝血过程 中的辅助因子参与凝血。
于0.25IU
安全试验
? 小白鼠实验：用体重18~20g小白鼠5只，每 只腹腔注射检品1.5IU，半小时内动物不应有 明显的异常反应，继续观察7天，动物均健康， 每只体重增加者判为合格。如不符合上述要 求，再用10只小白鼠复试一次，观察结果
不良反应
1)过敏:可能出现过敏反应,发热,风疹症状; 2)肝:可发生肝病 3)消化系统:呕吐,恶心或胃痛 4)神经系统:可能发生不适或头痛
血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨
血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨来源：本站原创作者：杨海平（北京市红十字血液中心，北京100088）发布时间：2009-12-4新鲜冰冻血浆（FFP）是目前临床常用的一种血液成分，在治疗和预防出血性疾病及大剂量输血所致的凝血功能障碍方面起非常重要的作用。
在FFP中，Ⅷ因子是非常不稳定又重要的一种凝血因子［1］。
在目前采供血机构对血液质控检测中，常用Ⅷ因子效价（IU/ml）作为FFP的质量控制指标［2］。
随着检测技术的自动化，全自动血凝仪也开始进入采供血机构。
全自动血凝仪一般的输出结果是FFP中Ⅷ因子的百分活性，此活性单位适用于临床诊断，正常人血浆中Ⅷ因子参考值为（103±25 7）%［3］。
采供血机构对FFP中Ⅷ因子效价的测量一般是通过测定已知国际单位的国家标准品来进行换算。
笔者探讨了一个新的换算方法，可用于FFP质量控制指标中Ⅷ因子百分活性与国际单位的换算。
1 材料与方法1．1仪器及试剂ACL7000全自动血凝仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套进口试剂，包括：Ⅷ因子缺乏血浆，APTT试剂（含硅土），因子稀释液，校准血浆，正常质控物，CaCl2溶液。
1．2样品稀释方案用含量为7 3 IU/ml的Ⅷ因子浓制剂国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010607）进行稀释（表1）。
表1 稀释方案（μl）1．3测定方法严格按照仪器操作说明和试剂要求进行。
仪器配套正常质控物的靶值范围82%—122%，测定值：94%，以此作室内质控，监测仪器的工作状态。
用全自动血凝仪分别测定稀释后国家标准品Ⅷ因子的凝固时间和百分活性，对每种样品测2次，取平均值。
2 结果2．1测定结果不同稀释比例下国家标准品Ⅷ因子的凝固时间（用TC表示）和百分活性（用V表示）的测定值见表2。
从表2可以看出，不同的稀释比例，获得的N/V值不完全相同，这说明N/V值与稀释比例之间不是严格线性关系。
另外采用Ⅷ因子国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010606，含量为3 8 IU/ml）试验，都得到相同的结论。
冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程
冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。
主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。
本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。
1 制造1.1制造要求1.1.1 对血浆的要求1.1.1.1所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求，血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。
在采集时应减少皮肤损伤，保持血流通畅，并与抗凝剂充分混合，用塑料袋采集。
新鲜分离液体血浆或新鲜冰冻血浆及冻结冷沉淀，均可用于生产。
1.1.1.2分离后的血浆应保持无菌，并应及时冰冻保存。
自采血到冻结一般在8小时内完成。
液体血浆应在4±2℃贮放，贮放时间应不超过小时，最长不得超过12小时。
冰冻血浆（-30℃以下）保存期不超过6个月。
1.1.2 对制造工作室、设备及原材料的要求，与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。
1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法或冻融法制得冷沉淀，经抽提、吸附、精制，亦可采用经卫生部批准的其他工艺制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。
1.2.2 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤器和不同机柜冻干的制品分为亚批。
1.2.3 稳定剂及防腐剂制品内允许加稳定剂，制品应不含防腐剂。
1.2.4除菌过滤及分装本品应用微孔薄膜过滤，可直接分装无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及规格确定。
1.2.5 半成品检定每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验。
1.2.6 冻干除菌过滤分装的制品经外观检查后立即冻结，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。
2。
5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。
1.3 规格每瓶含人凝血因子Ⅷ的效价可有50、100、200、300、400IU五种，制品的效价应标示在瓶签及包装上。
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法1 材料1.1试剂1.1.10.05mol/L CaCl2溶液称7.35gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.20.025mol/L CaCl2溶液称3.675gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.3 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17gNaCl，溶于约100ml蒸馏水中，加37.2ml0.1mol/l HCl，加蒸馏水至200ml，pH为7.3～7.4。
1.1.4 枸橼酸盐-氯化钠溶液1份3.8%枸橼酸三钠溶液加5份0.85%NaCl溶液混匀。
1.1.5Al(OH)3胶a称（NH4）2SO45.5g，溶于150ml63℃蒸馏水中。
B称氨明矾19.175g，溶于250ml58℃的蒸馏水中。
C最取12.5ml氨水（比重0.88），加12.5ml蒸馏水。
三种溶液配毕后，立即将c液迅速倒入a液中搅匀，然后在搅拌下将此混合液迅速倒入b液，用力搅拌10分钟（保持温度不低于58℃），离心（2500r/min，15分钟），弃上清，沉淀洗涤5次。
第一次：用75ml蒸馏水加0.055ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第二次：用75ml蒸馏水加0.11ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第三、四、五次分别用75ml蒸馏水洗。
将沉淀物悬浮于总体积为175ml蒸馏水中，混匀，分装，4℃保存。
1.1.6 正常人血清分别收集20份以上正常人血于干燥灭菌的玻璃瓶中，待血凝固后，放于37℃保温5～6小时，置4℃冰箱过液，分离血清，混匀，定量分装（0.5ml/安瓿），冷冻干燥，-20℃保存。
缓冲液作1∶10稀释，4℃冰箱过夜（使血清活化），试验当日再用咪唑缓冲液作最适浓度稀释（一般为1∶20），置冰浴备用。
1.1.7 牛Ⅴ因子收集公牛血于干燥灭菌的玻璃容器中，室温放置4小时，离心（2500r/min，30分钟），分离血清，取血清加10%（g/ml）BaSO4在室温下搅拌吸附40分钟，离心（2500r/min，40分钟），弃沉淀，定量（1ml/瓶）分装，冷冻干燥，-20℃保存。
人凝血因子ⅶ效价的检定方法
人凝血因子ⅶ效价的检定方法哎呀，今天咱们聊聊人凝血因子ⅶ效价的检定方法。
说到这个，大家可能觉得有点严肃，其实嘛，听我慢慢道来，保证让你明白得透透的，也不乏趣味。
首先啊，凝血因子ⅶ，听起来是不是很高大上？别担心，这个小家伙在咱们的身体里可发挥着重要的作用。
它可负责帮助咱们止血，像个小英雄，随时准备出击。
不过，咱们得知道，光有这个因子可不够，得知道它的效价，也就是它的“战斗力”有多强。
没错，正所谓“纸上得来终觉浅”，光知道名字可不行，得实际检定一下，才能心中有数。
说到检定方法，哎哟，首先咱们得准备一些材料。
你想啊，实验室里总是需要点东西的。
什么啊，抗体啊，血浆啊，哎呦，听着就挺复杂，其实没那么可怕。
咱们可以找点标准品，先给自己打个样子。
这就像咱们做饭，得有个食谱，才知道怎么做出好菜来。
找到了标准品，咱就能进行实验了，像个小小科学家，开始冒险。
实验室里，咱们要用到一种叫“凝血实验”的方法，简单来说，就是给小鼠注射一些东西，然后看看它们的凝血情况。
真的是一场“斗智斗勇”的较量。
小鼠在这场比赛中可是相当重要的选手，咱们得观察它们的反应，就像看一场精彩的足球比赛。
要是凝血速度快，说明咱们的因子效价高，要是慢了，那可得想想办法，别让它们太失望。
咱们还得通过一些统计分析来评估数据。
别一听到统计就觉得枯燥，其实就像算命一样，得看一看这些数字背后的故事。
咱们得搞清楚，哪种条件下因子的效价最好，就像找到比赛的最佳阵容一样。
这样一来，咱们的实验就不仅仅是数据的堆砌，而是一个个精彩的故事。
这整个过程也不是一帆风顺，偶尔会遇到点“小麻烦”。
比如说，实验结果不理想，哎呀，真是让人心里五味杂陈。
可别着急，做实验就像打麻将，有时候你就是碰不上好牌，但只要坚持，总能翻盘。
可能得调整一下实验条件，换个角度再看，真是“山重水复疑无路，柳暗花明又一村”啊。
说到咱们检定完了，得出结论，就像一场酣畅淋漓的战斗胜利。
整个人都充满了成就感，像是收获了满满的果实。
人凝血因子Ⅷ浓制剂国际标准品第六次协作标定
刘大英 （ 中国药品生物 制品捡 定所 ， 京 １０ ５ ） 北 ００ ０
要 】 目的 建立 第六次人凝血因子Ⅷ浓制剂 国际标 准品， 用于全世界 各 国建立本 国人凝血因子 Ⅶ浓制
共采 用 ３种方法 ， 即一期 法、 二期法 和基质显 色沽。结果 标准品批号 为 ９／１， ７６６ 效价 ８ ．
法标定 中有 ２ 个 实验 室使 用 Ｃ ｒ ｏｅｉ ２ ｈｏ ｇｎ ｍ ｘ试剂 盒 ； ２ 个 实验 室使用 Ｄｄ 试 剂盒 ； 实验 室使用 Ｉｍ ｎ ａｅ ２个 ｍ ｕ０ 试剂 盒。 以上 ３ 标定 方法所使 用 的凝集仪 也都是 种 产地不 同 、 型号不 同， 体现 了多样化 。
据， ４个样本 Ｓ Ｐ Ｘ、 、 、 Ｙ测 定 顺 序在 每 一 次测 定 中均
本次协作标定 人凝 血 因子 Ⅷ浓制 剂 国际标准 品 有两 个候选待标 品 （ ｘ和 Ｙ表示 ）取 代第 五 次人 用 ， 源 的凝血因子 Ｙ浓制 剂 国际标 准 品。由于 重组人凝 噩 血 因子 Ⅷ浓制 剂在 全 世 界广 泛 使 用 ， 以本 次 人 凝 所 血 因子 Ⅷ浓 制剂 国际标 准 品采 用重组 人凝 血 园子 Ⅷ 浓 制剂为原 料 ， 以第 五次 人 源 的凝 血 因子 Ⅷ浓 制 剂 国际标准 品为标准 （ ） ｓ 。同 时 还 协作 标 定人 凝 血 因 子 Ⅷ 血浆 国际标准 品 ， 候选 待 标品用 Ｐ表 示 。
Ｙ、 ；、 、 、 第 ２种为 同 时测 定 ５ 样本 ｓＰ ｘ、 Ｐ ＳＸ ＰＹ； 个 、、 Ｙ、； ３ 为 同时测定 ６个样 本 Ｓ Ｐ Ｘ、 、 、 ； Ｓ第 种 、 、 Ｙ Ｐ Ｓ第 ４种为 同时测定 ８ 个样本 ｓＰ Ｘ、 、 ｘ、、。 、 、 Ｙ Ｙ、 ＰＳ
结 果
人凝血因子检验方法(一)
人凝血因子检验方法(一)人凝血因子检验1. 什么是人凝血因子检验人凝血因子检验是一种通过检测人体凝血因子的活性和浓度水平来评估凝血功能和判断凝血疾病的一种方法。
根据不同的目的和需求，可以选择多种不同的检测方法进行凝血因子的检验。
2. 检测方法以下是几种常见的人体凝血因子检验方法：2.1 凝血酶原时间 (PT)•PT是一种常见的凝血因子检测方法，主要用于评估凝血因子Ⅶ、Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ和纤维蛋白原活性。
2.2 部分凝血活酶时间 (APTT)•APTT是用来测量体内凝血因子的固有和共同通路的方法，常用于评估凝血因子Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅱ。
2.3 国际标准化比值 (INR)•INR是一种标准化的凝血时间结果，用于监测和控制在接受口服抗凝药物治疗的患者的凝血功能。
2.4 凝血酶原活性 (FII)•通过比较未知样品和正常血浆的凝血时间，来测量凝血因子Ⅱ的活性。
2.5 凝血因子浓度检测•通过测量各凝血因子的浓度来判断凝血功能是否正常。
3. 使用注意事项在进行人凝血因子检验时，需要注意以下事项：•由于不同的凝血因子具有不同的正常活性和浓度范围，因此在进行检测时需要将结果与参考范围进行比较来做出评估。
•检测结果可能受到多种因素的影响，如药物使用、疾病状态等，因此需要综合考虑来做出准确的判断。
•在进行凝血因子检验前，需要告知医生关于个人的药物使用和疾病史等信息，以便医生能够更好地解读检测结果。
结论人凝血因子检验是评估凝血功能和判断凝血疾病的重要方法。
通过使用不同的检测方法，可以准确地评估人体内各凝血因子的活性和浓度水平，从而辅助医生做出准确的诊断和治疗方案。
但需要注意，检测结果需要综合考虑其他因素，并与参考范围进行比较，才能得出准确的结论。
4. 其他凝血因子检测方法除了上述提到的常见凝血因子检测方法之外，还有一些其他的方法可以用于评估凝血功能：4.1 纤维蛋白原测定（FIB）•纤维蛋白原测定是一种常用的方法，通过测量纤维蛋白原的浓度来评估凝血功能。
2019-重组人凝血因子Ⅷ临床试验技术指导原则
附件1重组人凝血因子Ⅷ临床试验技术指导原则目录1前言 (2)2适用范围 (3)3概述 (3)3.1 名词解释 (3)3.2研究人群 (4)3.3研究程序 (4)3.4样本量 (5)3.5 效价和抑制物检测 (5)4 rhFⅧ注册/上市前临床试验 (6)4.1 在≥12岁PTPs受试者中的研究 (6)4.1.1 药代动力学研究 (6)4.1.2 确证性临床试验 (7)4.1.2.1 受试者选择 (7)4.1.2.2 疗效评价 (8)4.1.2.3 安全性评价 (10)4.2 在<12岁PTPs受试者中的研究 (12)4.3 在PUPs受试者中的研究 (13)5 rhFⅧ制品的上市后临床试验 (14)6 rhFⅧ制品生产工艺变更时的临床试验 (15)7 风险管理计划 (16)8 参考文献 (17)附录一 (19)附录二 (21)—1 —重组人凝血因子Ⅷ临床试验技术指导原则1前言血友病A是一种由凝血因子Ⅷ（Coagulation Factor Ⅷ，F Ⅷ）缺乏而导致的出血性疾病，是X染色体连锁的隐性遗传性疾病，主要由凝血因子Ⅷ基因突变引起。
血友病A的临床表现主要为关节、肌肉和深部组织出血，也可有胃肠道、泌尿道、中枢神经系统出血以及拔牙后出血不止等。
若反复出血，不及时治疗可导致关节畸形和（或）假肿瘤形成，严重者可危及生命。
根据患者FⅧ活性水平可将血友病分为轻型（FⅧ水平：5—40 %）、中间型（FⅧ水平：1—5 %）和重型（FⅧ水平：<1 %）。
轻型患者一般很少出血，只有在损伤或手术后才发生；重型患者自幼可有自发性出血（可发生于身体的任何部位）；中间型患者出血的严重程度介于轻型和重型之间。
FⅧ替代治疗是目前血友病A的主要治疗手段，一般首选基因重组FⅧ或者病毒灭活的血源性FⅧ，在无法获得上述产品时可选用血浆冷沉淀或新鲜冰冻血浆等。
FⅧ替代治疗可分为按需治疗和预防性治疗。
本指导原则旨在为重组人凝血因子Ⅷ（Recombinant Human Coagulation Factor Ⅷ, rhFⅧ）用于治疗和预防血友病A患者申请上市许可、或已上市产品发生重要生产工艺变更需开展临床试验时提供建议。
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
1 试剂
1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液
称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液
称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液
称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆
取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液
称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆
人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品
按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定
2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆
用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
2.4测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
3 计算
将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子Ⅷ单位（IU/ml），分别取其对数值，再将其各相应浓度所测得凝固时间（秒），也分别取对数值，然后按照统计学方法作直线回归方程。
方程式：log y=b olg x+a
其中x代表人凝血固子Ⅷ单位数，y代表测得相应凝固时间（秒）。
将测试样品所得到凝固时间（秒）代入方程式计算x值。
然后将所得x值乘以样品稀释的倍数，即为每ml中人凝血因子Ⅷ含量。