免疫学诊断与防治(精)

（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应
沉淀反应
补体参与的抗原抗体反应
免疫标记技术
（一）凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等） 与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集 2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。 3、抗球蛋白试验（Coombs试验） 抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再 加入抗球蛋白后即形成凝集块。 用于检测抗Rh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。
（1）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。
用CD3、CD4、CD8单克隆抗体检测患者外周血T细胞表面 相应抗原
正常人PMB中T细 CD3+ ——T细胞，计算T细胞总数。 65~75% CD4+ —— CD4+T细胞，计算CD4+T细胞数。 胞占 + / CD +约为1.5~2 CD + + + 4 8 CD8 ——CD8 T细胞，计算 CD8 亚群T细胞数 计算CD4+ / CD8+比例
检测系统：待测样品 和已知抗原（或抗体） 补体
指示系统：SRBC和溶血素
溶血—阴性；不溶血—阳性
（四）免疫标记技术
用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免 疫学诊断的敏感性
放射性同位素： 酶：辣根过氧化物 125I、131I 酶、硷性磷酸酶
荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄 绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹 明（红色荧光）
4、免疫比浊法（immunonephelomtry）：快速简便。用 于血清IgG、IgA、IgM、 补体C3、C4含量测定
（三）补体参与的抗原抗体反应
1、50 %补体溶血试验（CH50测定） ——血清总补体量测定 试验原理？
2、补体结合试验(complement fixation test)：检测抗原或抗体。 原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断
海南医学院微生物学与免疫学教研室制作
Copyright 2009
免疫学诊断
一、抗原或抗体的检测 二、淋巴细胞的测定
三、免疫学检测方法的应用
一、抗原或抗体的检测
（一）抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体反应的 特异性 （1）特异性 （2）可逆性 亲和力（affimity）与亲合力（avidity） ——抗体抗原之间的结合力大小。 结合力大则亲和力强 ，不易解离，反之则然。 （3）适宜的条件 免 疫 学 诊 断 2、抗原抗体反应的可见性 抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。
应
1、利用已知抗原检测未知抗体
用
（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤 寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。
（2）检测自身抗体——诊断自身免疫病：SLE、类风 湿性关节炎等 2、利用已知抗体检测未知抗原 （1）鉴定病原菌：诊断疾病
（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌
（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂
抗体混于琼脂凝 胶中制板
沉淀环
环的直径与抗原 含量成正相关
2、双向免疫扩散（doule immunodiffusion）：常用于抗 原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。
一致
不一致，有多种成分
部分一致
3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）
常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。 如骨髓瘤及性联低丙种球蛋白血Biblioteka Baidu的诊断
卵白及某些微生物中的蛋白质
（ 1）
（ 2）
抗原包被
抗细胞因子的抗体包被 （ 3）
（ 4）
用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌 特异抗体的B细胞的频数。
放射免疫检测法（RIA）：灵敏度达pg水平。常用于微量物 质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗 啡、地高辛等药物以及IgE等。
1、T细胞功能测定
（1）T细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗CD3单克隆抗体
等能非特异地激活T细胞，使之发生转化增殖，计算淋 巴母细胞转化率（正常值65~80%） 。
①形态学观察法
②3H-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的β射线放射活性 ③MTT法 （2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC）
——检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能
直接凝集
直接凝集
红细胞 乳胶颗粒
间接凝集
类风湿因子检测 妊娠试验
（二）沉淀反应（precipitation）
可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液 等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不 透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色 的沉淀。 1、单向免疫扩散（single immunodiffusion）：常用于测定 IgG、IgM、IgA、C3、C4等。
放射免疫检测法（RIA）
酶免疫检测法（EIA） 免疫荧光检测法（IFA）
液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）
间接荧光法
直接荧光法
酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法）
间接ELISA 双抗夹心法
BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素 系统 -ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及 DNA 、 RNA的检测。
用mIgM、mIgD单克隆抗体检测患者外 正常人外周血中 SmIg+ 细胞占 周血B细胞表面相应的抗原已检测B细 8~12% 胞的数量
（2）磁珠分离法：用抗CD4交联的微珠可将T细胞 中的CD4+T细胞与CD8+T细胞分开。 （3）流式细胞术（flow cytometry）
流式细胞仪
（二）淋巴细胞功能测定
能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测 多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。
二、淋巴细胞的测定
（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定
1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-泛影葡 胺密度梯度离心法
单核细胞 白膜层 淋巴细胞 B T
吸附分离
过尼龙毛柱分离
2、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、 记数