高效液相色谱仪LC3000培训教程

高效液相色谱仪LC3000培训教程

LC3000现场培训教程

——基础部分一、培训目的

A、了解LC3000高效液相色谱仪结构和基本操作。

B、掌握CXTH-3000色谱工作站的打开、设备连接、数据采集、数据处理，打印报告。

C、常见故障排除

二、培训设备

CXTH LC3000色谱仪

P3000高压输液泵

UV3000紫外检测器

7725i手动进样阀

T2000柱温箱(可选)

C18色谱柱250×4.6 5u (可选)

其它色谱基本条件(流动相准备、电脑和实验台等)

三、溶剂准备

1、条件:色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈(ACN)、二次蒸馏水

、流动相的过滤和超声 2

3、样品的前处理和过滤

四、 LC3000色谱仪组成

1、 P3000泵和UV3000检测器

一元(等度)系统两元(梯度)系统1

P3000泵界面和基本操作

高压输液泵

泵头压力传感器+排空

泵壳体结构图

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泵头以及传动结构图

单向阀

单向阀内部结构

基本操作:泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者泵仪

器面板控制。

工作站的控制在下面色谱工作站基本控制内容中讲到，以下是泵面板的基本控制按钮:

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PUMP/STOP 键:按一下该按键可以运行泵，再按一下停止泵运行。

START/HOLD键:按一下该键运行预先设定的程序链(PROGRAM)。再按一

下保持此时的程序运行。

PURGE键:冲洗键。按一次泵按照(SYSTEM SETING)系统设定中设定冲

洗流量运行冲洗。再按一次泵停止冲洗。作用:冲洗泵头气泡和快速更换流动相。

DEL键:退出键或者删除键。进入子菜单下通过此键退回上一菜单。

ENTER键:进入键或者确认键。按该键进入子菜单。

方向键:光标的上下左右移动。

2、UV3000检测器

UV3000紫外检测器

流通池

基本操作:检测器基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者检

测器仪器面板控制。

波长的设定:按下λ 按键进入波长设定界面，通过数字键设定预设波长TIME CONSTANT(时间常数):在MAIN MENU主菜单下，按ENTER键进

入第一项DETECTOR PARAMETERS，将光标移动到TIME CONTANT下修

改合适的TC值。

RANGE(量程)设定:按下 RANGE 按键，进入量程设定界面，通过数字键

设定波长。

检测器注意事项:流通池中有气泡的处理办法，流通池脏处理办法(见常见故障维护)。

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3、7725i进样阀

7725i是6通道阀。阀的背面有数字标号:

2号口为流动相进口(泵连接到阀)，3号口为流动相出口(阀连接到色谱柱) 1号口和4号口为定量环接口(默认连接的为20微升，可以更换)

5口和6口为废液口。

进样口为阀前端口(实际上7725i有7口)

以上俗称:2进3出、1、4定量，5、6废液。

基本操作:

进样阀前端有LOAD(装样)和INJECT(进样)两个标示。

当阀的把手在LOAD的状态下时，此时处于装样的状态，当样品注入后将阀扳到INJECT状态，进样过程完成。

进样注意事项:

A、缓慢进样、快速扳阀。阀不要处于中间位置。

B、如果使用缓冲盐、当天使用后要使用含5%有机相的水溶液清洗进样阀。

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4、色谱柱

色谱柱标示:

如:Kromasil 250×4.6 5u 100A分别代表填料名称柱长内径填料大小填料比表

面积

色谱柱基本常识:

A、其他条件相同，柱子越长，保留时间越长。

B、其他条件相同，柱内径越小，柱压越高。

C、其他条件相同，柱填料颗粒越小，柱压越高。

D、不同品牌的色谱柱将有不同的特性，如保留时间、柱效等。

E、同等流速下，不同流动相的柱压将不同。包括流动相组分配比的变化也会导致压力变化。原因是:流动相组分的比例变化导致流动相粘度的变化，从而导致压力的变

化。

基本安装注意事项:

A、避免死体积、漏液或损坏柱子

使用正确的接头

尽可能缩短连接管路长度、降低柱外效应

管路切口必须平整

在接上色谱柱前先将管路中的气泡赶净

B、色谱柱安装的方向性

接头不可拧太紧

打开输液泵、检查柱是否漏

按照色谱柱上箭头指示的方向为流动相经过的方向

五、LC3000系统基本操作

1、打开计算机。

2、打开LC3000各部分(P3000泵、UV3000检测器等)电源。

3、待检测器和泵自检完成后，双击打开CXTH-3000(中文版)工作站软件图标。

4、将入液管放入到过滤超声好的流动相中。

5、拧开排空阀，将泵冲洗流量设定5ml/min。点击泵面板上PURGE键。此时泵开始

运行冲洗功能。直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止。再按PURGE键或者PUMP/STOP键停止冲洗。

6、关闭排空阀，设置工作站上控制面板中时间程序。

7、点击工作站上采集基线图标，观察基线稳定情况。

8、点击停止采集，进样扳阀，触发工作站采集谱图。

9、保存谱图到指定位置。

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10、谱图处理和谱图校正。

11、打印报告。

12、实验结束前，用纯甲醇或者其他纯有机相清洗系统。

13、关闭工作站和仪器电源。

六、色谱工作站基本操作步骤(工作站打开、工作站和色谱仪的连接和控制)