间充质干细胞的临床应用心得共47页
骨髓间充质干细胞总结
2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为翔实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。
一、骨髓间充质干细胞的分离目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞贴壁特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。
密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同，提取单核细胞进行贴壁培养。
随着对MSC表面抗原认识的深入，有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化，但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之耗费较大和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。
1. 直接培养法（全骨髓培养法）1987年，Friedenstein等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，而且这些细胞扩增2 0-30代后仍能保持其多向分化潜能，这类细胞即为骨髓间充质干细胞（BMSC），其工作对今后MSC的研究具有重要意义，不仅证实了骨髓MSC的存在，而且创建了一种体外分离和培养MSC的简便可行的方法，得到了广泛的应用。
culture-spirit采用直接贴壁法，24-36小时首次换液，换液时用PBS洗两次，7 -10天传第一代，以后2-3天传代。
培养基采用Hyclone的DMEM/F-12（1:1），血清是天津TBD的FBS（顶级），得到了较好的培养结果。
布兰卡根据自己培养大鼠MSC的经验，详细介绍了实验步骤：（1）接种后60-80分钟，换液去除悬浮细胞（2）原代培养24h,48h各换液一次（3）观察细胞情况，在原代培养7天左右时，如观察到成片的典型形态的细胞，在瓶底用Marker笔标记，0.25%胰酶消化，镜下观察控制，约5-10分钟（室温太低时应放置到孵箱中），加入全培养基终止消化，瓶体朝上，吸管轻轻吹打4-8分钟，尤其是标记部位。
有关骨髓间充质干细胞的临床应用
有关骨髓间充质干细胞的临床应用【摘要】骨髓间充质干细胞具有高度的自我更新和多相分化潜能。
由于取材容易、培养简便及应用前景广泛等特点成为干细胞中研究的热点,在医学各个领域都具有研究和应用价值,目前已应用于多种临床治疗当中。
骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcell,MSC)是存在于骨髓中的具有高度自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,又称骨髓基质干细胞、间充质祖细胞。
1MSC的生物学特性MSC具有高度自我更新能力和多相分化潜能,体外培养的MSC有快速黏附和克隆能力,可以在体外培养20~25代而没有形态、生长曲线和免疫表型的明显改变,且保持着细胞的染色体核型和端粒活性。
MSC在体外诱导培养条件下,能够向不同谱系的细胞分化,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、星形胶质细胞等[1]。
2MSC的免疫学特性由于MSC不表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ分子、CD40、CD80、CD86等共刺激分子,不表达或极低水平表达MHCⅠ分子,MSC不易被宿主T细胞识别,并能逃脱宿主免疫系统的排斥,因此认为MSC具有低免疫原性。
3MSC在临床医学中的应用3.1MSCs用于心血管疾病的治疗机制当MSCs移植到损伤的心肌局部后,MSCs能分化为心肌细胞系,表达心肌特异性蛋白质,包括:αactinin,troponinT,tropomyosin,myosinheavychainMHC,phospholamban,和其他的心肌特异性蛋白质。
更重要的是,在MSCs移植后的心肌组织中检测到了connexin43,该种蛋白质反映的是细胞之间的连接以及细胞与细胞之间的电偶联。
3.1.1MSCs促进缺血或梗死部位血管再生由于新生血管的生成,增加了梗死部位心肌的血供,通过挽救冬眠的心肌、减少肥大的心肌细胞的凋亡、帮助恢复损伤的基质来减少心室的扩张和改善心功能。
3.1.2MSCs向收缩性心肌细胞分化细胞移植的最初目标是所移植的细胞能取代死亡的可收缩的心肌细胞从而恢复心功能。
临床研究用人间充质干细胞质量评价
临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。
在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。
然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。
本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。
纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。
因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。
例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。
同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。
通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。
干细胞培养心得
我在培养外胚间充质干细胞的时候曾用成纤维细胞作为滋养层细胞，原因如下：从配体早期发育开始，如果作原代培养的话，所取得的细胞是不均一的，就是所谓的烦杂。
如果这时候不加干预因素的话，其中的干细胞将不占生长优势，而被其他的细胞影响，定向分化，尤其是这种分化是不可控制，也是不可知的，只有等到所有的优势细胞占据了所有资源，定型之后才能鉴别到底分化成为哪种细胞。
所以在培养干细胞的时候，尤其是胚胎干细胞或者胚胎早期的成体干细胞时都要加入LIF等细胞因子来规范干细胞的自我维持和自我更新。
不过细胞因子的效果虽然好，但是价格昂贵，还有没有其他的替代方法呢？答案是肯定的，那就是滋养层细胞。
实验证实，在以成纤维细胞作为滋养层细胞来培养胚胎干细胞的时候，干细胞也可以维持自身的纯洁性和增殖活性，功能上没有衰退的表现。
下面大概讲一下我自己制作滋养层细胞的一些心得.。
成纤维细胞可以选择原代培养也可以选择3T3细胞系，将细胞培养至对数生长期，消化下来，用撕裂霉素C处理，或者用Co60照射（30GY），使细胞失去增殖能力，将细胞接种到T75培养瓶，个数为每瓶5*10的4次方个细胞。
培养2天后就可以将需要培养的干细胞接种进培养瓶了，密度为每瓶10的3－4次方个细胞。
在细胞长到满之前保持隔天半量换液，这样大概到1周的时候细胞就能张满培养瓶。
这时候将细胞消化下来重复以前的步骤。
因为滋养层细胞是经过照射的，是不增殖的，随着时间的延长，细胞会逐渐死去，基本上2周就死光了，所以不用担心细胞污染的问题。
细胞治疗感悟心得体会范文(3篇)
第1篇在当今医学领域，细胞治疗作为一种新兴的治疗方法，正逐渐受到人们的关注。
我有幸参与了一次细胞治疗的研究项目，亲身感受到了细胞治疗的神奇魅力。
这次经历让我对细胞治疗有了更深刻的认识，以下是我对细胞治疗的感悟心得体会。
一、细胞治疗的定义及优势细胞治疗是一种利用患者自身的细胞或外源细胞，通过体外培养、诱导、扩增等手段，使其在特定条件下发挥治疗作用的治疗方法。
细胞治疗具有以下优势：1. 安全性高：细胞治疗使用的是患者自身的细胞或经过严格筛选的外源细胞，降低了免疫排斥反应的风险。
2. 疗效显著：细胞治疗可以针对特定疾病进行精准治疗，提高治疗效果。
3. 个体化治疗：细胞治疗可以根据患者的具体情况制定治疗方案，实现个体化治疗。
4. 无需长期用药：细胞治疗可以解决长期用药带来的副作用和药物依赖问题。
二、细胞治疗的研究项目我参与的研究项目是针对慢性萎缩性胃炎的细胞治疗。
慢性萎缩性胃炎是一种常见的消化系统疾病，长期得不到有效治疗可能导致胃癌等严重后果。
该项目旨在利用患者自身的骨髓间充质干细胞（MSCs）进行体外培养、诱导，使其具有抗炎、抗凋亡等作用，再将其回输至患者体内，达到治疗慢性萎缩性胃炎的目的。
三、细胞治疗的感悟心得1. 细胞治疗具有广阔的应用前景通过参与细胞治疗的研究项目，我深刻认识到细胞治疗在医学领域的巨大潜力。
随着生物技术的不断发展，细胞治疗有望成为治疗多种疾病的有效手段，为患者带来福音。
2. 细胞治疗需要严格的质量控制细胞治疗的成功与否，很大程度上取决于细胞的质量。
在研究过程中，我们严格按照细胞培养、诱导、扩增等环节进行操作，确保细胞的质量。
这使我意识到，在细胞治疗领域，严格的质量控制至关重要。
3. 细胞治疗需要多学科合作细胞治疗涉及生物学、医学、生物工程等多个学科，需要多学科合作才能取得成功。
在研究过程中，我们与病理科、消化科、生物工程等多个科室的专家密切合作，共同攻克技术难关。
4. 细胞治疗需要患者及家属的信任与支持细胞治疗作为一种新兴的治疗方法，患者及家属对其了解有限。
脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展
脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展摘要：目的：研究脐带间充质干细胞(hMSCs)生物学有效性。
方法：本实验以PHA刺激淋巴细胞作为反应体系，观察hMSCs与淋巴细胞共培养时增殖的变化，培养体系分为阴性对照组、阳性对照组、实验组。
结果：在共培养接触体系中不同数量hMSCs对淋巴细胞增殖具有抑制作用，且hMSCs浓度越高，抑制作用越强，具有剂量依赖性。
结论：间充质干细胞在不同类型的炎症环境中，可由静息状态转变成激活状态，通过细胞间相互作用和分泌可溶性免疫调控因子，调节多种免疫细胞的增殖、分化、活化以及炎症因子的分泌功能。
MSC的免疫调控功能是其临床应用中重要的生物学有效性质量属性，对这一质量属性的有效评价，是指导MSC产品研发及临床应用中最为相关的质量控制内容之一。
近年来人们对MSC免疫调控功能的认识及其与临床应用的相关性，在此基础上提出了针对治疗性MSC产品免疫调控功能的评价策略，为在我国建立和完善MSC生物学有效性评价体系奠定基础。
关键词：脐带间充质干细胞；物学有效性；免疫调控功能前言：间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞以及神经细胞等，其免疫原性低，几乎影响免疫系统的所有细胞，具有免疫调节作用[1]。
但其免疫调节作用机制不明确，我们通过研究hMSCs对异体淋巴细胞增殖的影响，进一步探讨hMSCs的免疫调节作用的可能机制，为hMSCs应用于临床提供一定基础。
1材料与方法1.1 材料脐带间充质干细胞(hMSCs)和淋巴细胞（PBMC）均由生产提供。
间充质干细胞无血清培养基；牛血清(FBS)；10XPBS；灭菌注射用水；PHA（植物血凝素）；CFSE；无水DMSO；荧光抗体；48孔板；流式细胞仪。
1.2 方法1.2.1 hMSCs表型鉴定调整细胞浓度，使用荧光抗体进行标记，不加抗体作为空白对照；室温避光孵育，洗涤后检测。
间充质干细胞疗法在肾移植中的应用：一个未完待续的故事
· 专家论坛·间充质干细胞疗法在肾移植中的应用：一个未完待续的故事谢思雨 路君【摘要】 免疫抑制药是预防器官移植术后排斥反应的主要手段，但会降低机体对病原体的反应能力，导致感染等的风险增加。
近年来，间充质干细胞（MSC ）疗法在实体器官移植领域的应用备受关注。
临床前研究表明，MSC 疗法能够延长移植肾存活时间，诱导免疫耐受，加速急性肾损伤修复，促进肾功能恢复。
临床试验则验证了MSC 疗法的安全性、耐受性和有效性。
因此，本文对MSC 的一般特性、MSC 的免疫调节和组织修复作用以及MSC 在肾移植临床试验中的应用进行综述，简要讨论待继续研究的问题和对未来的展望，旨在为推动MSC 治疗在临床肾移植中的应用提供参考。
【关键词】 间充质干细胞；肾移植；免疫调节；组织修复；外泌体；免疫抑制药；排斥反应；炎症【中图分类号】 R617,R329.2 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2024）03-0010-08Application of mesenchymal stem cell therapy in kidney transplantation: a continued story Xie Siyu, Lu Jun. The 900th Hospital of the Joint Logistics Support Force of Chinese People's Liberation Army , Fujian Provincial Key Laboratory of Transplantation Biology , Fuzhou 350025, ChinaCorresponding author: Lu Jun, Email: *********************.cn【Abstract 】 Immunosuppressant is one of the main preventive measures for rejection after organ transplantation,whereas it may reduce the host response capability to pathogens and increase the risk of infection. In recent years, the application of mesenchymal stem cell (MSC) therapy in the field of solid organ transplantation has attracted widespread attention. Preclinical studies have shown that MSC therapy may prolong the survival time of transplant kidney, induce immune tolerance, accelerate the repair of acute kidney injury and promote the recovery of renal function. Clinical trials have confirmed the safety, tolerance and effectiveness of MSC therapy. Consequently, general characteristics,immunomodulation and tissue repair function of MSC, and the application of MSC in clinical trials of kidney transplantation were reviewed, the unresolved issues were briefly discussed and the prospects for subsequent research were predicted, aiming to provide reference for promoting the application of MSC therapy in clinical kidney transplantation.【Key words 】 Mesenchymal stem cell; Kidney transplantation; Immunomodulation; Tissue repair; Exosome;Immunosuppressant; Rejection; InflammationDOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2023228基金项目：福建省自然科学基金面上项目（2023J01207）；中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院重点学科支撑项目（2023XKYZ01）作者单位： 350025 福州，中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院 福建省移植生物学重点实验室作者简介：谢思雨（ORCID 0009-0009-4452-2875），硕士，技师，研究方向为肾脏损伤与修复，Email ：189****************通信作者：路君（ORCID 0000-0003-2221-1872），Email ：*********************.cn第 15 卷 第 3 期器官移植Vol. 15 No.3 2024 年 5 月Organ Transplantation May 2024 作者简介：路君，现任中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院基础医学实验室主任，福建省移植生物学重点实验室主任，厦门大学、福建医科大学、福建中医药大学硕士研究生导师。
间充质干细胞在骨折病人创伤修复中的应用研究
间充质干细胞在骨折病人创伤修复中的应用研究目的探讨脐带间充质干细胞输注治疗骨折并大面积软组织挫裂伤的疗效。
方法对随机选取的该院临床骨外科30例骨折大面积软组织损伤术后患者，其中20例采用脐带来源的间充质干细胞静脉输注2个疗程。
另一组10例按术后普通治疗。
结果两个疗程后，患者愈合指标明显改善。
结论间充质干细胞输注治疗骨折大面积软组织损伤术后患者是安全的，这种新型疗法可能是治疗骨折大面积软组织损伤术后患者的一个合适选择。
[Abstract] Objective To discuss the curative effect of umbilical cord mesenchymal stem cell infusion in treatment of fracture combined with extensive soft tissue laceration. Methods Of the 30 cases of patients after fracture combined with extensive soft tissue laceration operation in the department of clinical bone surgery，20 cases received umbilical cord mesenchymal stem cell infusion for two courses of treatment，and the other 10 cases received postoperative common treatment. Results After two courses of treatment，the healing indexes of patients were obviously improved. Conclusion Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Infusion in treatment of Fracture combined with extensive soft tissue laceration is safe，and the new-style therapy may be a suitable choice of treatment of patients after fracture combined with extensive soft tissue laceration operation.[Key words] Fracture；laceration；Umbilical Cord目前对人脐带间充质干细胞培养上清液中伤口愈合检测研究的报道较少。
间充质干细胞的临床应用
干细胞治疗的未来展望
• 随着研究的深入，干细胞治疗有望在未来取得更大的突破。 目前，许多临床试验已经证明干细胞治疗在某些疾病中的疗 效和安全性。未来，随着技术的不断进步和研究的深入，干 细胞治疗有望成为治疗各种难治性疾病的常规手段。
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干细胞的免疫调节功能
• 干细胞能够调节免疫反应，抑制炎症反应和自身免疫反应 ，有助于减轻疾病症状和促进组织修复。
干细胞的旁分泌作用
•干细胞能够分泌多种生物活性分子，调节 受损组织的微环境，促进组织修复和功能 重建。
CHAPTER 05
干细胞治疗的前景与展望
干细胞来源的多样性
• 干细胞来源的多样性是干细胞治疗的重要优势之一。目前，科 学家已经从多种组织中分离出了不同类型的干细胞，包括胚胎 干细胞、脐带血干细胞、脂肪干细胞等。这些干细胞来源的多 样性为治疗各种疾病提供了更多的选择。
干细胞是一种未分化的细胞，具 有自我更新和多向分化的能力， 可以分化成不同类型的细胞，用 于修复和再生组织。
02
干细胞具有再生和修复受损组织 的能力，为许多难治性疾病提供 了新的治疗策略。
干细胞的分类
根据来源，干细胞可分为胚胎干细胞 和成体干细胞。
根据分化能力，干细胞可分为全能干 细胞、多能干细胞和单能干细胞。
。
有效
干细胞治疗已被证实对多种疾病 具有显著的治疗效果，如糖尿病
、帕金森病、脊髓损伤等。
副作用少
与传统的药物治疗相比，干细胞 治疗通常具有较少的副作用，因 为它是通过细胞替代和修复受损
组织来发挥作用的。
局限性：成本高、技术难度比较大
成本高
干细胞治疗需要大量的研发投入 和复杂的生产过程，因此成本相 对较高，目前还不能广泛普及。
骨髓间充质干细胞临床应用:与细胞移植相关的问题
骨髓间充质干细胞临床应用：与细胞移植相关的问题《中国组织工程研究与临床康复》杂志社学术部【摘要】@@ 文章导语:rn○骨髓间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能,在适宜的体内或体外环境下不仅可分化为造血细胞,还具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力.rn○骨髓间充质干细胞具有免疫调节功能,通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应,从而发挥免疫重建的功能.rn○骨髓间充质干细胞具有来源方便,易于分离、培养、扩增和纯化,多次传代扩增后仍具有干细胞特性,不存在免疫排斥的特性.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)010【总页数】2页(P1853-1854)【作者】《中国组织工程研究与临床康复》杂志社学术部【作者单位】《中国组织工程研究与临床康复》杂志社学术部,辽宁省沈阳市,110004【正文语种】中文0 引言间充质干细胞（MSCs）属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞。
骨髓间充质干细胞属于成体干细胞，成体干细胞有两个特征：一是能在很长一段时间内准确地复制自己，也就是长期自我更新；第二它能长成成体细胞类型，具有一定的形态特征和特定的功能。
成体干细胞非常少，它的主要功能是在一定程度上维持细胞的动态平衡，代替由于损伤或因疾病而死亡的细胞。
正是由于间充质干细胞所具备的这免疫学特性，使其在自身免疫性疾病以及各种替代治疗等方面具有广阔的临床应用前景。
通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能，并且可避免免疫排斥反应。
1 骨髓间充质干细胞移植的细胞准备骨髓间充质干细胞的移植是指采集间充质干细胞，然后进行培养、纯化，再回输进患者体内用以治疗疾病的一种最前沿的治疗方法。
虽然骨髓中间充质干细胞含量相对较多，仍仅占0.001%～0.01%，难以满足细胞治疗的需要，故需要在体外分离纯化，培养扩增才能满足要求。
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11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
间充质干细胞的临床应用心得
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权பைடு நூலகம்会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比