伪狂犬病活疫苗
科前伪狂犬疫苗2000株说明书
科前伪狂犬疫苗2000株说明书1. 产品名称：科前伪狂犬疫苗2000株2. 疫苗株型：本疫苗采用伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）2000株制成，该株型具有较高的免疫原性，能够刺激机体产生有效的免疫应答。
3. 活病毒含量：每头份疫苗含有≥10^7.0 lgCCID50的活病毒，这意味着在每头份疫苗中，含有足够量的病毒，可有效诱导免疫反应。
4. 疫苗用途：本疫苗主要用于猪、牛、羊等动物的伪狂犬病预防和控制。
在动物感染伪狂犬病病毒前或感染早期接种本疫苗，可有效保护动物免受伪狂犬病病毒的感染和传播。
5. 免疫程序及剂量：猪：产前5周（1次），产前3周（1次），共2次。
建议接种时按照说明书要求进行操作。
牛、羊：出生后1个月接种1次，间隔4-6周再次接种1次，共2次。
建议接种时按照说明书要求进行操作。
6. 免疫接种方法：本疫苗采用肌肉注射或皮下注射方式进行接种。
猪、牛、羊等动物接种时，应选择合适的注射部位和正确的注射方法进行接种。
接种时应遵循无菌操作原则，避免交叉感染。
7. 疫苗储存及运输：本疫苗应储存在2-8℃的冷暗处，避免阳光直射和高温。
在运输过程中，应采取适当的保温措施，以保证疫苗的效价和安全性。
8. 安全性及有效性：本疫苗在猪、牛、羊等动物中安全有效，能够诱导产生高水平的抗体和免疫细胞应答。
在正常饲养条件下，接种本疫苗的动物不会出现不良反应和副作用。
9. 注意事项及副作用：在使用本疫苗时，应注意以下几点：首先，要选用合适的注射部位和正确的注射方法进行接种；其次，接种时应遵循无菌操作原则，避免交叉感染；最后，疫苗应储存在2-8℃的冷暗处，避免阳光直射和高温。
本疫苗的副作用包括一般性副作用和严重副作用。
一般性副作用包括轻微发热、食欲不振、嗜睡等症状，这些症状通常会在短时间内自行消失。
严重副作用包括呼吸困难、四肢麻痹、共济失调、皮肤瘙痒等症状，如果发现这些症状应及时就医。
辉瑞 扑伪佳(猪伪狂犬病活疫苗)
扑伪佳产品简介：通用名：猪伪狂犬病活疫苗（Bucharest 株）商品名：扑伪佳®（PR–Vac Plus®）英文名：Pseudorabies Vaccine, Modified Live Virus（Bucharest Strain）汉语拼音：Zhu Weikuangquanbing Houyimiao（Bucharest Zhu）产品说明书：【主要成分与含量】疫苗中含有猪伪狂犬病毒（Bucharest 株）至少104TCID50/头份【性状】本品为微黄色海绵状疏松团块，加稀释液后迅速溶解【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病【用法与用量】3周龄以上猪，肌肉注射。
按瓶签注明头份，用专用稀释液进行稀释，每头猪接种1头份（2ml）推荐接种程序：-基础接种：在3周龄或3周龄以上时进行。
对于免疫母猪所产仔猪，应在母源抗体下降后（约8-12周龄时）进行-加强接种：对于种猪，每半年加强接种1次。
对于怀孕母猪，可在怀孕40日后进行加强接种【不良反应】接种后可能引起过敏反应，若发生这种情况，可用肾上腺素进行抢救，并采取辅助治疗措施【注意事项】1、仅用于接种健康猪2、疫苗不要冻结3、疫苗瓶开封后应一次用完4、使用过的疫苗瓶和未用完的疫苗应焚毁5、接种时，应执行常规的无菌操作6、疫苗中含有庆大霉素7、屠宰前21日禁止使用8、如果动物处于某些传染性疾病的潜伏期、营养不良、有寄生虫感染、处于运输或环境应激状态下或存在免疫抑制，或者未按说明书进行接种，均可能引起免疫失败【规格】10 头份（20ml）/瓶、25 头份（50ml）/瓶、50 头份(100ml)/瓶【包装】10 盒/箱【贮藏与有效期】在2～8℃保存，有效期为1 年6个月。
猪伪狂犬病疫苗及其免疫
２０２１年第６期浙江畜牧兽医猪伪狂犬病疫苗及其免疫 近年来，猪伪狂犬病病毒在国内猪场的阳性感染率居高不下，严重威胁养猪业的健康发展。
而养殖场户病急乱投医，随意选择疫苗，不按程序免疫，首免日龄不正确，甚至多种疫苗轮番使用等，免疫效果往往事与愿违。
笔者通过多年的免疫实践与调查研究，认为只要抓住伪狂犬病毒易感的关键时间节点，避开母源抗体干扰，选用高效安全疫苗，并科学掌握免疫的时机和方法，就能达到比较理想的效果。
现将具体做法介绍于下，与同行探讨。
１ 常用的疫苗种类猪伪狂犬病毒属于甲型疱疹双链ＤＮＡ病毒，虽然只有一个血清型，但毒力有强弱之分，毒株的致病性也有高有低。
近年来，我国科研团队已经分离到多个不同的毒株，证明猪伪狂犬病毒毒株已经发生变异，且不同毒株感染同一动物时，病毒可以重组，产生更强毒力的毒株，引起新的疫情暴发。
因此，对合理选择疫苗预防控制该病提出了较高的要求。
目前，有多种疫苗可用于预防控制与净化猪伪狂犬病，现简要介绍于下。
１．１ 灭活疫苗 灭活疫苗安全性较高，不易引起散毒与潜伏感染，在世界各地区都有应用。
由于其难以诱导细胞毒Ｔ细胞产生反应（ＣＴＬ），因而只会产生体液免疫，甚至不能引起细胞免疫的缺陷，同时，接种后产生的抗体滴度可随着时间的推移而逐渐下降，因此，需要重复接种，且免疫剂量较大，成本费用较高，有时还易发生过敏反应。
１．２ 自然缺失弱毒活疫苗 常规意义上的弱毒活疫苗，是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传代，加入突变剂培养而获得的疫苗。
国际上主流毒株都是Ｂａｒｔｈａ和Ｂｕｋ株。
目前，国内猪场使用较多的常规基因缺失疫苗有Ｂａｒｔｈａ株，ＳＡ２１５株，ＨＢ ９８株和ＢＵＫ株等。
其中，广泛使用的是ｇＩ／ｇＥ双基因缺失ＰＲ弱毒冻干活疫苗（Ｂａｒｔｈａ ｋ６１。
也叫ｋ６１）。
一般而言，自然基因缺失弱毒活疫苗，仍有良好的免疫原性，且安全性高，价格又低廉，一直在防控中发挥着重要作用。
但缺点是主要的毒力基因ＴＫ基因没有缺失，有可能导致返强而致该病重新流行，同时还存在造成潜伏感染或向未免疫生猪散毒的可能性。
猪场伪狂犬病疫苗的最佳免疫时机应该是什么时间
猪场伪狂⽝病疫苗的最佳免疫时机应该是什么时间猪伪狂⽝病是由伪狂⽝病病毒(Pseudrabies virus, PRV)所引起的猪的⼀种病毒性传染病。
猪伪狂⽝病毒被确认为猪甲型疱疹病毒，为双链DNA病毒。
1902年匈⽛利奥杰斯基Aujeszky⾸次报道⽽命名，⼜称奥杰斯基病病毒。
迄今从世界各地分离的毒株虽然毒⼒有强弱之分，毒株的致病性有差异，但均呈现⼀致的⾎清学反应，即只有⼀个⾎清型。
我国有多个研究团队分离到⾄少4个不同的变异毒株，对出现的变异毒株进⾏了研究，并获得⼀些新毒株的全基因组序列。
这些变异株虽然基因有变化，但是并没有出现新的⾎清型。
不过多个变异毒株的毒⼒明显地增强。
近⼏年来，猪伪狂⽝病的流⾏⾮常普遍，导致包括母猪繁殖障碍、仔猪神经症状伴随⾼死亡率和育肥猪呼吸道症状等引起⽣产阻滞的严重问题。
分析发病的原因，从外因来说，当前较多的⼈认为是环境的感染压⼒⼤，出现了超强毒的变异株所导致。
从内因来说，猪场没有阻断病毒的循环，表现为整体猪场伪狂⽝野毒(gE)抗体的阳性率⽐较⾼。
还有引种把关不严，把阳性猪引⼊猪场。
使猪群⾯临考验；消毒﹑隔离等⽣物安全措施不到位；多数猪场只采取⼀般控制措施，未采取坚决的清除策略，猪场内野毒有循环传播的机会，使野毒（gE）抗体阳性率居⾼不下，从防疫来讲，主要是免疫不合理，造成免疫空⽩：免疫程序与疫苗特性不匹配，商品猪或者不免疫，或者免疫时机不能正确把握，免疫剂量不⾜（疫苗效价低）。
在临床实践中，虽然多数猪场是根据母猪流产、仔猪神经症状来确定伪狂⽝发病，但⾎清学检测显⽰往往是育肥猪gE转阳在先。
由于仔猪免疫的不完整或程序的偏差，或免疫量的不⾜，在⾼感染压⼒或强毒攻击下，育肥期猪群临床上出现咳嗽并⼤量排毒，同时⾎清gE抗体转阳。
⼤量野毒的扩散造成的病毒⾼压⼀旦突破母猪原有抗⼒，则引起母猪流产，继⽽仔猪发病死亡。
临床案例显⽰，有些猪场母猪即使在gB抗体⾼且⼀致的状况下，也有出现较多流产并伴随仔猪神经症状的现象。
猪伪狂犬疫苗及评估
主题策划F E A T U R E题。
很多猪场发生腹泻后取病料去检测，通过是否PED阳性、是否变异来决定选择谁家的疫苗。
很多猪场特别关心是否添加变异株PED，疫苗病毒含量有多高，也就造成前几年某公司疫苗的病毒含量是106.0 TCID50，另外一家公司疫苗的病毒含量是107.0 TCID50，A公司的疫苗是经典株，B公司的疫苗是变异株，C公司的疫苗是双毒株！但是最后很多猪场接种后还是效果良莠不齐，投诉多多。
针对PED和猪传染性胃肠炎（TGE），是否需要对仔猪进行免疫，是否需要进行口服，到底哪些因素会影响疫苗免疫效果，哪些因素制约了疫苗本身质量，需要做大量的工作，如何在猪场现场进行评估，如何通过简单的实验室检测，就知道目前的防疫漏洞，存在感染压力，需要加强免疫，减少损失，这是目前猪场最关心的问题。
猪伪狂犬病和猪瘟等疫苗免疫也有很多争议，乱象比较多。
目前猪场伪狂犬野毒和疫苗毒有一定差异性，交叉保护性如何、免疫方案和免疫程序设计、免疫效果的评估、gE和gB抗体，如何评估猪场仔猪，保育猪，肥猪感染野毒，疫苗免疫程序的设计和谁有关，如何评估效果？猪伪狂犬病疫苗免疫效果是否就是简单地看疫苗病毒含量的高低，ST细胞和鸡胚成纤维细胞培养出来的伪狂犬病毒免疫原性是否一样，目前疫苗能否防住变异株伪狂犬病毒，这些都是问题。
经常有猪场咨询猪瘟脾淋苗和牛睾丸细胞苗、ST细胞疫苗哪个免疫效果好，哪个污染少，如何免疫，免疫后检测阻断率多少才有保护，野毒造成的抗体阻断率是多少？如何判断是野毒感染的抗体，等等，其实这些问题不能够很清楚地回答。
目前从试剂盒生产单位角度如何来判断疫苗免疫后，是否有效，免疫覆盖率和野毒感染情况如何区分及如何判断，离散度分析？这里涉及到不同公司试剂盒和检测方法不同，判断标准也有差异，造成很多猪场用户不能正确评判疫苗免疫效果如何，保护率如何？这些需要广大科研人员来研究清楚，需要疫苗生产企业建立一套方案，如何从疫苗生产、疫苗佐剂和抗原、疫苗接种方案、疫苗免疫后效果评估、疫苗免疫后抗体检测各个方面进行哪些指标进行检测和评估。
不同伪狂犬病活疫苗免疫效力比较
不同伪狂犬病活疫苗免疫效力比较陈娟;喻正军【摘要】为临床科学选用疫苗,对来自三个生物制品厂的伪狂犬病活疫苗的免疫效力进行了评价.试验选取35日龄伪狂犬阴性猪20头,试验根据疫苗接种情况分为5组,分别为:免疫疫苗稀释液的对照组(第一组)、免疫进口活疫苗组(第二组)、免疫国产活疫苗组(第三组)、免疫本公司ST细胞系增殖制备活疫苗组(第四组)、免疫本公司鸡胚成纤维细胞增殖制备活疫苗组(第五组),然后进行免疫监测和效力评价,观察不同疫苗组仔猪的抗体水平后攻毒保护情况.结果显示:一次免疫后各组抗伪狂犬病毒抗体水平增长缓慢,进行二次免疫后,抗体水平迅速增加并保持较高水平.攻毒后,从身体耐受性、体温变化、体重下降率以及gE抗体水平来看,第二组疫苗B和第四组疫苗D耐受性较强,较快恢复健康,体重下降率较小且gE抗体水平较高.%Immune Efficacy of pseudorabies vaccine from three bio-factories was evaluated to provide data for the selection of this kind of vaccine in practice.Twenty 35-day pigs with both sero-geative and pathogen negative was selected and divided into five groups,the first group was the blank control,the second to the fifth group was invidually intramuscular injected with one kind of imported vaccine from a famous company,one kind of vaccine from a company in China,ST origin vaccine from our factory,CEF origin vaccine from our factory.Antibody titres and immune efficacy was monitored at two time points.The data demonstrated antibody titres for the gB fragment of pocine pseudorabies rised slowly after the first innoculation,then this certain antibody titres for gB elevated rapidly and stably after the second vaccination.Furthermore,some clinicindex,including body resistaned,temperature fluctuation,weightloss,etc.and antibody levels for gE after poison attacking was comprehensively evaluated.The result showed that there were more tolerance,more recovery,higher gE antibody and less weight losing in the second and the fourth group.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2017(051)001【总页数】4页(P15-18)【关键词】伪狂犬病;活疫苗;免疫效力【作者】陈娟;喻正军【作者单位】湖南中岸生物药业有限公司,长沙 410000;湖南中岸生物药业有限公司,长沙 410000【正文语种】中文【中图分类】S852.5伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的以发热，奇痒，脑脊髓炎为主要特征的一种烈性传染病。
猪伪狂犬病活疫苗(SA215株,扑伪优)对新流行伪狂犬病病毒具有良好的免疫保护力
文 ⊙ 周远成 畜禽生物制品四川省重点实验室 张 冰 四川华神兽用生物制品有限公司李 碧 四川农业大学动物医学院2011年至今，全国范围内的猪伪狂犬病暴发后，国内学者分离到大量新毒株，如HeN1及TJ株。
基因组分析结果表明，新毒株与以往分离的PRV毒株相比存在转换、插入和缺失变异的特点。
实验结果证实SA215对伪狂犬病经典毒株和新流行毒株均具有优异的免疫保护能力，能有效保护猪只免受猪伪狂犬病野毒的感染。
猪伪狂犬病活疫苗（SA215株，扑伪优）对新流行伪狂犬病病毒具有良好的免疫保护力2011年底河南、山东等地先后暴发猪伪狂犬病，随后迅速扩散至我国主要生猪养殖区域，给养猪业造成了巨大的经济损失。
为了研究猪伪狂犬病活疫苗（SA215株）对新流行猪伪狂犬病病毒的免疫效力，本研究对猪伪狂犬病活疫苗SA215株和新流行伪狂犬病野毒株的主要免疫保护相关基因进行遗传进化分析，使用断奶仔猪模型评价猪伪狂犬病活疫苗SA215株对猪伪狂犬病病毒和新流行毒株的免疫效力。
结果显示，猪伪狂犬病病活疫苗SA215株与流行毒株均为基因II型毒株，而我国广泛使用的疫苗毒株Bartha株则为基因I型。
使用SA215株免疫仔猪后1周即可检测到gB抗体，免疫后4周分别使用流行毒株SCHS株和经典毒株Fa攻毒，结果显示，未免疫攻毒的对照组全部发病、死亡，而免疫组未观察到伪狂犬病的临床症状。
伪狂犬病病毒（Psudorabies Virus，PRV）为疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科成员，基因组为线状双股DNA，核酸长度约150kb。
PRV可感染多种动物（35种以上），以发热、奇痒（猪除外）、繁殖障碍、呼吸道症状和脑脊髓炎为特征。
猪是PRV最主要的天然宿主，PRV感染后的临床症状与猪的年龄、免疫状态以及毒株毒力密切相关，通常情况下易感猪群年龄越小感染后发病率和死亡率越高。
PRV可以在神经细胞内复制并沿神经通路传导，猪感染恢复后PRV可以潜伏在三叉神经节中而不被机体清除，在猪免疫力下降或环境应激条件下，潜伏的PRV可被激活持续在猪体内复制并排出病毒。
勃林格伪狂犬
勃林格伪狂犬潜伏感染是PRV的感染特点吗？是的，PRV最主要的特征性感染特点就是潜伏感染。
PRV感染猪后，最初在上呼吸道的上皮细胞内复制，接着感染扁桃体和肺，随后病毒以自由扩散。
同时，PRV进入三叉神经和嗅神经末梢，侵入中枢神经系统。
由于猪免疫后特异性抗体和非特异性抗体均不能到达神经节内，因此进入神经系统的PRV又能被激活，不断复制增殖，到一定程度会排毒。
这就是PRV的潜伏感染过程，也是导致猪场伪狂犬病难以控制和净化的关键因素。
为什么控制猪伪狂犬病要特别重视预防潜伏感染？野毒感染猪后，病毒可潜伏于神经元、淋巴结等靶组织器官。
感染猪部不表现临床症状，但可长期带毒。
在应激或机体免疫力下降等条件下病毒重新活跃，猪只向环境排毒，感染易感动物。
弱毒疫苗可通过占位竞争力方式阻止野毒株潜伏感染，也可缩短野毒株排放时间，并降低排毒量，但要清除体内野毒需要相当长一段时间，因此，应尽早用疫苗，防止潜伏感染。
茵格发猪伪狂犬病疫苗注射免疫能过在靶组织上预先定殖，滴鼻免疫可在感染神经节定殖，相当大程度上减少野毒潜伏感染。
为什么作滴鼻免疫？猪滴鼻免疫是有德国勃林格殷格翰动物保健有限公司最早提出的免疫途径，多年的临床实践证明是非常成功的免疫途径，其优点是可以避开母原体的干扰，并在野毒感染的门户产生快递（滴鼻后2小时产生免疫保护）有效的局部免疫。
茵格发猪伪狂犬病活疫苗是经实践证明的安全有效的滴鼻免疫疫苗。
正如《猪病学》第9版中文版第475页所述：最有效的接种方式为滴鼻免疫，鼻内接种的优点表现为病毒在局部复制和粘膜免疫的建立。
获得性被动免疫存在的情况下，鼻内接种的方法优于肌肉注射，且在急性感染期可以有效控制PRV的复制和排毒过程。
是否所有的PRV弱毒疫苗都可以作滴鼻免疫？不是。
猪伪狂犬弱毒疫苗是否可以滴鼻以及滴鼻的效果受某些因素的限制，尤其是所用疫苗佐剂、疫苗毒株缺少的基因和疫苗稀释后稳定性。
要求水性佐剂（非专用佐剂会影响疫苗免疫效果，如生理盐水等），油性佐剂会影响鼻腔粘膜吸收效果和免疫效果，目前应用水性佐剂产品有：茵格发猪伪狂犬病活疫苗;弱毒疫苗株不可缺失TK基因，因为此基因缺失将减弱病毒在三叉神经节的定殖能力，从而降低弱毒疫苗的效果，要求米秒稀释后稳定性良好，在温室环境下存放2小时以上效价不降低；否则会影响滴鼻免疫功效。
伪狂犬活疫苗C株抗体消长规律及攻毒保护试验
Chinese Journal of Vete/na/Medicine中国兽医杂志2020年(第56卷)第6期111伪狂疫苗C株消长规律毒验马晶晶1,高俊锋S吴碧清1,韩相敏S张江2,赖志1(1.上海创宏生物科技公司，上海松江201619；2.上海农林职业技术学院，上海松江201699)摘要:应用中和试验法对伪狂犬活疫苗C株免疫仔猪进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种7d产生中和抗体, 42d抗体水平达到高峰,180d时抗体仍保持较高水平。
攻毒试验证实，免疫后80%免疫仔猪获得保护。
确定伪狂犬活疫苗C株免疫保护期可6个月。
关键词:伪狂犬活疫苗C株；抗体消长规律；攻毒保护试验中图分类号：S852.65+5文献标志码：A文章编号：0529-6005(2020)06—0111—03 Antidody Variety and Challenge Test of Porcine Psendorabies Vires Live Vaccine Strain C MA Jiny-jiny1,GAO JunWeny1,WU Bi-qiny1,HAN Xiany-min1,ZHANG Jiang2,LAI Zhl1(1.Shanghai Chuanghong Biotech Co.,Ltd,Shanghai201619,China；2.Shanghai Colleye of Agriculture and Forest/,Shanghai201699,China)Abstract:Neutralizing antibody test was used to monitoz antibody Stez of porcine pseudorabies virus live vaccine strain C.The results showed that the protective antibody was obtained aftez7days of inoculation and antibody Stez reached the highest aftez42days and still above protective Stez on180days.The result of chdenying test showed that80%of inoculated piglets were protected against the disease.The iomune period of porcine pseudorabies virus live vaccine strain C for piglets was concluded to be for6months.Key words:porcine pseudorabies virus live vaccine strain C；antibody va/ety；chdenge testCorresponding author:LAI Zhl,E-mail:zh/**********猪伪狂犬病(Pseudomhies,PR)是由疱疹病毒科,#疱疹病毒亚科的猪伪狂犬病病毒(Pseudom-bOsv2es,PRV)的种家畜和野生动物的以发热、奇痒髓炎为的一种传染病。
五个不同厂家伪狂犬病活疫苗免疫效果对比试验
伪狂犬病是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus ，PRV ）引起的一种急性传染病，以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征，该病毒目前仅有一个血清型。
疫苗免疫是预防和控制该病的主要手段，目前我国伪狂犬病活疫苗毒株以经典株Bartha 株为主［1，2］，Bartha 株不仅具有免疫原性强、安全高效的特点，而且使用后能区分野毒感染和疫苗免疫，为伪狂犬病的净化提供了良好的工具［3］。
通过市场调研分析，我们发现不同厂家生产的伪狂犬病活疫苗效果存在差异［4⁃6］，疫苗的选择与伪狂犬病的防控效果密切相关。
因此，本次试验从目前市场上国产和进口的伪狂犬病活疫苗中挑选了5个进行病毒含量测定和免疫试验，以评价不同伪狂犬病活疫苗的免疫效果，为该疾病的防控提供参考。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物60头4~5周龄健康仔猪，经PRRSV 、CSFV 、PRV 、PPV 和PCV2抗原检测均为阴性，且PRV⁃gB 抗体阳性、PRV⁃gE 抗体阴性，未免疫伪狂犬病疫苗，来源于广东某猪场。
1.1.2试验疫苗选择5个不同厂家生产的伪狂犬病活疫苗作为试验疫苗，分别标记如下：A 组，广东某厂猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）；B 组，进口猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；C 组，福建某厂伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；D 组，黑龙江某厂伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；E 组，湖北某厂猪伪狂犬病活疫苗（HB⁃98株）。
1.1.3检测试剂盒猪伪狂犬病毒gB 抗体ELISA 检测试剂盒和猪伪狂犬病毒gE 抗体ELISA 检测试剂盒均购自IDEXX 公司。
1.2试验方法1.2.1疫苗病毒含量测定按瓶签注明头份，用无血清培养基将每头份疫苗作10倍系列稀释，取10-4，10-5，10-6，10-7四五个不同厂家伪狂犬病活疫苗免疫效果对比试验李少辉，黄秋雪，赖月辉，牛贝贝，侯高伟，林益坤，吴文福*（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356）摘要：为临床上科学的选用疫苗，对5个厂家生产的伪狂犬病活疫苗进行病毒含量测定和免疫效果比较试验。
HB-98株”伪狂犬活疫苗将成主流？
HB-98株”伪狂犬活疫苗将成主流？•点击次数：654•日期：2014-01-02 09:16•编辑：admin•来源：养猪信息网•评论目前国际上及国内大多数伪狂犬疫苗生产厂家都用经典毒株Bartha株，如哈尔滨维科、广东永顺、硕腾、勃林格、海博莱等都是以Bartha株疫苗为主打，而以HB-98株为主打的厂家为数不多，武汉科前生物制品有限公司是其中比较典型的一家企业。
为了解“HB-98株”伪狂犬疫苗的销售情况，以及所反映的问题，养猪信息网记者联系了武汉科前相关负责人，以探知一二。
“HB-98株伪狂犬疫苗使用群体在增加”据科前内部人士透露，“目前，武汉科前的伪狂犬疫苗目前在全国销量第一，2012年我们公司猪伪狂犬活疫苗HB-98株在全国销量达到8千万销售额，加上返赠给经销商的二千多万，实际销售了一个多亿的猪伪狂犬活疫苗HB-98，在而全国第二的厂家是3千万销售额。
”据称，相比较去年，科前公司的销售额基本都是按照30-40%的增长比例增加。
科前内部人士继续解释道，“今年销量的增加，一方面是使用伪狂犬活疫苗免疫的客户群增加，这点和去年开始全国各地普遍发生猪伪狂犬病有一定关系；另一方面也反映出使用猪伪狂犬活疫苗HB98株进行治疗的客户群在增加。
”“当前流行的猪伪狂犬毒株存在一定的变异”？据记者了解，实际上武汉科前并非只生产HB-98猪伪狂犬疫苗。
科前的伪狂犬产品一共有三种，分别是猪伪狂犬活疫苗HB-98株、伪狂犬活疫苗和猪伪狂犬灭活疫苗。
那为何猪伪狂犬活疫苗HB98株最受欢迎？受访者告诉记者，原因有：1）该疫苗的种毒为我国地方流行毒株，免疫原性强；2）该毒株定向缺失了伪狂犬主要毒力基因TK，因此不存在毒力返强，对种猪和仔猪均是安全、有效的；3）该毒株定向缺失了gG基因，强化VP22蛋白和免疫趋化因子双效作用，增强体液及非特异性免疫反应；可激发机体产生很好的α和β两种干扰素及细胞免疫因子，不仅对伪狂犬病具有很好的特异性免疫，而且对其它病毒性疾病具有很好的非特异性免疫，可以显著提高猪群对疫病的抵抗力；4）自然缺失了gE基因，可用于伪狂犬病的鉴别诊断和猪群伪狂犬病的根除与净化。
伪狂犬病疫苗
从净化并根除PR角度出发应选用基因缺失 疫苗。高级别大型种猪场选用TK+gG基因及 TK+gE基因缺失株活疫苗均可，很多资料报 道及实际运用结果表明TK十gG基因缺失株免 疫效果优于TK+gE基因缺失株。
2、猪伪狂犬病活疫苗(Bartha—k61株)
天然基因缺失弱毒株，保留重要生物学功 能TK基因。免疫效果好，产生免疫力快， 可用于紧急预防接种。仔猪免疫可促进其 生长发育。
3、猪伪狂犬病灭活疫苗(鄂A株)
全病毒灭活疫苗免疫原性好。抗原含量 高，免疫效果好。灭活疫苗使用安全。
双基因缺失疫苗(HB-98株)免疫效果
外贸猪场，特别是出口到欧洲和北美地区 的外贸猪场，因为上述这些国家和地区在实施 PR根除计划，规定只能免疫gE基因缺失株， 那么这些外贸猪场只能使用gE基因缺失株疫 苗。
3、伪狂犬病疫苗参考免疫方案
活疫苗：
后备母猪：6月龄左右免疫1次，间隔1个月加 强免疫1次，产前1个月再免。 经产母猪及种公猪：1年3次免疫 母猪未强化免疫所产仔猪：7日龄内滴鼻或肌 肉注射 母猪强化免疫所产仔猪：45日龄左右肌肉注射
猪伪狂犬病双基因缺失疫苗(HB-98株)免 疫效果经研究表明，免疫后，有以下特点：
经产母猪：流产、死产、木乃伊胎数下降18 ％，健仔率提高10％；哺乳及保育仔猪成活率 提高6％。
40～50日龄仔猪免疫：免疫仔猪皮肤红润毛色
作为新型疫苗使用的活的减毒的重组伪狂犬病毒的概述
姓名：张克龙专业：动物科学院预防兽医学学号：1618305017作为新型疫苗使用的活的减毒的重组伪狂犬病毒的概述摘要：伪狂犬病病毒（PRV）是一种双链，猪源DNA病毒，其基因组大小约为150kb。
PRV具有许多非必需基因，其可以被编码异源抗原但对病毒繁殖没有有害影响的基因替代。
表达的天然和外来抗原的重组PRV能够刺激免疫应答。
在本文中，我们对当前具有控制动物中的病毒感染的可能的活减毒重组PRV和基于PRV的活载体疫苗进行概述。
简介1.1PRV背景伪狂犬病病毒（PRV）是疱疹病毒家族的一个成员，α疱疹病毒亚亚科和伪狂犬病（PR）或Aujezsky氏病的病原体。
感染PRV之后导致神经紊乱，呼吸困难，消瘦，年轻仔猪死亡，流产感染。
该病毒具有双链线性DNA基因组1.43×10 5 kb 的长度和含有独特的长区域（UL），独特的短区域（US），一个末端重复序（TRS），和内部重复序列（IRS）。
到目前为止，已经鉴定了至少11种不同的PRV糖蛋白（gB，gC，gD，gE，gG，gH，gI，gK，gL，gM或gN），并且编码这些蛋白质的基因已经测序。
PRV的必需糖蛋白包括gB gD，gH，gL和gK; 其他被可以被异源基因替代而不影响感染性或病毒繁殖，只要基本基因保持完整。
显示在关于在PRV基因组的基因插入常见的部位的示意图如图1.图1PRV基因组中用于插入外源基因的常见位点。
编码TK，PK，gG的，国电电力，GI和gE基因的基因是插入外源序列的最常见位点。
TK基因位于独特的长区（UL）内，并且PK，gG的，国电电力，GI和gE 基因基因位于独特的短区（US）内。
IR =内部重复序列; TR =末端重复序列。
附图不是按比例的。
已经研究了多价PRV疫苗的功效。
在这里，我们概括研究使用减毒重组PRV（rPRVs）作为疫苗候选的作为应用应用的进展，用于推动rPRV 载体疫苗的发展。
1.2减毒活PRV疫苗的简介重组PRV病毒最有希望改进现有疫苗和开发新的的途径以及即将开发新疫苗。
猪伪狂犬病防治措施
猪伪狂犬病防治措施引言猪伪狂犬病，又称为伪狂犬病，是一种由狂犬病病毒引起的猪类传染性疾病。
虽然其感染性较低，但一旦发生，对猪群和养猪业造成的经济损失是不可忽视的。
为了减少猪伪狂犬病的传播，减少损失，制定一系列科学有效的防治措施势在必行。
本文将详细介绍猪伪狂犬病的防治措施，以及相关的管理和监测工作，帮助养殖户更好地应对和预防猪伪狂犬病的发生。
一、疫苗接种疫苗接种是预防猪伪狂犬病最常用的措施之一，它可以有效地提高猪的免疫力，降低感染的风险。
1. 疫苗种类目前可用的猪伪狂犬病疫苗主要有活疫苗和灭活疫苗两种。
活疫苗具有良好的免疫效果，但对免疫应答弱的动物可能会产生副反应。
灭活疫苗则相对安全，但其免疫效果有限，需注意免疫程序和免疫间隔。
2. 疫苗接种时间猪伪狂犬病疫苗的接种时间一般根据猪群的生长阶段确定，常见的接种时间包括出生后、断奶后、育肥期等。
具体接种时间应根据兽医的建议和当地的防疫要求来确定。
3. 疫苗接种程序猪伪狂犬病疫苗的接种程序包括准备疫苗、选择接种方法、按照规定剂量接种等。
接种时注意卫生和消毒，确保接种器具的清洁和消毒，避免交叉感染。
二、加强养殖管理除了疫苗接种，加强养殖管理也是预防猪伪狂犬病的重要措施之一。
1. 饲养环境保持猪舍的清洁卫生，及时清理猪圈内的粪便和废弃物。
定期对猪舍进行消毒，防止病原体的滋生和传播。
同时，保持合理的通风和温度，提高猪群的免疫力。
2. 控制源头采取严格的检疫制度，对引进的猪只进行疫苗接种和隔离观察。
饲养户应加强对猪只的管理，不随意引进病死猪或病猪尸体，确保养殖场内的动物健康。
3. 营养调理合理的饲料营养配制有助于增强猪的免疫力。
饲养户应根据猪群的年龄、生长阶段和环境等因素，合理制定饲料配方，保证猪只获得充足的营养。
4. 疫情监测建立健全的疫情监测制度，定期对热点地区和养殖场进行病原体监测。
一旦发现疫情，要及时报告并采取控制措施，避免疫情扩散。
三、加强免疫监测免疫监测是及时了解猪伪狂犬病疫情和免疫效果的重要手段。
高低效价伪狂犬病疫苗免疫效果的比较
72猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2021年38卷第12期猪场兽医VETERINARY伪狂犬病是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus ，PRV ）引起的一种危害养猪业的重要疫病，PRV-gE 基因缺失疫苗接种是其有效预防措施，疫苗免疫虽能阻止临床发病，但难以完全阻止野毒感染。
2010年以来，猪的伪狂犬病在国内出现了明显反弹，部分猪场的PRV 野毒感染率明显上升，疫苗效价不足可能是其重要原因之一。
现有多种猪伪狂犬病商品疫苗，不同商品疫苗标识的每头份剂量之间存在明显差异。
鉴于疫苗免疫效果通常与其免疫剂量或效价相关，因此，比较效价差异明显的伪狂犬病疫苗的临床免疫效果无疑具有重要临床价值。
1 材料与方法1.1 疫苗PRV-gE 基因缺失弱毒活疫苗A （高效价）与B （低效价），二者每头份的标识效价分别为不小于105.5 TCID 50和103.3 TCID 50。
1.2 疫苗临床免疫在一个规模化猪场选取50头断奶空怀母猪，随机分成2组，每高低效价伪狂犬病疫苗免疫效果的比较方 伟 1,2#，杨 倩 1#，杨红杰 1，任国鑫 2，李焕荣 1，张永红 1*，周双海 1*（1.北京农学院动物科技学院，北京 102206；2.北京信得威特科技有限公司，北京 101302）基金项目：北京市农委“菜篮子”能力提升工程项目（PXM2018-014207-000051）；北京市生猪产业创新团队项目（BAIC02）作者简介：方伟，硕士，兽医师，从事兽用生物制品研制工作；杨倩同为第1作者通信作者：周双海，博士，硕士生导师，******************；张永红，教授，硕士生导师，***************组各25头，分别免疫疫苗A 与疫苗B ，4个月后进行相应疫苗的二次免疫。
仔猪在出生后35、75、120 d 分别免疫其母猪所用疫苗1次。
每次免疫剂量均为1头份。
2个试验组的猪群相对隔离饲养，免疫后全程观察猪群免疫反应与健康状况。
猪伪狂犬病活疫苗
猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）说明书和标签（一）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）说明书【兽药名称】通用名猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）商品名喜可净英文名Swine Pseudorabies Vaccine, Live（Strain Bartha K-61）汉语拼音Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao（Bartha K-61 Zhu）【主要成分与含量】每头份疫苗中含猪伪狂犬病病毒Bartha K-61株至少105.5TCID50。
【性状】黄白色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
【用法与用量】可采用颈部肌肉注射或滴鼻途径进行接种。
所有年龄、体重和性别的猪均接种2ml（含1头份）。
采用肌肉注射途径进行接种时，可以用红色稀释液（W）或白色稀释液（A3）稀释后进行接种；采用滴鼻途径进行接种时，用红色稀释液稀释后，每个鼻孔接种1ml。
推荐的接种程序：育肥猪：在一般地区使用时，每头猪于12～13周龄时接种1头份（2ml）；在流行地区使用时，每头猪于10～11周龄时接种1头份，13～14周龄时再接种1头份。
种猪：以3～4周的时间间隔接种2次，此后，每隔4个月再接种1次，或在每次分娩前4～6周再接种1次。
在进行紧急接种时，对所有猪（包括母猪、公猪和仔猪）均接种1头份。
【不良反应】一般无可见的不良反应。
【注意事项】（1）仅用于接种健康猪。
（2）疫苗应避光保存，不要冷冻。
（3）使用前应使疫苗充分溶解。
（4）疫苗稀释后，应在1小时内用完。
（5）注射时，应使用灭菌注射器和针头，并采用常规无菌操作方法。
（6）用过的疫苗瓶器具和或未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】（1）10头份/瓶（2）25头份/瓶（3）50头份/瓶（4）100头份/瓶【包装】10瓶/盒【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为30个月。
【《进口兽药注册证书》证号】【生产企业】西班牙海博莱生物大药厂（LABORATORIOS HIPRA, S.A.）地址：Avda. La Selva, 135. 17170—Amer (Girona) Spain电话：0034972430660 传真：0034972430061仅在兽医指导下使用（二）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）内包装标签喜可净猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）10（25、50、100）头份/瓶《进口兽药注册证书》证号：批号：有效期至：【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
伪狂犬病活疫苗
伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）生产工艺规程编制人：年月日审核人：年月日批准人：年月日目录一、目的：伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）生产工艺规程的方法和程序。
二、适用范围：适用于伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的生产的全过程三、依据：《伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）制造及检验试行规程》四、责任者：生产车间、质管部。
五、正文：Ⅰ工艺流程及质量控制要点Ⅱ操作细则1、制苗材料的制备2、生产用种毒的制备3、半成品的配制4、配苗5、疫苗的分装6、疫苗的冻干7、轧盖贴标8、包装Ⅲ成品检验Ⅳ工艺卫生与人员卫生Ⅴ生产设备一览表Ⅵ包装机检查方法Ⅶ物料平衡Ⅷ劳动定员及劳动保护吉林和元生物工程有限公司GMP管理文件一、目的：规定制造伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的方法和程序。
二、适用范围：适用于伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的生产的全过程三、依据：《伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）制造及检验试行规程》四、责任者：生产车间、质管部。
五、正文：I 工艺流程及质量控制要点伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）质量控制要点II 操作细则本品系用伪狂犬病病毒弱毒株接种于鸡胚成纤维细胞收获感染病毒液，加适宜稳定剂，经冷冻干燥制成，用于预防猪、牛及绵羊伪狂犬病。
1 制苗材料的制备条件准备根据细胞制备所需物品及设备条件，进行全面准备。
按使用时间，提前做好灭菌工作后将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
操作规则细胞的制备制苗用细胞的来源发育良好的9～10日龄SPF鸡胚。
细胞制备选择9～10日龄发育良好的SPF鸡胚，先用碘酒棉消毒蛋壳气室部位，无菌取出鸡胚，去头、四肢和内脏，放入灭菌的玻璃器皿中，用汉克氏液洗涤胚体，用灭菌剪刀剪成米粒大小的组织块，再用汉克氏液洗涤2～3次，然后加%胰酶溶液（每胚4ml），～℃消化20～30分钟，吸出胰酶溶液，用汉克氏液洗涤2～3次再加入适量的营养液（用含5%～10%犊牛血清乳汉液，加适宜的抗生素适量）吹打，用4～6层纱布过滤，制成每1ml含活细胞数约100～150万的细胞悬液，分装于培养瓶中进行培养，形成单层后备用。
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伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）生产工艺规程编制人：年月日审核人：年月日批准人：年月日目录一、目的：伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）生产工艺规程的方法和程序。
二、适用范围：适用于伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的生产的全过程三、依据：《伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）制造及检验试行规程》四、责任者：生产车间、质管部。
五、正文：Ⅰ工艺流程及质量控制要点Ⅱ操作细则1、制苗材料的制备2、生产用种毒的制备3、半成品的配制4、配苗5、疫苗的分装6、疫苗的冻干7、轧盖贴标8、包装Ⅲ成品检验Ⅳ工艺卫生与人员卫生Ⅴ生产设备一览表Ⅵ包装机检查方法Ⅶ物料平衡Ⅷ劳动定员及劳动保护吉林和元生物工程有限公司GMP管理文件一、目的：规定制造伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的方法和程序。
二、适用范围：适用于伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）的生产的全过程三、依据：《伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）制造及检验试行规程》四、责任者：生产车间、质管部。
五、正文：I 工艺流程及质量控制要点伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）质量控制要点II 操作细则本品系用伪狂犬病病毒弱毒株接种于鸡胚成纤维细胞收获感染病毒液，加适宜稳定剂，经冷冻干燥制成，用于预防猪、牛及绵羊伪狂犬病。
1 制苗材料的制备条件准备根据细胞制备所需物品及设备条件，进行全面准备。
按使用时间，提前做好灭菌工作后将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
操作规则细胞的制备发育良好的9～10日龄SPF鸡胚。
选择9～10日龄发育良好的SPF鸡胚，先用碘酒棉消毒蛋壳气室部位，无菌取出鸡胚，去头、四肢和内脏，放入灭菌的玻璃器皿中，用汉克氏液洗涤胚体，用灭菌剪刀剪成米粒大小的组织块，再用汉克氏液洗涤2～3次，然后加%胰酶溶液（每胚4ml），～℃消化20～30分钟，吸出胰酶溶液，用汉克氏液洗涤2～3次再加入适量的营养液（用含5%～10%犊牛血清乳汉液，加适宜的抗生素适量）吹打，用4～6层纱布过滤，制成每1ml 含活细胞数约100～150万的细胞悬液，分装于培养瓶中进行培养，形成单层后备用。
细胞培养物应无细菌、霉菌（见《无菌（纯粹）检验标准操作规程》）和支原体（见《支原体检验标准操作规程》）污染，无特异性病变。
将细胞冻融液接种Marc-145细胞，应不出现任何病变（见《外源病毒检测标准操作规程》）。
清场和记录工作结束后，应全面清场，对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。
全面填写《生产工序记录》。
2 生产用毒种的制备条件准备根据毒种制备所需物料及设备条件，进行全面准备。
按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
操作规则制苗用病毒液的制备细胞单层培养将扩大培养的种子细胞接种到转瓶中培养，控制转速9~12转/小时。
接种取所需数量的、细胞覆盖率达到80%以上的细胞转瓶，弃去生长液，按2％（V/V）接种病毒，加入含2%胎牛血清的细胞培养液，37°C旋转（9~12转/小时）培养。
收获在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变（CPE），直至CPE达到70%以上收获细胞培养物，反复冻融1次，经离心或过滤除去细胞碎片，冻存于-40°C以下。
毒种鉴定毒标准病毒含量将毒种用无血清培养基做10倍系列稀释，取10-4、10-5、10-6、10-74个稀释度，分别接种于96孔细胞板，每个稀释度接种6孔，每孔，设置正常的细胞对找孔，放置5%CO，2 37℃下培养观察3~5日，根据Reed-Muench法计算TCID。
病毒含量应≥。
50鉴别检验/mL，取与等量呼吸综合征病毒中和试验：将毒种用无血清培养基稀释成103TCID50特异性阳性血清混合，同时设病毒对照组和正常细胞对照组，37℃作用1小时后，接种Marc-145细胞培养板，观察5日。
应不产生细胞病变（CPE）。
病毒基因鉴定应用下列引物进行RT-PCR检测，毒种可扩增出581bp的特异性条带，以而猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1-R株为代表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒以及其他猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸为阴性（猪繁殖与呼吸综合征病毒 JXA1-R株RT-PCR检测方法见附注3）。
U1 ATTTGAATGTTCGCACGGTCTCD2 CGGAACCATCAAGCACAACTCT毒力对仔猪的毒力用JXA1-R-R株毒种（≥mL）接种4~6周龄抗原猪繁殖与呼吸综合征病毒、抗体阴性仔猪（阴性猪标准见附注1）5头，每头颈部肌肉注射2mL，同时设5头阴性猪作对照，隔离饲养。
接种猪逐日测量体温，观察临床症状，均不发病（发病猪判定标准见附注2）。
对妊娠母猪的毒力用JXA1-R-R株毒种（≥mL）接种怀孕80~90天的母猪3头，每头颈部肌肉注射2mL，同时设同期怀孕母猪3头做对照，隔离饲养，观察母猪临床症状和分娩产仔状况。
怀孕母猪应不发生流产，所产仔猪的存活率与未接种对照组无统计学差异。
免疫原性取4~6周龄猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、抗体阴性猪（阴性猪标准见附注1）10头，其中5头肌肉注射JXA1-R-R株毒种2mL（mL），另5头作为对照，同条件下隔离饲养。
28日后，所有猪肌肉注射检验用强毒NVDC -JXA1株病毒培养液（病毒含量≥mL）3mL，每天测温并观察21日。
对照猪均应发病，且至少2头死亡，免疫猪应至少4头保护（发病猪判定标准见附注）。
纯净按现行《中国兽药典》进行检验，应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染。
基础种子代数82~90代。
种毒保存 -70℃下，保存期暂定为12个月。
强毒标准病毒含量将毒种用无血清培养基做10倍系列稀释，取10-3、10-4、10-5、10-64个稀释度，分别接种于96孔细胞板，每个稀释度接种6孔，每孔，在37℃下培养观察5~7日，。
病毒含量应≥mL。
根据Reed-Muench法计算TCID50对猪的毒力取8~10周龄的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体阴性猪（阴性猪标准见附注1）5头，每头猪肌肉注射检验用强毒NVDC-JXA1-R（~mL）3mL，每天测温并观察21日。
猪均应发病，且至少2头死亡。
毒种代次 5～6代。
毒种保存在-70℃以下，保存期暂定为12个月。
3 细胞系病毒培养用细胞为Marc-145，由中国动物疫病预防控制中心鉴定、保管和供应。
细胞标准培养2h即可贴壁，24h 细胞形态用含8％犊牛血清的DMEM细胞培养液，37℃、5％CO2内可长成单层。
显微镜下，细胞呈三角形、多角形、圆形等多种形态。
外源病毒检验3取2个细胞单层，每个单层至少6cm2，培养7天，每日观察细胞，应无细胞病变。
血吸附病毒检验按现行《中国兽药典》进行检验，应无红细胞吸附现象。
其它特定病毒的检验采用PCR或RT-PCR方法检测，应无BVDV、PCV、CSFV、PPV、PRV 和JEV污染。
胞核学检查对不同传代水平的细胞，取50个处于有丝分裂中期的细胞进行检查。
在基础细胞库细胞中存在的染色体标志，在最高代次细胞中也应存在。
与基础细胞库的细胞相比，所有细胞的染色体模式数不得高出15%。
核型必须相同。
致瘤性检验用无胸腺小鼠至少10只，各皮下或肌肉注射107个待检细胞，同时用Hela 细胞皮下或肌肉注射无胸腺小鼠，每只106个细胞，作为阳性对照，用鸡胚成纤维细胞作为阴性对照。
观察21日，Marc-145细胞应无肿瘤形成，阳性对照组应出现明显的肿瘤，阴性对照组应为阴性。
无菌检验按现行《中国兽药典》进行检验，应无菌生长。
支原体检验按现行《中国兽药典》进行检验，应无支原体生长。
细胞代次基础细胞应为1~10代，工作细胞代次应为10~25代，生产用细胞应在40代以内。
保存液氮保存。
保存期36个月。
4 疫苗制造及半成品检验生产用毒种制备毒种繁殖将已长成单层的Marc-145细胞倒去生长液，换以含2％毒种的细胞维持液，置37℃下培养2~3天，当70％以上细胞出现病变时收获，置-40℃冻融1次，离心后分装，然后进行鉴定。
45项进行，应符合规定。
符合上述标准的毒种作为生产用毒种。
毒种保存在-70℃下保存，应不超过12个月。
毒种继代应不超过3代。
清场和记录工作结束后，应全面清场，对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。
全面填写《生产记录》。
5 半成品的制备条件准备根据毒液繁殖所需物料及设备条件，进行全面准备。
按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
操作规则接种取所需数量的、细胞覆盖率达到80%以上的细胞转瓶，弃去生长液，按2％（V/V）接种病毒，加入含2%胎牛血清的细胞培养液，37°C旋转（9~12转/小时）培养。
收获在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变（CPE），直至CPE达到70%以上收获细胞培养物，反复冻融1次，经离心或过滤除去细胞碎片，冻存于-40°C以下。
半成品检验检验，病毒含量应≥mL。
无菌检验按现行《中国兽药典》进行检验，应无菌生长。
清场和记录工作结束后，应全面清场，对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。
全面填写《生产记录》。
6 配苗条件准备根据配苗所需物料及设备条件，进行全面准备。
按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
将检验合格的半成品于配苗前取出，融化待用。
操作规则配制将经检验合格的病毒液按比例添加蔗糖脱脂乳冻干保护剂，充分混合均匀。
清场和记录工作结束后，应全面清场，对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。
全面填写《生产记录》。
7 疫苗的分装操作内容见《分装岗位标准操作规程》。
8 疫苗的冻干操作内容见《冻干标准操作规程》。
7 轧盖、贴标操作内容见《轧盖标准操作规程》、《贴标标准操作规程》。
8 包装操作内容见《包装标准操作规程》III 成品检验见《伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）制造及检验试行规程》Ⅳ、工艺卫生与人员卫生1 定期对洁净室进行消毒，并根据沉降菌测定结果决定消毒周期。
2 操作间的卫生按各自区域的清洁消毒规程进行。
3 生产设备按各自清洁规程进行清洁消毒。
4 原辅料进入生产区按规定程序进行清洁消毒。
5 人员进入洁净区时，必须按规定进行人净。
进入洁净区程序：更鞋→脱外衣→穿普通工作服→更鞋→脱普通工作服→洗手→穿洁净服→手消毒→进入十万级洁净区→更鞋→手消毒→套洁净服→手消毒→进入万级洁净区。