生物技术制药：5-疫苗及其制备技术-2
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➢ 多联疫苗（mixed vaccine）：利用不同的微生物 增殖培养物，按免疫学原理和方法组合而成的疫 苗。接种动物后能获得相应疾病的免疫保护，一 针多防，可减少劳动力和动物应激。
➢ 1、目前已经使用的多种疫苗：有DTaP-HIB； DTaP-HB-HIB；DTaP-HIB-IPV；DTaP-HIB-IPV-HB； HA-HB；MMR；白喉破伤风联合疫苗；麻腮疫苗等。
(五）核酸疫苗
➢ DNA疫苗和RNA疫苗 ➢ DNA疫苗经直接接种体内后, 可被体细胞摄取, 并
转录、翻译、表达, 然后通过不同途径刺激机体产 生应答。由于DNA疫苗既拥有亚单位疫苗和灭活 疫苗的安全性, 又兼备减毒疫苗或重组疫苗才有的 诱导细胞免疫应答的特点, 因而受到越来越多的重 视。
DNA疫苗的构建与免疫
➢ ②另一部分蛋白抗原从分泌它们的APCs的细胞膜上进入MHC-Ⅱ类型途 径, 进入MHC-Ⅱ类呈递途径的蛋白在溶酶体中水解，产生大约20 ~ 25个 氨基酸的多肽，这些溶酶体和包含MHC-Ⅱ分子的囊泡融合，MHC-Ⅱ分 子结合合适的多肽形成MHC异聚体，成熟的MHC异聚体在细胞膜表面和 CD4+T细胞反应，引发体液免疫应答。
➢ 2、目前已经使用的多价疫苗：A+C流脑疫苗；
ACWY135流脑疫苗；23价肺炎疫苗等。
23价肺炎球菌疫苗
➢ Pneumococcal Vaccine Polyvalent 或 Pneumovax 23
➢ 包括的23种血清型为： 1,2,3,4,5,6B,7,8,9N,9V,10A,11A,14,15B,17F, 18C,19A,19F,20,20F,23F,33F.
➢ 表达载体包括：质粒表达载体、缺陷性病毒表达载体 等。
➢ 常用的接种方法有三种： ✓ ①用生理盐水稀释质粒DNA，直接注射； ✓ ②高速轰击提高疫苗DNA对组织的转染率和表达效率，
即用DNA包裹金颗粒，用基因枪射入组织的微粒轰击 法；
✓ ③是将组织预先用药物如丁哌卡因、心肌毒素和高渗 蔗糖等进行处理，以增加组织细胞对DNA的摄取和表 达能力的药物协助法。
➢ GSK的10价新疫苗 Synflorix ：GSK的Synflorix 疫苗2011年5月上市，含有获自10种不同的肺炎球 菌菌株的多糖，可覆盖抗另外3种肺炎球菌菌株 (血清型1，5，7F)
双伏威（Synflorix）
四联疫苗
➢ 2010年8月，GSK在中国新
上市了INFANRIX “英芬四
（四）联合疫苗
➢ 联合疫苗是多种疫苗抗原联合制成的。它包括两 大类，多联疫苗和多价疫苗。多联疫苗由多种病 原的抗原组成，用来预防多种疾病；多价疫苗是 包含同一种细菌或病毒的不同亚型或血清型的疫 苗。
➢ 联合疫苗的主要目的是减少注射次数的同时预防
更多的疾病。
➢ 1948年白喉、破伤风二联混合制剂获得成功，并 且与百日咳联合制成了百白破三联疫苗。
联”疫苗，可预防4种疾病， 这是目前中国市场上唯一的 “四联苗”。 ➢ Hib+百日咳+白喉+破伤风的
四联针 ➢ HIB+DPT
➢ 460元一针 ➢ 2004年FDA批准美国上市
五联疫苗
➢ 赛诺菲巴斯德的五联疫苗（DTaP-IPV-Hib， Pentaxim） 潘太欣TM 2011年6月在中国上市
DNA疫苗的免疫机理
一般将核酸疫苗的免疫机理概括为3个方面：
➢ ①DNA疫苗接种后，在非淋巴系统的组织细胞如肌细胞内表达抗原，再 被分泌或被损伤的细胞释放到组织间隙，最终被结合在游离核糖体上的 mRNA进行翻译，合成的内源性抗原蛋白其中一部分以有效的比例结合到 泛肽上，呈递到蛋白酶体，降解为多肽，通过抗原肽转运结构运送到内 质网腔，与MHCⅠ类分子以亲和吸附方式形成聚合体, 多肽MHC-Ⅰ聚合 体通过内质网进入高尔基体，最终到达细胞膜的表面，诱发CD8+的CTL 应答的产生。
RNA疫苗
➢ 由于RNA易降解பைடு நூலகம்对RNA疫苗的研究较少。 ➢ 目前的RNA疫苗主要为RNA复制子疫苗。RNA复制子疫苗是
一种基于RNA病毒的复制子，能够进行自我复制，并保留 了病毒的复制酶基因，结构基因由外源基因所代替，复制 酶可控制载体RNA在胞质中高水平复制和外源基因高水平 的表达。
➢ RNA复制子疫苗被包装成病毒样颗粒后，大大提高了稳定 性。被感染的细胞能分泌释放抗原，刺激B细胞生成抗体。 同时，抗原被抗原递呈细胞摄取，在内体被降解成为肽段， 与MHCⅡ类分子结合，经高尔基体运至细胞表面，被含有 TCR/CD3复合物的CD4+T细胞识别，发挥体液免疫作用。
➢ 可同时预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎 和b型流感嗜血杆菌感染等5种疾病.
➢ DPT+Polio+HiB
六联疫苗
GSK 继续开发的INFANRIX hexa
中国未批准上市 Combined Diphtheria-Tetanus-acellular Pertussis (DTPa), Hepatitis B, Inactivated Poliovirus and. Haemophilus influenzae type b Vaccine
➢ 1996年欧洲批准使用甲乙肝炎联合疫苗， ➢ 目前，国外的六联苗已经上市，七联苗也在研发
中
➢ 单价疫苗（univalent vaccine）：利用同一种微生 物（菌）毒株或同一种微生物中的单个血清型 （菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗。
➢ 多价疫苗（polyvalent vaccine）：利用同一种微 生物（菌）毒株或同一种微生物中的多个血清型 （菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗
• ③也有一部分抗原多肽递呈给B细胞，使B细胞自身活化， 产生特异性抗体，诱发体液免疫。另外递呈后的CD4+限 制性T细胞（Th）活化、增殖可产生多种细胞因子，进一 步促进和强化体液免疫和细胞免疫。核酸免疫后，还可以 使肌细胞和抗原递呈细胞被感染，从而使CD4+和CD8+细 胞亚群活化，产生特异的免疫应答。
How does it work?
（六）治疗性疫苗
➢慢性持续性感染 ➢认知性疾病 ➢自身免疫病 ➢肿瘤
➢ 1、目前已经使用的多种疫苗：有DTaP-HIB； DTaP-HB-HIB；DTaP-HIB-IPV；DTaP-HIB-IPV-HB； HA-HB；MMR；白喉破伤风联合疫苗；麻腮疫苗等。
(五）核酸疫苗
➢ DNA疫苗和RNA疫苗 ➢ DNA疫苗经直接接种体内后, 可被体细胞摄取, 并
转录、翻译、表达, 然后通过不同途径刺激机体产 生应答。由于DNA疫苗既拥有亚单位疫苗和灭活 疫苗的安全性, 又兼备减毒疫苗或重组疫苗才有的 诱导细胞免疫应答的特点, 因而受到越来越多的重 视。
DNA疫苗的构建与免疫
➢ ②另一部分蛋白抗原从分泌它们的APCs的细胞膜上进入MHC-Ⅱ类型途 径, 进入MHC-Ⅱ类呈递途径的蛋白在溶酶体中水解，产生大约20 ~ 25个 氨基酸的多肽，这些溶酶体和包含MHC-Ⅱ分子的囊泡融合，MHC-Ⅱ分 子结合合适的多肽形成MHC异聚体，成熟的MHC异聚体在细胞膜表面和 CD4+T细胞反应，引发体液免疫应答。
➢ 2、目前已经使用的多价疫苗：A+C流脑疫苗；
ACWY135流脑疫苗；23价肺炎疫苗等。
23价肺炎球菌疫苗
➢ Pneumococcal Vaccine Polyvalent 或 Pneumovax 23
➢ 包括的23种血清型为： 1,2,3,4,5,6B,7,8,9N,9V,10A,11A,14,15B,17F, 18C,19A,19F,20,20F,23F,33F.
➢ 表达载体包括：质粒表达载体、缺陷性病毒表达载体 等。
➢ 常用的接种方法有三种： ✓ ①用生理盐水稀释质粒DNA，直接注射； ✓ ②高速轰击提高疫苗DNA对组织的转染率和表达效率，
即用DNA包裹金颗粒，用基因枪射入组织的微粒轰击 法；
✓ ③是将组织预先用药物如丁哌卡因、心肌毒素和高渗 蔗糖等进行处理，以增加组织细胞对DNA的摄取和表 达能力的药物协助法。
➢ GSK的10价新疫苗 Synflorix ：GSK的Synflorix 疫苗2011年5月上市，含有获自10种不同的肺炎球 菌菌株的多糖，可覆盖抗另外3种肺炎球菌菌株 (血清型1，5，7F)
双伏威（Synflorix）
四联疫苗
➢ 2010年8月，GSK在中国新
上市了INFANRIX “英芬四
（四）联合疫苗
➢ 联合疫苗是多种疫苗抗原联合制成的。它包括两 大类，多联疫苗和多价疫苗。多联疫苗由多种病 原的抗原组成，用来预防多种疾病；多价疫苗是 包含同一种细菌或病毒的不同亚型或血清型的疫 苗。
➢ 联合疫苗的主要目的是减少注射次数的同时预防
更多的疾病。
➢ 1948年白喉、破伤风二联混合制剂获得成功，并 且与百日咳联合制成了百白破三联疫苗。
联”疫苗，可预防4种疾病， 这是目前中国市场上唯一的 “四联苗”。 ➢ Hib+百日咳+白喉+破伤风的
四联针 ➢ HIB+DPT
➢ 460元一针 ➢ 2004年FDA批准美国上市
五联疫苗
➢ 赛诺菲巴斯德的五联疫苗（DTaP-IPV-Hib， Pentaxim） 潘太欣TM 2011年6月在中国上市
DNA疫苗的免疫机理
一般将核酸疫苗的免疫机理概括为3个方面：
➢ ①DNA疫苗接种后，在非淋巴系统的组织细胞如肌细胞内表达抗原，再 被分泌或被损伤的细胞释放到组织间隙，最终被结合在游离核糖体上的 mRNA进行翻译，合成的内源性抗原蛋白其中一部分以有效的比例结合到 泛肽上，呈递到蛋白酶体，降解为多肽，通过抗原肽转运结构运送到内 质网腔，与MHCⅠ类分子以亲和吸附方式形成聚合体, 多肽MHC-Ⅰ聚合 体通过内质网进入高尔基体，最终到达细胞膜的表面，诱发CD8+的CTL 应答的产生。
RNA疫苗
➢ 由于RNA易降解பைடு நூலகம்对RNA疫苗的研究较少。 ➢ 目前的RNA疫苗主要为RNA复制子疫苗。RNA复制子疫苗是
一种基于RNA病毒的复制子，能够进行自我复制，并保留 了病毒的复制酶基因，结构基因由外源基因所代替，复制 酶可控制载体RNA在胞质中高水平复制和外源基因高水平 的表达。
➢ RNA复制子疫苗被包装成病毒样颗粒后，大大提高了稳定 性。被感染的细胞能分泌释放抗原，刺激B细胞生成抗体。 同时，抗原被抗原递呈细胞摄取，在内体被降解成为肽段， 与MHCⅡ类分子结合，经高尔基体运至细胞表面，被含有 TCR/CD3复合物的CD4+T细胞识别，发挥体液免疫作用。
➢ 可同时预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎 和b型流感嗜血杆菌感染等5种疾病.
➢ DPT+Polio+HiB
六联疫苗
GSK 继续开发的INFANRIX hexa
中国未批准上市 Combined Diphtheria-Tetanus-acellular Pertussis (DTPa), Hepatitis B, Inactivated Poliovirus and. Haemophilus influenzae type b Vaccine
➢ 1996年欧洲批准使用甲乙肝炎联合疫苗， ➢ 目前，国外的六联苗已经上市，七联苗也在研发
中
➢ 单价疫苗（univalent vaccine）：利用同一种微生 物（菌）毒株或同一种微生物中的单个血清型 （菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗。
➢ 多价疫苗（polyvalent vaccine）：利用同一种微 生物（菌）毒株或同一种微生物中的多个血清型 （菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗
• ③也有一部分抗原多肽递呈给B细胞，使B细胞自身活化， 产生特异性抗体，诱发体液免疫。另外递呈后的CD4+限 制性T细胞（Th）活化、增殖可产生多种细胞因子，进一 步促进和强化体液免疫和细胞免疫。核酸免疫后，还可以 使肌细胞和抗原递呈细胞被感染，从而使CD4+和CD8+细 胞亚群活化，产生特异的免疫应答。
How does it work?
（六）治疗性疫苗
➢慢性持续性感染 ➢认知性疾病 ➢自身免疫病 ➢肿瘤