【精品】植物细胞组织培养技术实验指导书
1plant实验1 植物细胞组织培养
实验1 植物细胞组织培养1.1 相关基础知识细胞分化(cell diferentiation)指细胞后代在形态、结构和功能等发生变化的过程，归根结底是某些功能基因的开启或者关闭。
一般说来，终端分化细胞已经失去分化潜能，只具有单能性；而大部分细胞只保留了部分分化潜能，称为多能性。
对于动物而言，只有部分干细胞仍保留了分化的全能性。
而植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物细胞的全能性(totipotency)。
植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。
植物组织培养最原始的意义是指愈伤组织培养，但发展至今，其范围已经扩展至植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养：1)植株培养。
指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）作为外植体的无菌培养。
2)胚胎培养。
指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
3)器官培养。
指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。
4)组织培养。
指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。
这是狭义的组织．．．．．培养．．。
5)细胞培养。
指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
6)原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。
植物组织培养的成功与否取决于外植体的制备、无菌操作和人工培养环境。
外植体的制备是能否建成离体繁殖系要过的第一关。
所谓的外植体是指将外界生长的植物的细胞和组织经过一系列的无菌处理形成的有活性的无菌组织和细胞。
习惯上我们经常使用化学药剂处理，例如氯化汞、次氯酸盐或者抗生素等。
植物组织培养实验指导书
《植物组织培养实验指导》《植物组织培养实验指导》的相关说明一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。
二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。
其中15个课时的内容调整如下：实验一、二、五 3学时实验六 3学时实验七 3学时实验九、实验十二 3学时实验十三 3学时实验一实验室基本设备及其用途的识别一、目的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、实验室的基本结构（一）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。
设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。
安装水、电、排气等装置。
（二）接种室①无菌操作室②接种箱③超净工作台（三）培养室（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。
（五）温室（培养大棚）。
实验二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、目的认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。
二、常用仪器1.蒸馏水器（学习操作）2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作）3.天平⑴药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵扭力天平（精密度1/100）⑶分析天平（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱8.显微镜和解剖镜①手提式解剖镜（学习、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：⑴精密PH4－7试纸；⑵笔型袖珍酸度计。
三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L型和T型管⑦凹面载玻片2.盛装器皿①试剂瓶②烧杯3.计量器皿①量筒②容量瓶③吸管4.其它器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
植物组织培养的实验报告_实验报告_
植物组织培养的实验报告一、实验目的1.掌握无菌操作的植物组织培养方法；2.通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3.通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；4.通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5.了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
（二）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（三）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70% 酒精、0.1% 升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、 84消毒液、蔗糖、琼脂等。
六、实验步骤。
植物细胞工程实验指导
实验一植物组织培养培养基的配制【实验目的】通过实验，掌握常用MS培养基的配制。
【仪器及试剂】1．仪器：：500 ml试剂瓶4个，100 ml试剂瓶4个，高压灭菌锅，电子天平，烧杯（大、中、小各2个），玻璃棒，移液管，搪瓷缸，培养瓶，电炉，pH计或精密pH试纸，容量瓶（大、中、小各1个）2．试剂：见MS培养基的配制方法一览表【操作步骤】1、母液的配制：为了避免每次配制培养基时都要对所需的各种成分进行称量，人们便把培养基中必需的一些物质按原量的10倍、100倍或1000倍称量后放在一起，成为一种浓缩液，这种浓缩液就叫“母液”。
①大量元素：一般配成使用浓度的10－20倍，浓度太大的母液在冰箱保存时会结晶。
除钙盐外，其它大量元素按一定倍数分别称量并分别用蒸馏水溶解后混合在一起，最后加蒸馏水定容。
钙盐要单独配制，不能和PO43-、SO42-混合，以免生成Ca3(PO4)2或CaSO4，发生沉淀。
②微量元素：微量元素因用量小，为称量方便及精确起见常配成100倍或1000倍的母液，即每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐个溶解并混合在一起。
③铁盐：微量元素中的铁盐是单独配制的，由硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）5.56克和乙二铵四乙酸二钠（Na2-EDTA）7.46克溶于1升水中配成。
每配1升培养基加铁盐5毫升。
④有机物质：主要指氨基酸和维生素物质，它们都是分别称量及分别用容量瓶配成所需浓度（0.1－10毫克/毫升），用时按培养基配方中要求的量分别加入。
这些化合物都易溶于水，直接用水配制。
⑤生长调节物质：一般配成0.1－1.0毫克/毫升。
生长素类IAA、NAA、2,4-D等，配制时先按要求浓度称好药品，置于小烧杯中，用1－2毫升0.1 N氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。
如果用少量95％的乙醇来溶解亦可，有时效果不如氢氧化钠好。
配制细胞分裂素类物质时，则宜先用少量0.5 N或1 N盐酸来溶解，然后加蒸馏水至所需量。
植物细胞组织培养技术实验指导书
T植物细胞组织培养技术实验指导书中国计量学院生命科学学院二零零六年七月《植物细胞组织培养》实验指导目录实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制实验三、康乃馨的离体快繁实验四、胡萝卜愈伤组织的建立实验五、组织培养物的继代培养实验一组织培养基母液的配制一、仪器及药品冰箱、天平（0.0001g）容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水二、方法和步骤：按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml或50 ml。
微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成 100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。
逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1 L N6培养基需吸取该母液10 ml或者1 ml。
铁盐：在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）2.78 g和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA）3.73 g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上，冷却后定容至1 L。
实验报告组培
一、实验目的1. 掌握植物组织培养的基本原理和方法。
2. 学习植物细胞全能性的概念及其在植物繁殖中的应用。
3. 培养学生的实验操作技能和科学思维。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过离体培养技术，将植物细胞、组织或器官培养成完整植株的过程。
植物细胞的全能性是指具有再分化形成完整植株的潜能。
在适宜的培养基和条件下，植物细胞可以分化成各种器官，进而形成完整的植株。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：拟南芥种子、MS培养基、琼脂糖、无菌水、消毒液等。
2. 实验仪器：超净工作台、显微镜、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、移液器、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 种子消毒：将拟南芥种子用70%的酒精消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
2. 种子萌发：将消毒后的种子接种于含有1/2MS培养基的培养皿中，置于恒温培养箱中培养。
3. 营养组织分离：待种子萌发后，选择生长良好的幼苗，用无菌剪刀将幼苗的茎尖和叶片剪下。
4. 培养基制备：将MS培养基加入琼脂糖，溶解后高压蒸汽灭菌，制成固体培养基。
5. 培养基接种：将分离得到的营养组织接种于固体培养基上，置于恒温培养箱中培养。
6. 观察与记录：定期观察培养皿中植物组织的生长状况，记录生长情况。
五、实验结果与分析1. 种子萌发：经过消毒和萌发处理后，拟南芥种子成功萌发，长出幼苗。
2. 营养组织分离：成功分离出拟南芥的茎尖和叶片。
3. 培养基接种：接种后的植物组织在适宜的培养基和条件下生长良好。
4. 生长情况：接种后的植物组织逐渐分化出根、茎、叶等器官，形成完整植株。
六、实验结论1. 本实验成功实现了拟南芥的组织培养，证明了植物细胞的全能性。
2. 通过植物组织培养技术，可以快速繁殖植物，提高植物繁殖效率。
3. 本实验为植物学研究提供了有益的参考，有助于推动植物育种和繁殖技术的发展。
七、实验讨论1. 实验过程中，种子消毒和培养基制备是关键环节，需要严格控制无菌操作。
2. 在培养过程中，注意观察植物组织的生长状况，及时调整培养基和培养条件。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养皿、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器皿的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾50g，加1L蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器皿的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器皿先将器皿中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3～4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤(一) 组培工厂的参观1．参观组培实验中心2．组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3．各室内仪器设备的种类及摆放(二) 设计一200m2组培工厂，要求绘出大概的布局图。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
1plant实验1 植物细胞组织培养
实验1 植物细胞组织培养1.1 相关基础知识细胞分化(cell diferentiation)指细胞后代在形态、结构和功能等发生变化的过程，归根结底是某些功能基因的开启或者关闭。
一般说来，终端分化细胞已经失去分化潜能，只具有单能性；而大部分细胞只保留了部分分化潜能，称为多能性。
对于动物而言，只有部分干细胞仍保留了分化的全能性。
而植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物细胞的全能性(totipotency)。
植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。
植物组织培养最原始的意义是指愈伤组织培养，但发展至今，其范围已经扩展至植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养：1)植株培养。
指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）作为外植体的无菌培养。
2)胚胎培养。
指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
3)器官培养。
指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。
4)组织培养。
指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。
这是狭义的组织．．．．．培养．．。
5)细胞培养。
指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
6)原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。
植物组织培养的成功与否取决于外植体的制备、无菌操作和人工培养环境。
外植体的制备是能否建成离体繁殖系要过的第一关。
所谓的外植体是指将外界生长的植物的细胞和组织经过一系列的无菌处理形成的有活性的无菌组织和细胞。
习惯上我们经常使用化学药剂处理，例如氯化汞、次氯酸盐或者抗生素等。
《植物组织培养》实践教学指导书教程
《植物组织培养》实践教学指导书目录实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器设备的构造及使用实验二无菌操作技术（选做）实验三接种训练实验四组培苗的移栽驯化实验五试管苗的转接与扩繁（选做）实验六生根培养（选做）实验七胡萝卜离体根的培养（选做）实验八茎尖的组织培养（选做）实验九茎段的组织培养实验十百合鳞茎的组织培养（选做）实验十一叶片的组织培养（选做）实验十二花药培养实验十三西葫芦子房的培养（选做）实验十四苹果胚（embryo）培养（选做）实验十五黄瓜下胚轴愈伤组织的诱导（选做）实验十微茎尖的剥离训练专业实训部分实训一培养基的制作实训二器官培养技能实训三果树、蔬菜、经济类植物组织培养一、果树类组织培养（一）苹果的组织培养（二）草莓微茎尖培养（三）枣的组织培养（四）树莓的组织培养二、蔬菜类组织培养（一）芦笋的组织培养（二）无籽西瓜的组织培养（三）大蒜的组织培养（四）马铃薯组织培养三、经济类组织培养（一）香石竹的组织培养（二）菊花茎段的组织培养（三）菊花微茎尖的组织培养（四）唐菖莆的组织培养（五）串红的组织培养（六）蝴蝶兰的组织培养附1：观看组织培养实验室和组培工厂化生产的录像或课件附2：组培技能考核标准实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器的构造及使用一、目的要求（一）一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护；（二）熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。
二、常用仪器设备分析天平；灭菌器；蒸馏水器等。
三、方法步骤（－）岛津进口电子分析天平的构造及使用1．构造：岛津进口电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。
2．使用：（1）调平天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内；（2）自检在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4→0，CAL，END，CAL，OFF；（3）全显示按“ON／OFF”键，液晶屏进入全显示态；（4）这时再按“ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2021.3附录培养基母液的配制〔实验老师准备〕一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进展配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大假设干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例汲取母液进展稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯〔50ml, 100ml, 500ml, 1000ml〕、量筒〔1000ml,100ml, 25ml〕、容量瓶〔1000ml,500ml,100ml〕、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制〞，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进展药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再参加第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基汲取该母液量为50ml。
（2）MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
植物组织培养技术实验指导书
《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、 Ms成分19种（N6同）2、蔗糖3、琼脂4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等）电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶（棕色）、蒸馏水二、无菌室所需物品1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式镊子（16 cm,20cm）、尖镊（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴• 3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）(15mm*145mm试管)2、电炉3、烧杯（1000ml）移液管（ 10ml、5ml、2ml、1ml）、吸球4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸（5.4-7）6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸馏水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒四、消毒剂（处理外植体）升汞（氯化汞）、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第二个因素就是培养基。
应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。
另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。
一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器•高压灭菌锅、天平、电炉2 、玻璃器皿•烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂•Ms母液（见表1-1）氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2，4-D（1mg/ml）、NAA（1mg/ml）、蒸馏水三、实验方法（一）、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。
09植物组织培养实训指导
实训一MS固体培养基的配制、灭菌及保存一、实训目的掌握MS固体培养基的配制方法。
二、设备仪器电子分析天平、托盘天平、灭菌器、电炉等。
以下按小组为单位，烧杯、棕色细口瓶（1000ml 1个、500ml 1个、100ml 1个）、量筒100ml1个、移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、定容瓶1000ml 1支、小烧杯1支、培养瓶及瓶盖10个、精密pH试纸等。
三、药品试剂MS培养基所需各种物质(见配方)，琼脂，蔗糖(或绵白糖)，0.1M NaOH溶液，0.1M HCl 溶液。
1mol／L NaOH的配制方法是称4gNaOH，溶解后加入蒸馏水，定容到100ml即可。
1mol HCl的配制方法是量取，12mol HCl 8.4ml，加水定容至100m1。
四、母液的配制1．大量元素母液在分析天平上按下表分别称取大量元素药品，置于三角瓶中，分别加蒸馏水100ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器（或电炉）搅拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中（注意CaCl2要后加，最后加蒸馏水定容至刻度，此为10倍液的大量元素母液）。
2．微量元素母液在分析天平上按表分别称取微量元素药品,按大量元素母液配制方法，配成100倍液的微量元素母液。
3．铁盐母液在分析天平上按表称取FeSO4.7H2 O和Na2 －EDTA 药品，配成100倍液的铁盐母液。
4．有机物母液：用分析天平按表分别称取甘氨酸、VB1 、Vpp、VB6、肌醇，配成100倍有机物质母液。
表1 ＭＳ培养基母液的配制实验三还需要 NAA和6-BA，请准备！！！五、MS培养基的合成1. 加热溶解先在1L的烧杯中加500ml蒸馏水，然后加入琼脂丝8g，加热并不断搅拌，直至琼脂完全溶化，透澈见底为止；再放入蔗糖22g，容解后，用量筒取大量元素母液100ml、用专用的移液管分别移取微量元素母液10ml ，铁盐母液10ml ，有机物母液10ml 入烧杯中。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书班级：园林1421、1521教师：张璐璐实训一植物组织培养室参观与设计一、目的要求通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具1 、仪器：超净工作台，空调机，蒸馏水发生器或纯水发生器，高压灭菌锅，低温冰箱、普通冰箱，电炉，显微镜，天平、恒温培养箱，烘箱等设备。
2 、用具：各种培养皿，分注器，各种实验器皿和各种器械用具。
三、方法步骤1 、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项。
2 、先由指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。
3 、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况，包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。
1 ）准备室（化学实验室）面积：20m2 左右用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，清洗及整理工作。
要求：明亮、通风设备：工作台，橱柜，水池，仪器，药品等2 ）缓冲室面积：约3-5m 2 左右用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。
设备：1 盏紫外灯，1 个配电板，石英电力时控器等3 ）无菌操作室（无菌室，接种室）面积：10-20m 2 ，视生产规模和超净工作台数量而定。
用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割，嫩枝扦插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。
要求：干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。
门窗要密闭，一般用移动门窗。
设备：超净工作台、空调机，医用小平车，操作台、搁架等。
4 ）培养室面积：视培养架多少及培养物数量而定。
用途：将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。
设备：①培养架与灯光培养架数目多少视生产规模而定，年产4万—10万苗需4—6个培养架；年产10万—20万苗约需8—10个培养架。
植物组织培养实验设计
植物组织培养一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法；2.了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（二）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（三）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验材料杉木的茎段四.实验器具高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室。
镊子、解剖刀、接种针、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿。
五.实验药品与试剂1．药品2．70% 酒精3．0.1% 升汞六.实验方法（一) 培养基的配制1.母液配制母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。
2.培养基的配制与分装3.培养基的灭菌( 二) 取材、消毒与接种杉木芽增殖①清洁超净工作台，打开风机和紫外灯，打开培养皿和培养物瓶，取出无菌苗于培养皿上，剪取杉木茎段约2cm左右接入新MS培养基，封口。
②全部接种工作都是在严格无菌条件下进行的, 所以要特别认真、仔细、以防杂菌污染。
(三) 培养与观察（1）接种完毕后取出培养瓶, 置26-28℃恒温培养室内,照光条件下培养,定期进行观察。
培养3-4周时进行观察。
（2）取出增殖培养的杉木无菌苗，最后计算增殖系数（增殖系数=增殖后的芽数/接种芽数）。
七、实验分析1. 观察植物组织培养的培养物在培养中的生长情况，5周后统计增殖系数。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L 的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
然后紫外线消毒。
2.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
3.用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
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T植物细胞组织培养技术实验指导书中国计量学院生命科学学院二零零六年七月《植物细胞组织培养》实验指导目录实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制实验三、康乃馨的离体快繁实验四、胡萝卜愈伤组织的建立实验五、组织培养物的继代培养一、实验一组织培养基母液的配制一、仪器及药品冰箱、天平（0。
0001g）容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml广口储液瓶:500ml、250ml、50ml、25ml烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺标签纸、胶水、50％酒精、95％酒精、1mol/L盐酸、1mol/LNaOH几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水二、方法和步骤：按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素培养基各种母液的配制步骤如下:分类,每一类中各种药品分别称量,如N6大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N培养基配方〉，按表中6排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍,分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水,定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液,配制培养基时，每配1L培养基需吸取该母液l00ml或50ml。
微量元素母液:因用量少，为了称量精确和方便,常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。
逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1LN6培养基需吸取该母液10ml或者1ml。
铁盐：在N6培养基中需要单独配制,它是由硫酸亚铁(FeSO4•7H2O）2.78 g和乙二氨四乙酸二钠(Na2—EDTA）3.73 g，分别溶解，混合后,用酒精灯加热半小时以上，冷却后定容至1 L。
冰箱过夜贮藏无结晶析出，否则重新配制。
每配l升N6培养基需加该铁盐母液5ml.有机物质：主要指氨基酸，维生素类物质。
它们大都是扩大1000倍，分别称量,分别定容和储存,配制培养基时按需要的量加入。
植物激素：常用的有生长素类如：2，4-D、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA)、吲哚丁酸(IBA);细胞分裂素类：激动素（KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA)、玉米素(ZT）。
配制时需要单个称量，根据需要可分别用酸、碱或酒精等不同的溶剂溶解后,再用蒸馏水配制成所需的浓度，一般为每ml含0.1-2mg，配制培养基时按所需要的量分别加入,本实验中的2，4-D和6-BA均配成1mg/ml的母液。
在配制吲哚乙酸（IAA）母液时，先用几滴95%酒精溶解完全后，加蒸馏水定容,否则会发生沉淀.而配制6—BA母液时，要用少量的1mol/LNaOH溶解;而配制2，4-D时,可先用少量的95％酒精溶解。
朱至清(1975）培养基配方表1 N6各种母液配制好后，要贴好标签,注明母液的名称，配制1 L培养基需要的吸取量、母液配制的日期,然后放入冰箱中储存。
一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上,有机物质的母液保存时间在半年以内，但若发现有沉淀或霉变，应立即需重新配制。
三、注意事项1.如药品所带结晶水不同，应进行换算。
2.因常用的MS培养基中硝酸铵（NH4NO3)属于公安部门严格限制管理的药品，所以本实验采用N6培养基替代MS培养基。
实验二培养基的配制一、仪器设备及试剂电炉天平（0。
0001g）高压灭菌锅量筒：l0ml、20ml、100ml、500ml烧杯:1000ml、500ml、250ml移液管:1ml、2ml、5ml吸管若干、记号笔三角瓶或试管、试管架锡铂纸、玻璃棒配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调节剂等，个别生长调节剂要随配随用。
蒸馏水、pH试纸蔗糖、琼脂等1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。
二、方法和步骤1量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，如要配l升培养基,先量取约700ml体积的水.2根据培养基配方,用量筒量取所需要的各种元素的母液。
物质加入体积或重量大量元素母液（10×)100ml微量元素母液(1000×)1ml有机物质母液(1000×)1ml铁盐母液(1000×)10ml蔗糖30 g琼脂8 g吸取母液时，注意应先将几种母液按顺序排好，不要弄错以免使培养基中药品成分发生改变。
在培养不同的外植体时，应加入不同的激素，如本实验中培养康乃馨侧芽或茎段时就加入1ml的1mg/ml的6—BA；而另一个实验胡萝卜愈伤组织培养中应加入2ml的1mg/ml的2，4-D。
加入一种母液后应先搅拌均匀，避免因不均而使局部浓度过高而引起沉淀，琼脂可于加入蔗糖调节完pH值后再加入，此时应注意搅拌,以免琼脂或蔗糖沉淀于烧杯底而炭化.加热至沸腾片断，以使琼脂充分溶解,检查时可注意烧杯内溶液是否透明。
3调节培养基的pH值,用pH计或pH试纸测定培养基的pH按照培养材料的要求分别用1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液来调节所配制培养基的pH值，一般培养基的pH值约为5.8，培养的材料不同,对培养基的pH值要求也不同。
4分装将配制好的培养基分别装在事先洗净的三角瓶，用锡铂纸封口，注明标签，然后和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶装好的蒸馏水一道进行高压灭菌.5培养基的灭菌一般用手提式医用高压锅来灭菌（方法略），本实验采用全自动高压灭菌锅.6培养基的保存消毒过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，一般应在消毒后的两周内用完，最好不要超过一个月。
三、注意事项激素应在调节pH之前加入，因为有些激素是用酸或碱溶解的，在调节pH好之后加入会改变pH值.pH过酸或过碱对培养基均是不利的，会导致过软或过硬的结果，从而影响培养质量。
在本次实验中将下次实验所需的其它材料一同灭菌处理。
实验三康乃馨的离体快繁一、仪器设备和试剂超净工作台、带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水+1mg/L6-BA培养基N6剪刀、枪型镊子量筒、酒精灯、滤纸、蒸馏水、小刷子95%乙醇、70%酒精、70％酒精棉球、0。
2%升汞、甲醛、高锰酸钾、来苏尔纱布、棉塞、牛皮纸、才培纯、肥皂、酒精喷壶植物的嫩茎、侧芽、茎尖、叶片、花、愈伤组织上的不定芽、胚状体、试管苗等二、实验材料康乃馨枝条三、方法和步骤1外植体灭菌取从市场上购买的康乃馨枝条,去掉大的叶片，剪取带腋芽的节结，用肥皂（洗洁精）清洗表面,再用自来水冲洗30-60分钟，然后在无菌室（超净工作台）内用70％酒精浸没20-40秒钟(根据材料的木质化程度掌握具体的浸没时间。
用0.2%的升汞溶液浸泡10—15分钟，再用无菌水冲洗3—4次，放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。
2接种先进行无菌室内消毒，用紫外灯照射30—45分钟，地面用低浓度的来苏尔溶液消毒，紫外灯关闭约20分钟后方可进去工作。
超净工作台消毒开启无菌风开关，让无菌风吹上30—45分钟后方可工作。
并用70%的酒精棉球擦净工作台。
接种时先点燃酒精灯，镊子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。
用酒精灯上灼烧好冷却后的镊子、剪刀取出一个侧芽或小段茎，迅速打开三角瓶口,将材料才插入瓶内，注意材料上下端的极性，不能倒插。
在酒精灯边塞回锡箔纸，用记号笔在瓶体上写明日期和材料。
3培养条件：25℃光照13小时/天光强1000Lux4继代培养（见下一个实验）培养基诱导生根5诱导生根:用低浓度的吲哚乙酸或者萘乙酸或无激素的N66试管苗移栽〈参见有关其它实验〉实验四胡萝卜愈伤组织的建立一、材料和设备超净工作台或者无菌接种室+2mg/L2，4—D培养基N6带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水解剖刀、枪型镊子、刀片无病虫的胡萝卜直根数十个消毒剂0.2%的升汞溶液70％酒精、95%酒精及70%的酒精棉球l000毫升的玻璃烧杯数个、酒精灯、火柴、记号笔、小刷子(可用一次性牙刷）二、实验材料新鲜胡萝卜、胡萝卜愈伤组织三、实验步骤’1选择无伤、无病、形状较规则的胡萝卜，用小刷子在流动的自来水下洗刷胡萝卜，除净表面所有的泥屑.可以根据实验的时期，选用其它的实验材料。
2将胡萝卜切成大约40 mm厚的片段,放入100或500ml的烧杯中,倒入消毒液,将植物材料覆盖、浸泡10-30min.在灭菌过程中,在每个材料上做好标记，并对应地放在预接种的培养基边上.接种后在培养瓶上标明培养物名称和培养日期。
3在超净工作台上，倒掉消毒液,用无菌水冲洗3—5次，以便去除残留的消毒液.4取消毒过的胡萝卜放入已灭菌的带有滤纸的培养皿中，用无菌解剖刀从两端各切去10毫米，再将留下的胡萝卜直根切成一系列一毫米厚的横切片。
取其中的一片转到另一个已灭菌的带有吸水纸的培养皿中，再将每一片切成小块，使其每个小块上均包含木质部、形成层和韧皮部，外植体的大小要尽量一致。
5接种取下培养瓶的塞子(或锡铂纸），用火灼烧瓶口2 cm处，手持培养瓶呈45º角，用消毒镊子把4-8块外植体转到琼脂培养基的表面，注意把靠近根尖的一面接触培养基。
然后立即将烧过的封口棉塞或锡铂纸封住瓶口.每两次转移之间都要用酒精灯灼烧镊子,防止带菌。
6培养接种好的外植体在25℃的培养箱中，黑暗条件下培养四周左右就会形成一块较大的愈伤组织.一、实验五组织培养物的继代培养一、材料和设备材料从培养4—6周的外植体上长出的愈伤组织、丛生芽或胚状体超净工作台培养基N6+0.5mg/L2，4—DN6+2mg/L6—BA（也可以自已设计）三角瓶、带有吸水纸的成套的培养皿、镊子、解剖刀70%酒精、95%酒精及70％的酒精棉球酒精灯、火柴、记号笔、酒精喷壶二、方法步骤1取材在无菌室的超净工作台内，每次取一瓶培养物,灼烧培养瓶口约20毫米处，用灼烧冷却后的镊子和解剖刀，取出外植体或者愈伤组织放在无菌的培养皿中。
每个培养皿中约放4-6个外植体或者愈伤组织。
把每块愈伤组织分成两、三个不小于5 mm见方的小块.外植体下面向着中心的细胞常呈坏死状，不适宜作继代培养。
这些坏死的部分应当与正常的部分分离并弃去.每次操作后要去掉用过的吸水纸并重新盖上培养皿的盖子。
2继代转接将正在发育的外植体或愈伤组织转移到新鲜培养基上，接种方法同前。
转接后在培养瓶上写明培养物、培养基、日期。
长期培养的胡萝卜组织会产生大块愈伤组织。
正在发育的愈伤组织作第一次继代培养所用的实验程序与以后每隔四周转移一次建成愈伤组织系的继代培养程序相同.3实验记录将实验记录抄录于笔记本上，注明实验开始的日期、持续期、培养物的数目、污染数目和所作的不同处理。
在四星期内，每隔一星期用肉眼观察培养物，记录培养物形态的变化，培养物的生长状态、鲜重变化等，必要时作拍照记录。