蔗糖酶提取方法的研究
蔗糖酶的提取和固化
唐志远 08化生一班 0808106020
蔗糖酶的提取和固化
一：试实验目的
1， 了解酶的提取和初纯化法，掌握高速冷冻离心机的操作技术。
2， 了解固定化酶的原理和优缺点。
掌握制备固定化酶的最基本方法。
二：实验原理
酵母中含有蔗糖酶，而蔗糖酶系胞内酶，提取胞内酶时，要破碎组织和细胞，然后用一定的溶剂提取，得到的材料称为细胞抽取液。
材料不同破壁的方法不同。
我们用的菌体细胞破壁法是自溶法。
固定化酶是用物理或化学的方法使酶固定。
包括吸附法，包埋法，共价交联法等 三：试剂和器材 略。
四：实验步骤：
1， 蔗糖酶的提取 包括初提取A 液，细提取B 液。
2， 酶的固定化，主要用的是包埋法和共价交联法。
3， 固定化酶活力的测定。
（1） 制作葡萄糖的标准曲线。
（2） 酶活测定。
（3） 计算固定化酶的活力单位。
五：实验数据处理
葡萄糖标准曲线
-0.200.20.40.6
0.8葡萄糖的浓度 mg/ml
吸光度
2，酶活性的侧定
六：实验总结
本次试验主要是酶也得提取，其中在提取的过程中掌握如何使用离心机和注意事项，还有提取液的初提取和精细提取的方法。
酶的固化中让我们了解了几种常用的酶固化的原理，以及操作方法和注意事项。
最后是酶活性的测定基本上是测其吸光度，然后根据吸光度进行计算，并得出结论。
酵母蔗糖酶提取方法的研究
酵母蔗糖酶提取方法的研究生命科学学院 10级生物科学类李倩 10197022指导老师：陶芳摘要：采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶，通过抽提、30﹪乙醇分级、50﹪乙醇分级和透析，同时测定各步的蛋白质浓度和酶活，并据此计算比活、回收率和纯化倍数。
关键词：蔗糖酶提取自溶法Research on the Extraction Method of Yeast SucroseSchool of Life Sciences，Biological Sciences of grade 2,li Qian, 10197022Abstract:The autolysis extract from yeast invertase,through extraction,30ethanol fractionation and dialysis,simultaneous determination of each step of concertration of protein and enzyme avtivity,and then calculate the radio oflive,recovery and purification.Key words:yeast；extraction；autolysis method前言：蔗糖酶（Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶（Invertase),1928年Dumas等首先指出酵母菌发酵蔗糖时必须有这种酶的存在，蔗糖在蔗糖酶的作用下，水解为葡萄糖和果糖，还原力增加，又由于生成果糖，甜度增加。
按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-frutofuranosidases,EC 3.2.1.26)和从葡萄糖末端切开蔗糖的α-D-葡萄糖苷酶（α-D-glucosidases,EC 3.2.1.20)。
前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。
蔗糖酶的提取分离
蔗糖酶的发酵生产及酶学性质研究摘要：本实验酵母中蔗糖酶进行分离纯化并对酶学性质进行了初步的研究。
结果表明:酵母蔗糖酶的最适pH为5.0, 最适温度为45℃。
关键词：蔗糖酶、酶学性质1前言蔗糖酶(Sucrase, EC3.2.1.26) 又称转化酶(Invertase)。
可作用于β-1,2糖苷键,将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。
由于果糖甜度高,可用以转化蔗糖,增加甜味,制造人造蜂蜜,防止高浓度糖浆中的蔗糖析出,制造含果糖和巧克力的软心糖,还可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法。
本实验对酶的动力学性质分析, 是酶学研究的重要方面。
本研究通过一系列实验对酵母蔗糖酶的动力学性质如最适温度、最适pH、酶的固定化等进行了初步研究，更好的了解了没得性质。
2材料与方法2.1 材料与设备2.1.1 实验材料酵母、活性干酵母、壳聚糖2.1.2 试剂及配制方法葡萄糖、蔗糖、豆芽汁浸汁、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、NaOH、Na2CO3、盐酸、氨水、琼脂、酒精均为国产分析纯。
95%乙醇溶液、DEAE-Sepharose Fast Flow、1 mol/L醋酸溶液、0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH值7.3)0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液(内含0.5 mol/L NaCl溶液，pH值7.3)葡萄糖标准液配制（1mg/ml）：预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。
准确称取500mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至500ml容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。
1% 3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：酒石酸钾钠100 g溶于400 mL蒸馏水，加热中依次加入NaOH 5 g，3，5-二硝基水杨酸5 g，苯酚1 g，亚硫酸钠0.25 g，搅拌至溶。
冷却后定容至500 mL，储于棕色瓶室温保存。
10%蔗糖溶液：10g蔗糖溶解于蒸馏水中，定容至100ml0.1 mol/L pH 7.8 Tris-HCl缓冲液1%戊二醛溶液：将4 mL 25%戊二醛溶液用上述Tris-HCl缓冲液稀释至100mL 0.2 mol/L pH 4.5醋酸缓冲液：称取16.4g无水乙酸钠，溶解于800ml蒸馏水，用冰乙酸调节其ph至4.5，然后定溶至1000mL。
酵母蔗糖酶的提取实验报告
酵母蔗糖酶的提取实验报告酵母蔗糖酶的提取实验报告1. 引言酵母蔗糖酶是一种重要的酶，在许多生物过程中起着关键作用。
通过提取酵母蔗糖酶，我们可以深入了解其结构和功能，以及其在实际应用中的潜力。
本实验旨在通过一系列步骤，从酵母细胞中提取酵母蔗糖酶，并评估其活性和效果。
2. 方法和材料2.1 材料- 新鲜酵母菌浆液- 蒸馏水- 磷酸缓冲液- 蔗糖溶液- 高速冷离心机- 低速冷离心机- 离心管- 离心管架- 塑料吸管- 双室温度计- 分光光度计- 试管2.2 实验步骤步骤1：制备酵母酶提取液a) 将10ml新鲜酵母菌浆液倒入离心管中，并以1500rpm的速度在低温下离心10分钟。
b) 将上清液转移至另一个离心管中，再次进行高速离心，以去除细胞碎片。
步骤2：沉淀酵母蔗糖酶a) 将上一步中得到的上清液倒入一个含有7ml蔗糖溶液的试管中。
b) 在室温下孵育搅拌2小时，让酵母蔗糖酶与蔗糖结合形成沉淀。
c) 用低速离心将沉淀分离。
收集上清液备用。
步骤3：测定酵母蔗糖酶活性a) 在分光光度计中设置波长为540nm。
b) 取1ml上清液和1ml磷酸缓冲液混合，作为空白对照。
c) 另取1ml上清液和1ml含20%蔗糖溶液的试管中，作为实验组。
d) 在不同时间点（例如0、1、2、3、4分钟）测定两个试管的吸光度，并记录数据。
e) 计算酵母蔗糖酶的活性。
3. 结果与讨论通过以上实验步骤，我们成功地提取了酵母蔗糖酶，并可以测定其活性。
根据测定结果，我们观察到酵母蔗糖酶在一定时间范围内对蔗糖的降解表现出线性增加的趋势。
这表明酵母蔗糖酶在一定程度上具有稳定的催化作用。
通过本实验，我们还可以根据酵母蔗糖酶的活性表征其在不同条件下的稳定性、催化效率和适应性。
我们可以改变温度和pH值，观察对酵母蔗糖酶活性的影响，从而了解其最适宜的操作条件。
通过进一步的研究，我们还可以探索酵母蔗糖酶在生物制药、食品加工和能源生产等领域的应用潜力。
总结回顾：通过酵母蔗糖酶的提取实验，我们深入了解了酵母蔗糖酶的结构、功能和应用前景。
蔗糖酶制备与生化特征及应用研究进展
蔗糖酶制备与生化特征及应用研究进展刁云春1滕丕合1麻婷婷1潘世永1米运宏1，2*（1广西弘山堂生物科技有限公司，广西南宁530031；2南宁纵联科技有限公司，广西南宁，530033）摘要蔗糖酶具有水解酶和转移酶的双重性质，主要用于催化水解蔗糖链中的糖苷键。
本文介绍了蔗糖酶的来源和分类，以酸性酶和碱性酶为代表，分别阐述了两种酶的结构和催化水解蔗糖的机理，并综述了蔗糖酶在工业上的应用，为进一步拓宽蔗糖酶在食品工业中的应用范围提供参考。
关键词蔗糖酶；食品工业；催化机理中图分类号TS201.2文献标识码A文章编号1007-7731（2023）23-24-0146-05蔗糖是使用较为广泛的糖类，其甜味纯正，无不良口感，作为天然甜味剂被广泛应用在食品、医药等领域。
甘蔗和甜菜是制备蔗糖的主要原料[1]。
人体不能直接吸收蔗糖和多糖等物质，须在体内水解转化为单糖（如葡萄糖、果糖等）才能被充分吸收利用。
因此，研究蔗糖的水解有利于甘蔗等糖料资源的充分利用。
蔗糖酶是催化蔗糖水解成果糖和葡萄糖的一种酶，目前与蔗糖酶相关的文献报道较多。
米运宏等[2]利用蔗糖酶制备出高果糖浆；梁鹏等[3]介绍了蔗糖酶、蔗糖异构酶和β-果糖基转移酶等多种延伸蔗糖产业链的相关酶；刘丽娜等[4]对微生物葡聚糖蔗糖酶进行了详细论述，该酶有助于提升通过蔗糖合成葡聚糖和功能性低聚糖的产量。
国外对于不同来源、不同类型蔗糖酶的报道也较多，Manoochehri 等[5]统计出来源于动植物、真菌和细菌等在内的50多种蔗糖酶，其本质属于糖苷水解酶，主要功能是催化蔗糖水解得到葡萄糖和果糖[6]，以及两者等比例混合的转化糖浆，该反应也可通过酸水解发生。
GF ¾®¾¾¾¾¾蔗糖酶G +F 或GF ¾®¾酸G +F 式中，GF 代表蔗糖，G 代表葡萄糖，F 代表果糖。
其中，酸水解通过在高温高压下加入酸性物质使蔗糖水解为葡萄糖和果糖，此方法工序复杂、副产物多且效率低，限制了其在工业上的应用[7]。
生化综合实验-酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究
酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究一、蔗糖酶的制备1、提取称取14.997g干酵母粉于250ml小烧杯中，少量多次地加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
成糊状后加入1.499g乙酸钠、25ml乙酸乙酯，搅匀。
再于35℃恒温水浴中搅拌30min，然后补加30ml蒸馏水，搅匀，盖好，于35℃恒温过夜。
之后，1000r/min离心10min，抽取酯层后再次离心，得到无细胞提取液。
用1M HCl将其PH调至5.0，即可得到级分Ⅰ。
（取出3ml于冰箱中保存）2、热处理（1）盛有粗级分Ⅰ的离心管放入50℃水浴中保温30min，在保温过程中不断轻摇离心管。
（2）取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用4℃，1000r/min离心10min。
（3）上清液即为热级分Ⅱ。
（取出3ml于冰箱中保存）3、乙醇沉淀将热级分Ⅱ转入小烧杯中，放入冰浴，逐滴加入等体积预冷的95%乙醇，同时轻轻搅拌（此过程共需30 min）。
然后在冰浴中静置10 min，以沉淀完全。
然后4℃，1000r/min离心10min。
倾去上清，并滴干。
将沉淀保存于离心管中，冷冻保存，此即级分Ⅲ。
二、蔗糖酶的纯化将3ml级分Ⅲ加入洗脱柱中进行梯度洗脱。
及洗脱峰图如下：三、蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定（一）还原糖含量测定1、各级分稀释倍数的确定级分Ⅰ：取50μl稀释至1.5ml（30倍）级分Ⅱ：取50μl稀释至1.5ml（30倍）级分Ⅲ：取50μl稀释至15ml（300倍）取20μl稀释至2ml（100倍）释100倍。
在上述表格中，Glu含量是由标准曲线求得的，E'=Glu含量*稀释倍数/（10 min*0.6 ml）Units=0.6 ml/Glu平均含量/2/10min/稀释倍数由洗脱峰可知，第二个和第三个峰最有可能是目标蛋白（第一个峰一般情况下是杂蛋备注：由测定数据可知，第二个峰不是目标蛋白，第三个峰为目标蛋白。
（二）蛋白质含量测定1、各级分稀释倍数的确定由以上数据可知，级分Ⅰ和级分Ⅱ不需稀释，级分Ⅲ需稀释5倍。
酵母蔗糖酶的提取方法
酵母蔗糖酶的提取方法摘要：采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶，经质量分数50%的乙醇分级沉淀、MonoQ阴离子交换柱层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶。
比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。
纯化的酶经等电聚焦测定，等电点为5.6，SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。
以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol／L。
结果显示3种提取方法各有优劣，冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。
其中SDS抽提法的效率最高，加之其操作简便，更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。
关键词：酵母；蔗糖酶；提取；纯化蔗糖酶(Sucrase，EC 3．2．1．26)又称转化酶(Invertase)。
可作用于B一1，2糖苷键，将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。
由于果糖甜度高，约为蔗糖的1．36～1．60倍，在工业上具有较高的经济价值。
可用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，制造含果糖和巧克力的软心糖，还可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法。
目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究较多，以甲苯自溶法最为常见。
作者采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种不同的方法从酵母中提取蔗糖酶，将冻融法和SDS法提取的蔗糖酶进一步纯化，并对其基本性质进行了研究。
通过不同提取方法的比较，为酵母蔗糖酶在食品工业中的应用和蔗糖酶基因工程产品的下游技术开发，提供了实验依据。
1材料与方法1．1材料酵母，安琪酵母股份有限公司提供；MonoQ(10／10)阴离子交换层析柱、PhastGelIEF3-9胶，Amersham公司提供。
1．2主要化学试剂和仪器十二烷基硫酸钠(SDS)，Serva公司提供；等电点标准品，Amersham公司提供；其余试剂均为国产分析纯或生化试剂。
UV一2201型紫外可见光分光光度计，Shimadzu公司制造；Waters650型高级蛋白纯化系统，Waters公司制造；PhastSystem全自动快速水平电泳仪，Amersham公司制造；高速冷冻离心机，Hitachi公司制造；冷冻干燥器，Labconco公司制造；电泳仪，Bio-Rad公司制造；精密酸度计，Orion公司制造。
蔗糖酶的提取过程的原理
蔗糖酶的提取过程的原理蔗糖酶是一种重要的酶类物质，其作用是分解蔗糖，将其转化为葡萄糖和果糖等单糖。
蔗糖酶现已被广泛应用于工业和食品加工等领域，因此对于蔗糖酶的提取过程和原理的研究十分重要。
蔗糖酶的提取原理：蔗糖酶主要是存在于细胞内的酶类物质，在提取过程中需要破碎细胞壁、细胞膜等障碍物，使酶类物质释放出来。
因此，蔗糖酶的提取过程可步骤分为细胞破碎、酶的提取、分离纯化等环节。
细胞破碎细胞破碎是蔗糖酶提取的第一步，其目的是将细胞壁、细胞膜等保护层破碎，以便获得高含量的酶液。
细胞破碎主要有三种方法：物理方法、生物方法、化学方法。
物理方法：包括高压破碎法、超声波破碎法、微波破碎法等技术，其中高压破碎法是最为常用的破碎方法，可通过高压融合，将含有酶的细胞破裂。
生物方法：是利用生物体内酶的辅助作用，通过胰蛋白酶等酶的介入，使细胞膜被破坏，从而释放出酶来。
化学方法：通过化学物质对生物组织进行不同程度的破坏，使细胞膜等基本单位出现裂缝，酶液就可以自由地流出。
酶的提取酶的提取是蔗糖酶提取过程的第二步，其目的是从破碎的细胞内提取蔗糖酶。
酶的提取常用的方法有：水解法、溶剂法、膜过滤法等技术。
水解法：是指通过水解反应从生物物质中分离有用成分的方法。
例如，将蔗糖酶浸泡在50温水中，持续2小时左右，使蔗糖酶转化成有利于提取的热变性酶。
溶剂法：即将蔗糖酶和溶剂混合，应用分离纯化技术获得有用的酶液。
溶剂法有界面法、反相分配法、油相萃取法、溶液萃取法等。
膜过滤法：是利用一定的压力，将蔗糖酶溶液通过一定孔径大小的膜片，将酶体分离纯化出来。
分离纯化分离和纯化是蔗糖酶提取过程中的最后一步，其目的是获得高纯度和高活性的酶液。
常用的分离和纯化技术有：离子交换层析法、凝胶过滤层析法、亲和色谱法等。
其，默认是将酶液溶液经某些方法处理后，将酶从其他的杂质中过滤出来，其中离子交换层析法是最为常用的手段。
在这种方法下，蔗糖酶分子通过吸附原理与活性生物载体进行相互作用，去除杂质，实现酶活性的提高和纯度的提高。
生物化学实验示范报告-蔗糖酶的提取与纯化(正确)
生物化学实验示范报告:实验名称：蔗糖酶的分离提取与纯化实验目的:1．掌握蔗糖酶分离提纯的原理与实验操作方法；2．掌握有机溶剂分级纯化蔗糖酶的原理和操作方法，了解蔗糖酶的离子交换层析法纯化原理；3．掌握酶活、酶比活等基本概念及测定原理、计算和操作方法；4．巩固并熟练掌握Folin法测定牛血清蛋白和3、5 -二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线制作方法，并能通过回归方程测定还原糖及蛋白质的含量。
实验原理：蔗糖酶分离提纯原理：酵母中的蔗糖酶含量很丰富，实验以安琪酵母粉为原料，首先采用自溶法破碎细胞壁、再用乙醇分级和DEAE—纤维素柱层析两步分离提纯，制备纯度较高的蔗糖酶制剂。
酶分离提纯的原理与蛋白质的相同。
但酶是有催化活性的蛋白质，在分离提纯过程中必须注意：防止酶变性失活；随时测定酶的比活力，并跟踪酶的去向、衡量酶提纯的程度及得率。
有机溶剂分级纯化蔗糖酶原理：利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂—乙醇中溶解度的差异将蔗糖酶蛋白与其它蛋白质杂质进行有机溶剂分级沉淀，而使提取的蔗糖酶得以纯化（32％的乙醇饱和度沉淀分离杂蛋白，47.5％的乙醇饱和度沉淀分离酶蛋白）。
操作必须在低温下进行且避免有机溶剂局部过浓；分离后应立刻除去有机溶剂并用水或缓冲溶液溶解沉淀的酶蛋白（复溶），确保酶的活性；pH多选在酶蛋白的等电点附近；有机溶剂在中性盐存在时能增加蛋白质的溶解度减少变性，提高分离效果。
蔗糖酶的离子交换层析法纯化原理：本实验采用DEAE-纤维素（DEAE-C11）微粒状的、弱碱性的阴离子纤维素为柱料，进行蔗糖酶的进一步纯化。
它具有分辨率高、化学性质稳定、有开放性的长链结构、有较大的表面积、对蛋白质的吸附容量大等优点；纤维素上离子基团的数量不多，排列疏散，对蛋白质的吸附不是太牢固，用缓和的洗脱条件即可达到分离的目的，不致引起蛋白质的变性。
蔗糖酶活力与比活的测定：在蔗糖酶的纯化过程中，通过3、5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化蔗糖生成还原糖的量，测定酶活力大小，跟踪酶的活力。
蔗糖酶的分离提纯
蔗糖酶的分离提纯【实验目的】1．了解蔗糖酶分离提纯的方法。
2．掌握离心技术、电泳技术、层析技术、膜分离技术和分光光度法。
【实验原理】蔗糖酶[Ec 3．2．1．26]习惯命名β--D--Fructofuranosidase 系统命名：β--D —Fructofuranosideffructonydrolase 。
蔗糖酶是一种水解酶，能使蔗糖水解为果糖和葡萄糖。
它所催化的反应是：H OH OH H蔗糖+H OH OH H 葡萄糖 果糖蔗糖酶的分布相当广，在微生物、植物及动物中都有它的存在。
在微生物中，酵母中的含量很丰富。
在研究中用的最多的是面包酵母和啤酒酵母。
研究表明采用菌体自溶法破碎酵母细胞，采用乙醇分级和DEAE--纤维素柱层析两步分离提纯步骤，就可制备纯度较高的蔗糖酶制剂，而且收率也较好。
从酵母中制备蔗糖酶，材料来源十分方便，而且以自己提纯的酶制剂进行蔗糖酶的性质、动力学研究也十分方便。
【实验材料、仪器和试剂】 1．实验材料和试剂(1)0．2％葡萄糖标准液；(2)3，5-二硝基水杨酸试剂；(3)新鲜啤酒酵母； (4)甲苯；(5)乙酸钠；(6)稀乙酸溶液；(7)95％乙醇；(8)DEAE--纤维素；(9)0.5mol ／L NaOH ；(10)0.5mol ／L HCl ；(11)0.005mol ／L ，pH6.0的磷酸钠缓冲液；(12)含O.15mol ／L NaCl 的O.005mol ／L ，pH6.0的磷酸钠缓冲液；CH 2OHH OHHHOHCH 20H(13)5％蔗糖；(14)测定蛋白质浓度试剂；(15)聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂2．仪器(1)恒温水浴；(2)烧杯、量筒、移液管、容量瓶、玻棒；(3)冰盐浴；(4)离心机；(5)721型分光光度计；(6)柱层析装置；(7)天平；(8)pH计；(9)滴管、试管和血糖管；(10)秒表【方法】一、葡萄糖浓度标准曲线的制作1．取10支血糖管，按下表加入0．2％葡萄糖溶液、水及3，5一二硝基水杨上述试剂混匀后，在沸水浴中加热5min，取出立即冷却，以蒸馏水稀释至25mL，摇匀，于540nm测光密度。
实验蔗糖酶的提取
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四．其他 １．上实验课请不要迟到早退，如有事请向任课老师事先请假或
事后说明。 ２．在实验室里上课时不要玩电脑游戏。
３．进入实验室要衣着整洁，要求穿实验服做实验，不能穿拖鞋
进实验室做实验。实验过程中不要随便串走，保持安静，不
6．严禁在实验室吸烟。
7．禁止在实验室用电炉或明火取暖。
8．实验时，应保持桌面的整洁不乱；实验结束后，应将自己的桌 面收拾干净方可离开实验室。
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9．在每次实验结束后，安排卫生值日的同学应自觉地完成以下
工作：
⑴ 收理实验用试剂、器材和仪器。
⑵ 将实验桌上的废液缸中的废物倒掉洗净，并把桌面擦干净。 ⑶ 把使用过的仪器及仪器桌面擦拭干净。 ⑷ 把实验室的地面扫清拖净。
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二．实验仪器使用
1．学生实验使用仪器前，应在教师讲解了使用方法后，或在已学会
如何使用的情况下，方可自己单独操作有关仪器；如违反操作规程， 将仪器损坏，应由当事人按规定处理。
2．仪器如果以小组为单位共同使用，某一同学如出现不当操作损坏 仪器，则以小组为单位共同赔偿损失。
3．如因教师没有讲解好仪器的使用方法等原因造成学生损坏仪器， 应由教师负全责，并按规定处理。
录。请保存好，实验结束后上交，作为实验报告成绩的一部分！
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实验成绩
1、实验报告成绩（纸质版） 70％ 2、实验平时成绩 30％
(1)到课情况（签到、迟到、早退和请假） (2)实验操作，器材、仪器使用 (3)值日情况 (4)实验预习、实验过程和实验记录（实验记录本）
酵母蔗糖酶的分离提取
酵母蔗糖酶的分离提取作者：XX 指导老师：XX摘要：采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶，即在一定PH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎再通过乙醇的分级与透析，得到纯化的酵母蔗糖酶。
本实验也通过考马斯亮蓝G250染色法，测定蔗糖酶的活力和蛋白质浓度，对蔗糖酶的性质进行了研究。
最后的纯化倍数为2.8倍，所得产率为36.85%。
关键词：蔗糖酶，分离提取，酶活力，蛋白质含量前言：蔗糖酶又称转化酶，可作用于β-1，2糖苷键，将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。
蔗糖酶在工业上用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，还用来制造含果糖和巧克力的软心糖等。
蔗糖酶在畜牧方面，可防治禽兽的疾病，促进幼龄禽兽的发育，节约饲料和提高肉产量等；在农业方面可防治植物病害、刺激植物生长、提高作物产量；在工业上可用作鱼、肉、蔬菜和水果等食品的保鲜剂，同时也在植物的运输贮藏、碳水化合物代谢中发挥主要作用，并在渗透调节、抗逆性生长繁殖、以及信号传导方面也发挥着重要的作用。
目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究较多，以甲苯自溶法最为常见。
本实验采用自溶法从酵母中分离提纯蔗糖酶，通过测定得到的蔗糖酶的活力及蛋白质的含量。
1.材料与方法1.1试剂酵母粉（实验室提供），醋酸钠(0.5g)，乙酸乙酯（8ml），10%醋酸，无水乙醇，1mol/LNaOH，蒸馏水，PH=4.7缓冲液，DNS试剂，0.9%NaCL，考马斯亮蓝G-250，系列标准蛋白液，150mol/L 磷酸等。
1.2器材离心机，722分光光度计，水浴锅，量筒25ml，烧杯100ml，大小试管若干，各种专用移液管，吸耳球，玻离棒，胶头滴管，PH试纸等。
1.3操作方法1．3.1蔗糖酶粗品制备方法(1)自溶法将5g酵母粉倒入500mL烧杯中、少量多次的加入15mL蒸馏水，搅拌均匀，成糊状后加入0.5g乙酸钠、8mL乙酸乙酯，搅匀，盖好，于35℃恒温水浴中搅拌30min。
浙江工业大学生物化学实验论文 - 对啤酒酵母的蔗糖酶的提取提
浙江工业大学生物化学实验论文 - 对啤酒酵母的蔗糖酶的提取、提浙江工业大学生物与环境工程学院生物化学实验论文姓名：组员：学号：学品科学与工程所在院系：生物与环境工程学院指导教师：邱乐泉2021 年12 月 1日填科：食啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文摘要：为了解酶的初步提取及纯化方法，并在此基础上掌握测定酶活力的原理和方法；用Folin-酚试剂、微量凯式定氮法测定蛋白质含量的原理和方法，SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量。
除此之外，还要掌握高速离心机、Q-Sepharose柱层析法、紫外分光光度计、凯氏定氮仪、蒸馏装置、电泳等用法。
这一系列实验需要实验预制作――酵母的自溶，大约3天以后，酵母细胞壁破裂，胞液流出，经多次分别离心得到初提液A、热提液B和乙醇提取液C。
利用Q-Sepharose柱层析法洗脱乙醇提取液C得到洗脱液D并在280nm处测D的吸光值，用葡萄糖测验试纸定性进行酶活力测试，发现洗穿透峰得到的第1、2管酶活力高，从第3管以后吸光值开始下降，且吸光值大的酶活力较大。
得到4种酶提取液样品以后，便可以制作葡萄糖标准曲线，进行定量酶活力测定，葡萄糖标准曲线是一条直线，根据曲线回归方程计算4个样品的总活力单位数和酶回收率，比较计算结果可以知道随着蔗糖酶的不断提纯酶的总活力单位数和酶回收率都减少。
随后用Folin-酚试剂法测样品中蛋白质的含量，与用微量凯氏定氮法测定的结果进行比较，后者测出的总蛋白含量比前者大，并且知道随着酶的提纯，A、B、C、D4个样品的纯化系数升高，比活力升高，总酶活、总蛋白和蛋白回收率却在下降，其中A的蛋白质含量最高，D的纯化程度最高。
最后用SDS-聚丙烯胺凝胶电泳法通过凝胶对样品的筛选分离、考马斯亮蓝的染色、洗脱等步骤测量蛋白质分子和染料的迁移距离间接测定蔗糖酶的相对分子质量，得到2条蔗糖酶条带，计算的蔗糖酶相对分子质量。
关键词：蔗糖酶；提取纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定氮法；SDS-聚丙烯胺凝胶Summary：To understand the the enzymes preliminary extraction and purification methods, and on this basis to master the principles and methods of determination of enzymeactivity; Folin-phenol reagent, trace Kay ceremony will be the principles and methods of nitrogen determination of the protein content, SDS-PAGE protein determination of therelative molecular mass. In addition, we must master the use of high-speed centrifuges, Q-Sepharose column chromatography, UV spectrophotometer, Kjeldahl instrument, distillation apparatus, electrophoresis.This series of experiments requires experimental pre-production - yeast autolysis, about three days later, the yeast cell wall rupture, cytosolic outflow to the beginning of extracts A, after repeatedly respectively centrifugal heat extracts B and ethanol extract C. Using Q-Sepharose column chromatography to obtain an eluate D eluted ethanol extract C and the absorbance value of the 280nm measured at D, the enzyme activity test, and found to penetrate wash peak obtained with glucose tests stripsqualitative 1,2 tube enzyme activity began to decrease from the absorbance values after 3 and suck the light value greater enzyme activity. Later to obtain four kinds of enzyme extraction fluid sample, it can produce a standard curve of glucose, quantitative enzyme activity assay, the glucose standard curve is a straight line, according to the regression equation to calculate the number of units and enzyme recovery of the total activity of the four samples, and comparing the calculated results You can know are reduced as thenumber of units of the total activity of the purified enzyme sucrase continues and enzyme recoveries. Followed by the protein content in the measured samples of the Folin-phenol reagent method, micro Kjeldahl nitrogen method resultswere compared, which measured the total protein content than the former, and know with the purification of the enzyme, A, B, C, D4 samples purified coefficient increases, increased specific activity, the total enzyme activity, total protein and protein recovery is on the decline, wherein A is the highest protein content, D, the highest degree of purification. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis gel sample screening separation test brilliant blue staining, elution step measurement of protein molecules and dye migration distanceIndirectdetermination of the relative molecular mass of sucrase get two thesucrase strip sucrase relative molecular mass, the calculatedKeywords: sucrase; extraction and purification; enzyme activity assay;Folin-phenol reagent; micro-Kjeldahl method; SDS-polyacrylamide gel 正文：1、文献综述 1.1蔗糖酶(Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶(Invertase)，可作用于β21,2糖苷键,将蔗糖水解为D2葡萄糖和D2果糖[1]。
蔗糖酶-酶工程实验
y = 0.0061x + 0.0827 y——蛋白质含量（µg/ml） x——595nm 下光吸收 四、实验结果及计算
步骤
提取(I) 热处理 沉淀(II) 乙醇沉 淀(III)
总体积 单位体积活 总活力 （mL） 力（IU/mL） （IU）
总蛋白 （mg）
比活力
纯化 产率
（IU/mg 蛋白） 倍数 （%）
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
将各管溶液混匀后，在 100℃恒温水浴加热 5 分钟，取出立即用冷水冷却至室温
H2O
（ml）
7
7
7
7
7
7
将各管溶液混匀
7号 0．．.3．5． 0.70 1.30 1.0
7
A520nm 每步收集的酶液应进行一定倍数的稀释，先试做，选其吸光度值在 0.1-1.0 内，即还原糖含量应在 0.08~1.2
【实验一】蔗糖酶的提取（实验分组：4 人）
1.实验学时：6； 2.实验目的：掌握蔗糖酶提取的流程。 3.实验内容：沉淀、透析，及活性测定。计算酶的提取效率。 4.实验要求：理解影响酶提取的基本原理，掌握沉淀、透析等方法、影响实验结果的重要因素、掌握 数据的分析方法。 一、实验原理： 1、蔗糖酶 酵母细胞存在两种蔗糖酶，一种在细胞壁中，一种在细胞质内，前者活力较高，分子量较大（约 270KDa），后者活力较低，分子量约为 135KDa，两种酶的底物专一性和动力学性质十分相似，因此，本 实验未区分内酶与外酶。 2、蔗糖酶的初步分离纯化 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯。
【实验二】蔗糖酶的固定化及固定化酶性质的测定
1.实验学时：4 2.实验目的：掌握蔗糖酶固定化方法。 3.实验内容：采用包埋法固定蔗糖酶，并测定固定化效率。 4.实验要求：理解酶的固定化原理，掌握蔗糖酶固定化的方法、实验中影响实验结果的重要因素、掌 握数据的分析方法。
实验1 蔗糖酶的提取
三、实验材料与试剂
1、实பைடு நூலகம்材料 市售干酵母粉 10g/组(3～4人）
2、实验试剂
⑴ 石英砂，
⑵ 95% 乙醇(-20℃），
⑶ 20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 四、实验器材与仪器 1、电子天平（称量样品）； 2、研砵（每组一套）； 3、50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）； 4、托盘天平（离心管平衡用）； 5、高速冷冻离心机； 6、恒温水浴箱（50℃）； 7、制冰机； 8、1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架 ； 9、7ml离心管（留样品Ⅲ用）及离心管架 ； 10、－20℃冰箱。
五、实验操作方法和步骤 分组操作：每组3～4人。
1、酵母细胞破碎
称取市售干酵母粉10g，约3-5 g石英砂放入研钵中直接干燥充分研磨
至尽可能成细粉末状（约15分钟），量取总体积30-40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加在研砵内研磨10分钟，使呈糊状液体； 将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后，4℃、 12000r/min离心15分钟，收集上清液并量出体积V1（样品I）,另留1ml 上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存，用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖 酶活力测定和SDS-PAGE分析。 2、热处理： 将上一步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴中，保温30分钟，并
用玻璃棒温和搅拌抽提液，保温后迅速用冰浴冷却5分钟，转移至两支
50ml离心管中，平衡后， 4℃，15000r/min离心15分钟，收集上清液 并量出上清液体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃ 冰箱保存，用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。
酵母中蔗糖酶提取
实验酵母蔗糖酶的提取一、实验目的：1、学习酶的纯化方法，酶蛋白分离提纯的原理。
2、学习掌握细胞破壁、有机溶剂分级、透析和离子交换柱层析技术及分子筛层析技术。
3、学习独立设计实验应遵循的原则二、实验原理：蔗糖酶主要存在于酵母中，但工业上通常从酵母中制取。
酵母蔗糖酶系胞内酶，提取时细胞破碎或菌体自溶。
常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、离子交换和凝胶柱层析。
以此可得到较高纯度的酶。
细胞破壁的几种方法1、高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。
2、玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。
3、反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
4、超声波处理法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料。
5、化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。
有机溶剂沉淀法即向水溶液中加入一定量的亲水性的有机溶剂可降低溶质的溶解度使其沉淀被析出。
三、试剂：啤酒酵母、二氧化硅、甲苯（使用前预冷到0℃以下）、去离子水（使用前冷至4℃左右）、1mol / L 醋酸、95%乙醇四、仪器：研钵1个、离心管3个、3. 滴管3个、量筒50ml 1个、水浴锅1个、恒温水浴、烧杯100ml 2个、广泛pH试纸、高速冷冻离心机四、操作步骤：1. 提取（1）准备一个冰浴，将研钵稳妥放入冰浴中。
预先在冰箱中冷却20g干酵母和10g二氧化硅。
（2）将20g干酵母粉和10g二氧化硅，放入研钵中。
量取预冷的甲苯30ml缓慢加入酵母中，边加边研磨成糊状，约需60分钟。
蔗糖酶的提取及活力
蔗糖酶的提取及活力、含量和相对分子质量测定摘要：本学期共做了六次生化实验。
.第一次是提取及纯化蔗糖酶，以为后续实验提供样品。
实验主要目的是要求学生掌握高速离心机的使用。
实验共得到不同纯化度的三种提取液，标记为A、B、C。
将三种提取液分别放入冰箱保存，做为后续实验样品。
也因此做此实验时必须保证各个操作无误，及准确，以免影响后续实验的结果。
第二次是有关蔗糖酶的柱层析法，主要目的是要求同学掌握离子交换层析的原理及柱层析的操作技术及紫外吸收的分析方法。
此次实验通过柱层析及紫外吸收法得到2~3管的活力最大的分离液合并为分离液D，放入冰箱作为后续实验样品。
第三次实验为蔗糖酶的活力测定，目的为掌握酶的活力测定方法，了解各个酶的纯化情况。
利用分光度计测出各个样品的OD值，再对照葡萄糖的标准曲线来得出剩余葡萄糖的含量，从而获得各个酶的活力大小，了解各个酶的纯化情况。
并得出结论酶的纯化度越高，活力越小。
第四次实验为蔗糖酶蛋白质的含量测定，目的为掌握学习Folin-酚测定蛋白质含量的原理及方法，制备标准曲线测定未知样品中蛋白质含量。
同样利用与标准曲线对照来得到试样的蛋白质含量，并测出酶的比活力。
测量蛋白质的方法有多种，我们必须根据所做实验的具体选择合适的方法来测定蛋白质。
第五次的实验是微量凯氏定氮测总蛋白。
目的是要求同学掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理及方法。
本实验除利用了凯氏定氮法外还加上了酸式滴定法最后得出了毫克级别的总蛋白含量。
其结果与上一实验所测得的总蛋白质含量有所不同，正证明了不同的方法测量蛋白质造成的误差不同，致所得结果不同。
最后一次实验为SDS-PAGE测定蛋白质分子质量，目的为掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和测定蛋白质分子量技术。
此实验操作复杂，需先制作凝胶再结果染色脱色，最后还要制作标准蛋白分子质量曲线图来进行试样对照。
最后得到蔗糖酶的分子量在5万左右及9万左右。
关键字：实验；提取液；比活；蛋白质；SDS-PAGE；OD正文：1，蔗糖酶的提取及提纯1.1，文献综述：蔗糖酶的分离利用的是细胞破壁法。
蔗糖酶的提取、分离、纯化及活性检测
蔗糖酶的提取、分离、纯化及活性检测摘要随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究还是其他研究，越来越需要纯度更高的酶制剂，这就要求我们熟悉酶提纯的一般操作步骤及酶的提纯及活力测定等重要的生物实验技术。
本次实验主要通过提取啤酒酵母中的蔗糖酶并经过两次纯化测定其活力与Km。
在实验过程中用乙醇分级分离法，DEAE-Cellulose 柱层析，分子筛（凝胶过滤）层析提取纯化蔗糖酶。
在实验过程中，虽然我们很努力, 但由于我们对实验的程序不熟悉，因此在实验的一些过程中有一些明显的操作失误，使得实验的最后测定结果与理论值有一定出入。
关键词啤酒酵母蔗糖酶乙醇分级分离DEAE-Cellulose 柱层析分子筛层析Km 前言生物体内所发生的一切化学反应，几乎都是在专一性酶的催化下进行的，因此酶的研究对了解生命活动的规律以及生命本质的阐述具有十分重要的意义。
随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究以及分子生物学其他重要课题的研究都越来越多地需要使用作用专一，纯度高的酶制剂。
这就要求人们建立各种方法，以便从各种生物来源的材料中分离提纯酶。
由于酶本身也是蛋白质，因此酶分离提存的方法大体上与蛋白质纯化方法相同，一般来说，没有一种固定的方法，而往往根据实验者所要分离提纯酶的取材以及酶本身的物理﹑化学及生物学性质来确定分离提纯方法。
各种酶的纯化通常有五个阶段：①材料的选择与预处理；②细胞破碎；③抽提；④纯化；⑤浓缩﹑干燥及保存。
酶分离纯化成功与否的重要标志：一是要有较高的收率；二是达到所要求的纯度，这两个指标通常是矛盾的，可根据需要来有所侧重，一般来说，好的方法与步骤应该是简单易行，最终的酶制剂有较高的收率和纯度。
就单独的每种分离提纯的方法而言，有盐析法、有机溶剂分级法、调PH分级沉淀法、选择变性法、吸附法、层析法（纸层析、薄板层析、柱层析等）。
其中盐析法是用于蛋白质和酶分离提纯的最早而且最广泛的一种方法，该方法是根据蛋白质和酶在一定浓度的溶液中溶解度的降低程度的不同而达到彼此分离的方法盐析法常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等，其中用得最多的是硫酸铵，因为它具有温度系数小而溶解度大的优点。
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不同温度除杂蛋白后沉淀重量
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加热除杂蛋白
将粗提液倒入小锥形瓶中，Fra bibliotek!#&
醇提
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朱静， 严 自 正3微 生 物 产 生 的 木 聚 糖 酶 的 功 能 和 应 用 ， 生物 工程学报， ： !884 ， !% （ +） &6)*&69 科学出版社， 6 苏拔贤3生物化学制备技术3北京： !894， !3&"*&4
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加热去除杂蛋白
如表 % 、 表 & 所示， 随温度升高， 上清液中酶活逐
： 化学杂志， !88" ， 4（ %） !"%*!"4 生物化学与生物物理学报， ： !88" ， %% （ &） %98*%8% 学性质 3 生物化学杂志， ： !88& ， 8（ 4） 4)8*44&
渐下降， 包含酶和杂蛋白的沉淀量也增加。从收率方 面来考虑， 上清液的活力越高， 收率越高， 因此要求 温度尽可能低一些。而在一定条件下， 沉淀越多， 酶 液越纯， 从这方面考虑温度高一些好。再依据表 % 中 温度对酶失活变性的影响，蔗糖酶在 )", 时要明显 比 +), 时 失 活 严 重 ； 表 & 说明， 在 )", 时 ， 蔗糖酶大 量沉淀， 使酶液活性降低。 所以选取 +), 作为热提温 度较为适宜。
&" !3+%8
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醇提
按表 ! 所示配比表，分别采用 &"5 、
乙醇提取后沉淀重量
沉淀蔗糖酶。离心 +"5 、 )"5 、 4"5 、 6"5 浓度的乙醇， 后取管中的上清液测定其活性，并用精确电子天平 称取沉淀量。 表! 乙醇浓度配比表 混合液乙醇体积百分比（ 5） 酶液体积（ #$ ） 乙醇体积（ #$ ）
% 材料与方法
%#% 材料与仪器
收稿日期： #$$%*%#*%. 作者简介：孙国志（ ， 男， 助教， 研究方向： 生化工程及天然产 &()*+ ） 物的研究与开发。
’$
!!" !!" !!" !!" !!" !!" !!" !!" !!" !!"
孙国志 冯惠勇
摘 要 介绍了从酵母菌中提取蔗糖酶的方法。通过试验确定了 用冰融研磨法提取蔗糖酶的最佳条件，即通过反复冰冻 研磨破碎细胞、 !"# 水 浴 加 热 提 取 并 去 除 杂 蛋 白 、 "$% 乙 醇沉淀，在保持较高酶活力和收率的情况下制得成品蔗 糖酶。 蔗糖酶 提取
中图分类号： !"#$%&#’( 文献标识码： ) 文 章 编 号 ： %$$#*$+$, （ #$$# ） $-*$$(-*$#
!O7*%,O 型冷冻离心机。 # 型电热磁力搅拌器，
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蔗糖酶酶活的测定方法
采用 =J" 显色方法， 通过测定样品中还原糖的
量， 确定蔗糖酶酶活 ?LA。
%&#&%
葡萄糖浓度标准曲线
!"#$%"$ &%’ ($")%*+*,- *. /**’ #%’0123-
工艺技术
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蔗 糖 酶 提 取 方 法 的 研 究
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（ 河北科技大学生物工程学院， 石家庄 $"$$&’）
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工艺技术
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表% 样品管 空白 对比 不同温度除杂蛋白后上清液活性测定 热提温度（ ,） 吸光度 <
样品二： 把 甲 苯 改 为 !"#$ 脱 离 子 水 ， 再按与上 面的方法相同的步骤实验， 并且研磨相同的时间。 它的研磨方法 样品三： 只 加 入 %"#$ 脱 离 子 水 ， 就 在 冰 箱 中 冰 冻 约 !"#’( （ 研磨液 是 每 研 磨 &"#’( ， 面上刚出现冻结为宜） ， 重复以上两个步骤， 直到达 到相同的时间， 并加入 %%#$ 脱离子水。 取沉淀研磨液上清液倒入小烧杯中， 洗 涤 沉 淀 两次， 把洗涤上清液倒入小烧杯中， 分别把三个上清 用冷冻离心机 在 液定容至相同体积， 取 )#$ 上清液， 温度 "*+, ， 转速 !%"""- . #’( 条件下离心 !)#’( 。吸 取上清液， 用 !#/$ . 0 醋酸分别调 12 至 )3" 。
!""!#$
’’
取葡萄糖标准品， 用
蒸馏水配置成一定梯度浓度的溶液，与 =J" 显色后 在 (-$9> 测定吸光值。以吸光度 ) 对葡萄糖浓度作 标准曲线， 如图 % 所示。
蔗糖酶 （ "/01234567 +&#&%&#, ） 又 称 转 化 酶
$&,L-,,LR’$&$#L+,( 。 %&#&#
蔗糖酶酶活力计算公式 吸光度 )S%$$$S 稀释倍数 活力单位（ —— —— —— —— —QL-&%%S 吸光度 )S 稀释倍数 T U >I） Q——
67 +&#&%&#,G 和从葡萄糖末端切开蔗糖的 "*=*葡萄糖
苷酶（ 。前者存在于酵母 "*=*HI/0D3EF23435 67 +&#&%&#$） 中， 后者存在于霉菌中。工业上多从酵母中提取 。
?-A
人造蜂蜜， 防止高浓度糖浆中的蔗糖析出， 还用来制 造含果糖和巧克力的软心糖等。 本实验目的在于用冰融法在不同的 条 件 下 提 取 酵母中的蔗糖酶， 比较其酶活力， 以确定最佳的提取 条件 ?(5,A。
不大，但二号样品由于甲苯的存在给离心后上清液 的收集带来了不便， 并且如果去除不净， 会对后续工 作产生影响。三号样品效果较好， 其原因一是在冷冻 过程中会促使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加 细胞的亲水性能； 二是反复冷冻使细胞内形成冰晶， 引起细胞膨胀而破裂。另外由于每 隔 &"#’( 冰 冻 一 次， 整个提取过程保持较低温度， 酶失活率较低。
表+ 乙醇浓度（ 5） 吸光度 < 表) 乙醇浓度（ 5） 沉淀重量（ L） 乙醇提取后上清液酶活
在 水 浴 中 迅 速 加 热 到 +", 后 ， 缓 慢 搅 拌 &"#’( ， 取出 置于冰浴中迅速冷却。然后在冷冻离心机中， "*+, ， 取上清液测酶活。在 +) 、 !)"""- . #’( 离心 !)#’( ， )" 、 以待比较。 )) 、 4", 四个水浴温度下重复以上步骤，