脓毒血症动物模型具体步骤及说明
中重度脓毒症长期生存大鼠模型的建立
中重度脓毒症长期生存大鼠模型的建立焦裕霞;熊君宇【摘要】目的：建立中重度脓毒症长期生存大鼠模型，观察脓毒症自然转归的过程，为研究脓毒症提供新思路和方法。
方法将40只SD大鼠分为对照组（ sham 组，8只）与盲肠结扎穿孔术组（ cecal ligation and puncture， CLP组，32只），所有操作均在小动物麻醉机，七氟烷吸入麻醉下完成。
所有大鼠在其右颈部建立动静脉通路。
术后恢复24 h后，CLP组大鼠通过盲肠结扎穿孔术致脓毒症。
手术完毕后将大鼠转移到恢复室（室内温度22～25℃），单笼饲养。
术后静脉补液按1∶1比例分别给予6％HEAS和5％葡萄糖注射液，第1、2天补液量为20 mL／kg／12 h，之后液体减半直至大鼠开始饮食。
根据大鼠生存情况CLP组大鼠自然分为生存组（survival组）和死亡组（dead组）。
观察术后大鼠至30 d，记录大鼠的症状表现、体重变化、IL⁃10血浆浓度的变化，并解剖观察腹腔内脏器改变。
结果（1）CLP组术后24 h内生存率为75％，72 h内生存率为62�5％，7 d内生存率为50％。
（2）根据脓毒症严重程度评估系统，32只CLP组大鼠在术后24 h均达到中重度脓毒症程度。
（3）手术后，survival组与sham组体重均有下降。
survival组大鼠从第4天开始体重下降明显（P＝0�017）。
survival组大鼠在术后第6天体重下降至最低，较原体重下降（8�51±2�23）％；sham组则在术后第4天体重最低，较原体重下降（2�73±1�82）％，两组差异具有统计学意义（ P ＝0�026）。
两组大鼠在术后第30天时，体重的最大升高率（ sham 组（16�16±2�39）％与survival组（13�03±3�74）％比无明显差异（P＝0�29）。
（4）术后1 d与术前（0 d）相比，三组IL⁃10血浆浓度均有升高，survival组（P＝0�000）和dead组升高明显（P＝0�010）。
脓毒血症大鼠模型建立及对P38MAPK和GLUT4转位通路的影响
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１１ Ｓａｎｅｉ－Ｍｏｓｈａｄｄａｍ Ａ，Ｓａ ｎ ｅｉ－ｉｏｓｈａｄｄａｍ Ａ，Ｋａｂ ｒｏｂａｅｉ Ｓ．Ｌａｔｅｒａｌ ｓｏｆｔ ｔｉｓ— ｓｕｅ Ｘ —ｒａｙ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｆ ｔｓｈｂｏｎｅ ｉｎ ｏｒｏｐｈａｒｙｎｘ，ａ ｔｈｉｎｇ ｉｎ
大鼠脓毒症模型建立方法
大鼠脓毒症模型建立方法
嘿，你知道咋给大鼠整出脓毒症模型不？先得选好健康的大鼠哇，这就跟挑运动员似的，得挑身强体壮的。
然后给大鼠来点细菌或者毒素啥的，让它感染上。
但这可得小心着点儿，别整太多把大鼠给搞死了。
就像做饭放盐似的，得恰到好处。
这过程安全不？那肯定得小心再小心哇！稍有不慎大鼠可能就一命呜呼了。
稳定性嘛，也得看操作手法。
要是技术不过关，那可就没准儿了。
那这脓毒症模型有啥用呢？哎呀，用处可大了去了。
可以研究脓毒症的发病机制呀，找到治疗的办法。
就好比侦探破案，得先有现场才能找出凶手嘛。
我听说有个实验室就用这方法做脓毒症模型，效果还不错呢。
通过观察大鼠的症状和生理指标，找到了一些治疗的新思路。
这不是超棒嘛！
大鼠脓毒症模型建立虽然有难度，但真的很有意义，值得一试。
浅谈建立脓毒症动物实验模型的新方法
浅谈建立脓毒症动物实验模型的新方法高宇;陈慧;刘艳苓;谢莹;张佳丽;栾泽柱;陈桂荣【期刊名称】《当代医药论丛》【年(卷),期】2018(016)008【摘要】目的:分析建立脓毒症动物实验模型的新方法.方法:将60只SD大鼠随机分为6组,分别为模型组1、模型组2、模型组3、模型组4、模型组5和空白组,每组各有10只大鼠.向1～5组模型组大鼠的腹腔内注射浓度为10％的大鼠粪便匀浆进行造模.在造模完成10 h后,分别采集这6组大鼠眼眶静脉丛的血液,检测、对比其血清中TNF-α 和IL-6的水平.在造模完成48 h后,用无热原的针筒心尖分别采集这6组大鼠200μl的血液,检测、对比其血清脂肪酶(LPS)的水平.对这6组大鼠进行解剖,取其心、肝、脾、肺、肾组织,对这些脏器组织进行病理检查和研究.结果:这1～5组模型组大鼠血清LPS、IL-6和TNF-α 的水平均高于空白组大鼠,P<0.01.与空白组大鼠相比,这1～5组模型组大鼠的心、肝、肺、肾中均存在大量的炎性浸润和明显的损伤.结论:本次研究中所使用的脓毒症大鼠的造模方法较为接近临床肠源性脓毒症的发病机制.【总页数】4页(P152-155)【作者】高宇;陈慧;刘艳苓;谢莹;张佳丽;栾泽柱;陈桂荣【作者单位】辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 110033【正文语种】中文【中图分类】R563【相关文献】1.联合应激法建立单纯心理应激动物实验模型的研究 [J], 徐东宝;王杰;于燕妮;汪元河;黄江;戴佳琳;夏冰2.改良动静脉转流术动物实验模型的建立 [J], 李春江;郑秋涛;丁俊连;王海燕;张桂云;戚素银3.地雷爆炸伤动物实验模型的建立 [J], 张森;韩庚奋;叶广函;赖西南;王爱民;王丽丽4.上颌矢状扩弓的动物实验模型的建立 [J], 尉静;左艳萍;苑迎娇;刘亚非5.脓毒症动物实验模型研究进展 [J], 陈海鸣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠CLP脓毒症模型的建立和抗菌肽Lycosin-1对其肝肾功能的影响
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｓｅｖｅｒｅ
ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｗｈｉｃｅ
ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｂａｃｔｅｒｉａ、ｆｕｎｇｉ、ｖｉｒｕｓｅｓ，ｗｈｉｌｅ
ｓｅｐｓｉｓ ｗｉｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐ ｉｎｔｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｆａｉｌｕｒｅ ａｎｄ ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ．Ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
３．与假手术组比较，ＣＬＰ脓毒症小鼠血清脚、ＡＳＴ、ＢＵＮ、ＳＣｒ４
个指标在术后６ｈ、１２ｈ、２４ｈ三个时间点均升高，差别有统计学意义
万方数据
硕士学位论文
中文摘要
（Ｐ＜０．０５）；Ｌｙｅ干预组各时间点血清札Ｔ、ＡＳＴ、ＢＵＮ、ＳＣｒ浓度与
ＣＬＰ组比较并没有降低，反而升高更显著，差异有统计学意义
（Ｐ＜Ｏ．０５）。
学位论文原创性声明
本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致 谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。
¨
万方数据
硕士学位论文
中文摘要
观察２４ｈ内各组小鼠死亡情况及一般活动状况，并在相应时间点取 血，检测血清谷丙转氨酶（创－一Ｔ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）、尿素氮（ＢＵＮ）、 血肌酐（ＳＣｒ）等生化指标的变化。第三部分为探讨腹腔注射Ｌｙｅ （２００ｕｇ／ｍ１）对ＣＬＰ脓毒症模型小鼠的肝脏和肾脏是否有保护作用， 分为Ｌｙｃ干预６ｈ组、１２ｈ组、２４ｈ组，各组再分为４个小组：＠Ｓｈａｍ 组（假手术组）：打开小鼠腹腔找到盲肠，不结扎及穿孔，关闭腹腔 后腹腔注射０．５ｍｌ生理盐水；②Ｓｈａｍ＋Ｌｙｃ：不结扎及穿孔盲肠，关 闭腹腔时注射Ｌｙｃ（２００ｕｇ／ｍ１）０．５ｍｌ：③ｃｃＰ组：见实验一中Ｃ组 ＣＬＰ模型制备方法，即在距盲肠末端ｌｃｍ处结扎，并用１２号针头贯 穿盲肠穿孔２次。腹腔注射Ｏ．５ｍｌ生理盐水液体复苏；＠ＣＬＰ＋Ｌｙｃ见 实验一中的Ｃ组ＣＬＰ模型制备方法，术后立即腹腔注射Ｌｙｃ （２００ｕｇ／ｍ１）０．５ｍｌ，每小组各ｌＯ只小鼠。同样检测各组小鼠血清肝 肾代谢指标的变化。 结果 １．采用距盲肠末端ｌｃｍ处结扎，１２号针头贯穿盲肠穿孔２次的 方法制备的ＣＬＰ模型小鼠７２ｈ死亡率达７０．１００％，且具有典型脓毒 症表现，死亡小鼠解剖证实腹腔存在恶臭积液、部分肠管粘连。 ２．不同浓度Ｌｙｃｏｓｉｎ一１腹腔注射２４ｈ内均无小鼠死亡，与对照组 比较，虽然给药组的一些指标稍偏高或偏低，但差异无显著性 （Ｐ＞Ｏ．０５），且无剂量依赖性；
脓毒症动物模型的研究进展
广西医科大学学报2020Aug ；37（8）JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY脓毒症动物模型的研究进展*彭凤辉，邓晓彬，吕立文△（广西壮族自治区人民医院急诊科，南宁530021）摘要脓毒症严重威胁人类生命健康，目前其发病机制仍不清楚，脓毒症模型的建立有助于人们更好的研究脓毒症。
本文就脓毒症动物模型的种类，建模方法，优、缺点，适用范围等进行综述，为日后脓毒症研究中动物模型的选择提供参考。
关键词脓毒症；动物模型；内毒素；盲肠结扎穿孔中图分类号：R459.7；R-332文献标志码：A文章编号：1005-930X （2020）08-1577-05DOI ：10.16190/ki.45-1211/r.2020.08.031Research progress in animal models of sepsisPeng Fenghui,Deng Xiaobin,LüLiwen .(Emergency Department,People ’s Hospital of Guangxi Zhuang Autono-mous Region,Nanning 530021,China)AbstractSepsis is a serious threat to human life and health,and its pathogenesis is still unclear.The establish-ment of sepsis models will help researchers study sepsis.This article reviews the types of sepsis animal models and their modeling methods,advantages,disadvantages,scope of application,etc.,so as to provide information for the selection of animal models in sepsis research in the future.Keywords sepsis;animal model;endotoxin;cecal ligation and perforation*基金项目：广西壮族自治区人民医院青年基金资助项目（No.QN2018-4）；2019年黎介寿肠道屏障研究基金资助项目（No.Z-2017-24-2009）；广西科技攻关计划资助项目（No.桂科攻15277007）△通信作者，E-mail ：******************收稿日期：2019-05-23尽管脓毒症的研究不断有新突破，其发病机制及病理生理学的研究也越来越深入，但临床上脓毒症的发病率和死亡率在全球范围内仍是呈递增的趋势，其发病机制仍不清楚，脓毒症是导致重症患者死亡的主要原因，国内一项多中心流行病学调查显示，严重脓毒症在ICU 的发病率为8.68％，死亡率高达44.7％，人均消耗医疗费用为11390美元/年（502美元/d ）[1]。
脓毒症动物模型制作及评价-2019年文档
脓毒症动物模型制作及评价脓毒症动物模型是研究脓毒症发病机制和临床防治的基础。
建立标准的符合临床的脓毒症动物模型是脓毒症研究领域重点课题之一［1］。
本文就脓毒症动物模型制作中动物种类选择、制作方法等，予以综述并进行模型评价。
1 脓毒症动物模型动物以及制作方法的选择近交系小型动物如大鼠、小鼠或豚鼠，自身纯度较高、无特异性病原菌且价格较低。
大型哺乳动物，如猪、羊、狗等动物，可进行血流动力学监测和提供充足标本，便于进行较长试验观察。
灵长类动物免疫系统与人类高度相似，可用于评价炎性细胞因子以及免疫系统反应，但价格昂贵而且受到严格的伦理学制约。
另外，动物自身特点也可供实验利用：如羊对内毒素敏感，只需相当于狗的几十至几千分之一剂量（0.6μg/kg）即可出现肺血管损伤等脓毒症症状［2］。
猪肾脏、心血管和消化系统的生理特点和解剖结构与人类最相似，多用于严重脓毒症器官功能障碍的研究。
具有明确基因特征动物如内毒素耐受型敏感型小鼠，成为从分子水平揭示脓毒症发病机制的重要工具［3］。
脓毒症动物模型使用的制作方法也是需要考虑的重要问题。
不同种属宿主对内毒素或致病菌的敏感性、反应性各异：如啮齿类动物、猫和狗对内毒素具有一定的耐受性，而灵长类动物、兔和羊则对内毒素较敏感。
即使是相同动物对不同细菌侵袭反应也不同：如腹腔注射金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的小鼠，抗生素可诱发前者循环中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的早期释放，而后者TNF-α释放在时间和变化幅度上均无明显影响。
在应用抗TNF-α抗体分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对感染的大鼠进行治疗时，结果显示对后者的保护作用优于前者［4］。
即使是同一种动物同一种制模病原体，采取的攻击方式和剂量不同，所引起的动物体内细胞等炎性因子反应亦不同。
如给予亚致死量的LPS可诱导动物产生高动力循环特点，而致死量LPS则使动物呈现低动力循环特点。
所以脓毒症动物模型的选择，除了要考虑研究的目的以及路径之外，还要考虑制模所使用的方法以及在研究结果的解释方面考虑模型自身的特点以及局限，作出合理客观的解释。
大鼠脓毒症模型
大鼠盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征(Systemic inflammatoy response syndrome，SIRS)，临床上证实有致病菌侵袭存在或有高度可疑的感染性病灶，临床中多以常见并发症出现在重度感染、大面积烧伤、严重创伤或大手术术后的危重患者当中。
脓毒症一旦发生，进展迅速，短时间可由全身炎性反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)、脓毒症进展为重度脓毒症(severe sepsis)(合并器官功能不全)、脓毒症休克(septic shock)(并发充分液体复苏亦无法纠正的低血压)及多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，以上三者可贯序发生，亦可同时发生，严重危及患者生命，产生极高的致死风险。
虽然目前已经有许多动物模型用来复制脓毒症，但盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症的啮齿动物模型仍然是目前应用最广泛的脓毒症动物模型。
1.实验动物SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期2d4.建模方法1.称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
2.沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用5-0缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。
轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用5-0缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。
3.待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。
4.2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。
脓毒症相关性脑病大鼠动物模型的建立
脓毒症相关性脑病大鼠动物模型的建立脓毒症相关性脑病在脓毒症患者是一种常见并发症，合并脓毒症相关性脑病者病死率明显增加。
目前临床对于脓毒症相关性脑病仍是排除性诊断，缺乏客观的诊断指标，如生化指标、影像学指标、电生理学指标等，导致流行病学及发生机制均不明确，因此确立相对客观统一的诊断标准势在必行。
动物模型的选择建立对其机制及治疗方法研究具有重要意义。
研究人员应用脑电图和诱发电位监测早期诊断脓毒症相关性脑病，取得一定效果，但尚未形成统一结论。
本研究根据已有脓毒症相关性脑病模型研究的进展，选用盲肠结扎法（CLP）建立脓毒症模型，通过监测大鼠神经行为学改变、脑电图信号及体感诱发电位改变来早期诊断脓毒症相关性脑病，并对所建立的大鼠脓毒症脑病模型进行分析，为以后的研究提供参考。
1 材料与方法1.1 实验动物清洁级成年雄性SD大鼠30只，体质量200～250 g，由中南大学动物学部提供。
1.2 主要药品、试剂、仪器PBS购自鼎国生物工程公司，水合氯醛为中南大学湘雅医院药剂科化学分析室配制；多聚甲醛购置岳麓区鼎盛实验器材公司；戊二醛、无水乙醇、二甲苯、苏木素、伊红、锇酸等由中南大学病理教研室提供。
套管针购置BD公司。
脑立体定位仪，RM6240生物信号记录器，Olympus BX41型光学显微镜（日本），LKB-Ⅲ型超薄切片机（瑞典），H-7500型透射电镜（日本），石腊切片机（美国），生化培养箱（广东），格兰士微波炉WP700，隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂），荣事达家用冷藏冰箱BCD-202，MIAS医用图像分析管理系统电子摄像。
1.3 实验方法1.3.1 大鼠脑电及诱发电位监测电极放置30只大鼠称质量、编号分别在造模前10 d放置脑电监测电极。
水合氯醛腹腔注射麻醉后，大鼠头部用立体定位仪固定，常规外科消毒，在头颅中间矢状位作3 cm的皮肤切口，将前囟点和其他颅骨缝暴露。
在颅骨面行局麻（10%利多卡因喷雾），移去骨膜。
脓毒血症大鼠模型建立
CLP致脓毒血症大鼠模型建立一、实验目的利用CLP技术建立脓毒血症大鼠模型二、实验原理脓毒血症患者最常见的感染源来自腹腔且易造成腹腔感染，所以腹腔感染模型是目前最常见的动物模型。
鼠类盲肠结扎穿刺（CLP）是临床研究脓毒血症常见模型，是模仿腹腔脓毒血症感染的临床过程，引起多菌群感染，最终导致脓毒血症。
三、实验材料和设备成熟期雄性Sprague-Dawley大鼠，体重400-500g。
外科手术器械：手术台，手术刀，刀片，剪刀，刮毛器，镊子，止血钳，持针器，缝皮针，1号线，4号肠线，18g针头，血管夹，医用胶布，PE50导管（厂家），探针，硬膜外穿刺针，肝素帽，留置针，注射器（规格）。
实验药品：1.5%戊巴比妥钠，2%利多卡因，丁苯诺啡，75%酒精，碘伏，肝素钠（10000U），蒸馏水，生理盐水。
四、实验方法和步骤1.购买SD大鼠，适应性饲养1周，自由饮水，饮食；2.术前禁食12小时；3.称重以1.5%戊巴比妥钠40mg/kg（4%水合氯醛 0.1ml/10g抽取麻药，一般3-5分钟起效，可以维持1小时左右。
），腹腔注射（先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。
），麻醉大鼠，止血钳夹小鼠脚趾确定麻醉深度；4.将大鼠背位固定于手术台上，剪去颈部和腹部被毛；5.取血导管的制备：取PE50导管约15cm，一侧剪契口，另一端平口，对楔面要进行简单打磨处理,以防表面粗糙划破血管外壁。
抗凝处理是将导管用装满肝素钠的注射器灌流、冲洗,保证导管每个部位都充分接触肝素钠。
6.颈静脉置管术：a.用碘伏常规消毒颈部，铺无菌手术单。
b.于胸锁乳突肌连线中点起向颈部垂直延伸15mm,做皮肤切口约1.5cm，暴露皮下结缔组织，用血管钳逐层钝性分离至显露颈静脉(特征是在胸廓入口处，有轻微搏动，直径2～4 mm)，2%利多卡因3-5滴局部浸润1min，完全游离一段长1-1.5cm血管，血管夹分别夹闭远心端和近心端，血管下穿过两根1号线。
脓毒症诱导的急性心肾综合征的动物模型制作与评价
［ 关 键词］ 腹 主动脉阻断 ； 脓毒症 ； 急 性 肾损 伤 ； 急性心肌损伤 ； 脓 毒 症 心 肾综 合 征 模 型
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８—８ ８ ４ ９ ． ２ ０ １ ４ ． ３ ０ ． ０ ７
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心肌组 织紊乱 ， 少数 心 肌 变 性 、 溶解 ， 部分心肌 纤维断 裂， 毛 细血 管充血、 扩张 ， 肌 间 隙 内 可 见 红 细胞 漏 出 、 炎性 细胞 浸 润 ， 损 伤 程 度 较 Ｃ组 略 重 ； Ｃ组 心 肌 组 织 紊 乱 ， 心肌 细 胞 略 肿 胀 ， 肌间
《脓毒血症小鼠致肺损伤模型的研究》
《脓毒血症小鼠致肺损伤模型的研究》一、引言脓毒血症是一种由感染引起的全身性炎症反应综合征，常常导致多器官功能障碍。
在脓毒血症患者中，肺损伤是常见的并发症之一。
因此，研究脓毒血症导致的小鼠肺损伤模型，有助于了解其病理机制及开发新的治疗方法。
本文将重点介绍我们建立的脓毒血症小鼠致肺损伤模型的研究过程及结果。
二、材料与方法1. 实验动物本实验采用SPF级小鼠作为实验对象，年龄为6-8周，体重约25-30g。
2. 脓毒血症小鼠模型的建立采用细菌感染方法建立小鼠脓毒血症模型。
选取敏感细菌（如大肠杆菌）注射至小鼠体内，以诱发全身炎症反应。
3. 肺损伤模型的建立在脓毒血症模型的基础上，通过一定的实验操作，如药物注射、氧气浓度控制等，诱发小鼠肺部炎症反应，建立肺损伤模型。
4. 实验方法采用病理学、分子生物学、免疫学等多种方法，观察并分析脓毒血症及肺损伤的病理变化及机制。
三、实验结果1. 脓毒血症模型小鼠的病理变化在细菌感染后，小鼠出现明显的全身炎症反应，表现为体温升高、活动减少等症状。
病理学检查发现，小鼠体内多器官出现不同程度的损伤，其中肺部损伤最为明显。
2. 肺损伤模型的病理变化在脓毒血症的基础上，通过药物注射或氧气浓度控制等方法诱发肺部炎症反应。
病理学检查发现，小鼠肺部出现明显的炎症渗出、肺泡损伤等表现。
3. 分子生物学及免疫学分析通过分子生物学及免疫学方法检测发现，脓毒血症及肺损伤过程中，炎症因子、氧化应激等相关分子表达水平显著升高。
这些分子在脓毒血症及肺损伤的发生、发展过程中起重要作用。
四、讨论本研究成功建立了脓毒血症小鼠致肺损伤模型，为研究脓毒血症及肺损伤的病理机制提供了有力的工具。
通过观察和分析模型的病理变化及分子生物学、免疫学指标，我们发现脓毒血症及肺损伤的发生与炎症反应、氧化应激等密切相关。
这些发现有助于我们深入了解脓毒血症及肺损伤的发病机制，为开发新的治疗方法提供理论依据。
五、结论本研究通过建立脓毒血症小鼠致肺损伤模型，探讨了脓毒血症及肺损伤的病理机制。
大鼠实验造模实验报告
一、实验背景脓毒症是一种由细菌等病原微生物侵入机体引起的全身炎症反应综合征，严重时可导致多器官功能衰竭甚至死亡。
脓毒症的研究对于临床医学具有重要意义。
本实验旨在通过建立大鼠脓毒症模型，探讨脓毒症的发病机制及病理生理学变化，为临床治疗提供实验依据。
二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康成年雄性SD大鼠30只，体重200-220g，随机分为实验组与对照组，每组15只。
2. 实验试剂：10%水合氯醛、碘伏、3-0缝合线、18G针头等。
3. 实验步骤：（1）实验组：大鼠称重后，注射10%水合氯醛进行麻醉。
使大鼠仰卧于泡沫板上，用碘伏消毒。
行下腹部正中皮肤纵向切口（长约1.5-2cm），找到腹肌白线（即中线白色筋膜），在此处剖开腹肌、筋膜及腹膜层。
从切口处钝性分离盲肠，并仅暴露盲肠、小肠、大肠仍留于腹腔中。
在盲肠基底部与其末端之间的中点处，使用3-0缝合线结扎。
用18G针头于盲肠末端与结扎位置的中部，沿肠系膜侧向其对侧穿孔3-4次，从针孔处各挤出一滴肠内容物，将盲肠放回腹腔。
逐层缝合切口，用碘伏消毒。
（2）对照组：除不进行盲肠穿孔外，其余操作同实验组。
4. 实验观察指标：（1）一般观察：术后观察大鼠的精神状态、活动能力、饮食、呼吸、体温、体重等。
（2）血液学指标：术后12h、24h、48h、72h分别采集大鼠血液，检测白细胞计数、C反应蛋白等。
（3）器官功能指标：术后12h、24h、48h、72h分别采集大鼠血清，检测血清肌酐、尿素氮、乳酸等。
三、实验结果1. 一般观察：术后实验组大鼠出现竖毛、蜷缩、少动、少食、精神倦怠、体重减轻、呼吸急促、腹泻等现象，证明造模成功。
对照组大鼠无异常表现。
2. 血液学指标：实验组大鼠术后12h、24h、48h、72h的白细胞计数、C反应蛋白等指标均显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 器官功能指标：实验组大鼠术后12h、24h、48h、72h的血清肌酐、尿素氮、乳酸等指标均显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。
脓毒症动物模型的选择与评价_姚咏明
脓毒症（Ｓｅｐｓｉｓ）作为急危重症领域的棘手难题，日益引起临床医师及科研工作者的关注。
近十年来，现代生物科技的飞速发展极大地促进了人们对脓毒症发病机制的认识，并推动了脓毒症治疗措施的改进和更新。
其中，脓毒症动物模型的应用对此起到了十分重要的作用。
脓毒症动物模型的不断发展也反映了人们对脓毒症本质的认识正在逐渐深入，总结和分析现有动物模型，对于如何建立更贴近临床实际的脓毒症动物模型、合理设计实验以及准确解释动物实验数据都具有重要意义。
１ 应用脓毒症动物模型的意义在过去的几年中，人们对感染后炎症反应分子机制的研究已取得显著进展，其中很大部分是利用体外观察的方法对细胞生理学研究的成果。
应明确的是，尽管体外实验的手段先进而且方便，但要更好地了解脓毒症时体内炎症反应的发生、发展过程和其他病理生理变化，还需采用临床相关的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行深入的探讨。
一般认为，利用动物模型进行脓毒症研究具有以下优点。
１．１ 在进行具有高度创伤性的操作或进行器官离体实验时只能使用动物模型。
特别是在研究脓毒症的病理生理变化时通常需要采集组织标本（如肝、肺、肾等），而这些标本很难从临床获得。
只有利用动物模型才可能方便地采取脓毒症各个阶段的组织标本。
１．２ 临床脓毒症病因较复杂，难以判断其确切的发病时间。
很多患者还伴有其他严重的非相关疾病。
并且，临床的脓毒症患者通常接受多种支持治疗，这些治疗不可避免地会影响对脓毒症自然病程的观察。
因此，直接探讨人类脓毒症的病理生理机制相当困难，而采用动物模型进行实验则可免受上述因素的干扰。
１．３ 由于临床脓毒症患者的遗传学背景非常复杂，加之患者年龄、性别、同时存在的其他疾病以及支持治疗等因素均可导致临床资料的高度变异性。
而要控制这种变异只能靠加大样本量，这无疑将会耗费更多的时间并给临床脓毒症试验带来很大的经济压力。
由于动物模型的生物学差异较人类要小，因此所需的样本量也明显少于临床观察。
１．４ 在探讨脓毒症的发病机制时经常要使用一些药物或试剂（如某种细胞因子的抗体或拮抗剂等），这些制剂可能具有毒性或未经过临床的安全性检验不能用于人体。
sd 大鼠脓毒血症.pptx
平，试剂盒购FI北京东亚免疫所。 采纲CX7自动生化分析仪（美国Beckman公司）检测A1.T、AST水平。 1.3统计学处理所得数据以S表示，计量资料采纳t检验、方差分析进行统计学处理，检验水准=0.05。
C1.P术后30minA1.T即增加，且呈进行性增加，C1.P术后30、60、120、180min组A1.T水平与正常比照组相比 差异均有统计学意义（P。.01）,与正常比照组及C1.P术后30、60min相比,C1.P术后120、180min组AST明显上升 （P0.01）（表2）。
表2各组大鼠血清TNF.A1.T和AST水平比较（略）3探讨肝脏是全身最大的网状内皮系统，肝脏枯否氏细胞具有 强大的中和、灭活和清除毒素的作用，其在脓毒症与器官损害的发生、发展中具有重要的调控作用。
我室采纳盲肠结扎穿孔术（C1.P）宜制脓毒症大鼠模型，视察TNT和肝细胞凋亡的关系以及脓毒症大鼠肝功能 的变更，为临床防治脓毒症供应试验依据。
1材料与方法1.l试验动物及模型制备雄性WiStar大鼠30只，清洁级，体重180~220g,由新疆医科高校试验动物中 心供应，试验前饲养1周，禁食过夜，自由饮水。
sd 大鼠脓毒血症
sd大鼠脓毒血症
大鼠脓毒血症建立方法SD大鼠，体重190〜270g,雌雄均有,禁食24h后进行试验。
用2.5%戊巴比妥钠按lm"kg体重，腹腔注射麻醉大鼠，随机分为试验组和比照组（假手术组）。
常规消毒腹部，在卜腹部正中心切口，长约2cm,打开腹腔找寻盲肠，当心分别其远端与大肠的系膜，盲肠内如 有粪便，则把粪便当心挤向相连的大肠，试验组在盲肠远端"2处用无菌4号丝线紧紧结扎，并用无菌7号针头在已结 扎盲肠远段中心处贯穿穿刺。
脓毒症动物模型制作方略及应用
脓 毒 症 的特 征 是 具有 高 代谢 和 高排 低 阻 的血 流运 动 状 态 ， 因此在
设 计 动 物模 型 时 ，也 应 该有 这 种特 点 。② 同时应 出现 多个 器 官 的
通 过 实 验 可知 ，假 手术 组 腹 腔没 有 明显 改 变 ，ＣＬＰ组 有 少量
功 能 障 碍 。③ 死 亡率 高 ，并 且 根据 脓 毒症 的转 归 ，需要 动 物 模 型 的渗 出液 ，同 时结扎 盲肠 肿大 ，肝 脏也 出 现肿 大现象 。
的 自然 死 亡 率应 该 在 ５ｏ％￣Ｕ７ｏ％之 间 。④应 注 意 脓毒 症 的发 病机
这 种 模 型最 初是 在 １９８０年 出现 ， 因粪便 含有 大 量 细 菌 ，并且
理 ，脓 毒症 是 因为感 染 造成 机 体 的炎 症 反应 过度 ，出 现 自身 细胞 粪 便 大都 积存 在 盲 肠 中 ，对盲 肠 进行 结 扎后 极 易产 生 细 菌感 染 ，
的 ６ｈ到 １２ｈ后 的器 官 衰竭 和死 亡 现 象往 往 因为 全 身 的炎 症 所 引 起 感 染模 型的 制备 ，但感 染 情 况与 粪便 量 、结 扎 位 置 、穿 孑Ｌ的位 置 的 ，但 是 在这 个 时 间 内 ，全身 的 炎症 反 应并 来 不及 发 生 ，所 以 在 不 同都会 导 致感 染 的程 度 不 同 ，导 致感 染 程度 难 以控 制 ，可 能 导
的损 伤 ，而不 是 细 菌造 成 的对 机体 的损 伤 ， 因此脓 毒 症动 物 模 型 便 可 以很 好 的模 拟 脓毒 症 的 发病 过 程 ，因此 也 可 以用 腹 腔感 染 来 出 现器 官 衰竭 和 动 物死 亡 的 时间 应有 一 定 的 间隔 。在 制造 模 型后 制 作 脓 毒症 的动 物 模 型 。虽 然 通 过 盲肠 结 扎 一穿 孔 可 以进 行 腹 腔
脓毒症：研究方法与操作手册_笔记
《脓毒症：研究方法与操作手册》阅读笔记目录一、前言 (2)1.1 脓毒症研究背景 (3)1.2 手册编写目的与意义 (4)二、脓毒症概述 (5)2.1 脓毒症的定义 (6)2.2 脓毒症的病因 (7)2.3 脓毒症的临床表现 (8)三、脓毒症研究方法 (9)3.1 实验研究方法 (10)3.1.1 动物实验模型 (11)3.1.2 细胞培养实验 (13)3.1.3 生物信息学分析 (14)3.2 临床研究方法 (15)3.2.1 病例选择与分组 (16)3.2.2 临床观察指标 (17)3.2.3 数据收集与分析 (17)四、脓毒症操作手册 (18)4.1 实验室操作规范 (19)4.1.1 实验室基本操作 (21)4.1.2 生物安全操作 (22)4.1.3 实验器材与试剂的准备 (23)4.2 动物实验操作流程 (24)4.2.1 动物选择与饲养 (25)4.2.2 动物模型建立 (26)4.2.3 实验操作步骤 (27)4.3 细胞培养操作步骤 (28)4.3.1 细胞来源与鉴定 (28)4.3.2 细胞培养条件 (30)4.3.3 细胞处理与检测 (31)五、数据分析与结果解读 (32)5.1 数据分析方法 (33)5.1.1 统计学方法 (35)5.1.2 生物信息学分析方法 (36)5.2 结果解读与讨论 (37)六、脓毒症研究展望 (38)6.1 研究现状与挑战 (39)6.2 未来研究方向 (41)一、前言脓毒症作为一种严重威胁人类健康的疾病，近年来其发病率与死亡率均呈上升趋势。
为了更好地认识脓毒症的发病机制、诊断标准及治疗策略，国内外学者开展了大量研究。
然而，由于脓毒症研究涉及多个学科领域，研究方法与操作流程的多样性使得初涉此领域的研究者往往感到无从下手。
鉴于此，编者特编写《脓毒症：研究方法与操作手册》，旨在为从事脓毒症研究的科研工作者提供一套系统、全面、实用的研究指南。
本手册从脓毒症的基础研究方法入手，逐步深入到临床研究方法，涵盖了脓毒症研究中的各个阶段。
脓毒症动物模型的制备方法及影响因素
脓毒症动物模型的制备方法及影响因素
李潇;颜海鹏;肖政辉
【期刊名称】《实验动物与比较医学》
【年(卷),期】2022(42)3
【摘要】脓毒症是常见的急危重症,其致病机制复杂,常涉及全身多个器官、系统,其中炎性反应、免疫功能紊乱、凝血功能障碍等多种因素联结成相互联系、相互影响的网络系统,加重病情进展。
目前脓毒症病死率约25%,严重威胁人类健康。
建立稳定可靠的脓毒症实验动物模型是了解感染早期宿主防御调控机制、病情进展期宿主反应失调机制及研究新型药物治疗效果的重要手段。
目前脓毒症动物模型的建立方法种类繁多,且影响因素较多。
本文就脓毒症动物模型的制备方法及影响因素进行综述,以期为研究者选择合适的动物模型提供参考。
【总页数】6页(P207-212)
【作者】李潇;颜海鹏;肖政辉
【作者单位】南华大学儿科学院
【正文语种】中文
【中图分类】R-332;Q95-33
【相关文献】
1.脓毒症动物模型制备方法的研究进展
2.脓毒症相关性血小板减少症的危险因素及对脓毒症患者预后的影响
3.脓毒症性与非脓毒症性急性肾损伤行CRRT治疗患者
临床特征及预后影响因素对比分析4.针刺足三里对实验性脓毒症急性肺损伤动物模型影响的Meta分析5.腹腔感染致脓毒症实验动物模型建立方法的研究进展
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脓毒血症动物模型具体步骤及说明
原型物种人
来源盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症
模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
实验周期2d
建模方法1. 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
2. 沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用5-0 缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。
轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用5-0 缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。
3. 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。
4. 2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。
处死大鼠，取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变，其余组织置于-80℃冰箱备用。
应用疾病模型
1.一般情况观察脓毒症组术后苏醒延迟，醒后精神萎靡，身体蜷缩，基本不活动，进食进水减少，对外界反应迟钝，呼吸频率加快，被毛蓬松少光泽，大便稀软，不再扎堆取暖。
12h出现死亡大鼠，随着时间的延长大部分大鼠出现皮温低，肌力减弱，眼周血性分泌物，停止进食进水，排泄稀水样便，色黄，腥臭味。
进一步发展出现呼吸急促，对被动仰卧无反抗，排泄物呈黏液状，量多，最终死亡。
剖腹可见恶臭味血性渗液，肠管水肿黏连，盲肠坏死变黑。
心脏：光镜下结果比较，对照组大鼠心肌肌纤维结构排列紧密、无水肿、充血及渗出。
模型组心肌肌纤维结构排列疏松，带状空泡化，细胞核肿胀，间质水肿、充血。
肝脏：肝有大量空泡脂肪样变性，肝细胞肿胀并有炎性细胞浸润。
肺：模型组肺间隔增厚，部分肺泡组织结构被破坏，炎症细胞浸润。
肾：可见肾皮质及间质水肿伴大量炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞均有肿胀。
空泡变性，坏死脱落。
肾小管囊腔扩张、管型形成。
皮髓质境界欠清晰，肾小球收缩、毛细血管微血栓形成
小肠：模型组小肠粘膜水肿、白细胞浸润、出血和上皮细胞坏死脱落。
血浆中炎症因子增加是脓毒症的典型特征之一,IL－1β、TNF－α及IL－6 是主要的促炎症细胞因子，在脓毒症模型后显著升高。