一株植物乳杆菌培养条件优化

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植物乳杆菌如何培养及应用

植物乳杆菌如何培养及应用植物乳杆菌是一种常见的有益菌种，在食品工业、畜牧业和医药领域有着广泛的应用。

本文将从培养方法和应用领域两个方面，详细介绍植物乳杆菌的培养及应用。

一、植物乳杆菌的培养植物乳杆菌是一种需氧、兼性厌氧的杆菌，对培养条件要求较宽松。

下面将分别从培养基、培养条件和培养方法三个方面进行介绍。

1. 培养基选择植物乳杆菌的培养基可以选择一般的细菌培养基，如液体培养基、固体培养基等。

常用的培养基有Lactobacilli MRS、De Man Rogosa Sharpe (MRS) 等。

2. 培养条件植物乳杆菌的适宜生长温度一般在30-40摄氏度之间，最适生长pH大约为6-7.5。

在培养过程中，可以添加一些辅助生长因子，如葡萄糖、酵母浸膏等。

3. 培养方法a. 液体培养法：将所选的培养基配制好后，加入适量的植物乳杆菌菌种，培养于摇床或培养箱中。

培养温度和时间根据菌株的需要进行调整。

b. 固体培养法：将所选的培养基配制好后，装入培养皿中，待凝固后点接植物乳杆菌菌种，然后在恰当的温度下孵育。

孵育结束后，观察菌落的形态和生长情况。

二、植物乳杆菌的应用植物乳杆菌具有广泛的应用价值，涉及食品工业、畜牧业和医药领域。

下面将介绍几种常见的应用领域。

1. 食品工业植物乳杆菌主要应用于酸奶、发酵牛奶、发酵肉制品等食品工业中。

其能够发酵乳糖产生乳酸，降低食品pH值，抑制有害菌的生长，提高食品的质量和保鲜效果。

此外，植物乳杆菌还可以产生具有特殊风味和香气的化合物，赋予食品独特的风味。

2. 畜牧业植物乳杆菌在畜牧业中有着重要作用。

它可通过发酵制备酸菌预混饲料，能够促进动物的消化吸收，增强免疫力，预防和治疗消化系统疾病。

此外，植物乳杆菌还可以抑制肠道有害菌的生长，改善动物的肠道菌群结构，提高饲料的利用率和动物的生长性能。

3. 医药领域植物乳杆菌在医药领域中具有重要的应用前景。

它可以通过多种途径进入人体，并在肠道中定殖和繁殖。

利用木薯酒糟液培养植物乳杆菌工艺条件的优化研究

体活菌数达４９．０ ×ｌＯｃｆｕ／ｍｌ，是未优化木薯酒糟液基础发酵培养基中活菌数的２．４１倍，比ＭＲＳ培养基中的活
茵数高３５％。表明用优化的木薯酒糟液培养基培养植物乳杆菌具有可行性。
关键词：木薯酒糟；植物乳杆菌；液体发酵；活茵数中图分类号：Ｓ８１６．９文献标志码：Ａ文章编号：１００３ —６２０２（２０１３）０３ —００４１ —０３
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍｕｓｉｎｇｃａｓｓａｖａｌｅｅｓｌｉｑｕｉｄ
ＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００２３，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｖｉａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａｃｏｕｎｔｓｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍａｎｄｃｕｔｔｉｎｇｄｏｗｎｃｏｓｔｏｆｍｅｄｉｕｍｐｒｏｄｕｃ — ｔｉｏｎｗｅｒｅｔｈｅｋｅｙｏｆｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｆｅｅｄｉｎｇｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａａｇｅｎｔ．Ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆ

植物乳杆菌生长条件的优化

植物乳杆菌生长条件的优化植物乳杆菌（plantarum Lactobacillus）是一种重要的益生菌，它在食品工业、医药保健和农业领域有着广泛的应用。

为了提高植物乳杆菌的生产效率和品质稳定性，优化其生长条件是非常关键的。

本文将介绍植物乳杆菌生长条件的优化方法。

一、温度调控植物乳杆菌对温度的需求较为特殊，不同的菌株对温度的适应范围也不尽相同。

一般来说，植物乳杆菌的适宜生长温度在30-40摄氏度之间。

在此范围内，菌株的生长速度最快，产酸性能最佳。

因此，在培养植物乳杆菌时，应根据具体菌株的需求，选择适宜的培养温度。

二、pH值调控植物乳杆菌对酸碱度的敏感性较高，不同菌株对pH值的适应能力也有所差异。

一般来说，植物乳杆菌的适宜pH范围在4.5-6.5之间。

在此范围内，菌株的生长繁殖较为稳定，产酸性能最优。

因此，在培养植物乳杆菌时，应控制培养液的pH值在适宜范围内。

三、营养物质供给植物乳杆菌的生长繁殖需要合适的营养物质供给。

常见的营养物质包括碳源、氮源、矿物质和维生素等。

其中，碳源是植物乳杆菌生长的主要能源，常用的碳源有葡萄糖、果糖等。

氮源是植物乳杆菌合成蛋白质的关键物质，常用的氮源有氨基酸、酵母浸粕等。

矿物质和维生素对植物乳杆菌的生长也起着重要的调节作用，应注意合理配置。

四、溶氧量控制植物乳杆菌属于需氧菌，对氧气的需求较高。

在培养植物乳杆菌时，应提供充足的溶氧量，以保证菌株的正常生长和代谢活性。

常用的方法包括搅拌培养、增加曝气量等，有效提高溶氧量。

五、抗生素应用在植物乳杆菌的培养过程中，常常需要应用抗生素进行菌群的选择和维持。

选择合适的抗生素可有效抑制其他细菌对植物乳杆菌的干扰，从而提高菌株的纯度和活性。

常用的抗生素有青霉素、新霉素等。

六、其他因素除了以上几点，还有一些其他因素也会对植物乳杆菌的生长产生影响。

比如，光照、湿度、培养时间等因素都需要根据具体情况进行调控。

此外，还需要注意培养容器的选择、消毒方式和操作技巧等，以确保培养环境的洁净和无菌。

植物乳杆菌素产生条件及分离方法的优化

现代食品科技Modern Food S cience and Technology2014, Vol.30, No.10植物乳杆菌素产生条件及分离方法的优化姜黎明，罗义勇，王良才，李晓然，柳陈坚（昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明 650500）摘要：目前植物乳杆菌常规发酵产生的植物乳杆菌素产量一般较低，优化植物乳杆菌素的产生条件和分离纯化方法是提高其产量的有效途径。

本文以 3 株 Lb. plantarum 为实验材料，研究了发酵时间、温度、培养液初始 pH 值和培养基成分等因素对 Plantaricin 产量的影响。

基于优化培养条件的研究结果，再探究五种不同 Plantaricin 的分离纯化方法，使两者达到最佳组合。

研究发现：（1）发酵时间在 28~35 h 内，温度 30~37 ℃，培养液初始 pH 在 6.5~7.0，10 g/L 葡萄糖和 10 g/L 蔗糖为碳源，10 g/L 蛋白胨、5 g/L 牛肉膏和 5 g/L 酵母粉为氮源，2 g/L 磷酸氢二钾、0.2 g/L 硫酸镁、0.05 g/L 硫酸锰、 2 g/L 柠檬酸铵和 5 g/L 乙酸钠为无机盐，1 mL/L 吐温-80 为乳化剂，优化后 Plantaricin 产量较优化前提高了 1.5 倍以上；（2）最佳分离方法为超滤法。

发酵液通过超滤法分离后，回收率达到了 71%。

本研究为获得尽量多的 Plantaricin 以及 Plantaricin 工业化开发利用提供理论基础和技术支撑。

关键词：植物乳杆菌素；产生条件；分离方法；优化文章篇号： 1673-9078(2014)10-218-225 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.037Optimization of Production Conditions and Separation Methods for PlantaricinJIANG Li-ming, LUO Yi-yong, WANG Liang-cai, LI Xiao-ran, LIU Chen-jian （College of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650500, China ）Abstract: At present, the yield of plantaricin produced by Lactobacillus plantarum through conventional fermentation is relatively low. Therefore, optimization of plantaricin production conditions and methods of isolation and purification is an effective approach to improve its yield. In this study, three strains of L. plantarum were chosen as fermentation agents and the effects of fermentation time, temperature, initial pH of the culture, and medium composition on the production of plantaricin were investigated. Based on the results of such optimization techniques, five different methods for separation and purification of plantaricin were explored and the best combination was identified as follows: fermentation time of 28~35 h; temperature at 30 ℃~37 ℃; initial pH of the culture medium at 6.5~7.0; 10 g/L glucose and 10 g/L sucrose as carbon sources; 10 g/L peptone, 5 g/L beef cream, and 5 g/L yeast powder as nitrogen sources; 2 g/L potassium hydrogen phosphate, 0.2 g/L magnesium sulfate, 0.05 g/L manganese sulfate, 2 g/L ammonium citrate, and 5 g/L sodium acetate as inorganic salts; and 1 ml/L tween-80 as emulsifier. Under these optimized culture conditions plantaricin yield increased by at least 1.5 times. The optimal separation method identified as ultrafiltration, where the recovery rate reached 71% after fermentation broth was extracted by ultrafiltration. Results from this study thus provide theoretical and technical evidence for increasing plantaricin yield which will be useful for industrial applications. Key words: plantaricin; production conditions; separation methods; optimization细菌素（Bacteriocin）是由某些细菌通过基因编码、核糖体合成的具有抗菌生物活性的蛋白质或多肽。

Box—Benhnken设计优化植物乳杆菌培养基

Box—Benhnken设计优化植物乳杆菌培养基作者：张瑶李啸潘冬瑞来源：《天津农业科学》2013年第07期摘要：通过单因素试验筛选出植物乳杆菌的最适碳源、氮源以及各缓冲盐、无机盐等物质的种类及优化浓度。

再通过Plackett-Burman试验设计筛选出显著影响因子。

然后用最陡爬坡试验逼近关键因素的最大响应区域。

最后在此基础上，采用Box-Benhnken试验设计法对培养基组分进行进一步优化，得出其最佳浓度。

结果表明，优化得到3种显著因子糖蜜、MgSO4、吐温-80通过响应面优化后的结果分别为23.79%（v/v），0.16%（w/v），1.35%（w/v）。

采用优化培养基后活菌数可达到4.45×109cfu·mL-1，较在MRS中培养的活菌数提高12倍左右。

关键词：培养基优化；高密度培养；响应面设计；植物乳杆菌；糖蜜中图分类号：S816.7 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.07.001Media Optimization of Culturing Lactobacillus plantarum by Box-Benhnken DesignZHANG Yao1， LI Xiao1，2， PAN Dong-rui1（1.College of Chemistry and Biology，China Three Gorges University， Yichang， Hubei 443003，China；2.Angel Yeast Company Limited，Yichang， Hubei 443003， China ）Abstract： Lactobacillus plantarum optimum carbon source， nitrogen source and various buffer salts， inorganic salts and other types of substances and preliminary optimized concentration was screened by single factor experiment. Significantly impact factor by Plackett-Burman experimental design was obtained and approached largest response area of the key factor by steepest ascent experiment.On this basis， best optimum concentration of the medium components was obtained by using the Box-Behnken design. The results showed optimal concentration of molasses， MgSO4，Tween-80 was 23.79% （v/v）， 0.16% （w/v）， 1.35% （w/v） respectively. The viable cell count reached 4.45×109cfu·mL-1， which was about 12 times larger than cultured in MRS medium.Key words： medium optimization； high-density cultivation； response surface design；Lactobacillus plantarum； molasses植物乳杆菌是乳酸菌的一种，与人类的生活关系非常密切，常见于奶油、肉类及许多蔬菜发酵制品中，能通过胃并定植于肠道发挥有益作用[1]。

响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件

响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件陈琳，孟祥晨*(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 150030)摘要：为提高一株分离自内蒙古传统发酵稀奶油“焦克”中的植物乳杆菌KLDS1.0391代谢产细菌素量，以中性蛋白酶水解脱脂乳为培养基，以枯草芽孢杆菌为指示菌，以抑菌圈直径为考察指标，在单因素试验的基础上，采用响应面法优化发酵pH 值、温度以及接种量。

结果表明：对该菌代谢产细菌素的活性影响大小依次为：发酵pH 值＞接种量＞发酵温度；最优发酵条件为：pH5.1、发酵温度33℃、接种量1%。

在此条件下，发酵液的抑菌圈直径为15.00mm ，细菌素的效价为601.32IU/mL ，较优化前提高了43.08%。

在最优发酵条件下获得的实验结果与模型预测值吻合，说明所建立的模型是切实可行的。

关键词：响应面；细菌素；植物乳杆菌；焦克Optimization of Fermentation Conditions of Lactobacillus plantarum for Bacteriocin Production by ResponseSurface MethodologyCHEN Lin ，MENG Xiang-chen*(Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)Abstract ：The fermentation condition of Lactobacillus plantarum KLDS1.0391 isolated from Jiaoke , a traditional fermented cream from Inner Mongolia in China, were optimized for bacteriocin production. Skim milk hydrolyzed by neutral protease was used as the medium; Baicillus subtilis was used as indicator bacteria and diameter of inhibition zone was used as evaluation index of antibacterial activity. Based on the single factor tests, the optimal fermentation conditions for producing antibacterial components with high yield in this strain was explored by response surface methodology with three variables of fermentation pH, fermentation temperature and inoculation amount. Results indicated that the order for affecting the yield of antibacterial components from strong to weak was fermentation pH, inoculation amount and fermentation temperature. The optimal fermen-tation conditions were pH 5.1, inoculation amount of 1% and fermentation temperature of 33 ℃. Under these optimal conditions,the diameter of inhibition zone reached up to 15.00 mm. The antibacterial activity was increased by 43.08% and reached up to 601.32 IU/mL. Therefore, it is feasible for the established model due to the consistent results between the prediction and experiments.Key words ：response surface ；bacteriocin ；Lactobacillus plantarum ；Jiaoke中图分类号：TQ920.6 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)03-0176-05收稿日期：2010-04-16基金项目：黑龙江省留学归国科学基金项目(LC2009C30)；国家“863”计划项目(2008AA10Z335)作者简介：陈琳(1985—)，女，硕士研究生，主要从事食品微生物研究。

植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵培养基优化

ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅｍａｊｏｒｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｓｇｌｕｃｏｓｅ，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔａｎｄＴｗｅｅｎ一８０ｂｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒ
ｔｅｓｔｓａｎｄＰｌａｃｋｅｔｔ～Ｂｕｒｍａｎｔｅｓｔｓ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｅｅｐｅｓｔｇｒａｄｅｔｅｓｔａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｍｅｄｉｕｍｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｗａｓｆｏｌｌｏｗｅｄａｓｇｌｕｃｏｓｅ２．０８％，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ０．５１％，ｔｒｙｐｔｏｎｅ１．０２％，ｂｅｅｆｅｘｔｒａｃｔ１％，Ｔｗｅｅｎ一８０１．０２ｍＬ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４３ｇ／Ｌ，ＮａＡｃ０．５％，ＭｇＳＯ４０．２ｇ／Ｌ，ＭｎＳＯ４０．３ｇ／Ｌ，ｔｒｉ—ａｍｍｏｎｉｕｍｃｉｔｒａｔｅ２ｇ／Ｌ，ａｎｄｄｄＨ２Ｏ１Ｌ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｒｅａｃｈｅｄｕｐｔｏ７５２．１１ＡＵ／ｍＬｗｈｉｃｈｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１．６２ｔｉｍｅｓ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄｉｎｓｉｇｈｔｉｎｔｏｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｕｓｅｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎａｓａｆｏｏｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｉｎｔｈｅｆｏｏｄｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍＬＰＬ一１；ｐｌａｎｔａｒｉｃｉｎＬＰＬ一１；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ

植物乳杆菌发酵培养基的优化

植物乳杆菌发酵培养基的优化黄秀敏;张宜靖;李学优;曹丁;夏枫耿;黄魁英;林盛华【摘要】Objective] To optimize the fermentation medium, and to enhance the biomass of Lactobacillus plantarum based on successful screening of a L.plantarum with strong acid production.[Method] The single factor test and orthogonal test were used to optimize the composi-tion of the culture medium.[Result] The optimized fermentation medium was as follows:30.00 g/L sucrose, 50.00 g/L yeast extract, 5.00 g/L anhydrous sodium acetate, 2.00 g/L dipotassium hydrogen phosphate, 2.00 g/L diammonium hydrogen citrate, 0.58 g/L magnesium sulfate, 0.25 g/L manganese sulfate, 1 mL/L Tween-80, and 2.00 g/L calcium carbonate.OD value of L.plantarum broth after optimization increased from 5.701 to 15.021, viable count reached 7.1 ×109 cfu/mL.[Conclusion] The production cost was reduced by the optimized fermentation medium, which provided reference for the study of the subsequent industrial production.%[目的]在成功筛选出1株有强产酸能力的植物乳杆菌的基础上，优化其发酵培养基，以提高其生物量。

植物乳杆菌LB-B1产细菌素发酵条件的优化

ＯｐｉｚｔｎｏｆｒｅｔｔｎｃｎｉｏｓｆｒａｔｒｃｎｂｔｍｉａｉｏｆｅｍｎａｉｏｄｔｎｏｂｃｅｉｉｙＬａｔｂｃｌｓｐａｔｎｎＬＢ１ｏｉｏｃｏｏｉｕｌｎａｕＢ．ｌ
ｘＩｎ，ＮＱｉｑａ，ＨＮＧＪｇｈｎ，ＨＮＧＬｅｉｇＨｎｉＥＹｉｇＱｒａｉＺＡｎｓｅｇＺＡｉｎ，ＡＯＹａｌｇｎｎｉｂｎ
ａｍｍｏｕｉａｅ２ｇＬ，ａｎｓｕｕｌａｅＯ２ｍ，ｉｔｓｉｎｉｍｃｔｔ／ｍｇｅｉｍｓｆｔ．８ｇｒｄｐｏｓｕｍｙｒｇｎｐｓｈａｅ２ｇ，ａｇｎｓｕｌａｅＯ．５ｇＬ，ｗｅｎ・０４ｍ儿．ａｈｄｏｅｈｏｐｔｍｍｎａｅｅｓｆｔ２／ｔｅ８Ｕｎｄｒｔｅｅｈａｖｏｄｉｏｓｐｏｕｃｉｎｏｆｈｓｃｅｉｃｎｃｕｄｒａｈ１２０ＡＵ／，ｂｏｅｃｎｔｎ，ｒｄｔｏｔｉｔｒｏｉｏｌｅｃ０４ｉｂａｍｌｗｈｉｈｗａｎｒａｅｙｔｅｄｏｃｓｉｃｅｓｄｂｅｆｓｃｍｐａｅａｆｏｉｉｌｒｕｔｎ．ｈｒｏｌｒｄｔｔｔｒｇｎａｏｄｃｉｏｈｏｐｏ
试验结果表明植物乳杆菌lbb1的产量与菌体生长相关生物合成方式表现为初级代谢机制这与绝大多数细菌素研30002500皇2000当1500s1000楼500雌0最时问il围1植物乳杆菌lbb1的生长与发酵上清液细菌素效价曲线f畸u怕1cellgrowthlactobacillusplantarumlbb1bacteriocinproductionsupematant22培养温度对植物乳杆菌lbb1产量的影响15土525303742温度图2不同培养温度对细菌素产量的影响f白u他2effectdifferenttemperature013bacteriocins分别将接种植物乳杆菌lbb1的mrs培养基置于室温15525303742培养测定菌体生长与发酵上清液细菌素效价结果图2表明在37培养时植物乳杆菌lbbi产量达到最大值2560aimi且菌体生长较好故确定最适培养温度为3723培养基初始ph值对植物乳杆菌lbb1产量的影响将mrs培养基的初始ph值分别调为4050607080以1接种量接种培养测定菌体生长与发酵上清液细菌素效价

植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵培养基优化

植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵培养基优化王瑶;李琪;李平兰【摘要】乳酸细菌素是细胞在转录翻译过程中通过核糖体机制合成,并分泌到菌体体外的一类具有抑菌活性的蛋白质,细菌素具有无抗药性、无毒副作用及易被人体降解的特点,因此是一种天然的食品防腐保鲜剂.为了提高植物乳杆菌LPL-1所产细菌素的产量,以单增李斯特菌为指示菌,相对抑菌效价为效应值,通过响应面法对发酵培养基组成进行优化,确定了最优培养基组成.利用单因素试验与Plackett-Burman 试验,确定了主要影响因素为葡萄糖质量分数、胰蛋白胨质量分数与吐温-80体积比,最陡爬坡试验与Box-Behnken响应面试验确定了最优培养基组成为:葡萄糖质量分数2.08％、酵母粉质量分数0.51％、胰蛋白胨质量分数1.02％、牛肉膏质量分数1％、吐温-80体积比1.02 mL/L、磷酸氢二钾质量浓度3 g/L、乙酸钠质量分数0.5％、硫酸镁质量浓度0.2 g/L、硫酸锰质量浓度0.3 g/L、柠檬酸氢二铵质量浓度2 g/L、蒸馏水体积1L.在此条件下细菌素效价(752.11 AU/mL)比优化前(286.67 AU/mL)提高了1.62倍.因此,发酵培养基的优化为菌种与细菌素的产业化应用奠定了基础.【期刊名称】《农业机械学报》【年(卷),期】2018(049)009【总页数】7页(P311-317)【关键词】植物乳杆菌LPL-1;植物乳杆菌素;发酵培养基;响应面【作者】王瑶;李琪;李平兰【作者单位】中国农业大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;中国农业大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;中国农业大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083【正文语种】中文【中图分类】TS201.30 引言乳酸细菌素是乳酸菌在转录翻译过程中通过核糖体机制合成，并分泌到菌体体外的一类具有抑菌活性的蛋白质，细菌素具有无抗药性、无毒副作用及易被人体降解的特点，因此不仅是一种天然的食品防腐保鲜剂[1-2]，而且具有取代抗生素的潜力[3]。

一株植物乳杆菌[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810870915.6(22)申请日 2018.08.02(83)生物保藏信息CGMCC NO:15546 2018.04.02(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所地址 730046 甘肃省兰州市城关区徐家坪1号(72)发明人李有全　李禤　关贵全　刘军龙　刘爱红　王锦明　殷宏　罗建勋　刘志杰　独军政　高闪电　刘光远　任巧云　陈泽　杨吉飞　(74)专利代理机构兰州振华专利代理有限责任公司 62102代理人张晋(51)Int.Cl.C12N 1/20(2006.01)A23K 10/18(2016.01)C12R 1/25(2006.01)(54)发明名称一株植物乳杆菌(57)摘要本发明公开一株能防治牛羊腹泻病的菌株。

本发明的植物乳杆菌，于2018年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:15546。

本发明的的植物乳杆菌可在食草动物饲养中的应用，也可在制备食草动物的饲料添加剂中的应用，还可在制备食草动物的饲料中的应用。

本发明的植物乳杆菌菌株，具有很强的黏附及抑菌能力，有很好的耐酸、耐胃肠道以及耐胆盐能力，能有效的防治牛羊腹泻病。

权利要求书1页说明书6页附图5页CN 109022313 A 2018.12.18C N 109022313A1.一株植物乳杆菌，于2018年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:15546。

2.权利要求1所述的植物乳杆菌在食草动物饲养中的应用。

3.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备食草动物的饲料添加剂中的应用。

4.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备食草动物的饲料中的应用。

权　利　要　求　书1/1页CN 109022313 A一株植物乳杆菌技术领域[0001]本发明涉及一株能防治牛羊腹泻病的菌株。

植物乳杆菌生长条件的优化

植物乳杆菌生长条件的优化
关秀艳，胡梦坤，阳曹
（．阳产品质量监督检验院，阳ห้องสมุดไป่ตู้１０２；．１沈沈１０３２东陵区动物防疫监督所，阳１００）沈１００
摘要：为优化植物乳杆菌在静置条件下的生长条件，以植物乳杆菌为试材，采用摇瓶发酵试验方法，探讨发酵温度、培养基初始ｐＨ
值、接种量对菌体生长的影响。试验结果表明，植物乳杆菌的最佳培养条件为：起始ｐＨ值７￣．，．７培养温度３￣０℃，种量５０３７４接％
（／，ＶＶ）发酵时间２；此条件下培养，４ｈ在活菌数可达９４ｘ０ｃ／。培养条件优化后，．１ｆｍＬ７ｕ得到的活菌数是基础培养基的１．８倍。关键词：乳酸菌；培养基优化；生长条件；Ｓ培养基；ＭＲ培养温度；接种量
７２。．
７、．，．８然后按２ＶＶ的接种量取０Ｌ５０％（／）．ｍ菌液接６种培养．液量为３Ｌ３０ｍＬ三角瓶．３装０ｍ／０于７℃振荡培养２，摇床转速为１０ｒ／ｉ，平板菌落计４ｈ４ｖｍｎｅ
数。每个处理做３个重复，平均值。取
３）接种量对植物乳杆菌生长的影响：按１、％
２ＭＳ）Ｒ液体培养基（００ｍ）蛋白胨ｌ，１０Ｅ：０ｇ磷酸氢二钾２ｇ乙酸钠５ｇ柠檬酸二铵２ｇ葡萄糖２，，，０ｇ七水硫酸镁０５，肉膏１，水硫酸锰０１，．８ｇ牛０ｇ一．９

一株发酵乳杆菌培养条件的优化

条件（温度、接响。结果表明，最适碳源是乳糖，其最
佳氮源是酵母粉；最佳培养条件是起始ｐＨ值６、养温度３．培５５℃、种量１可以考虑将ＢＦ１接％，Ｌ０作
为青贮接种剂使用。
关键词：贮饲料；青发酵乳杆菌；养基优化培
中图分类号：８６３￥１．文献标识码：Ａ文章编号：０１９１２１）９０２ — ３１０ — ９Ｘ（００１— ０６０
ＯｐｔｍｉａｔｏｏｏｈｏｉｉｓｆｒｌｃｏａｉｌｓｆｒｎＵＩｉｚｉｎｆｇｒｗｔｃｎｄｔｏｎｏａｔｂｃｌｕｅｍｅｔｌｌ
ｄｎｉｅｙｔｅｏｅｆｃｏ — ｔａｔｐｒａｈｈｐｉｌｃｒＯｌｓｕｃｎｉｏｅｏｒｅｗｒｅｔｄｂｈｎ — ａｔｒａ — — ｉａｐｏｃ．Ｔｅｏｔｉｆｍｅｍａａｂｉｏｒｅａｄｎｔｇｎｓｕｃｅｅｒ
青贮饲料是反刍动物饲料的重要组成部分，青贮而且在实际生产中应用也较广泛，它们对于饲料的保菌制剂通过微生物作用，可以改善青贮产品品质，有存，饲料适口性以及提高奶牛的生产性能具有显提高效延长青贮饲料的保存时间，具有重要的使用价值。著作用。比之下，于异型发酵乳酸菌的研究较少，相关
青贮的原理是在厌氧条件下，通过附着于植物体的乳而且目前大多集中研究布氏乳杆菌对青贮饲料有氧

SAS软件优化植物乳杆菌增殖培养基的研究

发酵剂是影响发酵产品质量的关键子，乳国
发酵食品制作技术的发展，乳酸菌发酵剂也从天然发酵剂、普通乳酸菌发酵剂发展到浓缩型乳酸菌发酵剂。浓缩型乳酸菌发酵剂（即直投式乳酸菌发酵剂，Ｖ）ＤＩ最大的优点是活菌含量高，保藏期长，接种量／ｔｊ“ ，。因此，研制浓缩型乳酸菌发酵剂首先需要获得高浓度的菌体。植物乳杆菌是泡菜、发酵肉制品等重要发酵剂的组成菌之一，在对植物乳杆菌ＬＲ３进行研究时发 —Ｂ现。乳酸细菌培养基（Ｒ用ＭＳ培养基）培养该菌时，细
基中，— Ｂ的最大茵体浓度－￣达到１１ｘ０ｕｍ比优化前的３３ｌ８ｆｍＬ高了４倍多。ＬＲ３ｑ．－．９１９ｆＬ，４ｃ／．ｘ０ｃ／提５ｕ
关键词：植物乳杆茵：殖；增培养基；ＡＳＳ软件
ＯＰＭＩＡＴＩＴＩＺＯＮＣＵＬＯＦＡＴＵＲＥＭＥＤＩＵＭＯＲＦＣＥＬＬＭＵＬＰＬＣＡＴＯＮ耵ＩＩＯＦ上．ＣＡ Ⅳ Ｒ７ＵＳＮＧＡＳＳＩＳＯＦｒＷＡＲＥ
ＡｂｔａｔＥｆｃｆｓｃｏｅｗｏｔｗｈｅｏｅｎｎｔｌｐＨｎｔｅｃｌｍｕｔｐｉａｉｎｏｃｏａｉｕａ－ｓｒｃ：ｆｔｏｕｒｓ，ｒ，ｅｙｐｗｄｒａｄｉｉａｉｏｈｅｌｌｉｌｔｆｃｏＬａｔｂｃｌｓｐｌｎｌｔｒｍａｕＬ—ＲＢ３ｗａｔｄｅｔｅｐｎｅｓｒａｅｅｐｒｍｅｔｄｓｇｆＳｏｔｒ．ＳｉｎｉｃｍａｈｍａｉａｓｓｕｉｄｗｉｒｓｏｓｕｆｃｘｅｉｎｅｉｎｏＡＳｓｆｈｗａｅｃｅｔｔｅｔｌｉｆｃｍｏｅｓｗｅｅｆｕｄｄｄｌｒｏｎｅ．ＯｐｉｚｔｎｔｌｐｉａｉｎｃｎｉｉｎｆＬａｔｂｃｌｕａｔｒｍｔｍｉａｏｈｅｍｕｔｌｔｏｏｄｔｓｏｃｏａｉｓｐｌｎａｕＬ—ＲＢ３ｔｃｎｂｉｉｃｏｌ，ｉａｅｆｕｄｔａｈｐｉｏｎｈｔｔｅｏｔｍｕｍｒｃｓａａｔｒｏｅｍａｉｍｏｃｎｒｔｎｏｐｏｅｓｐｒｍｅｅｆｒｔｘｍｕｃｎｅｔａｉｆＬ．ｐａｔｒｍＲＢ３ｗｅｅｏ — ｓｈｏｌｎａｕＬ— ｒｂｔｉｅｓｆｌｗｓｓｃｏｅ４３，ｗｏｔ４．几，ｅｏｅ４／ａｄｉｉａＨ．５１ｈｄｑａｙｏａｎｄａｏｌ：ｕｒｓ．０ｇＬ，ｒ８ｍＬｗｈｙｐｗｄｒ７．２ｓＬｎｎｔｌｐ６２． ’ｅａｅｕｃｆｏ６ｉｔｅｍｏｅｑａｉｎｆｒｐｅｉｔｇｔｅｏｔｍｕｒｓｎｅｖｌｅｓｖｒｆｅｆｃｉｅｙｂｈａｉａｉｎｄｔ．ｈｄｌｅｕｔｏｒｄｃｉｈｐｉｍｅｐｓａｕｓｗａｅｉｄｅｅｔｖｌｙｔｅｖｄｔａａｏｎｏｉｌｏＴｈｂａｎｄｍａｉｍｏｃｎｒｔｏｆｐｌｎａｕＲＢ３ｉ．９０ｆ／ｈｐｉｚｄｃｎｉｉｎ．ｎｅｏｔｉｅｘｍｕｃｎｅｔａｉｎｏＬ．ａｔｒｍＳ１４１ｘｌ９ｃｕｍＬｉｔｅｏｔｍｉｅｏｄｔｓａｄｎｏｉｉｈｒｔａｅｕｔｖｌｆ．３０ｆ／ｅｏｅｏｉｚｔｏｕｍｅ．Ｓｈｇｅｎｔｒｓｌａｕｅｏ５￣１０ｕｍＬｂｆｒｐｔｈｈｅ３ｃｍｉａｉｎｆｒｉｓｏｔＫｅｒｓ：ａｔｂｃｌｓｐｌｎａｕｍｕｔｌｃｔｎ；ｍｅｉｍ；Ｓｏｔｒｙｗｏｄｌｃｏａｉｕａｔｒｍ；ｌｉｉａｉｌｐｏｄｕＡＳｓｆｗａｅ

植物乳酸菌高密度发酵培养基优化

植物乳酸菌高密度发酵培养基优化作者：刘利利周勇卢宗梅来源：《当代化工》2020年第04期摘要：主要探索了如何提高植物乳杆菌高密度发酵活菌数，研究了培养基成分、pH值等发酵条件。

结果表明：植物乳酸菌生长最适碳源是淀粉、葡萄糖，最适氮源是酵母浸粉;二价锰离子和无机盐对菌体的生长有促进作用;最适培养基组成：酵母浸粉3%，醋酸钠0.5 %，柠檬酸三铵0.2%，磷酸氢二钾0.3%，氯化钠0.2%，吐温80 0.1%，硫酸锰0.3‰，硫酸镁0.2‰，无水葡萄糖2.2%，碳酸钙0.5%，淀粉4.4%。

在5 L半自动发酵罐中，发酵16 h左右，活菌数为8.9×1011 CFU/mL，发酵液保存周期较长，在75 d跟踪检测中活菌数无数量级变化。

关键词：植物乳酸菌;培养基组分;活菌数;保存周期中图分类号：Q 815 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2020）04-0616-04Abstract： How to increase the number of viable bacteria in high-density fermentation of lactobacillus plantarum was mainly explored， and the fermentation conditions were studied，such as medium composition and pH value. The results showed that the mixture of starch and glucose was the optimum carbon source for the growth of lactic acid bacteria， while yeast extract was the optimum nitrogen source;Divalent manganese ions and inorganic salts could promote the growth of bacteria;the optimum medium composition was as follows： yeast extract 3%， sodium acetate 0.5%，triammonium citrate 0.2%， dipotassium phosphate 0.3%， sodium chloride 0.2%， Tween800.1%，manganese sulfate 0.3‰，magnesium sulfate 0.2teanhydrous glucose 2.2%，calcium carbonate 0.5%，starch 4.4%. The number of viable bacteria reached 8.9che11 CFU/mL after 16-hour fermentation in a 5 L semi-automatic fermentation tank，and the change of number of viable bacteria in the fermentation broth was not more than one magnitude order after 75-day storage.Key words： Plant lactobacillus; Medium composition; Number of living bacterium; Preservation period植物乳酸菌（LacLo ba-cillus planlarum）具备免疫调节、抑制病原微生物、维持肠道菌群平衡和促进营养物质吸收等很多保健作用，同时也广泛应用于微生物制剂[1]。

植物乳杆菌的培养条件

植物乳杆菌的培养条件植物乳杆菌（Plantarum Lactobacillus）是一种常见的益生菌，具有重要的应用价值。

为了获得高质量的植物乳杆菌，科学家们对其培养条件进行了广泛研究。

本文将以植物乳杆菌的培养条件为标题，详细介绍植物乳杆菌的培养条件。

一、培养基的选择植物乳杆菌的培养基是其生长和繁殖的基础。

常用的培养基包括MRS培养基、De Man Rogosa Sharpe（MRS）培养基等。

MRS 培养基是一种富含碳水化合物、氮源和维生素的培养基，能够提供植物乳杆菌所需的养分。

二、温度条件植物乳杆菌对温度的要求较高，一般在30-40摄氏度之间能够较好地生长和繁殖。

过高或过低的温度都会对植物乳杆菌的生长产生不利影响。

三、pH值调节植物乳杆菌对pH值也有一定的要求，一般在pH 6.0-7.0之间生长最好。

因此，在培养植物乳杆菌时，需要通过调节培养基的pH值来满足其生长需求。

四、氧气条件植物乳杆菌属于厌氧菌，对氧气敏感。

在培养植物乳杆菌时，需要采取相应的措施，保持培养的无氧条件，例如使用密闭培养瓶，或者通过注入氮气等方式排除氧气。

五、营养物质的添加植物乳杆菌对营养物质的需求较高，尤其对碳水化合物、氮源和维生素等的需求量较大。

在培养植物乳杆菌时，需要适当添加适量的营养物质，以提供菌体生长所需的养分。

六、培养时间植物乳杆菌的培养时间一般较长，通常需要培养24-48小时才能达到较高的菌量。

在培养过程中，需要定期观察菌液的浑浊度和pH 值的变化，以确定最佳的培养时间。

七、消毒条件为了避免外源性微生物的污染，培养植物乳杆菌时需要注意消毒条件。

可以采用高温蒸汽灭菌或紫外线照射等方法对培养器具和培养基进行消毒处理，以保证培养的纯度。

总结起来，培养植物乳杆菌的条件包括合适的培养基选择、适宜的温度、合理的pH值、无氧条件、适量的营养物质添加、适当的培养时间和良好的消毒条件。

只有在这些条件的综合作用下，才能获得高质量的植物乳杆菌。

一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究

江西农业大学学报㊀２０１８，４０（２）：３６５－３７０ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓＤＯＩ：１０．１３８３６／ｊ．ｊｊａｕ．２０１８０４８罗素贤，叶昱，周信荣，等．一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究［Ｊ］．江西农业大学学报，２０１８，４０（２）：３６５－３７０．一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究罗素贤１，２，叶㊀昱１，２＊，周信荣１，２，陈燕君１，２，宋德平１，２∗，彭㊀棋１，２，唐玉新１，２∗（１．江西农业大学动物科学与技术学院，江西南昌３３００４５；２．江西省畜禽疫病诊断与防控重点实验室，江西南昌３３００４５）摘要：为了探索鼠李糖乳杆菌的生长特性和最适培养条件，研究采用单因素试验设计，分别考察了温度㊁培养基初始ｐＨ值㊁供氧水平和培养周期等参数对鼠李糖乳杆菌（ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＧＧ，ＬＧＧ）菌体生长的影响㊂结果表明鼠李糖乳杆菌的最适生长温度为３９ħ㊁最适ｐＨ为６．０，适宜在低溶氧量的环境中培养㊂研究证实鼠李糖乳杆菌适宜在偏酸性的厌氧环境中生长，在３９ħ下培养６ｈ活菌量可达１０８．５ｃｆｕ／ｍＬ，上述结果对于鼠李糖乳杆菌的规模化生产具有一定的指导意义㊂关键词：益生菌；鼠李糖乳杆菌；培养条件；菌落计数；细菌生长曲线中图分类号：Ｑ９３９．１１＋７㊀㊀文献标志码：Ａ㊀㊀文章编号：１０００－２２８６（２０１８）０２－０３６５－０６ＡＳｔｕｄｙｏｎＯｐｔｉｍｉｚｉｎｇＣｕｌｔｕｒｅＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＡＳｔｒａｉｎｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＧＧＬＵＯＳｕ⁃ｘｉａｎ１，２，ＹＥＹｕ１，２＊，ＺＨＯＵＸｉｎ⁃ｒｏｎｇ１，２，ＣＨＥＮＹａｎ⁃ｊｕｎ１，２，ＳＯＮＧＤｅ⁃ｐｉｎｇ１，２∗，ＰＥＮＧＱｉ１，２，ＴＡＮＧＹｕ⁃ｘｉｎ１，２∗（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉａｎｇｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４５，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｒｏｗｔｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏ⁃ｓｕｓＧＧ（ＬＧＧ），ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｉｎｉｔｉａｌｐＨｏｆｍｅｄｉｕｍ，ｏｘｙｇｅｎｌｅｖｅｌ，ａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｐｅｒｉｏｄｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆＬＧＧｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈａｓｉｎｇｌｅ⁃ｆａｃｔｏｒｔｅｓｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｏｆｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｅｒｅ３９ħａｎｄ６．０，ａｎｄｉｔｗａｓｆｉｔｔｅｓｔｆｏｒＬＧＧｔｏｂｅｂｒｅｄｉｎａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌｏｗｌｅｖｅｌｏｆｄｉｓｓｏｌｖｅｄｏｘｙｇｅｎ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｆｕｒｔｈｅｒｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｉｔｗａｓｐｒｏｐｅｒｆｏｒＬＧＧｔｏｇｒｏｗｉｎｈｙｐｏｘｉａａｓｌｉｇｈｔｌｙａｃｉｄｃｏｎ⁃ｄｉｔｉｏｎ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅａｃｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｒｅａｃｈｅｄ１０８．５ｃｆｕ／ｍＬａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ６ｈａｔ３９ħ．Ｔｈｅａｂｏｖｅｒｅｓｕｌｔｓｐｒｏ⁃ｖｉｄｅｉｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｃａｌｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＬＧＧ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ；ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＧＧ；ｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ；ｃｏｌｏｎｙｃｏｕｎｔ；ｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆｂａｃｔｅｒｉａ㊀㊀收稿日期：２０１７⁃０７⁃１６㊀㊀修回日期：２０１７⁃０９⁃１０基金项目：国家自然科学基金项目（３１３７２４５７）㊁江西省科技厅落地计划项目（ＫＪＬＤ１３０２９）和江西省教育厅科技计划项目（ＧＪＪ１５０３８８）ＰｒｏｊｅｃｔｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（３１３７２４５７）；ｔｈｅＬａｎｄｉｎｇＰｒｏｇｒａｍＦｕｎｄｏｆＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（ＫＪＬＤ１３０２９）；ＰｒｏｇｒａｍｏｎＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（ＧＪＪ１５０３８８）作者简介：罗素贤（１９９３），男，硕士生，主要从事动物病毒学与免疫学研究，４２９０３２８４０＠ｑｑ．ｃｏｍ；＊同等贡献作者；∗通信作者：宋德平，博士，ｓｄｅｐｉｎｇ１９８７＠１２６．ｃｏｍ；唐玉新，教授，博士，ｔａｎｇ５３ｓｔｅｒ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ㊂㊃６６３㊃㊀江西农业大学学报第４０卷乳酸菌属于益生菌，主要存在于动物体肠道和阴道内［１］㊂它能改善肠道微环境，提高饲料利用率，促进动物生长性能［２］，还能刺激免疫细胞，调节免疫应答，使机体免疫力持续处于较高水平［３］㊂随着我国畜牧养殖业中饲料添加抗生素产生的副作用日益明显，乳酸菌因其益生菌的功能而作为绿色添加剂获得广泛研究及应用［４］㊂鼠李糖乳杆菌是近年来研究最热门的乳酸菌之一，在肠道酸性环境定植，可以调节肠道菌群，预防和治疗腹泻，并且在机体排出毒素㊁预防龋齿和增强免疫等方面效果良好［５］㊂本试验以鼠李糖乳杆菌为对象，通过细菌形态学观察㊁生化试验和生长曲线等方面的测定，旨在确定鼠李糖乳杆菌生长最佳温度和最佳起始ｐＨ，探究溶氧量以及不同收获时间点对其生长的影响，了解鼠李糖乳杆菌体外培养的生长周期，为进一步研究乳酸菌菌群和乳酸菌作为饲料添加剂应用于生产实践中提供良好的参考㊂１㊀材料与方法１．１㊀材料１．１．１㊀菌种㊀菌种鼠李糖乳杆菌（ＬＧＧ）ＪＸ－１，由江西农业大学预防兽医教研室保存㊂１．１．２㊀主要试剂㊀细菌微量生化反应管为杭州天和微生物试剂有限公司产品；脱脂奶粉为天津伊利乳业有限公司产品㊂１．１．３㊀培养基㊀ＭＲＳ液体培养基：称取ＭＲＳ培养基粉末４８ｇ，加入１Ｌ水，充分搅拌溶解㊂ＭＲＳ固体培养基：在ＭＲＳ液体培养基的基础上，加入质量浓度为１８ｇ／Ｌ的琼脂粉㊂１．１．４㊀仪器设备㊀生化培养箱（型号：ＳＰＸ－８０ＢＳＨ－Ⅱ），上海新苗医疗器械制造有限公司生产；紫外可见分光光度计（型号：ＵＶ７５４Ｎ），上海佑科仪器仪表有限公司生产；ｐＨ计（型号：ＰＨＳ－３Ｃ），上海仪电分析仪器有限公司生产等㊂１．２㊀试验方法１．２．１㊀细菌形态学观察㊀观察固体培养基中菌落的特点；经革兰氏染色后，在光学显微镜下观察细菌形态［６］㊂１．２．２㊀生化试验㊀本研究使用微量生化反应管进行糖发酵试验㊁淀粉水解试验㊁明胶液化试验㊁硝酸盐还原试验；在种子液上滴加体积分数为３％５％过氧化氢溶液，观察３５ｍｉｎ进行过氧化氢试验［７］㊂１．２．３㊀细菌生长最佳温度确定㊀本试验设置５个温度变量，分别在３５ħ㊁３７ħ㊁３９ħ㊁４１ħ和４３ħ培养乳酸菌㊂将活化好的鼠李糖乳杆菌按２％的量接种入５个锥形瓶中，每个温度重复３次，将锥形瓶分别标号并各置于５个温度条件下培养７ｈ后取出少量菌液，测定菌液ＯＤ６００［８］，探索鼠李糖乳杆菌的最适体外培养温度㊂１．２．４㊀细菌生长初始ｐＨ确定㊀本试验在最适温度条件下培养细菌㊂以初始ｐＨ为变量，设置６组ｐＨ值，分别为５．５㊁６．０㊁６．５㊁７．０㊁７．５和８．０㊂每个锥形瓶中加入等量ＭＲＳ培养基，盐酸溶液和碳酸钠溶液标定培养基至上述ｐＨ值，ｐＨ计测量并校准，经高压蒸汽灭菌后降至室温㊂按２％接种量将活化好的鼠李糖乳杆菌菌种液接入ＭＲＳ培养基，每个ｐＨ重复３次，放入生化培养箱培养７ｈ后取出，测定各组ＯＤ６００，确定最佳ｐＨ值㊂１．２．５㊀溶氧量对细菌生长的影响㊀震荡培养基溶氧量高，静置培养基溶氧量低［９］㊂本试验在最适温度和ｐＨ条件下培养细菌，通过震荡培养（２２０ｒ／ｍｉｎ）和静置培养两种方式改变溶氧量进行研究㊂以２％活化的菌种液分别接入ＭＲＳ培养基，每种方式重复３次，分别放入恒温培养箱和震荡培养箱培养４ｈ和７ｈ取出测定ＯＤ６００值㊂１．２．６㊀细菌生长曲线绘制㊀在５００ｍＬ三角瓶中加入２００ｍＬＭＲＳ培养基，２％接种量，在最适温度和ｐＨ条件下静置培养１６ｈ，每２ｈ进行ＯＤ６００测定㊁培养物的ｐＨ值测量及采用梯度稀释平板法进行细菌计数㊂使用Ｅｘｃｅｌ统计分析数据，计算并绘制ｐＨ㊁ＯＤ６００变化曲线和细菌生长曲线㊂２㊀结果分析２．１㊀形态学特征和染色结果细菌ＪＸ－１株的菌落呈淡黄色（图１），直径约１ｍｍ的半圆形凸起，表面光滑㊁湿润，菌落边缘整齐，第２期罗素贤等：一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究散发轻微酸味㊂革兰氏染色后置于１００倍油镜下观察结果如图２，菌体革兰氏染色阳性，外形呈杆状，符合鼠李糖乳杆菌形态学特性［１０］㊂图１㊀细菌ＪＸ－１株菌落形态Ｆｉｇ．１㊀ＣｏｌｏｎｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＪＸ－１ｓｔｒａｉｎ图２㊀革兰氏染色细菌形态（１００ˑ）Ｆｉｇ．２㊀ＢａｃｔｅｒｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗｉｔｈＧｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇ（１００ˑ）２．２㊀生理生化特征鉴定过氧化氢酶试验结果显示，无气泡产生，呈阴性㊂经过生理生化特征检测（表１），结果表明该菌能利用果糖㊁鼠李糖㊁淀粉㊁蔗糖㊁麦芽糖㊁半乳糖㊁甘露醇㊁山梨醇㊁葡萄糖㊁甘露糖㊁靛基质㊁蕈糖，不能还原硝酸盐，不液化明胶㊂综合生化鉴定㊁形态学分析和过氧化氢酶试验的结果，根据‘伯杰氏鉴定细菌手册“及‘乳酸细菌分类鉴定及试验方法“判断该菌为鼠李糖乳杆菌［１１］㊂表１㊀生理生化试验结果Ｔａｂ．１㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ鉴定项目Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｔｅｍ结果Ｒｅｓｕｌｔ鉴定项目Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｔｅｍ试验结果Ｒｅｓｕｌｔ果糖（ＦＲＵ）＋甘露醇（ＭＡＮ）＋鼠李糖（ｌＲＨＡ）＋山梨醇（ＳＯＲ）＋淀粉（ＳＴＡ）＋葡萄糖（ＧＬＵ）＋硝酸盐（ＮＩＴ）－甘露糖（ＭＮＥ）＋蔗糖（ＳＡＣ）＋靛（ＩＮＤ）＋麦芽糖（ＭＡＬ）＋蕈糖（ＴＲＥ）＋半乳糖（ＧＡＬ）＋明胶（ＧＥＬ）－㊀㊀＋为阳性；－为阴性㊀㊀＋ｍｅａｎｓｐｏｓｉｔｉｖｅ；－ｍｅａｎｓｎｅｇａｔｉｖｅ２．３㊀最适生长温度温度高于或低于最适生长温度，生长速率都会随之下降［９］㊂本试验发现在３５４３ħ内，鼠李糖乳杆菌均能生长（图３）㊂而且随着温度的升高，鼠李糖乳杆菌的生长呈现升高趋势，其菌体量在３９ħ达到峰值（ＯＤ值为１．１５８）㊂随着培养温度进一步升高，鼠李糖乳杆菌菌体生长呈现明显的下降趋势㊂以上结果表明，鼠李糖乳杆菌的最适培养温度为３９ħ㊂２．４㊀最佳起始ｐＨ值结果图４所示的起始ｐＨ结果表明，鼠李糖乳杆菌适合于中性偏酸性环境下生长，其中以６．０的初始ｐＨ最佳㊂当初始ｐＨ高达８．０时，鼠李糖乳杆菌的繁殖受到较大影响，其菌液ＯＤ６００值与ｐＨ６．０相差０．５９５㊂㊃７６３㊃㊀江西农业大学学报第４０卷图３㊀温度对鼠李糖乳杆菌生长影响Ｆｉｇ．３㊀ＧｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆＬＧＧａｔｖａｒｉｏｕｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ图４㊀初始ｐＨ对鼠李糖乳杆菌生长影响Ｆｉｇ．４㊀ＧｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆＬＧＧｏｎｖａｒｉｏｕｓｉｎｉｔｉａｌｐＨ２．５㊀溶氧量影响结果分别测定了静置培养和震荡培养两种培养方式对鼠李糖乳杆菌生长的影响，其４ｈ和７ｈ的菌液ＯＤ６００差值分别为０．０４５和０．１７８（表２），且４ｈ时静置培养的菌体量显著高于震荡培养（Ｐ＝０．０３９４），７ｈ时静置培养的菌体量极显著高于震荡培养（Ｐ＝０．０５）㊂本试验结果说明，溶氧量较高的震荡培养，不利于鼠李糖乳杆菌生长㊂表２㊀不同培养方式的生长结果Ｔａｂ．２㊀ＧｒｏｗｔｈｒｅｓｕｌｔｓｏｆＬＧＧｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ培养方式Ｃｕｌｔｕｒｅｔｙｐｅ不同培养时间下的ＯＤ６００值ＴｈｅＯＤ６００ｖａｌｕｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｉｎｇｔｉｍｅ２ｈ４ｈ７ｈ静置培养Ｓｔａｔｉｃｃｕｌｔｕｒｅ０．１２２ʃ０．００５０．３７９ʃ０．００３∗１．６５１ʃ０．００４∗∗震荡培养Ｓｈａｋｅｃｕｌｔｕｒｅ０．１２１ʃ０．００４０．３３４ʃ０．０１６１．４７３ʃ０．０２１㊀㊀∗表示差异５％水平显著性，∗∗表示差异１％水平显著性㊂㊀㊀∗ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔ０．０５ｌｅｖｅｌ，∗∗ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔ０．０１ｌｅｖｅｌ．２．６㊀生长曲线绘制结果从图５可知，鼠李糖乳杆菌繁殖引起培养基ｐＨ值降低，说明其生长代谢产生大量酸性物质（乳酸）㊂与其他很多微生物不同，除了营养物质消耗等因素制约外，乳酸菌还受代谢过程产酸而形成对自身的酸抑制的影响㊂细菌代谢产生的有机酸溶于培养基中，随着培养时间逐渐积累，造成菌体周围环境ｐＨ值下降，严重干扰乳酸菌正常代谢，抑制其繁殖㊂在图５中，ＯＤ６００值曲线呈Ｓ形，说明菌体存在一个加速繁殖到平稳生长的时期，而ｐＨ值曲线显示在菌体加速繁殖时期乳酸也在大量产生㊂以上结果反映了菌体加速生长引起产生乳酸，大量乳酸积累反过来降低菌体生长速率的现象㊂图５㊀ｐＨ㊁ＯＤ６００变化曲线㊀㊀Ｆｉｇ．５㊀ＴｈｅｃｕｒｖｅｓｓｈｏｗｐＨａｎｄＯＤｃｈａｎｇｅｓｗｉｔｈｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆＬＧＧ图６㊀生长曲线Ｆｉｇ．６㊀ＧｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆＬＧＧ如图６所示，活菌量计数结果发现０２ｈ，鼠李糖乳杆菌接种培养基后适应新环境，经历迟缓期；２４ｈ细菌生长进入对数期，以指数级速度增殖，菌量上升最快，４ｈ时菌量达到１０８ｃｆｕ／ｍＬ㊂而ＯＤ６００值曲线显示６８ｈ总菌数上升最快；并且在６ｈ时，活菌量高而ＯＤ６００值较低，可能与该阶段菌体较小导致ＯＤ６００测量值偏低有关㊂因此，鼠李糖乳杆菌生物量的实时检测时，活菌量的变化较ＯＤ６００曲线准确㊂活菌量与ＯＤ６００曲线测定均显示，１０ｈ后，随着营养物质消耗，乳酸含量升高，活菌数上升逐渐减弱，ＯＤ６００值上升趋势逐渐平缓，说明该菌群进了稳定期㊂㊃８６３㊃㊃９６３㊃第２期罗素贤等：一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究３　讨论㊀㊀鼠李糖乳杆菌是乳酸菌群中一员，是最常用的益生菌，也是最具代表性的菌株［１２］㊂它能抗氧化㊁促吸收，从而提高机体免疫力，对于生产生活也有十分积极的作用［１３］㊂然而发挥益生作用不仅仅需要代谢产物，菌体活性也十分关键㊂活性菌体进入动物胃肠道后，将部分蛋白质㊁糖类和维生素等降解成小分子物质，促进动物体吸收营养［１４］㊂所以在优化培养条件下，研究鼠李糖乳杆菌生长特性与菌体活性的关系，有助于该菌的工业化生产与实践应用㊂本试验绘制生长曲线采用活菌计数㊁ＯＤ６００值测定和ｐＨ值测定同时进行，旨在充分展示鼠李糖乳杆菌生长过程中活菌数㊁总菌数和产酸程度之间的联系㊂结果表明温度３９ħ㊁ｐＨ值６．０静置培养６ｈ，活菌数占总菌数比重最高，产酸速率随培养时间累积逐渐加快㊂在不考虑溶氧量影响的情况下，培养基营养分布越均匀，细菌的长势越好㊂震荡培养条件下，营养分布较静置培养更加均匀，但试验结果显示鼠李糖乳杆菌更适宜静置培养，上述结论与古元懿［９］的试验结果相一致，说明静置和震荡两种培养方式创造了相对不同的溶氧量环境，而且溶氧量环境对鼠李糖乳杆菌培养的影响较大㊂参考杨子萱等［１５］研究结果，按２％接种鼠李糖乳杆菌培养７ｈ，取样测定ＯＤ６００值反映菌液长势情况㊂上述方法与陈佩等［１０］培养１８ｈ不同㊂因此，上述因素可能导致了本试验最佳温度与其研究结果的不同，说明鼠李糖乳杆菌在３７ħ与３９ħ的生长曲线可能呈交叉的Ｓ形，而且随着培养时间延长，最适温度会有所降低，具体的机理还有待进一步研究㊂另外，大多数家畜㊁家禽的体温均高于３７ħ㊂本试验最适温度结果能够更好地模仿鼠李糖乳杆菌在动物体肠道内的温度环境㊂因此，绘制３９ħ的生长曲线可能较３７ħ更具实际意义㊂参考文献：［１］ＧｏｎｇＹＨ，ＴＬＳＬ．ＡｃｈｉｅｖｉｎｇｈｉｇｈｙｉｅｌｄｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｆｏｒａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｉｎｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＬａｃｔｏｂａ⁃ｃｉｌｌｕｓｂｙｔｈｅｃｏ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏｋｉｎａｓｅａｎｄｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１６，２６（１）：２．［２］代永刚，田志刚，南喜平．乳酸菌及其生理功能研究的进展［Ｊ］．农产品加工（学刊），２００９（７）：２４⁃２６，２９．ＤａｉＹＧ，ＴｉａｎＺＧ，ＮａｎＸＰ．ＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄｉｔｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ，２００９（７）：２４⁃２６，２９．［３］张友华，胡怀容，鲜欣言，等．荣昌猪肠道乳酸菌筛选及鉴定［Ｊ］．西南大学学报（自然科学版），２０１６，３８（９）：６⁃１１．ＺｈａｎｇＹＨ，ＨｕＨＲ，ＸｉａｎＸＹ，ｅｔａｌ．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｏｆＲｏｎｇｃｈａｎｇｐｉｇ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ），２０１６，３８（９）：６⁃１１．［４］郭志杰．仔猪源乳酸菌的筛选及其对仔猪作用的影响［Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２０１２．ＧｕｏＺＪ．ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｐｉｇｌｅｔａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｐｉｇｌｅｔｓ［Ｄ］．Ｈａｒｂｉｎ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵ⁃ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１２．［５］赵乙桢，沈雷，孙亚链，等．鼠李糖乳杆菌ＺＪ２２５细菌素的分离纯化及其特性研究［Ｊ］．中国食品学报，２０１５，１５（７）：５４⁃６０．ＺｈａｏＹＺ，ＳｈｅｎＬ，ＳｕｎＹＬ，ｅｔａｌ．ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＺＪ２２５ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１５（７）：５４⁃６０．［６］杨杨，石超，郭旭生．高寒草甸魏斯氏乳酸菌的分离鉴定及理化特性研究［Ｊ］．草业学报，２０１４，２３（１）：２６６⁃２７５．ＹａｎｇＹ，ＳｈｉＣ，ＧｕｏＸＳ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＷｅｉｓｓｅｌｌａｓｐｅｃｉｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＫｏｂｒｅｓｉａｌｉｔｔｌｅｄａｌｅｉｇｒｏｗｉｎｇｉｎａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１４，２３（１）：２６６⁃２７５．［７］叶青．性状优良乳酸菌的筛选分离鉴定及生物学特性研究［Ｄ］．南昌：江西农业大学，２０１４．ＹｅＱ．ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｅｘｃｅｌｌｅｎｔＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｄ］．Ｎａｎｃｈａｎｇ：ＪｉａｎｇｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４．［８］陆爱华．浓缩型乳酸菌发酵剂制备工艺的研究［Ｄ］．合肥：安徽农业大学，２００６．㊃０７３㊃㊀江西农业大学学报第４０卷ＬｕＡＨ．ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｂｏｕｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｓｔａｒｔｅｒｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ［Ｄ］．Ｈｅｆｅｉ：ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉ⁃ｔｙ，２００６．［９］古元懿．乳酸菌高密度培养及冻干工艺的研究［Ｄ］．哈尔滨：东北林业大学，２００８．ＧｕＹＹ．Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｈｉｇｈ⁃ｄｅｎｓｉｔｙｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ［Ｄ］．Ｈａｒｂｉｎ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒ⁃ｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００８．［１０］陈佩，党辉，王伟，等．具有降糖作用的鼠李糖乳杆菌生物学特性研究［Ｊ］．食品工业科技，２０１６，３７（２１）：１６２⁃１６５，１７１．ＣｈｅｎＰ，ＤａｎｇＨ，ＷａｎｇＷ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓｗｉｔｈａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ，２０１６，３７（２１）：１６２⁃１６５，１７１．［１１］陈宇强，曾敏，潘丽媚．鼠李糖乳杆菌生物学特性及功能特性研究进展［Ｊ］．科技信息，２０１０（２０）：３５７．ＣｈｅｎＹＱ，ＺｅｎｇＭ，ＰａｎＬＨ．ＴｈｅＡｄｖａｎｃｅｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓｉｎｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃ⁃ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，２０１０（２０）：３５７．［１２］黄琴，黄怡，崔志文，等．鼠李糖乳杆菌对巨噬细胞先天性免疫应答的调节作用［Ｊ］．中国农业科学，２０１２，４５（８）：１６２１⁃１６２６．ＨｕａｎｇＱ，ＨｕａｎｇＹ，ＣｕｉＺＷ，ｅｔａｌ．ＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓｏｎｉｎｎａｔｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｔｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａＳｉｎｉｃａ，２０１２，４５（８）：１６２１⁃１６２６．［１３］刘玉婷，吴明阳，靳艳玲，等．鼠李糖乳杆菌利用甘薯废渣发酵产乳酸的研究［Ｊ］．中国农业科学，２０１６，４９（９）：１７６７⁃１７７７．ＬｉｕＹＴ，ＷｕＭＹ，ＪｉｎＹＬ，ｅｔａｌ．ＬａｃｔｉｃａｃｉｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｙＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓｆｒｏｍｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏｒｅｓｉｄｕｅ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｔｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａＳｉｎｉｃａ，２０１６，４９（９）：１７６７⁃１７７７．［１４］刘艳姿．乳酸菌的生理功能特性及应用的研究［Ｄ］．秦皇岛：燕山大学，２０１０．ＬｉｕＹＺ．ＴｈｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｉｃｓｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｄ］．Ｑｉｎｈｕａｎｇ⁃ｄａｏ：ＹａｎｓｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１０．［１５］杨子萱，李晨，卢海强，等．鼠李糖乳杆菌原生质体制备与再生［Ｊ］．中国食品学报，２０１５，１５（１２）：３９⁃４６．ＹａｎｇＺＸ，ＬｉＣ，ＬｕＨＱ，ｅｔａｌ．ＰｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１５（１２）：３９⁃４６．。

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选获得的菌株接种于液体发酵培养基．０ｑ培养４３Ｃ８ｈ取１Ｌ发酵液，２Ｌ乙醇，０／ｎ离心；０ｍ加０ｍ５００ｒｍｉ１ｎ５ｍｉ；取上清液，５ｏ水浴保温４ｉ，用１Ｌ９Ｃ０ｍｎ０ｍ
乙醚萃取２，次合并萃取液，０℃挥干，甲醇溶解５用
工业化生产苯乳酸提供可行依据。
１材料与方法
１１材料与仪器．１．试验菌株．１１保藏。ＬｐａｔｒｍＰ８１由微生物实验室．ｌａｕ１８ｎ
１．培养基．２１
种子培养基组成为：葡萄糖１／。０ｇＬ
柱温为３Ｃ进样量为１Ｌ０ｏ；０。
第３总第１９期期８
２１００年３月
农业科技与装备
ＡｇｉｕｔＭＳｉｎｃ＆ＴｅｈｌｇａｄＥｑｉｍｅｔｒｃｌｕｒｃｅｅｃｎｏｏｙｎｕｐｎ
ＮＯ．ｔｌＮＯ．８３Ｔｏａ１９
Ｍａ．０１ｒ２０
中图分类号：１５５Ｒ５．文献标识码：Ａ文章编号：６４１６（０００ — ０８０１７ — １１１）３０２ — ３２
苯乳酸为一种新型生物防腐剂，能抑制多种食源性致病菌、腐败菌，且具有宽广的ｐＨ范围、稳定性热等优点，已引起了人们的关注，受发酵水平低、量但产
１．苯乳酸含量的测定．１２
１发酵液处理：经过筛）将
ｔｕＰ８１菌株的发酵水平不仅与其遗传性能和生ａｍ１８。ｒ
理特性有关，还与其培养条件有关。因此，必要对遗有传性能稳定的高产苯乳酸突变株ＬｐａｔｒｍＰ８１．ｎａｕ１８ｌ的培养条件进行优化改良，以期提高其产量，从而为
１１主要试剂苯乳酸购自ＡＦ．．３ＬＡ公司；其他材料为市售，甲醇为色谱纯，剂为分析纯。试１１主要仪器与设备日立高效液相色谱系统：．．４配有日立Ｌ７２一４０紫外检测器和ＫｏａｉＣ８反向色ｒｍｓ — １ｌ谱柱（５ｉｘ．ｌ５ｍ）２０ｍ４６ｎ。ｎｍ，
１２试验方法＿
不高等因素的制约，难以进行工业化生产＿。１］
辽宁医学院食品科学与工程学院实验室于２００８
年分离获得一株产苯乳酸的乳酸菌，鉴定为植物乳并
杆菌，后经过诱变育种．到一株高产突变株Ｌｐａ．得．ｎｌ
酵母粉１／０ｇＬ，蛋白胨１／，番茄汁３０ｍＬＬ０ｇＬ０／，
ｐＨ６．－６４。２．
１．ｐ值的测定．２Ｈ２
采用ＰＳ３Ｈ一Ｃ精密ｐＨ计测定
ｐＨ值。１．茵体生长量的测定．３２菌体生长量的测定采用
１．菌种活化．５２
从冰箱中取出Ｌｐｎａｕ１８．ｌｔｒｍＰ，士，１８一，硕从事食品微生物方面的
研究。
斜面菌种。温静置４ｉ，后取两环菌种接种于室０ｍｎ然装有１Ｌ・培养基试管中，０ｃ静止培养２，０ｍ子３Ｃ４ｈ
并定容至１，箱冷藏备用。２苯乳酸的测定［０ｍＬ冰）２］（Ｐ）流动相为甲醇和水的混合液；度洗脱Ｈ［Ｃ法：梯程序为０１ｎ由７％甲醇线性变化至１０１～～５ｍｉ００％．５
２ｉ０ｍｎ保持１００％甲醇．０２ｉ２～２ｍｎ由１００％甲醇线性变化至７％；测波长为２０ｎ流速为１ｍＬｍｉ；０检１ｍ；／ｎ
比色法：发酵液用无菌水稀释至ｌ倍体积，０以培养
基为空白对照，测定０锄处的吸光度。Ｄ１．残糖的测定．４２残糖的测定采用菲林滴定法［。
基金项目：宁省教育厅资助项目（０８３）辽２０４１
备用。
通信作者：王玉田（９３）男，１５一，教授，究生导师，研从事畜产
品质量与安全工程技术方面的研究。
一
株植物乳杆菌培养条件优化
柴虹宇，王玉田张莉力，
（辽宁医学院食品科学与工程学院，辽宁锦２１１０）１２０１１
摘要：采用单因素试验的方法，优化突变株Ｌｐｎａｕ１８的培养条件。优化后的培养条件为：ｌｔｍＰ８１ａｒ培养时间４；８ｈ发酵液初始ｐＨ值６５接种量（／４培养温度３．；ＶＶ）％；０℃，此时苯乳酸产量为０２／。．４ｇＬ６关键词：植物乳杆菌：培养条件：苯乳酸
发酵培养基组成为：葡萄糖２／，５ｇＬ酵母浸粉３５ｇＩ／，磷酸氢二钾２／，Ｓ４／，Ｓ４．ｇ１吐．ｇＩＭｇＯｇＬＭｎＯ３／，２１０
温一０ＬＬｐ６２６。８３ｍ／，Ｈ．．～４
收稿日期：００Ｏ一０２１一ｌ２