HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量
ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量
摘要：目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）检测法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量。色谱柱为
KromasilNH 2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，以甲醇-乙腈(50∶50)为
流动相，流速:1.0mL/min，柱温：30℃，蒸发光散射检测器：雾化器温度:60℃，漂移管温度：90℃，气体（氮气）流速：1.0L/min。结果：盐酸水苏碱进样量在0.16~1.6μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9990，平均回收率为98.73％，RSD=0.93％(n=6)。结论：本方法快速简便，结果准确可靠，重现性好，可用于益母草流浸膏的质量控制。
关键词：益母草流浸膏；盐酸水苏碱；HPLC-ELSD
益母草流浸膏是2005年版《中国药典》一部收载的品种，其中以薄层扫描法测定益母草中盐酸水苏碱的含量，考虑到而薄层扫描法的影响因素较多，对益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量测定方法进行了探索。用HPLC-ELSD法测定了益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量，该法操作更简便、灵敏度高、稳定性及重现性好，可作为母草流浸膏中盐酸水苏碱含量测定的新方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国Agilent 1200高效液相色谱仪，英国PL-ELS2100型蒸发光散射检测器，浙江大学N2010色谱数据工作站，日本GR-202电子分析天平(十万分之一)。
1.2 试药
益母草流浸膏（广西医科大学制药厂，批号：20060701），盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：11702-200508），流动相甲醇、乙腈为色谱纯（美国Scientific Fisher Technology），甲醇、乙醇均为分析纯（广东光华化学厂有限公司）。
2 实验方法与结果
2.1 色谱及检测的条件
色谱柱：KromasilNH 2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，柱温：30℃，
流动相：甲醇-乙腈（50∶50），流速：1.0mL/min。ELSD检测器：雾化器温度：60℃，漂移管温度：90℃，载气N2流速：1.0L/min。
益 母 草
附件3.4：中药材注释模板-益母草 益母草 Yimucao LEONURI HERBA 别名：茺蔚、益母、益母蒿、坤草、红花艾、益母艾、月母草。 益母草为常用中药，具有活血调经，利尿消肿之功能。始载于《神农本草经》，列为上品。《本草纲目》名茺蔚，列入草部隰草类。陶宏景谓：“今处处有，叶如荏，方茎，子形细长，三棱。”。经核对《植物名实图考》所载茺蔚及附图，与现代所用的益母草相符〔1〕。 全国大部分省市均有分布，以湖北、河南、安徽、江西、湖南、广西为主产区，以野生为主，少量种植，生长于荒野山地、田埂路边、河边等地。 本品先后收载于《中国药典》1963年版、1977年版、1985年版、1990年版、1995年版、2000年版、2005年版。2005年版中国药典中益母草药材中收录了鲜益母草和干益母草，鲜益母草主要作为制剂的原料。干益母草的采集时间与品质有较大关系，应为夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割，经调查目前市场上存在较多的童子益母草，主要作制剂原料，一般为春季幼苗期采割，其有效成分含量比较高，有部分省份的炮制规范中已收载童子益母草，如上海市中药饮片炮制规范，因与习惯使用规格不同，童子益母草是否收入药典有待后续研究。【来源】拉丁学名：Leonurus japonicus Houtt. 原植物形态：一年或二年生草本，高30～120cm。春季幼苗期叶基生，拔节后茎直立，方形，单一或分枝，被微毛。叶对生，基生叶具叶柄，叶片略呈圆形，叶缘5～9浅裂，每裂片具2～3钝齿，基部心形；茎中部的叶具短柄，3深裂，中央裂片常3裂，两侧裂片常再1～裂，小裂片披针形或近线形，先端渐尖，边缘疏生锯齿或近全缘；顶端的叶不分裂，线形，近无柄。花多数，生于叶腋，呈轮伞状，花冠唇形，淡紫色或淡红色，长9～12mm，上下唇近等长，花冠外被长绒毛；雄蕊4枚，2强，子房4裂，柱头2裂。小坚果4枚，三棱状，褐色。花期6～9月，果期9～10月。 【性状】传统经验认为，本品以茎细、质嫩、叶多、色绿者为佳；质老、枯黄、无叶者不能入药。
盐酸水苏碱在中药生产过程中的含量变化及影响因素研究
盐酸水苏碱在中药生产过程中的含量变化及影响因素研究 【摘要】目的探讨盐酸水苏碱在中药生产过程中的含量变化及影响因素。方法建立盐酸水苏碱HPLC含量测定方法，考察提取、浓缩、干燥工艺中各影响因素对盐酸水苏碱保留率的影响，分析益母草药材储藏过程中的各主要影响因素。结果水提取工艺中提取时间、提取温度、提取次数、水用量对盐酸水苏碱的影响较小；浓缩过程中盐酸水苏碱有一定损失，但浓缩温度、浓缩时间、真空度并非主要影响因素；干燥过程中的温度、真空度、时间等参数对盐酸水苏碱的影响较小。在益母草储藏过程中，见光降解是盐酸水苏碱含量下降的主要原因。结论光对盐酸水苏碱的稳定性有重大影响。 【关键词】盐酸水苏碱益母草高效液相色谱见光降解 Abstract：ObjectiveTo explore the content change of stachydrine hydrochloride in Chinese medicine production process.MethodsAn HPLC method was established stachydrine hydrochloride to determine the content of retention rate of stachydrine hydrochloride was applied as the parameters to investigate the processes of extraction, concentration and drying and the main factors in the storage of herba leonuri was investigated by factorial analysis.ResultsThe influence of time, temperature, frequency, and water volume in extraction process to stachydrine hydrochloride was weak. There is a little loss of stachydrine hydrochloride in concentration process; the influence of temperature, time, and vacuum value to stachydrine hydrochloride was weak. Decompose by light was the most important factor to content decline of stachydrine hydrochloride in the storage of herba leonuri. ConclusionLight showed a marked influence on the stability of stachydrine hydrochloride. Key words：Stachydrine hydrochloride；Herba leonuri；HPLC；Decompose by light 益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分，主治月经不调、胎漏难产、行经腹痛及产后瘀阻等症，有“血家圣药”“经产良药”之称。近年来其逐步被应用于心脑血管疾病的防治，临床效果较好，疗效甚至超过复方丹参注射液［1］。现代药理研究表明［2］，益母草中的益母草碱、盐酸水苏碱等多种生物碱具有较强的兴奋子宫、抗血小板聚集、降低血液黏度、抑制血栓形成等作用。 据统计，药典及部颁标准中含益母草的多数中成药，其盐酸水苏碱的理论保留率［理论保留率（％）＝成品中待测成分的标示总量/处方中待测成分的药典规定最低总量×100%］均低于40％。在产后逐瘀胶囊及妇血安片的成品检验中同样发现，两者的盐酸水苏碱理论保留率均低于20％，部分批次甚至不合格。同时，在对益母草药材进行筛选的过程中发现，各产地的药材盐酸水苏碱含量差异较大，且同一产地新上市药材的含量明显高于去年上市的老药材。为了考察其原因，本研究探讨了中药生产中提取、浓缩、干燥工艺过程对盐酸水苏碱含量的影响，并对益母草药材的稳定性影响因素进行了初步研究。 1 仪器与试药
Q_HGDY 006-2017饲料原料液态益母草粗体物
Q/HGDY 河南官渡兽药制造有限公司企业标准 皮 Q/HGDY006-2017天然植物饲料原料液态益母草粗提物 2017-07-16发布2017-07-22实施河南官渡兽药制造有限公司发布
Q/HGDY006-2017 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河南官渡兽药制造有限公司提出并负责起草。 本标准主要起草人：韩红霞、董炎超、徐超军、高李强、张珍、陈晓丽。
天然植物饲料原料液态益母草粗提物 1范围 本标准规定了天然植物饲料原料液态益母草粗提物的要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输与贮存。 本标准适用于以天然植物饲料原料益母草经过水粗提、浓缩加工而成的天然植物饲料原料液态益母草粗提物。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法。 GB10648饲料标签。 GB13078饲料卫生标准。 GB/T13079饲料中总砷的测定。 GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法。 GB/T13091饲料中沙门氏菌的检测方法。 GB/T14699.1饲料采样。 GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差。 GB/T20195动物饲料试样的制备。 JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则。 中华人民共和国质量监督检验检疫总局令（2005年）第75号《定量包装商品计量监督管理办法》。 中华人民共和国农业部公告（2013）第1773号《天然植物饲料原料目录》及（2013）第2038号《天然植物饲料原料目录》修订列表。 3要求 3.1原料 应符合《天然植物饲料原料目录》的要求。 3.2感官 色泽均一的液体。 3.3pH值 应为4.0～7.0。 3.4理化、卫生指标 理化、卫生指标应符合表1的规定。 3.5净含量 符合标签标注，偏差符合《定量包装商品计量监督管理办法》之规定。
益母草
一提到益母草，就有一个不得不讲的感人故事。相传有一个叫茺蔚的小孩，他的母亲在生他时得了“月子病”且多年不愈，几年以后身体越来越虚，乃至卧床不起。小茺蔚眼看着母亲的病越来越重，他暗下决心，要把母亲的病治好。于是他外出为母亲求医问药，然而历尽艰辛却未能如愿。一天，他借宿古庙，庙内老僧见他一片孝心，就送他四句诗，让他去找一种草药。诗云“草茎方方似麻黄，花生节间节生花，三棱黑子叶似艾，能医母疾效可夸。”小茺蔚沿着河岸找了起来，终于找到了那种茎呈四方形、节间开满小花、结有黑色三棱形小果实的植物。母亲服用后不久竟痊愈了。由于这种草是小茺蔚为医治母病而找到的，且又益于妇女，于是人们就把它取名为益母草，它的种子就叫茺蔚子了。 益母草为唇形科多年生草本植物，全草入药。益母草味辛、微苦，性微寒，入心包，肝经，具有去淤生新，活血调经的功效。因其常用于妇女血脉阻滞之月经不调、经行不畅、小腹胀痛、产后恶露不尽等病症的治疗，被视为“妇科经、产要药”。因此，也有人说，益母草是专为女人而生的草，有“坤草”之别称。 痛经者不妨试试益母草煮蛋 痛经是女性朋友的常见疾病之一，多发于未婚或婚后未孕的年轻妇女。其主要症状是月经前后或月经期间下腹疼痛，并伴有腰酸，呕吐等不适。痛经在医学上分为原发性和继发性两种原发性痛经是经妇科检查未发现病理变化者；继发性痛经是生殖器官有明显的器质性病变，如生殖系肿瘤，盆腔炎症等。继发性痛经患者，应在医生的指导下积极治疗原发病。原发性痛经虽不会危及患者生命，但往往会给患者的生活和学习、工作带来极大的影响。其实，原发性痛经的朋友除了月经前及月经期要注意避免劳累、受凉、情绪紧张等因素外，还要坚持饮食疗法，其中用益母草煮鸡蛋就是不错的选择。 益母草煮鸡蛋不仅取材方便，而且烹调方法也非常简单。具体做法为：取鸡蛋两个，益母草30克，元胡15克，放入砂锅中加入适量清水同煮，蛋熟后去壳再煮片刻，去药渣，吃蛋喝汤。经前1天～2天开始服，每日1剂，连服5天～7天。 中医理论认为“不通则痛”，痛经的发生与淤血的存在有着密切关系。方中鸡蛋具有滋阴养血的作用；益母草具有活血化淤的作用。现代药理研究认为益母草可通过松弛痉挛状态下的子宫、缓解炎症等多种途径起到抗痛经的作用；元胡具有行气活血，散淤止痛的作用，是临床上治疗痛经的常用药。三者合用可起到行气、养血，活血、去淤、止痛的作用，是痛经患者的食疗佳品。
益母草碱的研究概况
益母草碱的研究概况 摘要：益母草碱有较强的活血化瘀、利水消肿作用,在治疗前列腺增生的研究中有重要意义。综述近年来有关益母草碱的研究情况，包含其理化性质、制备和测定方法、药理评价及毒性研究等,以期为益母草碱的进一步开发应用寻找新的信息和思路。 关键词:益母草碱；理化性质；制备和测定方法；前列腺增生 益母草碱(Leonurine)是益母草的有效成份，具有广泛的生物学活性[1]。近年来研究揭示了其治疗前列腺增生的良药[2]，还具有改善抗血小板聚集、改善血循环、抗炎镇痛、兴奋子宫、保钾利尿和保护心肌等功效[3-4]。文章对近几年益母草碱的研究概进行简要概述，以期为益母草碱的进一步开发应用寻找新的信息和思路。1理化性质 益母草碱是生物碱。几乎不溶于水，熔点238℃（分解），溶于戊醇。益母草碱在自然界中只有极少一部分是以单体的形式存在,多以其盐的形式存在，含一结晶水的盐酸盐（如图1）。益母草碱水加氯化钡生成白色沉淀，再加硝酸，沉淀不溶解。 图1盐酸益母草碱结构 2制备方法 2.1 柱色谱法：硅胶柱色谱法是常用的方法，在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用是由于硅胶表面与溶质分子之间的范德华力、硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键产生作用，这种方法分离效果好，处理量大是天然产物提取有效成分的常用手段。张琳等[5]应用硅胶柱色谱对益母草碱提取分离。 2.2大孔吸附树脂法：大孔吸附树脂采用特殊吸附剂,通过物理吸附从水溶液中选择性的吸附有机物。该法设备简单、易操作、产品纯度高等优点，因此大孔树脂吸附法在中药精制纯化应用日益广泛。李雪丽等[6]在大孔吸附树脂对益母草总碱提取分离，应用SP825树脂对益母草总黄酮和总生物碱提取分离，并且能提高药材使用率。 2.3合成法：研究报道益母草中益母草碱含量很低，提取法制备得到量很少，分析结构可用化学合成方法来制备。以丁香酸为原料，用氯甲酸乙酯对其活泼的碳基保护和酰化、路易斯酸催化条件下四氢呋喃开环、酰氯的醇解等反应制备羰基化产物（4-乙氧羰基-氧基-丁香酸-丁酯），用该盖布瑞尔成胺法制备益母草胺,最后与甲基异硫脲反应制成益母草碱[7]。此法减少了反应步骤和操作的技术难度,并提高了收率，是常用得到益母草碱的方法。 2.4超声波和微波提取法：传统益母草碱回流提取率较低。相比较微波具有加热迅速和均匀、穿透力强等特点；超声波辅助提取能使细胞破碎完全提取效率高、提取物生物活性不受影响。周本宏等[8]应用超声波提取法的超声频率和强度对益母草碱提取结果影响的探讨。 3测定方法 3.1化学法 3.1.1 沉淀反应：原理是利用益母草碱中硫酸根离子与钡离子形成不溶于硝酸白色沉淀。方法是在益母草碱中加水溶解后，加氯化钡液，生成白色沉淀，加入硝酸后，沉淀不溶解。 3.1.2 显色反应：原理是利用益母草碱中含有酚羟基与三氯化铁反应显色。方法是样品加水溶解，加入三氯化铁振摇，溶液显茶褐色。 3.2紫外分光光度法(UV)：鉴于益母草碱结构中的共轭结构，在200nm-400nm的紫外区有两个吸收峰，一般在217nm和277nm有最大吸收峰，但217nm易受甲醇吸收干扰，277nm没有影响，所以选择277nm作为检测波长。UV快速和精确，不需要贵重仪器，是实验室简单测定益母草碱的方法。 3.3高效液相色谱法(HPLC)：高效液相色谱法高效、高灵敏度、分析和载液速度快、样品不被破坏等，是现代研究益母草碱测定常用方法。巩长芹等[9]发现用酸性流动相测定益母草碱单体时只出现单一的峰。Zhu Q 等[10]对益母草碱混悬液经口服后，用高效液相色谱-质谱联用技术，检测大鼠血浆中样品的含量，这种方法简
益母草药效成分及其人工种植研究论文
益母草药效成分及其人工种植研究论文 【摘要】目的考察益母草野生品和栽培品中主要有效成分水苏碱和多糖的含量，为人工种植益母草的必要性提供依据。方法分别采用薄层扫描法测定水苏碱，分光光度法测定多糖。结果栽培品中水苏碱和多糖含量普遍比野生品含量高，且含量变化有一定规律性。结论为保证益母草药材质量，应该采用人工种植为好。【关键词】益母草；水苏碱；多糖益母草来源于唇形科植物益母草(Leonurus japonicus Houtt.)的新鲜或干燥的地上部分，为妇科经产要药。本实验为考察黔产益母草野生品和栽培品的质量，通过测定益母草中主要有效成分水苏碱和多糖的含量[3，4]，对益母草野生品和栽培品的质量进行比较，为人工种植益母草提供依据，达到提高益母草药材质量的目的。一、仪器、试剂与药材1 仪器与试剂CS-9301PC双波长飞点层析扫描仪(日本岛津公司)；CAMAG LINOMAT V半自动点样仪(瑞士卡马公司)；定量毛细管(美国MICROCAPS公司)；XS205双量程电子分析天平，量程：万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；硅胶G板(青岛海洋化工厂)；DU-70紫外-可见分光光度计(美国BACKMAN公司)；盐酸水苏碱对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：
110712-200407；苯酚、浓硫酸和葡萄糖等其他化学试剂均为分析纯；水为蒸馏水。2 药材分别采自贵州省惠水县和贵阳市郊乌当，药材样品均经贵阳中医学院魏升华讲师鉴定为红花益母草Leonurus japonicus Houtt.，本实验均用益母草地上部分。二、方法与结果2.1 水苏碱的分析2.1.1 供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取干燥益母草样品粉末约1g，置圆底烧瓶中，加入乙醇约50ml，加热回流1.5h，放冷，滤过，滤渣及回流容器用乙醇50ml分次洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣用乙醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心(5000转/min，5min)，取上清液作为供试品溶液。精密称取在105℃干燥3h的水苏碱对照品适量，加乙醇制成每1ml含2.030mg的溶液，作为对照品溶液。2.1.2 薄层色谱分析条件用硅胶G薄层板，点状点样，点样量10μl。以正丁醇-盐酸-乙酸乙酯(8：3：1)为展开剂，展开，取出晾干后，在105℃加热15min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑点显色清晰，晾干，立即在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布密封。反射法单波长锯齿形扫描。波长λS=510nm，狭缝0.4mm×0.4mm。在上述分析条件下对薄层色谱进行扫描分析。2.1.3 线性关系的考察用半自动点样仪在同一硅胶G薄层板上点盐苏碱对照溶液2、4、6、8、10、12、14μl，用上述条件展开显色后进行薄层扫描测定，
级中药成分提起与分离复习题
练习(2) （一）填空题： ?生物碱的碱性来源于____氮___原子，能使该原子电子云密度增加的，其碱性____强___。 ?生物碱分子中若具有___内酯或内酰胺_______结构，在____碱水______溶液中加热可使其开环成盐而溶于_____有机溶剂______；含_____羧基，酚羟______基的两性生物碱既可溶于 _________碱__水，又可溶于酸水中。 ?生物碱盐，用不同碱度的碱碱化后，分别用有机溶剂萃取。若想分离出碱性不同的生物碱，其加入强弱碱的顺序应由______弱_____到___强_______，提出的生物碱的碱性顺序应由__弱 ______到_____强_____。游离生物碱用有机溶剂溶解后，加入不同酸度的酸，使它分步成盐，分别溶入酸水中，使各生物碱分离，其加入酸的酸性顺序应由到_____强__至_____弱____。酸水中依次提出的生物碱的碱性顺序应由____强_____到___弱________。 ?A型题（单项选择题） ?1、生物碱有碱性是因为其分子结构中含有 ?A、碳原子 B、氢原子C、氧原子 D、硫原子E、氮原子 ?2、具有挥发性的生物碱是 ?A、益母草碱 B、咖啡因C、乌头碱D、麻黄碱 E、利血平 ?3、水溶性生物碱从化学结构上分析大多属于 ?A、酰胺类生物碱 B、季铵类生物碱 C、仲胺类生物碱 ?D、酯类生物碱E、叔胺类生物碱 ?4、生物碱沉淀反应一般在何种溶液中进行 ?A、水溶液B、酸水溶液C、碱溶液 D、乙醇液 E、氯仿液 ?5、下列生物碱碱性最强的是 ?A、咖啡因pKa=1.22 B、小檗碱pKa=11.5 C、罂粟碱pKa=6.13 ?D、L－麻黄碱pKa=9.58 E、胡椒碱pKa=1.42 ?6、下列哪种是供电子基 ?A、苯基 B、羰基 C、羟基 D、双键 E、烷基 ?7、从水提取液中萃取水溶性生物碱，宜用何种溶剂 ?A、氯仿 B、正丁醇 C、苯 D、水 E、乙醇 ?8、生物碱进行TLC时，以硅胶为吸附剂，则展开剂必须是 ?A、碱性B、酸性 C、中性D、乙酸乙酯E、乙醚 ?9、酸水法提取生物碱时常用的酸是 ?A、0.5％～1.0％硫酸B、0.5％～1.0％硝酸C、37％盐酸 ?D、60％～65％磷酸E、10％～20％盐酸 ?10、雷氏铵盐沉淀法可用于分离或纯化的生物碱是 ?A、季铵型生物碱B、叔胺型生物碱C、肿胺型生物碱 ?D、伯胺型生物碱E、以上均可 ?11、生物总碱溶于亲脂性有机溶剂中，用pH值由高到低的酸性缓冲液萃取，最先得到的是?A、弱碱性生物碱 B、中强碱性生物碱 C、极弱碱性生物碱 ?D、强碱性生物碱 E、酰胺型生物碱 ?12、麻黄碱与伪麻黄碱的分离是利用其 ?A、盐酸盐溶解度不同B、硫酸盐溶解度不同C、草酸盐溶解度不同 ?D、酒石酸盐溶解度不同E、醋酸盐溶解度不同 ?13．临床上应用的黄连素主要含有 ?A．阿托品B．小檗碱C．黄连碱D．药根碱E．小檗胺
益母草药材中水苏碱成分应用高效液相色谱法的检测结果分析
益母草药材中水苏碱成分应用高效液相色谱法的检测结果分析 发表时间：2018-11-02T10:58:43.390Z 来源：《中国误诊学杂志》2018年第25期作者：宋妍 [导读] 结论高效液相色谱法检测方式快捷简便，专属性强，检测结果精准，能够对益母草颗粒质量进行有效的控制。天津医科大学第二医院天津 300211 摘要：目的对于益母草药材中水苏碱成分采取高效液相色谱法进行检测的具体方法以及检测结果开展分析与总结。方法色谱条件选取AgilentSB-C18柱，流动相选取乙腈-冰乙酸，流速调整为每分钟0.3ml，质谱检测选取正离子电喷雾离子源，受到多反应监测模式下开展监测。结果盐酸水苏碱浓度处于0.2μg/ml到10.0μg/ml范围中和峰面积表现为良好线性关系，回收率为102.6%。结论高效液相色谱法检测方式快捷简便，专属性强，检测结果精准，能够对益母草颗粒质量进行有效的控制。 关键词：益母草药材；水苏碱成分；高效液相色谱法 益母草颗粒主要是由益母草、木香、当归以及川芎四味中药所组成，通过加工提取制作而成，益母草颗粒存在行气止痛以及活血调经的作用，临床中一般用来治疗月经不调、气滞血瘀、产后淤血腹痛以及调经，其中益母草中药材属于君药，具有良好的活血化瘀效果，所以临床中对于益母草药材开展有效的质量控制十分关键。益母草药材质量控制方式主要包括高效液相色谱法以及薄层色谱扫描法对盐酸水苏碱含量进行检测，高效液相色谱法对于盐酸水苏碱含量进行检测选取氨基柱与C18柱与离子交换色谱柱为色谱柱，此外利用蒸发光检测器施行分析[1]。本文对于益母草药材中水苏碱成分采取高效液相色谱法进行检测的具体方法以及检测结果开展分析与总结，现汇报如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选取美国高效液相色谱仪，电子天平，超声波清洗器，盐酸水苏碱对照品进行含量测定使用，益母草颗粒，乙腈属于色谱纯，水选取市面所售娃哈哈纯净水，冰乙酸属于优级纯，剩余检测试剂属于分析纯。 1.2方法 色谱条件选取AgilentSB-C18柱，流动相选取乙腈-冰乙酸，流速调整为每分钟0.3ml，柱温30摄氏度，进样量5μl，离子源选取大气压电喷雾离子源，扫描方式选取正离子，施行全扫描、离子扫描和二级全扫描，干燥气温度300摄氏度，辅助气流速每分钟8L，毛细管电压为4000V，采取多反应监测模式进行含量检测。 严格称取盐酸水苏碱对照品，称取量为12.55mg，放置到量瓶中，置入乙醇进行溶解，摇匀，选取对照品储备液1ml，放置到量瓶中，置入乙醇稀释，摇匀作为对照品使用溶液。 选取5包颗粒内容物，进行研磨，称取5g置入量瓶中，放置乙醇进行超声处理20分钟，放置到室温之后置入乙醇进行稀释，摇匀并且过滤，选取2ml放置到量瓶，置入乙醇，摇匀，通过微孔滤膜进行过滤。 选取上述对照品溶液，阴性对照对照溶液分别5μl，置入高效液相色谱仪，根据上述色谱和质谱条件进行测定，对于色谱图进行记录，盐酸水苏碱保留时间3.5分钟，溶液中其他杂质不会对样品中盐酸水苏碱测定进行干扰，阴性样品在盐酸水苏碱色谱峰保留时间没有出现干扰峰，代表专属性良好[2]。 2结果 盐酸水苏碱浓度处于0.2μg/ml到10.0μg/ml范围中和峰面积表现为良好线性关系，回收率为102.6%，详见表1。表1 样品检测情况比较 3讨论 制备供试品溶液方面，本次实验对于不同超声提取时间，分别为10分钟、20分钟、30分钟以及40分钟施行考察，结果表明，超声提取20分钟可以完全提取样品中盐酸水苏碱。对于选择流动相方面，流动相中的乙腈和冰乙酸比例通过多次配比，当其比例为70比30期间，样品中其他成分对于盐酸水苏碱检测不会产生干扰，同时盐酸水苏碱出峰时间比较适当，峰形以及理论塔板数最佳，所以建议保持此种比例开展测定[3]。对于质谱条件考察方面，为确保盐酸水苏碱各子离子峰信号表达处于最强，施行正离子模式与负离子模式加以检测，开展二级质谱扫描，对裂解电压和碰撞能压进行优化，通过多次试验发挥最理想的质谱条件。益母草颗粒原质量标准中含量检测，利用薄层色谱扫描法施行检测，处理方式较为繁琐，检测所需时间比较长，数据的重现性比较差，采取高效液相色谱法，对于色谱柱的要求比较高，样品提取程序复杂，部分方式通过检测的灵敏度不佳[4]。本文通过高效液相色谱法对益母草颗粒中盐酸水苏碱含量加以检测，存在理想的选择性与专业性，检测灵敏度比较高，色谱柱选择十分普通并且常用，操作方法简单，重复性佳[5]。根据本文的研究显示，色谱条件选取AgilentSB-C18柱，流动相选取乙腈-冰乙酸，流速调整为每分钟0.3ml，质谱检测选取正离子电喷雾离子源，受到多反应监测模式下开展监测，结果表明，盐酸水苏碱浓度处于0.2μg/ml到10.0μg/ml范围中和峰面积表现为良好线性关系，回收率为102.6%。综上所述，对于益母草药材中水苏碱成分采取高效液相色谱法检测效果理想，具有临床推广价值。
双水相体系萃取分离_分光光度法测定益母草中水苏碱
双水相体系萃取分离-分光光度法测定益母草中水苏碱 赵鹂,郭圣荣 第一作者 Te:l (0578)2271458,136********;E -m ai:l xyzhaol@i 126.co m (丽水学院化生学院,丽水323000) 摘要 目的:利用双水相体系分离纯化益母草中的水苏碱,探究萃取机理及效率。方法:利用不同的双水相体系对益母草总生物碱进行提取,研究不同双水相体系、不同析相盐及温度等因素对提取效率的影响。结果:通过实验发现乙醇/磷酸氢二钾双水相体系效果最好。与常规回流提取法相比较,总碱提取率由1 95%提高到3 49%,总碱提取率高出79 5%。结论:按本文方法所形成双水相体系,操作简便,萃取率高,方法重现性好,可适用工业化生产。关键词:益母草;盐酸水苏碱;双水相;提取中图分类号:R 917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)10-1953-04 Extracti on and separation w it h aqueous t wo-phase syste m (ATPS)of t he total al kaloi ds i n leonurus and deter m i ned w it h s pectrophoto m etry Z HAO L,i GUO Sheng-rong (S choo l ofC he m istry and L i fe Sciences ,L i shu iUn i versit y ,L is hu i 323000,Ch i na) Abst ract Objective :To exp l o re the ex traction m echanis m and effecti v e of the separation -purificati o n o f stachydri n e in aqueous t w o-phase syste m s .M ethods :U sing d ifferent aqueous t w o-phase syste m to extract the to tal alka l o ids i n Leonurus ,study t h e affecti o ns of the salts ,te m perature and organic phase .R esults :Co m pari n g w ith conventional m ethods ,the ex traction rate o f total alka l o ids o f l e onurus i n aqueous t w o -phase syste m w as up to 3 49%when using the ethano l /K 2H PO 4/w ater ATPS as so l v ent and w hich is the best resu lt in different aqueous t w o-phase syste m.C onclusion :The t w o aqueous phase syste m for stachydri n e extracti o n is easy to operate ,good reproducti v ity ,and can be app li e d i n m ass pr oducti o n .K ey w ords :leonurus ;stachydri n e hydrochloride ;aqueous t w o-phase syste m ;ex tracti o n 益母草为唇形科植物益母草(Leonurus hetero phy llus Sw eet)的干燥地上部分,是常用中药,主要成分为生物碱类和黄酮类化合物等。临床用其流浸膏或复方制剂治疗月经不调、痛经、阴道炎症等妇科常见病[1~4] 。已知益母草中所含有效成分为总生物碱,主要包括益母草碱(leonuri n e)和盐酸水苏碱(stachydrine hydroch lori d e)等。盐酸水苏碱为益母草中生物碱类含量测定的指标性成分,中国药典 2005年版采用薄层扫描法测定[5] ,用乙醇提取样品,浓缩后通过活性炭一氧化铝柱纯化得到供试品溶液,回流提取方法耗时且提取率较低。其他传统的萃取分离法主要采用与水互不相溶的有机溶剂作萃取溶剂,这种异相萃取的传质速率通常较低,必须经过较长时间振荡或多次萃取才能达到定量萃取,工作量大且溶剂大多有毒性。采用均相萃取、异相 分离的双水相萃取(Aqueous t w o -phase extraction , ATPS)[6~9] 可以较好地克服以上萃取分离的缺点。在研究的双水相萃取体系中,多数是对基于水溶性高聚物的双水相萃取 [6~8] 。普通的能与水互溶的有 机溶剂在无机盐存在下也可生成双水相体系[9~12] 。与基于高聚物的双水相萃取相比,基于水溶性有机溶剂和盐水相的双水相萃取体系具有价廉、低毒、分相清晰、萃取相不含粘度大、难处理的聚合物、对测定干扰小等特点。 用双水相提取益母草中的水苏碱含量目前未见报道,本文研究了水溶性有机溶剂乙醇、丙醇及丙酮在不同无机盐作用下双水相萃取分离水苏碱,建立了乙醇-K 2H P O 4双水相萃取分离水苏碱,用紫外分光光度法测定含量,获得较好实验结果。
益母草有效成分及提取技术
益母草有效成分及提取技术 摘要：本文对益母草的提取工艺、化学成分、刚定含童方法及药理研究进展进行综述 关键词：益母草，提取工艺，有效成分 益母草为唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的干燥地上部分，具有活血调经、利尿消肿的功效，常用于月经不调、痛经、经闭、恶露不尽、水肿尿少、急性肾炎水肿等. 益母草的主要活性成分是益母草碱和水苏碱. 一、有效成分：益母草的主要化学成分有生物碱类、二萜类、黄酮 类、挥发油及微量元素 二、提取： 2.1.1 煎煮法益母草药材6份，每份100 g，分别以水、1％盐酸溶液为溶媒提取3次，提取时间为10倍量2.0 h、6倍量1.5 h、5倍量1.0 h，每种溶媒各提取3份，提取物浓缩，备用。 2.1.2 回流提取法益母草药材6份，每份100 g，分别以95％乙醇、0.1%盐酸乙醇溶液为溶媒提取3次，提取时间为10倍量2.0 h、6倍量1.5 h、5倍量1.0 h，每种溶媒各提取3份，提取物浓缩，备用。 2.1.3 超声提取法益母草药材12份，每份100 g，分别以10倍量的水、1％盐酸溶液、95％乙醇、0.1%盐酸乙醇溶液为溶媒在59KHz的超声发生器中提取2次，每次40 min，每种溶媒各提取3份，提取物浓缩，备用。 2.1.4 SFE-CO2法益母草药材3份，每份100 g，均用氨水湿润碱化，
置超临界萃取装置内，加入夹带剂（95％乙醇）0.5倍量，于萃取压力30MPa，萃取温度70 ℃，解析压力10MPa，解析温度45 ℃的条件下萃取4 h，萃取物备用。 三、益母草的药理作用 1、抗炎镇痛的作用：益母草碱具有抗慢性非特异性炎症的镇痛, 有效抑制炎症增殖反应, 对于药流后的止血及子宫复旧具有积极的治疗作用。从动物实验证实抗炎作用。机理研究采用放射免疫法及化学分析法, 分别检测大鼠口服后血液雌、孕激素及子宫平滑肌。、及、含量的变化, 可通过抑制痉挛子宫的活动, 抗炎, 降低子宫平滑肌上。含量及升高体内孕激素水平等多种途径缓解痛经症状。对血液流变学的作用益母草碱对急性血疲证大鼠血液流变学的实验, 可有效降低血液粘度, 提高红细胞变形能力。 2、对淋巴微循环的作用：益母草的注射液能明显增强失血性休克大鼠肠系膜淋巴管自主收缩频率及收缩性, 扩张微淋巴管口径, 使微淋巴的活性增强, 对失血性休克时的淋巴微循环障碍有非常好的改善作用。 3、利尿作用：益母草生物碱对大鼠的利尿用研究, 证实可作为一种作用和缓的保钾利尿剂。 4、心肌保护作用：益母草对在体或离体心脏缺血, 再灌注均有缺血预适应同等的心肌保护作用。 5、益母草的肾毒性研究：益母草和复方益母草胶囊长毒实验对比, 益母草提取物给大鼠灌胃, 连续天, 结果益母草高、低剂量都会造成不
益母草的化学成分X
益母草的化学成分 益母草中主要化学成分为生物碱类、黄酮类、二萜类、苯丙醇普类、脂肪酸类、,<4>挥发油类、环型多肽等，并含有锌、铜、锰、铁、硒等多种微量元素.<1> 一、生物碱类 研究表明益母草碱在营养期花初期生物碱成分含量高，果熟期含量最低。在常规储藏条件下，1年内生物碱含量无明显变化，2年内有所下降，3年后已显著下降<2>。生物碱类主要有益母草碱( Leonurine)、水苏碱(S tachydrine)、益母草啶和益母草宁等<1>。对不同产地益母草总生物碱含量测定结果发现，各地区产益母草中含量差别很大，其中以北京、新疆、辽宁总碱最高，江苏、湖北、湖南、海南产益母草几乎测不出总碱含量，由于其有效成分稳定，炮制简单，(烘干切割)，所以产地是决定药材质量的。<2> 二、黄酮类 主要有益母草酮A，谷甾醇，5，,3，4,5---五甲氧基黄酮、汉黄芩素、大豆素、洋芹素及苷、芜花素及普、棚皮素、山奈素及苷、芦丁等，其中化合物益母草酮A(2)为一个新的Labdane型化合物<1>，目前对益母草中黄酮类化合物的测定分析方法有紫外可见分光光度法、毛细管电泳-电化学检测( CE-ED) 法和细管电泳-紫外检测法<5>。 三、二萜类
主要有前益母草素(preh ispano lone)、益母草素(h ispano lone)、前益母草乙素(preleoheterin) . G iang等从益母草中分离并鉴定出9种半口花烷二萜。其中，化合物1hispanone是首次从益母草属植物中分离得到，化合物5~ 9为新化合物，被分别命名为leoheteron in A. B. C. D. E，<1>自1982年Giuseppe Savona等从中分得三个新二萜类成分后，根据C12上连接的五元环类型，其结构可分为5种类型：呋喃环型(I)，二氢呋哺环型(Ⅱ)，内酯环型(Ⅲ)，n，B不饱和内酯环型(1V)，四氢呋喃环型(V)<2>。 四、苯丙醇昔类主要有薰衣草叶普、毛蕊花苷和益母草苷A. B等<1>。 五、脂肪酸类主要有含延胡索酸、月桂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、硬脂酸和软脂酸<1>,薰衣草叶苷( lavandulifolioside, 1) 、芦丁( rutin, 2) 、苯甲酸( benzoic ac id, 3) 、邻羟基苯甲酸( sa licylic ac id, 4) 、丁香酸( syringic ac id, 5) 、腺苷( adenos ine, 6) 、豆，甾醇( s tigm as te rol, 7)等<3>以前实验证明益母草水溶性成分具有药理活性，现经实验发现其非极性部分如二萜类也具有很强的活性，这方面有待深人研究。<2> 六、挥发油类主要1--辛烯-3一醇、桉油精、丁香醛、氧化石竹烯、蓰草烯<1> ,3-辛醇、β-罗勒烯-Y (B-ocimene-Y )、芳樟醇(linalool)、
益母草的药理药性功效与作用
益母草的药理药性功效与作用益母草为唇形科植物益母草的新鲜或干燥地上全草，始载《神农本草经》，列为上品，是常用中药。益母草味辛、微苦，性微寒，人心包、肝经，具有去瘀生新，活血调经的功效，传统医学将益母草及其制剂应用于治疗妇产科疾病，医家称益母草为血分圣药。益母草和金银花，山豆根，红花，菊花，千里光等药合用。可以制成金菊千里光洁美洗液，金菊千里光洁美洗液治疗阴道炎，盆腔炎，宫颈炎等是很不错的妇科炎症用药。 益母草对子宫、乳腺的作用，益母草是我国民间常用的调经止血药，具有较强的子宫兴奋作用，其有效成分为益母草碱，对离体子宫、在体子宫和子宫血管均呈兴奋作用，使子宫收缩明显增强，紧张度增加，且持续时间增强。静注益母草碱0．5 min后即出现子宫兴奋作用，强度与作用随用量加大而增长¨]。个别应用益母草后出现剧烈宫缩痛，导致子宫肌组织缺血而引起疼痛瞳]。给大鼠静脉注射益母草水煎液后大鼠子宫肌电的慢波频率加快、平均振幅增大、单波频率加快、最大振幅增加，益母草对子宫的兴奋作用可能是通过改变一些与电活动有关离子的浓度，使起步细胞活动加强及动作电位去极化加快所致[3]。细叶益母草甲醇浸膏可促进小鼠妊娠依赖性乳腺瘤(PDMT)和由之引发的乳腺癌的发生。但抑制由增生性泡状瘤(HAN)引起的乳腺癌，使HAN数目减少，体积缩小¨J。 益母草对心血管系统的作用，益母草对早期缺血，甚至接近缺血性坏死的心肌有较好的改善作用。有人应用益母草注射液治疗冠心病
合并频，发室性早搏获得良好疗效，其机制可能与益母草改善心肌缺血，减轻氧自由基对心肌的损害有关b J。益母草水苏碱能明显提高冠状动脉和心肌营养性血流量，减少心肌细胞坏死量，降低血管阻力，改善微循环，减慢心率，减少心输出量，对血管壁有直接扩张作用。益母草碱能对抗肾上腺素的升压作用，具有减小梗死范围，减轻病变程度，减明显改善，闭锁的毛细血管重新开放，局部血流恢复正常?。益母革中富含多种对心血管系统有保护作用的微量元素，对心肌梗死、冠心病、心绞痛等心血管疾患有一定的防治作用。 益母草对血液系统的作用，益母草能显著降低红细胞压积、全血比粘度低切部分、全血还原比粘度低切部分、粘度指数和红细胞聚集指数，抑制血小板聚集作用，降低血液及血浆黏度，预防和抑制微小血管血栓形成哺J。丁伯平等"o用皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冰浴制作大鼠血淤模型，静脉注射益母草，结果表明益母草通过降低全血粘度、血浆比粘度、纤维蛋白原与红细胞变形指数等指标，从而显著改善血瘀状态。益母草有抗ADP诱导的血小板聚集作用，但对大鼠血管壁PGl2样活性物质无影响。研究发现前益母草素是一种血小板活化因子(PAF)的拮抗剂，能竞争性抑制血小板上的PAF受体产生抗凝作用随]。益母草有体外抗血栓形成作用，使血栓形成时间延长，血栓长度缩短，血栓重量减轻，并使血小板计数减少，血小板聚集功能减弱，使凝血酶原时间延长，血浆纤维蛋白原减少，优球蛋白溶解时间缩短。提示其活血化瘀作用主要与抗血小板聚集性和降低血小板含量、抑制凝血过程、促进纤溶系统有关旧。
益母草饮片中盐酸水苏碱_盐酸益母草碱含量测定
73 第15卷 第2期 2013 年 2 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 15 No. 2 Feb .，2013 益母草（Leonurus japonicus Houtt.）为唇形科 植物科植物益母草的新鲜或干燥地上部分，具有活血调经、利尿消肿、清热解毒之功效，用于月经不调、痛经经闭、恶露不尽、水肿尿少、疮疡肿毒，全国各地均有野生或栽培，其主要成分包括盐酸水苏碱、盐酸益母草碱等。为了保证益母草饮片质量稳定可控，本研究采用高效液相色谱法对益母草盐酸益母草含量进行研究，为益母草饮片质量标准研究提供依据。 1 仪器、药品与试剂1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括1200系列 四元梯度泵、1200系列 DAD 检测器、1200化学工作站（美国Agilent 公司），超声波清洗器，分析天平，具塞锥形瓶、漏斗滤纸、蒸发皿、水浴锅、容量瓶等。 1.2 试剂与药品盐酸水苏碱对照品，盐酸益母草碱对照品（成 都曼思特生物科技有限公司），益母草饮片，乙腈（色谱纯），水为重蒸馏水，磷酸、辛烷磺酸钠、冰醋酸、无水乙醇为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 2.1.1 盐酸水苏碱对照品储备液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品50 mg，置10 mL 容量瓶中，加70%乙醇制成每毫升含5 mg 的溶液，摇匀，即得。 2.1.2 盐酸益母草碱对照品储备液的制备 精密称取盐酸益母草碱对照品6 mg 置10 mL 容量瓶中，加70%乙醇制成每毫升含0.6 mg 的溶液，摇匀，即得。 2.2 供试品溶液的制备 取益母草粉末（过三号筛）约1 g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，供试品溶液使用前均以0.45 μm 微孔滤膜过滤，进样。 2.3 色谱条件与系统适用性试验 SCX 强阳离子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.5 mol 磷酸二氢钾-三乙胺（1000∶1.5）（磷酸调pH 值2.25~2.3）；检测波长：192 nm ；流速 益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定 张玉萌，项菲菲 （解放军总医院海南分院药剂科，海南 三亚 572004） 摘 要：目的：建立益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定方法，为其质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法对益母草饮片中盐酸水苏碱的含量进行测定，色谱柱：SCX 强阳离子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.5 mol 磷酸二氢钾-三乙胺（1 000∶1.5）（磷酸调pH 值2.25~2.3）；检测波长：192 nm ；流速 1.0 mL·min -1；柱温：25℃。结果：盐酸水苏碱的浓度在0.2~ 2.0 mg·mL -1 范围内线性关系良好，RSD=1.7%（n =5） ； 盐酸益母草碱的浓度在0.2~2.0 mg·mL -1 范围内线性关系良好，RSD=0.08%（n =5）。结论：该法简便、灵敏、准确，可用于益母草饮片的质量控制。 关键词：益母草；HPLC ；盐酸水苏碱；盐酸益母草碱 中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 02- 0073- 02 收稿日期：2012-08-20 作者简介：张玉萌（1978-），女，北京人，主管药师，研究方向：中药临床药学。 Content Determination of Hydrochloric Stachydrine and Hydrochloric Leonurine in Decoction Pieces of Motherwort ZHANG Yumeng，XIANG Feifei （Department of Pharmacy，Hainan Branch of PLA General Hospital，Sanya 572004，Hainan，China） Abstract ： Objective ：To establish a method for content determination of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in decoction pieces of motherwort，and to provide the basis for its quality control. Methods ：An HPLC method was established by using an SCX strong cation exchange column (4.6 mm×250 mm，5 μm) with the mobile phase of 0.5 mol monopotassium phosphate ：triethylamine(1000：1.5)，phosphoric acid adjusting the pH value to 2.25~2.3，with the flow rate of 1 mL?min -1 ，the wavelength of 192 nm and column temperature of 25 ℃. Results ：There was good linear relationship when the concentrations of hydrochloride stachydrine and hydrochloric leonurine were 0.2~2 mg?mL -1 and the values of RSD were 1.7%(n =5) and 0.08%(n =5) respectively. Conclusion ：The method is simple，sensitive and accurate，which can be used for the quality control of motherwort herb pieces. Key words ：motherwort ；HPLC ；hydrochloric stachydrine ；hydrochloric leonurine