薄层层析色谱(点板)
NO5 薄层色谱
三.实验装置图 实验装置图
展开剂（流动相）：6ml环己烷和 环己烷和2ml苯 展开剂（流动相）： ）： 环己烷和 苯 倒入展开剂，盖好盖子，放一段时间， 倒入展开剂，盖好盖子，放一段时间，然后 放入板，再盖上盖子。 放入板，再盖上盖子。 （目的：层析缸内展开剂的蒸汽压达到饱和， 目的：层析缸内展开剂的蒸汽压达到饱和， 排除溶剂挥发气态分子扩散造成的影响） 排除溶剂挥发气态分子扩散造成的影响） 层析缸不能洗
薄层色谱TLC
薄层层析 点板 爬板
赵
斌
zhaobinwily@
1
一.实验目的 实验目的
1. 了解薄层色谱分析的原理和应用。 了解薄层色谱分析的原理和应用。 2. 掌握薄层色谱分离异构体的方法。 掌握薄层色谱分离异构体的方法。
2
二.实验原理 实验原理
色谱法是分离提纯和鉴定有机化合物的重要方法。 色谱法是分离提纯和鉴定有机化合物的重要方法。 薄层色谱是一种微量、快速、简单、准确的定性分析方法， 薄层色谱是一种微量、快速、简单、准确的定性分析方法， 可在精制样品、化合物鉴定、 可在精制样品、化合物鉴定、跟踪反应进程和柱色谱摸索最 佳条件等方面得到应用。 佳条件等方面得到应用。 吸附剂（固定相） 硅胶，干燥， 吸附剂（固定相）：硅胶，干燥，活化 展开剂（流动相）：一种极性强的溶剂＋一种极性弱的溶剂 展开剂（流动相） 一种极性强的溶剂＋ 吸附能力弱的组分（即极性较弱）随流动相迅速向前移动， 吸附能力弱的组分（即极性较弱）随流动相迅速向前移动， 吸附能力强的组分（即极性较强的）移动慢。 吸附能力强的组分（即极性较强的）移动慢。 利用各组分在展开剂中溶解能力和被吸附能力的不同， 利用各组分在展开剂中溶解能力和被吸附能力的不同，最终 将各组分彼此分开， 将各组分彼此分开， 薄层板上将显示出各种有色斑点（若本身无色的情况呢？ 薄层板上将显示出各种有色斑点（若本身无色的情况呢？）
薄层色谱TLC(点板)的基本原理
薄层色谱(点板)的基本原理★★薄层色谱，或称薄层层析(thin—1ayer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。
这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采用。
(一)基本原理薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等)上形成薄层，然后用相应的溶剂进行展开。
薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。
一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
吸附是表面的一个重要性质。
任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。
在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。
物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。
在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。
而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。
吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。
吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。
例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。
当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。
薄层色谱层析操作规程
薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。
本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。
•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。
•样品：准备待测物的溶液或提取液。
•试剂：例如显色剂、定位剂等。
•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。
•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。
3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。
2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。
3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。
2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。
3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。
2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。
3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。
注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。
2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。
3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。
2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。
3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。
2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。
4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。
2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。
3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。
4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。
5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。
通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。
薄层层析色谱(点板)
检验系生化教研室 李莉
一、吸附层析的概念及原理
▪ 吸附：一种物质被聚集在另一种物质表面， 这种现象是吸附。
▪ 吸附剂：凡是能够将其他物质聚集到本身 分子表面的物质称为吸附剂，如氧化铝、 硅胶等。
▪ 被吸附物：聚集在吸附剂表面的分子就称 为被吸附物。
▪ 吸附层析（Absorption Chromatography):
rinse the microcap with clean solvent by first filling it . . .
. . . and then draining it by touching it to a paper towel
here's the TLC plate, spotted and ready to be developed
Measure 0.5 cm from the bottom of the plate. Take care not to press so hard with the pencil that you disturb the adsorbent.
Using a pencil, draw a line across the plate at the 0.5 cm mark. This is the origin: the line on which you will "spot" the plate.
Handle the plates carefully so that you do not disturb the coating of adsorbent or get them dirty.
Shown in the photo to the left is a box of TLC plates, a large un-cut TLC sheet, and a small TLC plate which has been cut to a convenient size. Plates will usually be cut and ready for you when you come to lab.
薄层色谱点样
薄层色谱点样
薄层色谱点样是薄层色谱法中的重要步骤，以下是其基本步骤：
1.点样：将样品溶液点在薄层板的一端距底边2cm处，同时点上随行标准。
点样时，每次吸取1～2μl的样品溶液，用毛细管或微量注射器点样。
点样斑点要集中、细小、圆整，每次点样时，斑点不能重叠，各次点样时所用的毛细管或微量注射器不能混用。
2.展开：将点好样的薄层板放入展开缸中，固定好。
如果展开缸不能密闭，可将展开缸的盖子取下，薄层板放好后，在盖上盖子。
3.晾干：将展开后的薄层板取出，放在晾干架上晾干。
4.显色：晾干后，将薄层板放入显色缸中显色。
如果显色缸不能密闭，可将显色缸的盖子取下，薄层板放好后，在盖上盖子。
以上信息仅供参考。
薄层色谱点样方法
薄层色谱点样方法薄层色谱（thin layer chromatography, TLC）是一种分离和分析混合物中化合物的常用方法。
它相对简单、快速、灵敏且经济实惠，因此在化学实验室中广泛应用。
薄层色谱的原理是根据物质在固定相（薄层）和流动相之间的相互作用不同而进行分离。
在进行薄层色谱时，首先需要准备一张薄层板，通常为玻璃、铝或硅胶薄片，上面涂有一层固定相，如硅胶或氧化铝。
然后，将待分离的化合物样品溶解在合适的溶剂中，称为样品溶液。
接下来，将薄层板浸入样品溶液中，使固定相完全湿润。
然后，将薄层板拿出并迅速放置到一个密封的盒子中，使其干燥形成薄层。
点样方法是薄层色谱中常用的一种方法。
它适用于待分析物质数量较少的情况。
在点样方法中，可以使用微量管、试管或取样针等工具，从样品溶液中取出一小部分待分析物质，然后将其点在薄层板上。
待薄层板上的样品点干燥后，可以将薄层板放入色谱槽中，加入流动相（溶剂），然后以恒定速度让流动相上升或水平流动。
流动相通过薄层板上的样品点时，不同成分根据它们与固定相之间的相互作用力的不同而被分离。
最终，通过观察色谱板上斑点的迁移距离和颜色可以推断化合物的性质和纯度。
点样方法的优点是快速简便，对样品消耗较少，适用于少量样品的分析。
但是，它的缺点是对于待分离物质的选取有一定的局限性，分离效果可能不如扩展点样法和连续点样法等方法好。
总结起来，薄层色谱点样方法是一种简单、快速和经济实惠的分析方法。
它适用于待分析物质数量较少的情况。
在点样方法中，通过将待分析物质点在薄层板上，并通过流动相的上升或水平流动将其分离。
这种方法在化学实验室中广泛应用，并为化学分析提供了有力的工具。
薄层色谱技巧
薄层色谱技巧（点板子）展开剂的选择一种简单的办法是根据你产物的溶解性选择一种极性最强的溶剂学（如醇类，乙氰等），再根据你实际展开的情况慢慢加入极性弱的溶剂（如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等）调节体系的极性。
以得到最好的展开效果。
把我的祖传秘方告诉你吧PE(60-90)EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH=15:5:1EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18年来我用这四种体系,没有出现过什么问题我一直在用的是乙酸乙酯：环已烷，不断调节比例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。
我用了好几年了，都还好。
不妨一试！氨基酸都有专用的展开剂，常用丁醇和水，再加酸碱选择展开剂一般要用混合溶剂：一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂，视样品的极性，再选用相应的体系。
极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸(应该交好)甲醇：氯仿对于胺类比较好我常用的展开剂有：氯仿/甲醇；环已烷/丙酮；醋酸乙酯/石油醚；甲醇/吡啶/水；等.本人用过的展开系统中，苯-丙酮用的最多，通过调节不同比例可以得到较好的效果俺的：EtOAc/HexanesCh2Cl2（EtOAc）/MeOH， 0-1% TEA or NH3极性乙酸乙酯和非极性的石油醚按不同比例混合对一般的都能适应人民卫生出版社的《分析化学》（下册）有专门的介绍，很详细。
我一般用乙酸乙酯和石油醚配成不同比例的混合溶剂。
实验时调整至Rf=0.3--------0.5我们做的氨基酸,用的都是丁醇:醋酸:水二氯甲烷：甲醇，调节不同的配比基本解决大多数问题. 用二氯甲烷与甲醇体系非常有用，只要调整好比例。
展开剂的使用一看自己的喜爱；二看产品特点。
我多用氯仿/甲醇或石油醚/乙酸乙酯！主要是调节比例！掌握了几种展开剂的比例和极性，处理起来就容易多了！用乙酸乙酯/正己烷，必要时加醋酸或三乙胺。
薄层色谱法PPT参考课件
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
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③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
薄层层析色谱(点板)
02
薄层层析色谱的基本原理
层析柱的工作原理
层析柱是薄层层析色谱的核心部件， 其工作原理基于不同物质在固定相和 流动相之间的分配系数差异。当流动 相携带待分离物质流经固定相时，由 于分配系数不同，各组分在两相之间 发生吸附、脱附、再吸附、再脱附的 过程，从而使不同物质得到分离。
VS
薄层层析色谱的固定相通常是硅胶、 氧化铝、纤维素等颗粒状物质，而流 动相则根据待分离物质的性质选择适 当的溶剂。
展开
将薄层层析板放入展开剂中，进行展开分离。
显色
根据待分离的样品和标准品的性质，选择合 适的显色剂进行显色。
பைடு நூலகம்
实验结果分析
分离效果评估
观察薄层层析板的分离效果，评估分离效果的好 坏。
定性分析
通过比较待分离的样品和标准品的显色结果，进 行定性分析。
定量分析
通过测量待分离的样品和标准品的峰面积或峰高， 进行定量分析。
技术创新和改进
新型固定相材料
研究和发展新型的固定相材料， 以提高层析的分离效果和选择性。
高效展开技术
探索和开发高效、快速的展开技术， 以缩短分析时间和提高分离效率。
自动化和智能化
推动薄层层析色谱的自动化和智能 化发展，实现自动点样、自动展开、 自动检测等功能，提高分析的准确 性和可靠性。
应用领域的拓展
04
薄层层析色谱的应用实例
在药物分析中的应用
药物成分分离
薄层层析色谱可用于分离和纯化 药物中的有效成分，提高药物的 纯度和药效。
药物质量控制
通过薄层层析色谱技术，可以检 测药物中杂质和降解产物的含量， 确保药物质量和安全。
药物代谢研究
薄层层析色谱可以用于研究药物 的代谢过程，了解药物在体内的 转化和排泄情况。
薄层色谱法
薄层色谱（Thin-Layer Chromatography: TLC）是在玻璃板上，塑料片或者铝箔覆盖有很薄的一层吸附剂的一种用于分离混合物的色谱法。
薄层板展开的方法是其中一端被溶剂浸润后，溶剂在吸附剂的间隙中扩散，溶剂往上方移动进行爬板（毛细管现象）。
如果在板子上点样混合物的话，那么化合物也会随着溶剂的移动而移动。
这个时候，由于化合物与固定相（吸附剂）的吸附度，移动相（溶剂）的亲和性的差异，混合物中各个化合物的移动速度与移动距离（Rf值）也不同。
也是利用这个原理，该方法可以用于有机化合物的分离纯化。
特别是在有机合成中，作为吸附剂的有硅胶，矾土，纤维素等等，展开溶剂的话通常有乙酸乙酯/正己烷体系，二氯甲烷/甲醇体系等等，根据具体情况运用到的体系也不同，这里就不多举例了。
TLC点板与跑板方法（出处：）TLC跑板法可以称为追踪一个反应的眼睛，是十分简便但又特别重要的分析手段。
往往不重视TLC或者对此方法掌握的不是很好的人，做实验也是多少有点问题的。
而怎样点板比较好呢？通常如上图所示，左边是原料，右边是混合物，中间是原料与反应混合物，这样的一个点板方式小编认为是比较推荐的。
而中间的这个原料与反应混合物叠加的点有以下三点作用：由于展开的方法问题有可能造成爬板的时候不是直线爬，所以有时候原料与反应混合物的Rf值可能差距不大，会分不清楚避免由于反应混合物中溶剂残留的问题，影响到Rf值有时候反应混合物在点板的时候会分解，有可能观测不到。
除了以上三点以外，我想这样点板还有很多好处，希望能够作为参考。
另外展开后，如何确认点的位置，一般我们用UV 或者显色剂的方法来观测，这在我们chem-station 以前的文章（各种TLC显色剂的调配方法）中有详细阐述，有需要的同学可以作为参考。
《TLC点板教程》课件
CONTENTS 目录
• TLC点板基础知识 • TLC点板实验操作 • TLC点板数据处理 • TLC点板实验安全与注意事项 • TLC点板实验案例分析
CHAPTER 01
TLC点板基础知识
TLC点板定义
01 02
TLC点板定义
TLC点板技术是一种通过薄层色谱法进行分离和检测物质的方法。它通 过将样品涂布在玻璃板或塑料板上，然后用适当的溶剂进行展开，以达 到分离和检测的目的。
案例一：TLC点板在药物分离中的应用
总结词：应用广泛
详细描述：TLC点板技术在药物分离纯化中应用广泛，适用 于多种类型的化合物，如生物碱、黄酮、皂苷等，为药物研 发和质量控制提供有力支持。
案例二：TLC点板在食品检测中的应用
总结词：食品安全
详细描述：TLC点板技术可用于食品安 全检测，对食品中的添加剂、农药残 留、重金属等进行分离和鉴定，确保 食品质量和安全。
案例三：TLC点板在环境监测中的应用
总结词：广泛应用
VS
详细描述：TLC点板技术在环境监测 中应用广泛，适用于多种环境样品和 监测项目，为环境保护和治理提供有 力支持。
药物分析
TLC点板技术可用于药物分析领 域，如抗生素、维生素、激素 等药物的分离和检测。
食品添加剂分析
TLC点板技术可用于食品添加剂 分析领域，如色素、防腐剂、 抗氧化剂等食品添加剂的分离 和检测。
环境污染物分析
TLC点板技术还可用于环境污染 物分析领域，如农药、重金属 等污染物的分离和检测。
CHAPTER 02
案例二：TLC点板在食品检测中的应用
总结词：广泛应用
详细描述：TLC点板技术在食品检测中应用广泛，适用于 多种食品类型和检测项目，为食品安全监管提供有力支持 。
薄层色谱的点样注意事项
薄层色谱的点样注意事项薄层色谱（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种常用的分离和分析方法，具有操作简单、分离迅速和分析准确等优点。
在进行TLC实验的过程中，需要注意以下几点：1. 试样的处理：将待测样品溶解在适当的溶剂中，通常可以选择极性不同的溶剂系统，以实现化合物之间的分离。
溶液的浓度一般为0.1-0.5mg/mL，当溶液中含有较多的有机溶剂时，需将试样溶液加热或浓缩至溶剂完全挥发。
2.样品的加载：将样品点于TLC板的起点处，通常采用微量注射器或毛细管，使液体形成圆点。
在加载过程中，注意要使圆点均匀和有限地均匀分布在载体上，以免导致不准确的结果。
3.色谱板的预处理：TLC板在使用前需要预处理，以去除表面的杂质和活性部分。
常见的预处理方法包括在TLC板的表面刷一层均匀的吸附剂，如石蜡、硅胶等，待其风干后，再进行实验。
4.选择合适的发展溶剂系统：发展溶剂的选择应根据待测物质的性质来确定，通常选择具有不同极性的溶剂混合物来进行发展。
在实验过程中，可以尝试不同的发展溶剂系统，以获得最佳的分离效果。
5.色谱板的开发过程：在色谱板放置于发展槽中时，应注意槽内溶剂的深度和液面的平行度，以确保沿TLC板上升的溶剂是均匀的。
开发过程中需避免颠簸、震动等不必要的干扰，以保证分离的准确性和可重复性。
6.色谱板的干燥和显色：在开发完成后，需要将色谱板从发展槽中取出并迅速晾干，避免涂层的破坏。
然后可使用紫外灯或荧光灯进行荧光显色或使用显色剂染色，以观察分离效果并记录实验结果。
7.结果的解读和分析：观察色谱板上形成的斑点或色带，可以测量它们的RF值（移动性因子），帮助鉴定待测物质和评估分离效果。
需要谨慎比较样品之间的RF值，以避免结果的不准确性。
总之，TLC实验是一项简单有效的分析方法，但是在实验过程中仍需注意样品处理、色谱板的预处理与干燥等步骤，以保证实验结果的准确性和可重复性。
点板
薄层色谱法中原点到斑点中心（origin) 的距离与原点到溶剂前沿(solvent front) 的距离的比值
是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。
定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。
Rf=（distance moved from origin by component）÷（distance moved from origin by solvent）
在制备薄层板时，在大小适当的玻璃板上，均匀涂上吸附剂，厚度在一毫米以内，然后在距底边1。
5厘米处点上样品溶液，形成一个小点，称为“原点”。
再将薄层板置于盛有动相溶剂的玻缸内（此溶剂称为“展开溶剂”，玻缸称为“展开槽”）。
当溶剂沿薄层扩散到距原点以上一定距离时（一般10—12厘米），取出薄层板，记录展开溶剂扩展前沿距原点的距离A。
然后用喷洒显色试剂或紫外光线照射的方法使被分离的化合物显色，此过程称为“显谱”。
观察并记录所显斑点的中心距原点的距离。
斑点在薄层板上的位置通常用比移值（Rf）表示。
Rf值为斑点中心距原点的距离与溶剂展开前沿距原点距离的比值
Rf值是与物质在两相中分配系数相关的数值，因此，在特定条件下为一常数。
不同的物质由于在特定色谱条件下的两相间分配系数的差异，而有着不同的Rf值，这样就达到薄层色谱分离的目的。
薄层色谱点样方法
薄层色谱点样方法薄层色谱（TLC）是一种常用的分析方法，常用于化学分析和有机合成中。
它是在含有吸附剂的玻璃板上，由于样品溶剂的上升，薄层色谱柱中进行分离和分析。
TLC方法简单、迅速、经济，样品的处理时间相对较短，而且不需要复杂的仪器设备，所以被广泛应用。
以下是薄层色谱的步骤和方法说明：1.准备TLC板：根据需要选择合适的吸附剂和固定剂，将其混合成糊状物，并均匀地涂在玻璃板上。
通常使用的吸附剂有硅胶、氧化铝等。
涂层完毕后，将玻璃板放置在通风处，保持板面干燥，通常需要数小时到整夜。
2.准备样品：将待测物质溶解于合适的溶剂中，通常选择的溶剂有醇类、醚类、酸类、酮类等。
注意要尽量避免溶剂选择相同吸附剂的溶剂。
3.样品的上样：将溶解好的样品滴在TLC板上，通常使用微量注射器，滴在距离玻璃板底边1-2厘米处。
4.开展柱层色谱：将TLC板放入开发槽中，加入适当的溶剂，使溶剂上升。
溶剂的选择主要取决于需要分离的化合物的极性和涂层的类型。
可以使用单一溶剂或多溶剂混合物进行开发。
开发过程中要注意控制溶剂的上升速度，过快可能导致分离效果不好。
5.染色和显示：开发至合适的位置后，从开发槽取出TLC板，将其放入染色剂中浸泡数分钟。
常用的染色剂有紫外灯下显示：在紫外灯下观察TLC板，化合物的位置会发出荧光，可以使用荧光探测器检测化合物；显色剂：将TLC板放在显色剂中，化合物会与染色剂发生反应产生颜色，从而使其可见。
6.结果分析：观察TLC板上的斑点，根据移行距离的大小和颜色的差异，可以判定化合物的相对极性，根据样品和参照物之间的颜色和痕迹，可以推断样品的对应物。
需要注意的是，TLC是一种定性分析方法，其结果不能用于定量分析，只能作为化合物之间的相对比较。
另外，为了减小误差，每个样品通常需要复制进行测试，并进行平均值计算。
总结而言，薄层色谱是一种简单、迅速、经济的分析方法，可以在很多领域中应用。
通过掌握薄层色谱的原理和操作步骤，我们可以准确判断化合物的极性和分离程度，并进行进一步的分析和研究。
点板薄层色谱法
点板薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，简称TLC）是一种分离和分析混合物中化合物的常用技术。
它是色谱法的一种类型，用于确定混合物中组分的数量和种类。
TLC通常用于有机化学、生物化学、药学和环境科学等领域。
TLC的原理基于化合物在不同吸附剂上的相对亲和性差异。
它涉及将待分离化合物样品点涂在薄而均匀的涂层（通常是硅胶或氧化铝）上，然后将这个点板放置在合适的溶剂中，让溶剂沿着涂层上升，通过色谱过程进行分离。
TLC的步骤通常包括：
准备涂层：在玻璃或铝板上涂覆薄层吸附剂，通常是硅胶或氧化铝。
样品的制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，并使用微量注射器在涂层上涂成一个小点。
开发：将涂有样品的点板放入一个封闭的容器中，容器里面放入一小池液体，使得涂层底端与液面浸泡。
液体中的溶剂会缓慢上升，与涂层中的化合物发生相互作用，导致它们分离出来。
停止开发：当液面到达涂层的顶部时，取出点板，并将其快速晾干，使化合物的分离停止。
可视化：将干燥的点板放入紫外灯或其他适当的检测器下，用于可视化分离的斑点。
化合物在涂层上的位置取决于其在涂层和溶剂之间的相互作用。
记录结果：记录斑点的位置、颜色和Rf值（迁移率）等信息。
Rf值是化合物前进距离与溶剂前进距离的比值，用于标识化合物。
TLC是一种简单、快速、低成本的分析方法，可以用于快速筛查样品的组成，并验证反应的纯度。
它也是其他更复杂色谱技术的前处理步骤之一。
薄层色谱TLC点板教程市公开课获奖课件省名师示范课获奖课件
1）让溶剂向上展开约90%旳薄 板长度。
2）从展开池中取出薄板而且 立即用铅笔标注出溶剂到达 旳前沿位置。
3）让薄板上旳溶剂挥发掉， 将薄板干燥后喷以显色剂， 或在紫外灯下显色，用铅笔 标出全部显色点或有紫外活 性旳点。
单一溶剂旳极性从小到大顺序为：
❖ 石油醚＜汽油＜庚烷＜己烷＜二硫化碳＜二甲苯 ＜甲苯＜氯丙烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙 烷＜三氯甲烷＜异丙醚＜硝基甲烷＜乙酸丁酯＜ 乙醚＜乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚＜甲乙 醇＜叔丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜乙醇 ＜乙腈＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺＜水
薄层色谱（TLC法）
❖ 定义、原理
薄层色谱(Thin Layer Chromatography)简称TLC，又 称薄层层析，属于固－液吸附色谱。样品在薄层板上旳吸 附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。因为多 种化合物旳吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进 行不同程度旳解吸，从而到达分离旳目旳。
❖2．展开： ➢ 展开方式可分为三类：上行展开和下行展开；单次展开和屡
次展开；单向展开和多向展开 ➢ 常用旳是上行展开，就是使展开剂从下往上展开：当样点上
旳溶剂充分挥干后，将薄层置于盛有合适展开剂旳标本缸、 大量筒或方形玻缸中，使展开剂浸入薄层旳高度约为0.5cm。 ➢ 注意事项：先悬空饱和、再入液展开；样点不能泡在展开剂 中；薄层浸入时不能歪斜进入。
前沿线
色斑
起始线
❖ 3．显迹：用合适旳措施或者合适旳显色剂处理薄层，使 其上可能已经分离旳各成份斑点显示出来，以以便计算各 个斑点旳比移值，从而提供定性与定量旳根据。措施有：
TLC(薄层层析色谱)技术原理与应用
精心整理TLC（薄层层析色谱）技术原理与应用一、薄层层析（TLC）简介薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。
还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。
吸附TLC→固定相为吸附剂→氧化铝、硅胶。
（较多用）TLC→分配TLC→固定相为液态（通常为水）→固定相吸附在支持剂上。
（一）吸附薄层的基本原理：吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。
吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。
1.吸附薄层层析：在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。
在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，……。
由于对氨基偶氮苯的极性比偶氮苯的极性稍强一些，层析的结果，对氨基偶氮苯受到的吸附作用稍强于偶氮苯，从而将两者分离。
展开结束以后，会在薄层板上形成两个斑点，混合物中的成分得以分离。
中药中的有效成分复杂多样，结构近似者不少。
特别是对未知结构的成分分析，设计并摸索出合理的层析条件是首要任务。
只有先设计出可用的层析条件，再经摸索改进，才可能对未知或者已知成分进行成功地分离。
然后才能谈得上进一步的分析研究。
要设计出合理有效的层析条件，必须熟悉薄层层析条件的选择的基本要领。
下面对薄层层析条件的选择做一初步介绍。
薄层色谱法点样的注意事项
薄层色谱法点样的注意事项
1.薄层色谱点样时,点样的部位要准确。
2.薄层色谱点样时,不能把色素点到固定相上,否则将影响检测结果。
3.点样用的色素溶液必须是新配制的,使用前应该过滤,以免引起实验误差。
4.色素的加入顺序与分离效果有关,一般先加入易挥发的物质(如水),再依次加入难挥发的物质(如盐酸、酒石酸钾钠等)和水。
5.点好样品后,可在薄层板的反面用铅笔轻轻描绘出一个小方格或圆圈,然后取下薄层板,在干净的载玻片上盖上盖玻片,用吸水纸吸去气泡,并在载玻片的中央滴加几滴显色剂,使其充分展开,即可得到一张理想的薄层色谱图。
薄层色谱法操作步骤及注意事项
薄层色谱法操作步骤及注意事项嘿，咱今儿就来聊聊这薄层色谱法！这玩意儿可有意思啦，就像是一场小小的实验冒险。
先说说操作步骤哈。
你得准备好那薄如蝉翼的层析板，这就好比是冒险的舞台。
然后呢，把样品小心翼翼地配好，就像给舞台上的主角化好妆。
接着，用那细细的毛细管或者微量注射器，把样品轻轻地点在层析板上，可别太用力啦，不然就把舞台给戳破咯！点好样后，把层析板放进那装着展开剂的层析缸里，看着展开剂慢慢地往上爬，就像看着主角在舞台上慢慢展现风采。
等展开到合适的位置，赶紧把层析板拿出来，让它晾干或者烘干。
嘿，这不，一幅漂亮的图谱就出来啦，就像主角完成了一场精彩的表演！那注意事项可不少呢！你想啊，要是不注意，这表演不就搞砸啦？首先呢，层析板得选好，质量差的可不行，那不是给表演添乱嘛！然后，样品的浓度可要把握好，太浓了就像化了个大花脸，太淡了又看不出来，这可得拿捏准咯！展开剂也很关键呀，得选对适合的，不然怎么能让主角好好发挥呢？还有啊，操作的时候要轻手轻脚的，别毛手毛脚把一切都搞乱了。
在这个过程中，就像烹饪一道美味佳肴，每个环节都不能马虎。
你要是不小心在点样的时候手抖了一下，哎呀，那图谱可能就不那么完美啦！就像做菜时盐放多了一样。
又或者展开剂没选对，那图谱就可能变得乱七八糟，好比做出来的菜味道怪怪的。
所以呀，每一步都得认真对待，可不能敷衍了事哟！咱再想想，这薄层色谱法不就像是人生的一场小旅途嘛！每一步都要走得稳稳当当，注意着各种细节，才能欣赏到最美的风景。
要是粗心大意，那可能就会错过很多精彩呢！总之呢，薄层色谱法看似简单，实则暗藏玄机。
只有用心去体会，认真去操作，才能让它发挥出最大的作用。
可别小瞧了它哟，它能帮我们解决很多问题呢！大家都好好去试试吧，相信你们会爱上这个小小的实验冒险的！。
薄层色谱TLC点板基本原理
.薄层色谱 (点板 )的基来源理★ ★薄层色谱，或称薄层层析 (thin — 1ayer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以适合的溶剂为流动相，对混淆样品进行分离、判定和定量的一种层析分别技术。
这是一种迅速分别诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其余多种物质的特别有效的层析方法，从50年月发展起来到现在，仍被宽泛采纳。
(一)基来源理薄层层析是把支持物平均涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等 )上形成薄层，而后用相应的溶剂进行睁开。
薄层层析可依据作为固定相的支持物不一样，分为薄层吸附层析 (吸附剂 )、薄层分派层析 (纤维素 )、薄层离子互换层析 (离子互换剂 )、薄层凝胶层析 (分子筛凝胶 )等。
一般实验中应用许多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
吸附是表面的一个重要性质。
任何两个相都能够形成表面，吸附就是此中一个相的物质或溶解于此中的溶质在此表面上的密集现象。
在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。
物质分子之因此能在固体表面逗留，这是因为固体表面的分子 (离子或原子 )和固体内部分子所受的吸引力不相等。
在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场相互抵消。
而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面遇到固体内部分子的作使劲大，而表面层所受的作使劲小，因此气体或溶质分子在运动中碰到固体表面时遇到这类节余力的影响，就会被吸引而逗留下来。
吸附过程是可逆的，被吸附物在必定条件下能够解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内走开此表面的分子之间能够成立动向均衡，称为吸附均衡。
吸附层析过程就是不停地产生均衡与不均衡、吸附与解吸的动向均衡过程。
比如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分派系数的不一样，使混淆物得以分别。
当溶剂沿着吸附剂挪动时，带着样品中的各组分一同挪动，同时发生连续吸附与解吸作用以及频频分派作用。
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（二）溶剂 不同溶剂具有不同的结构性质， 不同溶剂具有不同的结构性质，依极性大小 各种溶剂的洗脱能力各不相同。 各种溶剂的洗脱能力各不相同。 一般所选溶剂要求： 一般所选溶剂要求： a.纯度合格 纯度合格 b.黏度要小，易与样品中各组分相分离 黏度要小， 黏度要小 c.与所欲分离样品和吸附剂不起化学反应 与所欲分离样品和吸附剂不起化学反应
吸附层析（ 吸附层析（Absorption Chromatography): 指混合物组分随流动相经过由吸附剂组成 的固定相时， 的固定相时，由于吸附剂对不同物质的吸 附能力的不同以及各组分在流动相中的溶 解度不同而加以分离的方法。 解度不同而加以分离的方法。
二、薄层层析（Thin-layer 薄层层析（ chromatography,TLC)
聚酰胺是—类化学纤维原料， 聚酰胺是 类化学纤维原料，即锦纶 类化学纤维原料 (又称尼龙 。由己二酸与己二胺聚合 又称尼龙)。 又称尼龙 而成的称锦纶66 而成的称锦纶 。
因为在这类物质分子中都含有大量酰胺 基团，故统称聚酰胺。 基团，故统称聚酰胺。
聚酰胺对很多极性物质有吸附作用， 聚酰胺对很多极性物质有吸附作用，这是由于聚酰 胺的一C＝ 及 胺的一 ＝O及>NH基能与被分离物质之间形成氢 基能与被分离物质之间形成氢 如酚类(包括黄酮类 鞣质等)和酸类 包括黄酮类、 和酸类<如核苷 键。如酚类 包括黄酮类、鞣质等 和酸类 如核苷 酸、氨基酸等)是以其羟基与酰胺键的羰基形成氢 氨基酸等 是以其羟基与酰胺键的羰基形成氢 键；硝基化合物和醌类等物质与酰胺键的氨基形 成氢键。被分离物质形成氢键能力的强弱， 成氢键。被分离物质形成氢键能力的强弱，确定 吸附能力的差异。在层析过程中， 吸附能力的差异。在层析过程中，层层溶剂与被 分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。因此选择 分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。 适当的展层溶剂， 适当的展层溶剂，使被分离物质在溶剂与聚酰胺 表面之间的分配系数能有较大差异， 表面之间的分配系数能有较大差异，经过吸附与 解吸的展层过程，可以一一分离. 解吸的展层过程，可以一一分离
DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析
检验系生化教研室 李莉
一、吸附层析的概念及原理
吸附：一种物质被聚集在另一种物质表面， 吸附：一种物质被聚集在另一种物质表面， 这种现象是吸附。 这种现象是吸附。 吸附剂： 吸附剂：凡是能够将其他物质聚集到本身 分子表面的物质称为吸附剂，如氧化铝、 分子表面的物质称为吸附剂，如氧化铝、 硅胶等。 硅胶等。 被吸附物： 被吸附物：聚集在吸附剂表面的分子就称 为被吸附物。 为被吸附物。
Procedure for TLC
1. Prepare the developing container. The developing container for TLC can be a specially designed chamber, a jar with a lid, or a beaker with a watch glass on the top:
Handle the plates carefully so that you do not disturb the coating of adsorbent or get them dirty.
Shown in the photo to the left is a box of TLC plates, a large un-cut TLC sheet, and a small TLC plate which has been cut to a convenient size. Plates will usually be cut and ready for you when you come to lab.
溶剂选择考虑因素： 溶剂选择考虑因素： 1、溶剂与吸附剂之间的相互作用力 、 2、溶剂与样品之间的作用因素 、 溶剂的选择可通过实验来确定。 溶剂的选择可通过实验来确定。
（三）薄层层析的操作 1、点样 、 样品最好溶解在挥发性的溶剂中，如氯仿、 样品最好溶解在挥发性的溶剂中，如氯仿、 丙酮等，避免用水每次点少量样品， 丙酮等，避免用水每次点少量样品，可在 溶剂挥发后反复进行至点完为止。 溶剂挥发后反复进行至点完为止。 样品原点直径＜ 样品原点直径＜3mm
三、薄层层析的应用
（一）定性分析：将已知化合物作为标准品 定性分析： 与样品一起进行层析后对照， 与样品一起进行层析后对照，可初步确定 未知化合物的组成。 未知化合物的组成。 定量分析：可直接在薄板上测定， （二）定量分析：可直接在薄板上测定，无 须破坏薄层； 须破坏薄层； 用工具将斑点从薄层上取下，用溶剂洗脱， 用工具将斑点从薄层上取下，用溶剂洗脱， 再用其他方法测定。 再用其他方法测定。
3. Spot the TLC plate
add a few drops of solvent . . .
. . . swirl until dissolved
dip the microcap into solution - the arrow points to the microcap, it is tiny and hard to see
make sure it is filled - hold it up to the light if necessary
touch the filled microcap to TLC plate to spot it - make sure you watch to see that all the liquid has drained from the microcap
吸附剂的吸附能力常称为活度， 吸附剂的吸附能力常称为活度，用罗马字 表示。 母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ表示。 活度 减少 含水量 增大
2、常用吸附剂 、 极性： 极性：氧化铝 硅胶 非极性： 非极性：纤维素 聚酰胺： 合成 己二酸、 合成： 聚酰胺：a.合成：己二酸、己二胺 b.特点：氢键吸附剂 特点： 特点
DNS-C1在pH过高时，水解产生 在 过高时 过高时， 副产物DNS-OH，即： 副产物 ，
过量时， 在DNS-C1过量时，会产生 过量时 会产生DNS—NH2，即： ，
DNS-氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光， 氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光， 氨产生蓝色荧光，可 和 彼此区分开。 彼此区分开。
（三）临床生化上的应用 1.氨基酸的分离 氨基酸的分离 2.核苷、核苷酸和核酸的分析 核苷、 核苷
DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析 氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析
二甲氨基萘磺酰氯 （1-Dimethylaminonaphtalene-5-sulfonyl chloride）简称 ）简称DNS-Cl，可与氨基酸的游离 ， 氨基结合成DNS-氨基酸，形成的 氨基酸， 氨基结合成 氨基酸 形成的DNS-氨基 氨基 酸在紫外线（ 酸在紫外线（260nm或365nm）照射下发出 或 ） 强烈的黄色荧光，因此可用荧光检测DNS强烈的黄色荧光，因此可用荧光检测 氨基酸的存在。反应过程如下： 氨基酸的存在。反应过程如下：
Cover the beaker with a watch glass, swirl it gently, and allow it to stand while you prepare your TLC plate.
2. Prepare the TLC plate.
TLC plates used in the organic chem teaching labs are purchased as 5 cm x 20 cm sheets. Each large sheet is cut horizontally into plates which are 5 cm tall by various widths; the more samples you plan to run on a plate, the wider it needs to be.
Pour solvent into the beaker to a depth of just less than 0.5 cm.
To aid in the saturation of the TLC chamber with solvent vapors, line part of the inside of the beaker with filter paper
It's kind of hard to see the pencil line in the above photos, so here is a close-up of how the plate looks after the line has been drawn.
Under the line, mark lightly the name of the samples you will spot on the plate, or mark numbers for time points. Leave enough space between the samples so that they do not run together, about 4 samples on a 5 cm wide plate is advised. Use a pencil and do not press down so hard that you disturb the surface of the plate. A close-up of a plate labeled "1 2 3" is shown to the right.
薄层层析法是在平滑的玻璃板上或在聚脂 薄膜上， 薄膜上，将吸附剂铺在上面成薄层作为固 定相，以溶剂作为流动相， 定相，以溶剂作为流动相，把样品中各组 分分离。 分分离。 分离原理：吸附层析、 分离原理：吸附层析、分配层析和离子交换 层析。 层析。