疫苗制造基本程序

疫苗制造基本程序
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （三）灭 活
灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取 最适当的灭活条件进行，几种灭活菌苗的灭活方法如表所示。
表 几种灭活菌苗的灭活方法
疫苗制造基本程序
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字。
疫苗制造基本程序
项目二 细菌性活疫苗制造
疫苗制造基本程序
二、细菌性活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 浓缩 配苗
细菌性活疫苗多指弱毒菌苗，尽管种类与苗型甚多，但基本制造程 序相同。
（一）菌种与种子
弱毒菌种多系冻干品，由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所 传代、鉴定、保存与分发，少数由国家指定单位鉴定、保存与供给。
从受精卵入孵开始至培养全过程都应保持无菌，要求一定的温度和 湿度，且需不断翻动，然后选择。选择一定日龄、发育正常的胚用于接 毒培养。
蛋白质、肉浸液等原Baidu Nhomakorabea 配置、灭菌
培养基
活化 种子
培养
原料 配制 灭菌
佐剂
菌液
灭活
灭活菌液
菌苗原液
配苗、乳化
配苗
原料
配制 灭菌
保护剂
分装
分装、冻干
检验
检验
灭活疫疫苗苗制造基本程序 活疫苗
项目三
病毒疫苗制造
病毒性禽胚培养疫苗制造 病毒性细胞培养疫苗制造 病毒性动物组织疫苗制造
疫苗制造基本程序
一、病毒性禽胚培养疫苗制造
菌种使用前应按规程规定进行复壮、挑选，并作形态、特性、抗原性 和免疫原性鉴定，符合标准后方可用于制苗。
将检定合格的菌种接种子于规定的培养基，按规定的条件增殖培养， 经纯粹检查及有关的检查合格者即可作为种子液。
种子液通常在0～4C可保存2个月，在保存期内可作为菌苗生产的批量 种子使用。
疫苗制造基本程序
（四）配苗与冻干
经检验合格的菌液，按规定比例加入保护剂配苗，充分摇匀后随即 进行分装，分装量必须准确。
分装好的菌苗迅速送入冻干柜进行预冻、真空干燥，冻于完毕后立 即加塞、抽空、封口，移入冷库保存，并由质检部门抽样检验。
疫苗制造基本程序
流程图1——细菌疫苗制造工艺流程
细菌分离 鉴定
菌种 减毒
弱毒菌种
（四）浓 缩 为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高
菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。
常用的浓缩方法：氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法
以上方法可使菌液浓缩一倍以上。
此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹 毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐 酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。
鸡胚选择 种毒与毒种继代 接毒与收获 配苗
痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和疱疹病毒等一类生物制品，目前仍然 利用禽胚特别是鸡胚制备，如鸡新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟热鸡胚弱毒 疫苗等。
禽胚疫苗生产的原材料来源方便、质量比较容易控制，制造程序简单， 不需要过高的设备条件，生产的疫苗质量可靠。
（一）鸡胚选择
受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用抗生素药物的非免疫鸡群，以 免受母源抗体的干扰和残留抗生素的影响。
疫苗制造基本程序
疫苗制造基本程序
内容
项目一
细菌性灭活疫苗制造
项目二
细菌性活疫苗制造
项目三
病毒疫苗的制造
疫苗制造基本程序
项目一 细菌性灭活疫苗制造
疫苗制造基本程序
一、细菌性灭活疫苗制造
灭活细菌疫苗通用制造程序
菌种的选择 菌液培养 灭活
配苗
浓缩
细菌性灭活疫苗简称灭活菌苗，种类、苗型甚多， 但制造的基本程序差别不大。
菌液于0～4C暗处保存，待抽样经纯粹、活菌数等检查合格 后使用。
疫苗制造基本程序
二、细菌性活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 浓缩 配苗
（三）浓缩
为提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可进行浓缩，以提高单位活菌数，常 用的依缩方法有吸附剂吸附沉降法、离心沉降法等，如于猪丹毒菌液内加入 0.2% ～0.25%羧甲基纤维素(CMC)进行浓缩，也可用离心沉淀浓缩。浓缩 菌液应抽样作纯粹、活菌数等检查。
各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培养特 性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。
2.种子培养
将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定的培养基进 行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标准后即为种子液，用于菌苗 生产。
种子液通常保存于2-8C冷疫暗苗制处造，基不本程得序超过规程规定的使用期限。
疫苗制造基本程序
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （五）配苗与分装
由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。
氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶 配制；也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。
有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135m110号白油、 11.4m1Span-85、3.6ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲 醛灭活菌液配制。
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
（二）菌液培养
大量生产的细菌培养方法甚多，既有手工式的，也有机 械化或自动化的培养方式。
机械化或自动化的培养方式通称为反应缸培养法，可供 选择的菌液培养法有：液体静置培养法、液体深层通气培养 法、透析培养法及连续培养法等。
菌液培养也可采用固体培养法，该方法易获得高浓度的 细菌悬液，易稀释成不同浓度，且含培养基的成分较少，所 以比较适用于制备诊断用的抗原。
二、细菌性活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 浓缩 配苗
（二）菌液培养
按1%～3%量将种子液接种于培养基，然后依不同菌苗要求 进行培养。
如猪丹毒弱毒菌须在在深层通气培养中加入适当植物油作消泡剂，通入过 滤除菌的热空气进行培养制造菌液
如人用炭疽活疫苗、卡介苗经固体表面培养完成后须按规定要求将菌苔洗 下制成菌液
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
疫苗制造基本程序
基本流程
菌液
活灭
灭活菌液 + 佐剂
配置 原料
乳化
分装和保存 疫苗制造基本程序
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
（一）菌种与种子 1.菌种
制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个品 系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、冻干 保存和供应。