牛羊布病的检测技术

牛羊布病平板凝集试验

一、试验原理：

该试验又称为板式孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性（PH3.6--3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgMl类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。血清的制备

一、血清制备

将血液采集与无抗凝的离心管中，温室静置30分钟，3000r/min l离心5--10min,吸出血清（切勿吸出红细胞成分），分装备用。要保存的血清则分离后装入离心管与-- 2 0 ℃的冰箱内保存。

二、虎平平板凝集试验（RBPT）

将玻璃板清洗干净，划成50个方格（横10x纵5），每格4cm X 4 c m.每一格下再划1cm宽的小格，各格标上被检血清号，每一横行做两份待检血清。在各方格中加入相应的被检血清 3 0 ul,,然后再其旁加入30ul虎红平板凝集抗原，用牙签搅动被检血清和抗原使之均匀混合，形成直径约2cm的液区。轻微摇动，置室温条件下（2 0 ℃），4min内观察结果，同时设阳性血清和阳性血清对照。

方法二、在载玻片上加抗原30UL，加入30UL被检测血清，混匀。在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。

三、结果观察

当阴性血清对照不出现凝集（—），阳性血清对照出现凝集（+），方可对代检血清进行判定。待检血清在4min,内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）四、注意

RBPT 操作简单、反应迅速，且对试验条件要求不高，但特异性不高，易受试验温度和凝集时间等因素的影响，不易准确判定结果。应用此法所得的阳性检出率为70%，较SAT(试管凝集试验) ELISA（酶联免疫吸附试验）低。该方法主要用于初筛，对其阳性者，还必须经SAT检测为阳性后才能最终判定为阳性。