非线性混合效应模型估算环孢素在人体相对生物利用度和药动学参数

・２７６・中国新药与临床杂志（ＣｈｉｎＪＮｅｗＤｒｕｇｓＣｌｉｎＲｅｍ），２００５年４月，第２４卷第４期Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｙｙｌｃ＠ｓｈｙｙｘｘ．ｃｏｍｈｔｔｐ：／／ｘｙｙｌ．ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｅｎｈｔｔｐ：／／ｚｇｘｙｙｌｃｚｚ．ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌｓ．ｃｏｒｎ．ｃｎａｎｄＰＴＸｔｒｅａｔｍｅｎｔ（Ｐ２，ｎ＝８）；（６）ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕ－ｓｉｏｎ４ｈａｎｄＰＴＸｔｒｅａｔｍｅｎｔ（Ｐ４，ｎ＝８）．Ｔｈｅｓｅｒｕｍｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ－ｄ）ｌｅｖｅｌｓａｎｄｔｈｅｍｙ—ｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ｌｅｖｅｌｓｗｉｔｈｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．ＴｈｅｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＩＣＡＭ－１ｏｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏ—ｌｏｇｉｃｌｅｓｉｏｎｓｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓ．ＲＥＳＵＬＴＳ：ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＴＮＦ－０ｌｉｎｓｅｒｕｍａｎｄＭＰＯａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｉｎＩＲ２ｈａｎｄＩＲ４ｈｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｈｉｇｈ—ｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｓｈａｍｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ・－１ｗｉｔｈｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｕｐ－－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．ＩｎＰ２ａｎｄＰ４ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｗｅｒｅａ・ｍｅｌｉｏｒａｔｅｄａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＩＲ２ｈａｎｄＩＲ４ｈｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０１）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：ＦｒｘｃａｎｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＴＮＦ－ｏｔｉｎｓｅｒｕｍ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ一１ｗｉｔｈｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｒｅｄｕｃｅｔｈｅａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄａｃ—ｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＰＭＮｗｉｔｈｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅａｎｄｍｉｔｉｇａｔｅｉｎｔｅｓ—ｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．［ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ］［１］ＬＵＹ，ＳＨＥＮＧＺＹ，ＬＩＪＹ，ｅｔａ１．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＩＣＡＭ—ｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｅｍａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｃｙｔｅａｎｄｔｈｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｕｒｉｎｅｓｍａｌｌｂｏｗｅｌｉｎａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａ．ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＧｅｎＳｕｒｇ（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ），２０００，１５（３）：１４５・１４７．［２］Ｓｅｅａｂｏｖｅ［３］ＮＩＵＨＪ，ＦＡＮＳＺ，ＪＩＡＮＧＹＧ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｅｎｔｏｘｉｆ）７ｌｌｉｎｅｏｎａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｌｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＡｃａｄＭｅｄＭｉｌＴｅｒｔ（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ），２０００，２２（８）：７３７－７３９．［４］ＣＨＥＮＨＨ，ＳＵＮＳＧ，ＴＯＮＧＥＴ，ｅｔａ１．ＴＮＦ—ｄｉｎｄｕｃｅｄＩＣＡＭ－１ｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｕｓ［Ｊ］．ＪＢｒａｉｎＮｅｒｖＤｉｓ（ｉｎＣｈｉ—ｎｅｓｅ），２０００，８（５）：２６５－２６７．［５］Ｌ０Ｙ，ＬＩＪＹ，ＳＵＮＳＲ，ｅｔａ１．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｅｄｉａｔｏｒｓａｎｄＩＣＡＭ一１ｉｎｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅａｆｔｅｒｇｕｔｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＥｍｅｒｇＭｅｄ（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ），２００３，１２（ｔｏ）：６７０６７２．［６］ＸＵＪＣ，ＭＡＯＢＬ，ＱＩＡＮＧＳ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓ—ｓｉｏｎｓｏｆｓｅｖｅｒａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｇｅｎｅｓｉｎ。

ｒａｔｓｗｉｔｈｓｅｐｓｉｓ・ｉｎ—ｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＭｅｄＪＣｈｉｎＰＥＡ（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ），２００３，２８（２）：１０２—１０４．［文章编号］１００７－７６６９（２００５）０４－０２７６－０５非线性混合效应模型估算环孢素在人体相对生物利用度和药动学参数焦正，李中东，丁俊杰，施孝金，钟明康（复旦大学附属华山医院药剂科，上海２０００４０）［关键词】生物利用度；药动学；色谱法，高压液相；非线性混合效应模型；环孢素［摘要］目的：用非线性混合效应模型（ＮＯＮＭＥＭ）估算环孢素２种制剂在人体的相对生物利用度和药动学参数。

方法：２０名男性志愿者随机、交叉单次口服环孢素微乳剂和普通乳剂５００ｍｇ。

ＨＰＬＣ法测定血药浓度。

经典药动学方法和ＮＯＮＭＥＭ法估算相对生物利用度和药动学参数。

结果：用ＮＯＮＭＥＭ法估算环孢素微乳剂生物利用度是普通乳剂的（２０９土ｓ６０）％；普通乳剂和微乳剂的Ｖ／Ｆ分别是（０．３０±０．１０），（０．１４±０．０６）Ｌ；Ｋａ分另４是０．４０±０．１１，０．９士０．５；Ｋｅ分另４是０．１６±０．１８，０．３２±０．１３；Ｋ２分别是０．２３±０．１７，０．２０土０．１７；恐】分别是０．０２１±０．０２１，０．１７．４－０．０８，与传统方法相比基本一致。

结论：ＮＯＮＭＥＭ法为药物生物利用度评价和药动学参数计算提供一种简捷和快速的数据分析途径。

［中图分类号］［文献标识码］Ｒ９７９．５；Ｒ９２７．２Ａ环孢素（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）为１１个氨基酸组成的环状多肽，是一种强效免疫抑制剂，广泛用于器官移植后的排斥反应和自身免疫性疾病。

环孢素具有强亲脂［收稿日期］２００４－０９—１７［接受日期］２００５－０１－０５［作者简介］焦正（１９７２－），男，上海人，主管药师，博士研究生，从事药动学研究。

［联系人］焦正。

Ｐｈｎ：８６－２１—３２１２－００５９。

Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｏｚｈｅｎ＠ｏｎｌｉｎｅ．ｓｈ．ｃｎ万方数据中国新药与临床杂志（ＣｈｉｎＪＮｅｗＤｒｕｇｓＣｌｉｎＲｅｍ），２００５年４月，第２４卷第４期Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｙｙｌｃ＠ｓｈｙｙｘｘ．ｃｏｒｎｈｔｔｐ：／／ｘｙｙｌ．ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎｈｔｔｐ：／／ｚｇｘｙｙｌｃｚｚ．ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌｓ．ｃｏｍ．ｃｎ‘２７７・性，水溶性差，体内吸收不规则，个体问药动学差异大［见：ＬＩＮＤＨＯＬＭＡ，ｅｔａ１．ＴｈｅｒＤｒｕｇＭｏｎｉｔ，１９９５，１７（６）：５７０－５７３．］。

本研究采用非线性混合效应模型（ｎｏｎｌｉｎｅａｒｍｉｘｅｄｅｆｆｅｃｔｍｏｄｅｌ，ＮＯＮＭＥＭ）对环孢素微乳剂和普通乳剂的药动学参数和相对生物利用度进行估算。

同时与经典药动学方法的计算结果进行比较。

材料与方法仪器、药品与试剂１仪器Ｗａｔｅｒｓ２６９０高效液相色谱系统；Ｗａｔｅｒｓ２４８７紫外检测器；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ３２色谱工作站（Ｖｅｒｓｉｏｎ３．２，ＷａｔｅｒｓＩｎｃ．ＭＡ，ＵＳＡ）２药品与试剂环孢素口服乳剂（市售品，商品名赛斯平，福建科瑞药业有限公司，规格为５０ｍＬ：５ｇ，批号：０２０８０２）；环孢素口服微乳溶液（福建科瑞药业有限公司，规格为５０ｍＬ：５ｇ，批号：０２０８０７）；环孢素标准品（纯度９８．８％，中国药品生物制品检定所提供）；环孢素Ｄ（内标，纯度９９％，国家医药管理局福建微生物研究所提供）；乙腈、甲醇（ＨＰＬＣ级，ＢｕｒｄｉｃｋＪａｃｋｓｏｎＩｎｃ，ＵＳＡ）；超纯水（Ｍｉｌｌｉ—Ｑ超纯水系统产生，ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＩｎｃ，ＵＳＡ）；乙醚（上海试剂厂，重蒸后使用），其他试剂均为分析纯。

人体药动学及生物利用度试验１受试者２０名男性健康志愿者，年龄（２３．０±５１．２）ａ，体重（６７±７）ｋｇ，身高（１７３±７）ｃｍ。

经血、尿常规，肝、肾功能及心电图检查，各项检查指标均正常。

试验前２ｗｋ内未服用任何药物。

本研究得到复旦大学华山医院伦理委员会批准，受试者均自愿参加试验并于试验前由本人签署知情同意书。

２试验方案采用２阶段、双交叉试验设计。

２０名受试者被随机分为Ａ，Ｂ两组，每组１０名。

试验前１ｄ人住试验中心，禁食１０ｈ。

试验当日早晨空腹口服单剂量环孢素微乳剂或普通乳剂５００ｍｇ，温开水２００ｍＬ送服，服药后４ｈ进统一标准餐。

分别于服药前和服药后０．５，１．０，１．５，２．０，２．５，３．０，３．５，４．０，６．０，８．０，１２．０和２４．０ｈ取静脉血５ｍＬ，置肝素化试管中，一２０℃保存待测。

间隔１ｗｋ后交叉给药，重复试验。

试验期间禁用其他药物及含咖啡因饮料，禁止吸烟、饮酒。

血药浓度测定方法采用已验证的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法进行测定¨Ｊ，方法简述如下：色谱条件为ＨＰＬＣ分析柱（ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８，２５０ｍｍＸ４．６ｍｍ，５“ｍ）；流动相：乙腈：甲醇：水（７３：５：２２）；流速：１．５ｍＬ・ｍｉｎ～；柱温：６０℃，检测波长：２１０ｎｍ。

取１．０ｍＬ全血样品，加入内标液５０斗Ｌ、氟化钠５０ｍｇ和重蒸乙醚４ｍＬ，涡旋混合１．５ｍｉｎ，离心分离醚层并用氮气吹干，甲醇：２５ｍｍｏｌ・Ｌ“ＨＣｌ（１：１）２００斗Ｌ重组，用正己烷０．５ｍＬ洗涤，取水层１００汕进样。

方法的线性范围为５０—１２００斗ｇ・Ｌ～，平均回收率为１００．８％，批内和批间ＲＳＤ小于１０％。

数据分析１经典法ｃ一和￡。

；以实测值计算，ＡＵＣ。

～Ｍ按线性梯形法计算，ＡＵＣｏ。

用式（１）计算：ＡＵＣｏ～。

＝ＡＵＣｏ。

２４＋ｃ２４ｈ／Ａ（１）其中Ａ代表末端消除相中时间和浓度对数的线性回归的斜率。

２种制剂的ＡＵＣ之比为相对生物利用度。

药动学参数的计算应用二步法（ｔｗｏｓｔａｇｅｍｅｔｈｏｄ，ＴＳ）。

首先对每个个体进行拟合，求得个体药动学参数。

第二步将个体化参数进行统计分析，得到群体参数的均值及个体问变异。

本研究的计算采用ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ程序（Ｖｅｒｓｉｏｎ４．１，ＰｈａｒｓｉｇｈｔＣｏｒｐｏ—ｒａｔｉｏｎ，ＵＳＡ），权重系数采用ｃ≈心Ｊ。

２ＮＯＮＭＥＭ法２．１药动学模型根据上述经典法以及非线性混合效应模型中的目标函数最小原则进一步确定药动学模型［见：ＢＯＥＣＫＭＡＮＮＡＪ，ｅｔａ１．ＮＯＮＭＥＭＵｓ—ｅｒｓＧｕｉｄｅＶ．１９９９．５—１６．］。

参数估算时采用一级条件估算（ｆｉｒｓｔｏｒｄｅｒｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ，ＦＯＣＥ）和个体间和残差变异交互作用（ＩＮＴＥＲＡＣＴＩＯＮ）选项，以获得更为准确的计算结果∞Ｊ。