豆粕蛋白含量的检测方法
凯氏定氮法测定豆粕中蛋白质的不确定度评定
作者 简介 ：杨
玉 （ ７一 １ ５ ９
） 女， ， 福建人 ，质量工程师 ，研究方向 ：食品 、饲料检测。Ｅ ｍ ｉ １ ２ ２ １ ＠ ｑ ㈣ 。 — ａ ：４ １４ ２ ３ ｑ ． ｌ ｃ
农产 品加工 ・ 学刊
２１ ０ ２年第 ２期
（） 温 度 变 化 引入 的标 准 不 确 定度 。室 温 变 化 ２
（ ２ ）供应商给出纯度 Ｐａ ＝（０ ± ． ） Ｎ ＿ １０ ０ ５％，按 ０
，则 ： 的范围为 （ － ） ℃，液体的体积变化明显大于滴 矩 形分布 考虑 ， ＝ ２ Ｉ ０－ ３ ｕ Ｐａ０ ：００ ０５： ８ （ ￣０ ） ． ２ ９×１ －， ２ ０ 定管 的体积变化 ，因此 只需考虑液体 的体积变化 ， ０４ Ｖ ３ 水 的体积膨胀系数 为 ２１ ０ ，假设温度变化按均 ． ×１
度 ；称量 豆粕 样 品引人 的不确定 度 。
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３ 各标准不确定度分量的评定 ． ２
３２１ 测 量重 复性 引入 的标 准 不确 定度 ．．
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按 标 准 对 豆 粕样 品进 行 ８次 平行 测定 ，豆 粕 样 品中蛋 白质含 量 的测 定结 果见 表 ｌ 。
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您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】
您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】发酵豆粕中的小肽与抗原蛋白是衡量品质优劣的两项重要指标，长期以来国内的发酵豆粕产品主要由乳酸菌通过厌氧发酵生产，而出于便捷考虑，业内通常使用酸溶蛋白法测定小肽含量，使用ELISA法测定抗原蛋白含量，但随着发酵豆粕使用普遍性提高，并且芽孢杆菌通过有氧发酵生产的发酵豆粕在国内市场上渐露锋芒，这两种测定方法是否适用，是否能作为客观反映小肽和抗原蛋白真实含量的指标，引起了关注与讨论。
1 小肽-酸溶蛋白法①不同pH 发酵(或酶解)的豆粕在酸中的溶解度不同微生物发酵过程中对蛋白质的分解，实质上就是微生物产蛋白酶的作用。
但是，不同酸碱性的蛋白酶酶解豆粕所得的小肽在酸中的溶解度不同，其中酸性蛋白酶酶解小肽高达96%可以溶于三氯乙酸，而碱性蛋白酶酶解小肽不到 50%。
因此，酸溶蛋白更适合评估酸性发酵或酶解的豆粕产品，将低估希杰速益肽这类芽孢杆菌发酵的中偏碱性产品的小肽含量(刘慧珍，江南大学硕士论文，2007)。
速益肽 55%CP 产品酸溶蛋白相对低(6-10%)。
②小肽应有明确的分子量定义食品国家标准《大豆肽粉GBT 22492》2008 版将小肽的定义由③酸溶蛋白只体现了速益肽小肽含量的一小部分希杰研究所实验发现，同时测定的发酵豆粕样品整体蛋白分布(红色峰)和三氯乙酸溶解后上清液的蛋白分布结果(蓝色峰)。
三氯乙酸提取的分子量5kDa 以下蛋白质部分，而红色图谱和蓝色图谱之间存在一个灰色的面积区域是三氯乙酸没有办法提取出来的样品中的肽含量的部分，即三氯乙酸并不能完全溶解出样品中的所有的肽，只能溶解出其中的一小部分(如下图)。
2 抗原蛋白-ELISA 法和SDS 法①ELISA 法测定加工豆类产品的缺陷致敏性不确定：目前已有商品化大豆抗原蛋白的检测试剂有大豆球蛋白检测试剂盒和β-伴大豆球蛋白检测试剂盒，但是另两种大豆抗原蛋白 Gly m Bd 30K 和 Gly m Bd 28K 并没有商品化试剂盒。
发酵豆粕各项指标检测方法与实用实用标准
发酵豆粕各项指标检测方法与标准发酵工艺2010-12-31 15:16:17 阅读86 评论0 字号：大中小订阅1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。
2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。
3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。
4、可溶蛋白的测定方法5、小肽含量的测定水份的测定水份测定直接参见国标测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。
水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。
总有机酸检测试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂仪器:磁力搅拌器离心机方法：（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。
（终点到溶液呈现粉红）计算乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15gN(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；0.09008：乳酸的毫克当量。
0.1mol氢氧化钠的配制与标定1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。
用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
2、标定称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
饲料中粗蛋白的测定ppt课件
• 氮的蒸馏 采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
试验步骤
• 样品消化 • 样品粉碎后全部通过40目。称取试样 0.2 ～ 2.0g （含氮量 5 ～ 80mg），准确至0.0002g，放入消 化管中，加 10mL 浓硫酸摇匀，管口上放一只小 漏斗（在消化过程中起回流作用，以减少硫酸的 损失），放在电炉上消煮20min，当硫酸大量冒 烟、消化液呈酱油色时，将消化管取下稍冷却 （手摸不烫手），向管内加双氧水 10 ～ 15 滴， 加热消化。如此反复 2 ～ 3 次，直至管内溶液澄 清透明为止。取下消化管，冷却后注入30mL蒸馏 水备用。
滴定 空白测定 计算 （同国标法）
强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮， 使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式 释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行 的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标 定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
豆粕蛋白溶解度和尿酶值
大豆蛋白是家禽日粮中最为重要的，也是质量最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都接近理想平衡。
如同其它蛋白质饲料一样，豆粕质量受各种营养素含量的影响，如能量、蛋白质、纤维素和氨基酸等，例如普通豆粕与去皮豆粕间在以上指标方面就有很大的差别（见表1）。
去皮豆粕由于纤维素含量低而有较高的能量水平。
但是蛋白质水平高的豆粕不一定保证低纤维和高能量水平，例如某些未去皮中国豆粕的蛋白质含量可高达48%甚至50%，而仍然含有6%至7%的纤维素。
因此高蛋白水平豆粕的代谢能水平仍然可能因纤维素含量高而下降，尚未见到这些高蛋白质“高纤维素”豆粕的代谢能测定值。
但一般可以估计：在去皮豆粕纤维素正常含量3.5%以上时，每增加1%纤维素使每公斤猪饲料的代谢能下降32至42大卡，而每公斤禽饲料则下降将近60大卡。
另一方面，豆粕质量在很大程度上受加工方面问题的影响而使它的氨基酸含量和氨基酸消化率以致于能量受到影响。
本文主要讨论由加工不足或加热过度所引起的豆粕质量变异以及对生产性能的影响，同时介绍目前可行的鉴定豆粕质量的方法—尿酶活性（pH变化值）与0.2%氢氧化钾蛋白溶解度，并加以评估。
一、生大豆——抗胰蛋白酶与尿酶众所周知，豆粕必须经过适度热加工以破坏大豆中所含的数种抗营养物质。
其中对畜禽影响最大者为抗胰蛋白酶（Tripsin Inhibitor），有幸的是这些抗营养因子在加热后都会遭到破坏。
适度加热是豆粕加工的关键，因为加热不足或过度都会降低豆粕的营养价值。
抗胰蛋白酶是生大豆中的一种蛋白酶抑制物，它在消化道内能使胰蛋白酶和凝乳酶失活，从而降低蛋白质的消化率，并引起胰脏代偿性增大，由于胰酶富含硫氨基酸，因此，大量分泌消化酶可能加剧大豆蛋白含硫氨基酸的缺乏现象。
抗胰蛋白酶的测定方法很耗时也很昂贵，因此需要寻找一种简易而快速的测定方法。
生大豆中含不等量尿酶（Urease）。
尿酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似（图1），因此可用尿酶活性作为豆粕加工适宜度的间接估测指标。
豆粕质量测定实验报告
豆粕质量测定实验报告1. 引言豆粕是一种重要的饲料原料，其质量的好坏直接影响到畜禽的生长发育和产品质量。
为了保证豆粕质量的稳定性，进行豆粕质量测定实验是非常必要的。
本实验旨在通过一系列测定方法，对豆粕的营养成分、水分含量和重金属含量进行测定，以评估豆粕的质量。
2. 实验方法2.1 样品准备我们从市场上购买了一批无名豆粕样品作为实验材料。
样品经过干燥处理，并通过筛网过滤，保证样品的均匀性和质量。
2.2 营养成分测定采用酶解-比色法测定豆粕中的蛋白质含量。
具体步骤如下：1. 取一定质量的豆粕样品，精确称量，记录质量。
2. 根据样品质量计算酶解试剂（如氢氧化钠溶液）的用量。
3. 将样品与酶解试剂混合，进行酶解反应。
4. 利用比色法测定消耗的酶解试剂，利用标准曲线计算出样品中的蛋白质含量。
2.3 水分含量测定采用烘箱法测定豆粕中的水分含量。
具体步骤如下：1. 取一定质量的豆粕样品，精确称量，记录质量。
2. 将样品放入预热的烘箱中，在一定温度下进行烘干。
3. 定时取出样品，待冷却后精确称量，记录质量。
4. 根据质量的差异计算出样品中的水分含量。
2.4 重金属含量测定采用原子吸收光谱法测定豆粕中的重金属含量。
具体步骤如下：1. 取一定质量的豆粕样品，精确称量，记录质量。
2. 将样品溶解在适量的酸中，生成可以被原子吸收光谱仪测量的物质。
3. 使用原子吸收光谱仪进行测量，得到豆粕中每种重金属的含量。
3. 实验结果与讨论3.1 营养成分测定结果经过实验测定，豆粕样品中的蛋白质含量为XXg/100g。
与市场上标称的蛋白质含量进行比对，发现实测值与标称值相近，说明豆粕的蛋白质含量较为准确。
3.2 水分含量测定结果经过实验测定，豆粕样品中的水分含量为XX%。
与国家标准规定的水分含量范围进行比对，发现实测值在合理范围内，说明豆粕的水分含量符合标准要求。
3.3 重金属含量测定结果经过实验测定，豆粕样品中的铅、汞和镉含量分别为XXmg/kg、XXmg/kg和XXmg/kg。
豆粕蛋白质的质量测定方法非常重要_
高压蒸气处 雏鸡增重 饲料 KOH 蛋白质 尿素酶活性
理(分钟)
0 5 10 20 40 80
(克)
450a 445a 424a 393b 316c 219d
效率 溶解度(%)(pH 值的变化)
1.79c 1.87bc 1.83bc 1.89b 2.04b 2.55a
86.0 76.3 74.0 65.4 48.1 40.8
仅根据赖氨酸的消化 率来评 判豆 粕的质 量 , 就可 能会低估其中赖氨酸受 破坏的 程度 , 因为豆 粕加 热过 度后其中赖氨酸含量的分析值也降低了 。
豆粕的质量监测
表 4 简明 地显 示了 用 于评 价豆 粕 质量 的 四种 方 法 。 尿素酶试验根据 的是 , 豆粕中 残余 的尿素 酶从 尿 素中释放出的氨气量增 加导致 pH 值增 高 。 通过加 热 破坏尿素酶 , 与胰蛋白酶 抑制因 子和植 物血凝 素的 破 坏是相关 联的 。 一般 认 为 , pH 值的 最 佳增 高范 围 在 0.05 ～ 0.20 。 尿素酶试验的主要目的是测定豆粕 的加 热程度是否足以破坏大部分 抗营养因 子 。 Parsons 说 : “ 在笔者看来 , 尿素酶 水平 低于 0.05 仅 仅意味 着豆 粕 可能被加热过度了 , 这并 不意味 着豆粕 确实已 经被 加 热过度了” 。
0
122
2.5
6
124
2.4
12
152
1.4
15
153
0.1
18
155
0.0
21
156
0.0
商品豆粕
156
0.1
资料来源 :AndersonHafeman 等 , 1992。
氢氧化钾蛋 白质溶解度
豆粕的品质控制
豆粕的品质控制发表时间：2009-8-6 15:28:25访问次数：294豆粕作为目前最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都比较平衡，在饲料生产中应用最为广泛。
豆粕的色泽、形状、气味等感观指标和脲素酶、粗蛋白含量、水分等理化指标是衡量豆粕质量的重要参数，一般要求色泽为金黄色至浅褐色，质地要求颗粒大小一致、流动性好、不结块、不成饼、无微尘，气味为新鲜大豆粕固有的气味，无霉味、酸味、氨味或烧灼味，不含尿素、氨、农药、种子或霉变，容重为570g／l～640g／l。
豆粕质量一方面受上述各种营养素含量如能量、粗蛋白质、纤维素以及各种感官指标等的影响；另一方面受加工的影响。
加热不足，造成豆粕偏生，抗胰蛋白酶活性较强；加热过度，造成豆粕过熟。
无论哪种情况，都会影响氨基酸利用率和代谢能值，进而影响畜禽生产性能，降低饲料的转化效率。
豆粕的常规营养指标已经得到人们的重视，特别是蛋白含量。
这里着重介绍一下应该引起足够重视的几个影响豆粕质量的指标。
尿酶活性：判断豆粕加热不足的主要指标是尿酶活性，尿酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每千克豆粕分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
其原理是大豆中含有不等量的尿酶，尿酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而又遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为豆粕加热是否偏生的间接估测指标。
抗胰蛋白酶和尿酶活性不仅受加热温度的影响，还受到加热时间及水分含量的影响，水分含量越低，抗胰蛋白酶和尿酶活性的破坏程度越小。
实验室测定尿酶活性的方法较复杂，也可用酚红法快速而简单的估测尿酶活性。
一般来说，尿酶活性在0.05～0.4（有的油厂限定为0.05～0.5）之间表示豆粕加热适度，若大于0.4表示偏生（有的油厂限定为≤0.5）；尿酶活性没有负值，最低为0。
尿酶活性的测定方法是：在装样品的试管中加入已加磷酸盐缓冲液的尿素溶液，塞住管口并充分混合，然后放在30℃的恒温水浴中，每5分钟搅拌一次。
豆粕等级标准
豆粕等级标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：豆粕是生产饲料和食品加工的重要原料，被广泛应用于畜禽养殖和食品加工行业。
而豆粕的质量标准对于产品的质量和市场竞争力具有至关重要的影响。
制定和执行豆粕等级标准是非常重要的。
豆粕的等级标准主要包括质量指标和标准规定两部分。
质量指标是对豆粕的理化性质、营养成分及物理性状等进行规定，而标准规定则是对生产过程、贮存运输、包装标识等方面的要求进行规定。
这些标准的制定不仅有助于保障产品质量，也可以提高豆粕行业的生产水平和市场竞争力。
豆粕的等级标准一般会根据国家的相关法律法规和行业标准来制定。
在中国，豆粕的等级标准主要由农业部和国家标准化管理委员会进行制定和管理。
在国际上也有一些国际性的豆粕标准，比如美国农业部和美国豆粕协会制定的标准。
豆粕的等级标准主要包括以下几个方面的内容：一、理化性质：豆粕的理化性质是评价豆粕质量的重要指标，包括水分含量、粗蛋白质含量、粗脂肪含量、粗纤维含量、粗灰分含量、氨基氮含量等。
这些指标可以反映豆粕的营养成分含量和保质期等特性。
二、营养成分：豆粕作为饲料原料，其营养成分对于动物的生长发育和健康具有重要的影响。
营养成分主要包括粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、氨基氮等指标。
这些营养成分的含量需要符合国家和行业标准的要求，才能保证豆粕的质量。
三、物理性状：豆粕的颗粒大小、颜色、气味等物理性状也是评价豆粕质量的重要标准。
颗粒大小要均匀，颜色应该呈现暗黄色或淡黄色，气味应该清香无异味。
这些物理性状的好坏会直接影响豆粕的口感和食用安全。
四、标准规定：豆粕的生产过程、贮存运输、包装标识等方面的要求通常也被包括在等级标准中。
生产过程要符合卫生标准，贮存运输要注意避免受到污染，包装标识要清晰明了。
这些标准规定的制定和执行可以保障豆粕的品质和食品安全。
豆粕的等级标准对于产品的质量和市场竞争力具有非常重要的作用。
只有通过严格执行等级标准，才能保障豆粕的品质和安全，提高行业的生产水平和市场竞争力。
豆粕蛋白溶解度测定方法的研究_刘桂宾
. 37 .
ＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥ ＳＣＩＥＮＣＥ 检验检疫科学
美国大豆协会提供的方法，要求ＫＯＨ溶液的浓度 为０ ． ２ ％ ，相当于０ ． ０ ４ ２ 当量、ｐ Ｈ 值为１ ２ ． ５ 。以配制 １０００ｍＬ ０．２％ＫＯＨ溶液为例， 应称取ＫＯＨ２．３５６ｇ，但 市售的分析纯的ＫＯＨ一般纯度为≥８２％，如以８２％为 基准，则折算纯度后实际应该称取ＫＯＨ ２．８７３ｇ，故在 称量Ｋ Ｏ Ｈ 时应先对其纯度进行折算。
碱溶蛋白Ｐ１的平行试验允许误差参照粗蛋白的要 求（ＳＮ／Ｔ ０８００·３－１９９９）。
碱溶蛋白Ｐ 及粗蛋白Ｐ均取平行试验结果的算术 １
平均值作为结果，保留三位小数，最终蛋白溶解度Ｐｓ 的结果保留两位小数。 ３ 结果与讨论
在测定豆粕蛋白质溶解度的过程中，有一些因素 会对其测定结果产生较大影响，注意对这些关键点 加以控制，可获得较好的准确度和精密度。 ３．１ 制样粒度
ＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥ ＳＣＩＥＮＣＥ 检验检疫科学
Ｖｏｌ．１７ Ｎｏ．１－２ ２００７年第１－２期
豆粕蛋白溶解度测定方法的研究
刘桂宾 张 璐 李 元 郝永忱
（秦皇岛出入境检验检疫局，河北秦皇岛，０６６００２）
摘 要：［目的］摸索影响豆粕蛋白质溶解度测定中的关键因素及其控制方法，建立正确评价豆粕加工质量的测 定方法。［方法］参考美国大豆协会提供的蛋白质溶解度测定方法，测定蛋白质溶解度，同时测定尿酶活性。［结果］制 样粒度及其称量准确性、２％ＫＯＨ溶液浓度准确度及其放置时间、豆粕溶解时的振荡器转速、振荡时间、温度等都会 影响测定结果，１０次平行测定的标准偏差为０．０６５，相对标准偏差为０．１７％ 。［结论］该方法精密度好，准确度高，能满 足进出口检验的需要。
饲用豆粕国家标准
饲用豆粕国家标准1 范围本标准规格了饲料用大豆粕（带皮大豆粕和去皮大豆粕）的技术指标、质量分级、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
2.1 氢氧化钾蛋白质溶解度大豆粕样品在规定的条件下，可溶于0.2%氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量占样品中总的粗蛋白质含量的质量百分数。
3 要求3.1 感官性状本品呈浅黄褐色或浅黄色不规则的碎片状或粗粉状，色泽一致，无发酵、无霉变、结块、虫蛀及异味异臭。
3.2 夹杂物不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧剂、防霉剂、抗结块剂等添加剂时，要具体说明加入的品种和数量。
3.3技术指标及质量分级3.4 卫生标准应符合GB 13078中的有关规定。
4 实验方法4.1 感官性状和夹杂物的检验按GB/T 14698的规定进行。
4.2 水分的测定按GB/T 6435的规定进行。
4.3 粗蛋白质的测定按GB/T 6432的规定进行。
4.4 粗纤维的测定按GB/T 6434的规定进行。
4.5 粗灰分的测定按GB/T 6438的规定进行。
4.6 尿素酶活性的测定按GB/T 8622-1988的规定进行。
4.7 氢氧化钾蛋白质溶解度的测定4.7.1 方法原理氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映大豆粕产品加热过度的情况。
不同加热成都的大豆粕，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。
先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；再测定同一大豆粕样品中总的粗蛋白含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。
4.7.2 试剂除非另有说明，再分析中仅使用确认为分析纯的试剂，所用的水为按GB/T 6682中规定的三级水。
4.7.2.1 0.2%的氢氧化钾溶液：2.44g氢氧化钾溶解于水中，稀释并定容至1L。
4.7.3 仪器设备 4.7.3.1 实验室用样品粉碎机 4.7.3.2 样品筛：孔径0.25mm4.7.3.3 分析天平：感量0.0001g4.7.3.4 磁力搅拌器。
豆粕中粗蛋白含量测定的不确定度评定
豆粕中粗蛋白含量测定的不确定度评定张美玲【摘要】按照《饲料中粗蛋白测定方法》GB/T 6432—1994标准测定豆粕中粗蛋白的含量,通过计算测量过程中的系统因素和随机因素导致的不确定度,最终来评定豆粕中粗蛋白测定的不确定度.%The content of crude protein in soybean meal was determined according to Determination Method of Crude Protein in Forage GB/T 6432—1994, and the uncertainty caused by random factors and system factors in the process of measurement was calculated,and the uncer-tainty of crude protein in soybean meal was finally evaluated.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)026【总页数】4页(P109-112)【关键词】豆粕;粗蛋白;不确定度【作者】张美玲【作者单位】中国检验认证集团山东检测有限公司,山东青岛266032【正文语种】中文【中图分类】S816豆粕是食用油生产链下游产品，常被用于生产饲料，是一种营养价值全面的原料。
豆粕品质评价指标有很多，其中最重要的就是粗蛋白含量。
对豆粕中所含蛋白含量的检测结果进行不确定度评定，既可以满足实验室对检测结果进行不确定度评定[1]的能力要求，又可以在不确定度影响到对限度符合性判断时进行检测结果的不确定度判定。
尤其是当检测值处于标准的临界值时，计算不确定度一方面能检查检测工作是否存在差错，另一方面也能减轻检测人员和检测机构的风险，更利于检测结论的判定。
测定豆粕中的粗蛋白含量大多采用凯氏定氮法。
凯氏定氮法的原理[2]如下：使用强酸硫酸破坏有机物，加入催化剂，样品中的含氮物被转化为硫酸铵，使用强碱蒸馏使氨气逸出，硼酸来吸收氨气，吸收液被酸滴定，测出样品的含氮量，乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
豆粕的质量知识
豆粕质量知识Soybean Meal Quality前言大豆在中国、日本和印度尼西亚用于人类和动物食物已有数百年的历史了。
豆粕系指大豆采油过的残渣经过适度加热、干燥、粉碎。
大豆粕是鸡、猪、牛适口性良好的蛋白质源。
大豆粕的粗蛋白质含量约40-50%,其消化率高达75%~92%。
豆粕的价值主要取决于其粗蛋白含量。
豆粕的粗蛋白含量一般为40 -50% 这在所有的购买合同中都有说明还很重要的是豆粕的水分、粗纤维、灰分、粗脂肪等的含量。
尿素酶活性和蛋白质溶解度，销售商出售时标明的粗蛋白含量若与客户收货时的粗蛋白分析值不相符合，购销之间就会发生争议。
一批豆粕通常都经过不止一家实验室的分析这些实验室可能分别代表加工企业、调查公司、饲料厂等等，许多时候还在大学和官方实验室中进行分析。
对质量不均一的一批货中采集的样品进行分析时得出的关于这一批货的质量数据会出现误差。
这常被看作是买主分析结果和卖主分析结果不相符合的原因，不同的实验室，即使采用相同的方法进行分析，所得的结果也会有差异，产生实验室误差的常见原因包括：技术不良、没有测定和报告水分含量、缺乏合格的参照标准等等。
1、豆粕等级标准从加工工艺上来看分两种:一种是去除大豆的表皮物质之后的豆粕叫去皮豆粕。
另一种是没有去除大豆表皮物质的豆粕,叫不去皮豆粕或普通豆粕。
大豆中蛋白含量是固定的。
豆皮中部含有蛋白,所以,去掉豆皮以后,能够提高豆粕的蛋白含量。
没有去皮的豆粕,蛋白质含量有可能在44%以上,或可能在44%以下,但是不稳定,尿素酶也很不稳定。
分级一般蛋白含量44%以上的属一级豆粕;蛋白含量在42%~44%之间属于二级豆粕;蛋白含量一般都在46%以上属高蛋白豆粕。
2、豆粕的质量指标及影响因素2.1豆粕的外观质量及影响因素2.1.1粒度大豆粕粒度是指大豆粕中存在的结构尺寸不同的颗粒。
虽然国标中未对豆粕粒度作具体要求，但是豆粕作为一种商品其颗粒大小对其交易价格有一定的影响。
黑曲霉发酵豆粕对豆粕中酸溶蛋白含量影响的研究
黑曲霉发酵豆粕对豆粕中酸溶蛋白含量影响的研究朱平军;程茂基;江涛;邱良伟;关娇娇【摘要】试验对影响黑曲霉发酵豆粕中酸溶蛋白含量的发酵时间、发酵温度、接种量和料水比条件进行了单因素试验研究,并选择对试验结果影响大的因素水平进行了4因素3水平正交优化试验研究.试验结果表明,最优发酵条件为发酵时间72 h、温度28℃、接种量4％和料水比1:0.9.在该条件下进行发酵,黑曲霉发酵豆粕中的酸溶蛋白含量由发酵前的1.75％提高到13.62％.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2011(000)006【总页数】4页(P5-8)【关键词】黑曲霉;发酵;豆粕;酸溶蛋白【作者】朱平军;程茂基;江涛;邱良伟;关娇娇【作者单位】安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,合肥230036【正文语种】中文【中图分类】TS261.1+7;R379发酵豆粕是一种新型植物蛋白饲料原料，其以豆粕为主要原料，运用微生物发酵技术生产而成，与豆粕相比，发酵豆粕的抗营养因子水平大为降低，营养水平和使用价值得到提高，应用范围也更加广泛[1]。
在发酵豆粕生产中，常使用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌、黑曲霉和米曲霉菌等一种或数种微生物菌种进行发酵，其中黑曲霉因为其独特的性质而受到特别青睐。
黑曲霉具有产酶能力强、酶系丰富等特点，可以分泌植酸酶、蛋白酶、纤维素酶等多种消化酶，是经美国FDA批准允许应用在饲料中的益生菌之一[2-3]。
发酵豆粕质量检测的指标包括感官指标、常规指标（灰分、氨基酸）、抗营养因子去除程度和小分子蛋白的含量等。
本试验使用黑曲霉发酵豆粕，利用黑曲霉产生的蛋白酶等消化酶降解豆粕中的蛋白质，使豆粕大分子蛋白降解为小分子蛋白、肽类和氨基酸等。
为简单起见，本试验以黑曲霉发酵豆粕中酸溶蛋白含量作为试验测定指标。
豆粕掺假鉴别方法
豆粕掺假鉴别方法一、豆粕的掺假识别豆粕主要掺假有：玉米粉、玉米胚芽粕、豆饼碎识别方法如下：1、掺玉米粉的检查取碘、碘化钾1g溶于100ml水中，然后用吸管滴1滴水在截玻片上，用玻璃棒头沾取过20号筛的豆粕，放在截玻片上的水中展开，然后滴入1滴碘-碘化钾溶液，在显微镜下观察。
纯豆粕的标准样品，可清楚地看到大小不同的棕色颗粒，含玉米粉的载玻片上，含有似棉花状的蓝色颗粒，随玉米粉含量的增加，蓝色颗粒增加，棕色颗粒减少。
标准样品的制备：取通过20号筛的纯豆粕的、、、、，依次通过20号筛的玉米面、、、、各自混匀，五种标准样品分别含5%、4%、3%、2%、1%玉米粉的豆粕，按照上述步骤制成五个标准样片，以便半定量比较观察用。
2、掺豆饼碎的检查豆粕中掺豆饼碎也可借助于显微镜进行检查，因豆粕与豆饼碎加工工艺不同，镜下状态不一样，豆粕镜下形状不规则，一般硬而脆，子叶颗粒无光泽，不透明，奶油色或黄禢色，豆饼碎子叶因挤压成团，这种颗粒状团块质地粗糙，颜色外深内浅。
二者感观也可以大致区分，豆粕一般为碎片状，而豆饼成团块，颜色比豆粕深。
二、豆饼碎的掺假识别,豆饼碎掺假，目前仅限于玉米粉，具体检查方法可见豆粕中掺玉米粉的检查。
三、菜籽粕的掺假识别,菜籽粕掺假主要掺尽可能一些低廉的原料，而且较重，如泥土、砂石等。
具体检查方法如下：1、感官检查正常的菜籽粕为黄色或浅褐色，具有浓厚的油香味，这种油香味较特殊，其它原料不具备。
同时菜籽粕有一定的油光性，用手抓时，有疏松感觉。
而掺假菜籽粕油香味淡，颜色也暗淡，无油光性，用手抓时，感觉较沉。
2、盐酸检查正常的菜籽粕加入适量的10%的盐酸，没有气泡产生，而掺假的菜籽粕加入10%的盐酸，则有大量气泡产生。
3、粗蛋白质的检查正常的菜籽粕其粗蛋白含量一般都在36%以上，而掺假的菜籽其粗蛋白含量较低。
4、四氯化碳检查四氯化碳的比重为，菜籽比重四氯化碳小，所以菜籽可以顠浮在四氯化碳表面，其方法是：取一梨形分液漏斗或小烧杯，加入5-10g的菜籽粕，加入100ml四氯化碳的表面，用玻璃棒搅拌一下，静置10-20分钟，菜籽粕应飘浮在四氯化碳的表面，而矿砂、泥土等由于比重大，故下沉底部。
豆粕
取 被 检 大 豆 粕 5-10g 于 烧 杯 中 加 入 100ml 四氯化碳搅拌后放置 10-20min ，石粉和贝 壳粉则沉底，取沉淀 物于烧杯中，加入 10-20ml 5-10% 的 盐 酸，如有大量气泡产 生，说明掺有石粉或 贝壳粉。
豆粕鉴别掺假方法
1、水浸法：
取需检查的豆粕（饼）25克，放入盛有250毫 升水的玻璃杯中浸泡2-3小时，然后用木棒轻轻搅 拌可看见豆粕（碎饼）与泥沙分层，上层为饼粕， 下层为泥沙。
三、试剂： 1. 0.1mol/L NaoH
2. 0.05mol/L H2SO4
3. 尿素苯酚红溶液 溶解0.14g 苯酚红于7ml 0.1mol NaoH和35ml
蒸馏水中，溶解 21g尿素（分析纯）于300ml蒸馏水中。将两种
溶液混合搅匀备用。
四、操作步骤： 1.用小烧杯倒出适量尿素苯酚红溶液，滴加0.05mol H2SO4将 其调至琥珀色。 2.取一小勺粗细均匀的大豆饼（粕）原样，撒在培养皿里，加 入适量的苯酚红溶液， 轻轻的旋动以使皿内的样品能均匀浸
产46%蛋白豆粕。
二、豆粕简介
1.豆粕加工工艺
2.豆粕品质 3.营养特性 4.现用厂家 5.异常情况解析 6.豆粕分类
1.加工工艺
• 豆粕是油脂浸出生产后得到的副产物，主要用于饲
料和食品原料。它的质量取决于大豆的质量和豆粕
生产工艺。
• 按照提取的方法不同，可以分为一浸豆粕和二浸豆
粕二种。其中以浸提法提取豆油后的副产品为一浸 豆粕，而先以压榨取油，再经过浸提取油后所得的 副产品称为二浸豆粕。一浸豆粕的生产工艺较为先 进，蛋白质含量高，是中国国内目前现货市场上流
• 豆粕与大豆、豆油的比价关系
豆粕是大豆的副产品，每1吨大豆可以制出0.2吨的 豆油和0.8吨的豆粕，豆粕的价格与大豆的价格有密
豆粕粗蛋白控制方案
关于豆粕粗蛋白的检测内控方案针对公司现在的车间控制水平和产品质量状况，特制定本控制方由于豆粕粗蛋白的检测时间比较长，我们公司的粗蛋白含量检测频次只能达到一天三次，也就是以班为单位，每班检测一次，抽样量约为200吨。
假如某饲料厂一次性买断本班次所有豆粕，且以通样检测结果为标准，那么本批豆粕不会产生质量投诉。
但事实上没有任何一个饲料厂使用此操作模式，所有的饲料厂都是以车为单位分批进行检测，抽样基数约为30—40吨。
假设本批次豆粕全部发往饲料厂，那么装到后四小时的几车肯定都合格，但装到前四小时的几车蛋白含量肯定不足46%，后面会解释其中具体原因。
正规的国标检测基准线为硫酸铵回收率21.19±0.2%，由于硫酸铵只有分析纯试剂（纯度≥99%），且各化验室用的蒸馏水纯度、设备、检验方法等不一致，一般化验室的硫酸铵回收率只能达到21.05%左右，符合国标。
但这一国标要求并不适用于我公司的产品内控，下面解释其中原理：1、水分对蛋白结果的影响，这是最主要的原因。
由于受车间设备、工艺、操作工操作水平、大豆质量变化等多种因素的影响，豆粕水分会不断发生变化。
受豆粕水分的影响，豆粕蛋白也会随之变化，一般来讲，豆粕水分每上升或降低1%，豆粕蛋白会相应降低或升高0.5%。
例如：本批次豆粕平均水分为12.91%，蛋白质含量为46.01%，那么前四小时的平均蛋白为：46.01÷（100—12.91）×（100—13.41）=45.75%，而后四小时的平均蛋白为：46.01÷（100—12.91）×（100—12.41）=46.27%，同一班次内不同时间段的豆粕蛋白含量相差0.52%，而0:00和7:00的豆粕蛋白含量仅因水分造成的差值已达0.9%，这也就是为什么装到前四小时的几车豆粕蛋白含量会不足。
另外，车间大豆脱皮质量的稳定性也会直接影响到相应部分豆粕的蛋白含量高低。
2、残油对蛋白结果的影响。
豆粕的质量标准和判断方法
豆粕的质量标准和判断方法1 主题内容与适用范围本标准规定了食用大豆粕的术语、分类、技术要求、检验规则、检验方法、包装、运输和储存的要求。
本标准适用于商品食用大豆粕。
2 引用标准GB 5009.12 食品中铅的测定方法GB 5009.36 粮食卫生标准的分析方法GB 5490～5539 粮食、油料及植物油脂检验GB 8115 粮食包装麻袋GB 8611 油脂工业用大豆3 术语3.1 食用大豆粕大豆经浸出法（预榨浸出或直接浸出）制得的适合食品加工用的松散的富含蛋白质的物料。
3.1.1 高变性大豆粕（又名高温大豆粕）大豆粕经高温处理，蛋白质变性较大，水溶性蛋白质含量较低的食品用大豆粕。
主要用于酿造和蛋白制品等食品加工的原料。
3.1.2 低变性大豆粕（又名低温大豆粕）大豆粕经低温或闪蒸脱溶处理，蛋白质变性较小，水溶性蛋白质含量较高的食用大豆粕。
主要用于组织蛋白、浓缩蛋白、分离蛋白及蛋白制品的加工原料。
3.2 形状指一批大豆粕的颗粒大小，均匀度。
3.3 色泽指一批大豆粕的综合色泽。
3.4 气味指一批大豆粕的综合气味。
3.5 杂质指大豆粕中用眼能鉴别的大豆粕以外的物质。
3.6 水溶性蛋白质百分率（％）指在规定的测定条件下，溶解于水的蛋白质重量占试样重量的百分率。
3.7 氮溶解指数（NSI，％）指水溶性氮占总氮的百分率，或水溶性蛋白质占粗蛋白质的百分率。
3.8 含砂量百分率（％）指大豆粕内含有细砂重量占试样重量的百分率。
4 产品分类4.1 高变性大豆粕4.1.1 一级高变性大豆粕；4.1.2 二级高变性大豆粕。
4.2 低变性大豆粕4.2.1 一级低变性大豆粕；4.2.2 二级低变性大豆粕。
5 技术要求5.1 原料5.1.1 应符合GB 8611的规定。
5.1.2 不得含有蓖麻籽、野百合籽等有害杂草种籽。
5.1.3 不得有烟熏、腐败、霉变及不良气味。
5.1.4 不得有加工时无法除去的低劣物品。
5.2 外观质量见表1：表1项目指标形状松散的片状，粉状或颗粒状色泽高变性大豆粕：具有大豆粕固有的色泽低变性大豆粕：具有大豆粕固有的黄白色至黄色气味具有大豆粕固有的气味，无霉味 5.3 质量指标见表2：5.4 掺杂物不得掺入谷物粉等非豆粕物质。
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豆粕蛋白含量的检测方法
豆粕蛋白含量的检测方法以国标GB/T6432-94检测方法为基准，结合我们的实际情况特制定本方法。
1、检测方法：
①取样。
要求每小时钎取成品豆粕适量（约15袋，所有回掺的不合格样品不计入在内），混合均匀。
②分样。
将样品混合均匀后从中分取具有代表性的部分样品作检验用（以后可能引进标准的四分法分取样品）。
③粉碎。
将粉碎机内腔用毛刷清扫干净后粉碎样品，然后将粉碎后的所有样品置于样品盘中。
④称量。
称取约0.2～0.3克样品于消化管内，注意手上不要有汗渍，转移完样品后要检查称量纸上有无残留。
⑤消化。
在消化管内加6.4克混合催化剂，12ml浓硫酸，于420℃消化炉上消化2小时，然后取出放凉。
⑥蒸馏。
在250ml三角瓶内加入20ml硼酸（2%，M/V）作为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的三角瓶内，然后向消化管内加入浓碱溶液，至管内液体呈黑色时停止加碱并开始蒸馏。
当蒸馏量达到150ml时降下三角瓶并继续蒸馏，当蒸馏量达到170ml时用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入三角瓶内，结束蒸馏。
⑦滴定。
用已知浓度的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成浅红色时为终点。
⑧空白的测定。
称取蔗糖0.2～0.3克代替试样（也可以不加蔗糖），按照同样的操作方法进行检测，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml。
⑨计算结果。
⑩重复性：同一样品两次检测允许误差范围为≤0.5%。
2、注意事项：
①碱浓度配制比例：1000ml水+400gNaOH，浓度约为36%，与整个行业内所使用的碱浓度对应起来；
②稀HCl标定要求非常精确，标定盐酸用的无水碳酸钠必须烘干，标定完之后检测硫酸铵（须烘干）回收率，回收率在21.05%左右算合格。
然后校正盐酸浓度，使硫酸铵回收率在20.80±0.05%，以此盐酸浓度测定豆粕蛋白；
③做空白值加的硫酸的量（12ml）、混合催化剂的量(6.4克)、指示剂的量（可以加2～4滴，各化验室可自行决定，一般来讲滴数越多，颜色变化越明显，也更容易控制）、硼酸的量（20ml）、最后的蒸馏量(150ml+20ml)，就是我们检测蛋白的标准。
测蛋白时加的硫酸的量、催化剂的量、指示剂的量、硼酸的量、最后的蒸馏量必须和做空白时所加的量保持一致，这样空白值才有效；
④盛放盐酸的烧杯各班洗净烘干，盐酸每次现用现取，避免因烧杯内盐酸水分的挥发对结果造成影响。
假设烧杯内有50ml盐酸，8小时内挥发了1ml，对结果造成的影响将达到1个蛋白；
⑤消化炉使用单排的时候升温会特别慢且可能温度显示不准，使用时要求两排全开；
⑥蒸馏前，把消化管内圈溜一圈水，轻微振荡后开始蒸馏；
⑦蒸馏时注意三角瓶内壁是否有蒸汽，如果有蒸汽的话适当开大冷凝水；
⑨做蛋白的同时测一下粉碎后样品的水分，并在蛋白结果后注明；⑩滴定终点的判断：测蛋白的颜色、测硫酸铵回收率的颜色和测定空白的颜色必须一致；
⑾每次更换硼酸吸收液时需检测硫酸铵回收率，结果在20.80%左右算合格；。