细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
植物的细胞实验的注意事项
植物的细胞实验的注意事项在进行植物细胞实验时，有一些注意事项需要遵守。
这些注意事项涉及实验的操作步骤、实验环境、实验材料等方面，以下是一些常见的注意事项：1. 实验环境的准备：- 实验室应该保持清洁整洁，避免有杂物和污物影响实验结果。
- 实验室应该保持恒定的温度和湿度，以防止影响细胞的生长和发育。
2. 实验材料的准备：- 使用的培养基、试剂和材料应该保持干燥和清洁，以防止污染。
- 培养基和试剂应该按照要求配制和储存，避免使用过期或变质的试剂。
3. 植物细胞的取样：- 选择合适的植物部位进行取样，例如茎、叶或根。
- 取样时应该使用无菌器具，以避免外界微生物的污染。
- 取样时应该选择健康的植株，并尽量避免植株受损或感染病原体。
4. 细胞培养的操作：- 细胞的培养应该在无菌条件下进行，以避免细菌、真菌或其他微生物的污染。
- 培养器具和培养基应该经过高温高压灭菌处理，以确保无菌状态。
- 培养过程中应该定期观察细胞的生长和发育情况，及时调整培养条件。
5. 细胞处理和染色方法：- 对细胞进行染色时应该选择适当的染料和浓度，以获得清晰的显微图像。
- 处理细胞时应尽量避免过度操作，以免损伤细胞结构和功能。
6. 实验结果的记录和分析：- 记录实验数据时应准确详细，包括细胞数目、形态变化、染色结果等信息。
- 实验结果的分析应该结合相关的背景知识和参考文献，进行科学合理的解释和讨论。
7. 实验安全和伦理：- 在进行实验时应注意实验室安全，遵守相关的实验操作规程和个人防护措施。
- 对待植物进行实验时应尊重生命，并遵循合适的伦理原则。
总之，植物细胞实验需要严格控制实验条件和操作过程，以确保实验结果的可靠性和科学性。
同时，也需要尊重实验对象——植物的生命，遵循相关的伦理原则。
通过科学合理的操作和分析，可以更好地理解和研究植物细胞的结构和功能。
小鼠肾细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠肾细胞培养的方法。
2. 观察小鼠肾细胞的形态和生长特点。
3. 了解小鼠肾细胞培养过程中的注意事项。
二、实验材料1. 实验动物：8周龄健康雌性小鼠。
2. 实验试剂：不含Ca2+和Mg2+的1PBS、青霉素、链霉素、0.1%明胶、0.1%胰蛋白酶溶液、DMEM培养液、胎牛血清、成纤维细胞生长因子、庆大霉素、青霉素、链霉素、抗细胞角蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体、抗结蛋白抗体、抗-平滑肌肌动蛋白抗体。
3. 实验器材：眼科剪、眼科镊、无菌消毒手术器械、网筛、离心管、T25培养瓶、倒置显微镜、培养箱等。
三、实验方法1. 取材：将小鼠处死后，无菌条件下迅速取出肾脏，用生理盐水冲洗干净，剥离肾被膜。
2. 切取肾皮质：将皮质组织剪成2-3mm的细条。
3. 消化处理：将肾皮质组织在100目不锈钢网筛上轻轻研磨，并用生理盐水冲洗，收集滤液。
将滤液再用150目的网筛过滤，收集网筛上富含肾小管的间质碎片。
4. 培养细胞：将收集到的间质碎片加入含有0.1%胰蛋白酶溶液的培养皿中，在37℃、5%CO2的培养箱中消化5-10分钟。
待细胞变圆后，用吸管吹打细胞，使其悬浮。
5. 制备细胞悬液：将消化后的细胞悬液用无菌离心管离心，弃去上清液，加入适量的DMEM培养液重悬细胞。
6. 细胞接种：将细胞悬液接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养。
7. 细胞观察：在倒置显微镜下观察细胞的生长情况，并拍照记录。
四、实验结果1. 细胞形态：接种后，细胞逐渐贴壁生长，呈上皮细胞样、成纤维细胞样和淋巴母细胞样等多种形态。
2. 细胞生长特点：细胞生长迅速，2-3天内即可铺满培养瓶底部。
3. 细胞鉴定：通过细胞角蛋白、角蛋白、波形蛋白、结蛋白和-平滑肌肌动蛋白等抗体检测，确认细胞为小鼠肾细胞。
五、实验讨论1. 小鼠肾细胞培养的成功率为80%左右，说明实验方法可靠。
2. 在细胞培养过程中，要注意无菌操作，避免污染。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
贴壁细胞培养步骤及注意事项
贴壁细胞培养步骤一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。
液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装有10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。
吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.3天换一次培养基（具体看细胞生长状态及培养液情况）。
二、传代1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS4.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
5.当看到细胞开始脱离培养皿时倒掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
6.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
7.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
8.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
9.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个，继续培养。
10.若是只培养一皿，只需吹散后倒剩1/4左右，重新加入培养液继续培养。
三、冻存1.把原有培养基吸掉。
2.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
4.去掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
5.吹落后把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
6.加入1毫升冻存液悬浮细胞，装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。
7.4℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
配制溶液一、培养基配制（1）（DEME培养基）89%基础培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗（2）（1640培养基）89%基础1640培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗二、冻存液90%血清+10%DMSO；DMSO要慢慢滴加，边滴边摇三、消毒液75%的酒精注意事项（1）进入细胞间必须严格按照下列步骤操作①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项
原代培养原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）材料：动物组织块试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒原代消化培养法1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。
开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。
加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。
消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。
低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。
对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
原代组织块培养法1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
培养基配制的过程和注意事项
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备：首先，需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外，还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂：按照配方中的比例，准确地称取所需的试剂。
在称量过程中，应注意保持实验环境的清洁，并使用洁净的称量工具，以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂：将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中，可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后，应检查溶液的透明度和均匀性，确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值：根据具体的培养基配方，使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液，并经过搅拌均匀，逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中，应注意避免过度调节，以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒：将配制好的培养基加热至沸腾，保持沸腾状态持续5-10分钟，以达到消毒的目的。
在加热过程中，应注意避免溢出和烧焦，同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却：将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度，通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中，应避免引入环境中的微生物污染，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存：将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中，并密封保存。
在分装过程中，要注意避免试剂接触到外界空气，以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁，操作过程要注意无菌操作，以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中，应准确称取试剂的质量，并按照配方中的比例进行配比，以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时，应充分搅拌均匀，确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时，应注意控制加热时间和温度，以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中，要避免污染和细菌的侵入，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行，并尽快密封保存，避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
简述配制培养基的基本步骤及注意事项
简述配制培养基的基本步骤及注意事项以简述配制培养基的基本步骤及注意事项为标题，写一篇文章。
配制培养基是细胞生物学和微生物学研究中的重要步骤之一。
培养基是供给细胞或微生物生长和繁殖所需的营养物质的溶液，通过合适的配制可以提供细胞或微生物生长所需的营养物质、调节pH值和温度等环境因素，促进其生长和繁殖。
下面将简要介绍配制培养基的基本步骤及注意事项。
一、基本步骤：1. 确定培养基配方：根据研究目的和被培养的细胞或微生物的需求，选择合适的培养基配方。
常见的培养基包括无机盐、有机营养物、维生素和生长因子等。
根据具体需求，可以在基础培养基中添加不同的添加剂，如血清、抗生素等。
2. 计算配方中的成分：根据所选培养基配方，按比例计算各个成分的用量。
注意根据实验需求调整各个成分的浓度，确保培养基中的营养物质满足细胞或微生物的需求。
3. 配制溶液：将所需的固体成分称取并溶解于适量的溶剂中，通常是蒸馏水。
溶解固体成分时，可以先将其加热至溶解温度，然后搅拌均匀。
4. 调节pH值：使用酸或碱溶液调节培养基的pH值至所需范围。
pH值的调节对于细胞或微生物的生长和繁殖至关重要，一般培养基的pH值在7.0左右。
5. 滤过消毒：将配制好的培养基溶液通过0.22微米的滤器进行滤过消毒，以防止细菌和其他微生物的污染。
滤过消毒后的培养基应保存在无菌条件下，避免细菌再次污染。
二、注意事项：1. 严格按照配方计算成分的用量，避免过量或不足，以免影响细胞或微生物的生长和繁殖。
2. 使用高纯度的试剂和溶剂，以确保培养基的质量和纯度。
3. 注意培养基的pH值调节，过高或过低的pH值都会影响细胞或微生物的生长。
4. 注意培养基的温度调节，一般情况下，培养基的温度应与被培养的细胞或微生物的生长温度相匹配。
5. 避免细菌和其他微生物的污染，应在无菌条件下操作，使用无菌器材和耗材。
6. 培养基的保存应在低温和无菌条件下进行，以防止营养物质降解和细菌污染。
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。
（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。
(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。
(4)调节pH值至7.2~7.4。
(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。
此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。
(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。
（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。
配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。
3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。
干细胞流程及注意事项说明
干细胞流程及注意事项说明干细胞是一种具有自我更新和分化能力的细胞，具有广泛的应用前景。
在干细胞研究中，正确的操作流程和注意事项非常重要，下面将为您详细介绍干细胞流程及注意事项说明。
一、实验前准备1.1 实验室环境干细胞实验需要在严格的无菌条件下进行，因此实验室环境应该保持清洁、整洁、无尘，并且要定期消毒。
1.2 实验仪器干细胞实验所需的仪器设备包括显微镜、离心机、培养箱等。
这些设备应该经过严格的检测和保养，确保其正常运行。
1.3 培养基和试剂干细胞培养需要使用特殊的培养基和试剂，这些物品应该购买正规厂家生产的产品，并且要注意保存条件。
二、获取干细胞2.1 干细胞来源目前可以用于获取干细胞的方法有多种，包括体内分离、体外培养等。
其中较为常见的方法是从人类或动物组织中分离出干细胞。
2.2 干细胞分离干细胞分离需要使用特殊的试剂和设备，具体操作步骤如下：（1）准备组织样本，并进行消化处理。
（2）将消化后的组织样本过筛，去除不需要的组织碎片和异物。
（3）使用特定的抗体或其他方法对干细胞进行分离。
2.3 干细胞培养将分离出的干细胞放入培养基中进行培养。
在培养过程中应该注意以下事项：（1）保持无菌状态，避免污染。
（2）定期更换培养基，以保证营养物质的供应和废物的排出。
（3）控制培养温度、湿度和二氧化碳浓度等环境条件，以促进干细胞生长和分化。
三、干细胞鉴定为了确保分离出来的是真正的干细胞，需要进行鉴定。
常用的鉴定方法包括：3.1 免疫荧光染色法使用特异性抗体标记干细胞表面标志物，然后观察染色结果。
如果干细胞表面标志物呈阳性，说明分离出的是真正的干细胞。
3.2 流式细胞术利用流式细胞仪对干细胞进行鉴定。
流式细胞仪可以对单个细胞进行检测，并且可以同时检测多种标志物。
四、干细胞分化4.1 干细胞分化方法干细胞可以通过不同的方法进行分化，包括：（1）生长因子诱导法：通过添加特定的生长因子来促进干细胞向特定方向分化。
（2）遗传修饰法：通过基因工程技术改变干细胞内部基因表达，从而实现特定的分化方向。
细胞培养实验室操作准则2014.10版
细胞培养实验室操作准则任何首次准备开展细胞实验的人员必须首先认真阅读以下准则，然后在已经熟练掌握细胞培养操作技术人员的指导下开始进行细胞实验，并在以后的实验过程中严格遵守各项准则。
一、细胞实验准备1.进入细胞房前要换鞋，穿无菌服（干净实验工作服），戴手套，接触细胞前喷75%酒精消毒手套。
2.将所需实验用品：培养基（完全培养基、空白培养基）、胰酶（含ETTA）、枪头（1ml、200ul、10ul)、离心管，预先放置到超净工作台，打开紫外照射30min 后开始细胞实验。
3.观察细胞前，用75%酒精纱布擦拭显微镜镜头及台面，进行消毒后方可开始观察细胞。
4.观察细胞主要包括：细胞数量（汇合度）、形态、分布情况（是否均匀）、有无漂浮的死细胞和污染等，观察完及时放回培养箱。
（如图，汇合度约90%，分布均匀）5.每次开始细胞实验前，需关闭紫外照射，打开超净台风机及灯。
用含75%酒精的纱布擦拭超净工作台。
超净台内物品放置情况：左侧（各式枪头，及可常温放置的试剂如PBS等），右侧（5ml枪头及镊子），废弃瓶位于右上角，尽可能远离操作区域，正前方为枪和酒精灯，培养基及胰酶放置左侧便于取用。
6.超净台在使用前后，都需用含75%酒精的纱布擦拭台面至纱布上看不到明显脏物为止，每天操作后废液缸需清洗用紫外照射，此外，从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒。
7、每周四需更换培养箱中高压过的超纯水，每周五对超净台（包括风机）、细胞培养房卫生进行打扫，每月对培养箱进行消毒清洗，确保细胞不受污染。
8、检查培养箱的CO2含量是否正常，如出现异常及时联系细胞平台相关负责人。
9、5mL枪头清洗高压的流程:(1)用洗洁精将枪头超声一遍（2）更换干净的自来水超声清洗3遍（3）用超纯水超声清洗1遍（4）将枪头捞出后再用超纯水荡洗3遍（5）放入烘干箱烘干（6）装在铁盒中，注意枪头放置顺序一致，放入高压锅，选择橡胶类（7）高压后放入烘干箱烘干后方可拿入细胞房使用1ml、200ul、10ul装入枪盒后放入高压锅高压烘干后方可拿入细胞房使用二、细胞传代1.细胞传代前要观察细胞，细胞汇合度达到80%-90%时可以进行传代。
实验总结细胞培养方法
一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
超净台内准备一支15ml离心管备用。
3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。
7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
细胞培养操作及其注意事项
六、操作完处理
• 1.试剂瓶瓶口喷酒精，用封口膜封住后，拿回冰箱应该放置的位置。 • 2. 清理工作台面，并用酒精消毒。下拉门，开紫外照射一般30分钟。 • 3. 垃圾袋封口，拿出高压蒸气灭菌（如果有感染试剂）。 • 4. 关掉37℃水浴箱的电源，细胞培养箱CO2浓度恢复至5%后，关掉
次解冻。10%浓度配制冻存液。 • 3. 由于DMSO稀释时会放出大量热量，故不可将DMSO直接加入细胞液中，
必须使用前先行配制完成。 • 4. adherent tumor lines: 5-7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解
冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cells/ml。other suspensions: 510 x 106 cells/ml, human lymphocyte 须至少5 x 106cells/ml。 • 5. 回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1,000rpm），过高的转速， 将照成细胞死亡。
• 3. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如移液器和枪头盒等可以暂时 放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以酒精擦拭后才带 入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
• 4. 操作人员应注意自身的安全，须穿戴实验衣及手套Байду номын сангаас才进行实验。用酒精擦拭手套 后才可进行操作。
• 5. 实验服应该定期灭菌和更换。进出细胞间时，不要同时打开相邻两个房间的门。
二、贴壁细胞的换液及传代
• 1. 换液 • 当培养基中有较多漂浮的死细胞或者培养基颜色变黄，而细胞密度未
细胞培养操作步骤及注意事项
细胞培养操作步骤及注意事项细胞培养操作步骤1. 准备培养基和培养器具：选择适合细胞生长的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。
准备培养器具，如细胞培养瓶、组织培养皿、离心管等。
2. 培养器具的消毒：将培养器具放入70%的乙醇或漂白水中浸泡约15-30分钟，然后用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）清洗3次。
将培养器具在100摄氏度的烘箱中高温烘干或使用紫外线灯照射15-30分钟。
3. 细胞传代：将细胞从旧的培养瓶中移至新的培养瓶中，以防止细胞过度增殖和细胞衰老。
首先将培养瓶中的培养基抽吸掉，然后用PBS洗涤细胞2次，最后加入适量的胰酶消化细胞，使其与培养基充分接触，放置一段时间，观察细胞的离培情况，离心沉积细胞，弃去上清液，加入新的培养基。
4. 细胞培养条件控制：维持培养环境的适宜条件，包括温度、湿度、CO2浓度和培养基的pH值等。
通常细胞在37摄氏度、5%的CO2和95%湿度下生长。
定期检查培养器的培养基水平，保持培养基的适当量。
5. 细胞观察和记录：使用显微镜观察细胞的形态和数量，记录细胞培养的过程和实验结果。
注意控制细胞的密度，防止过度密集或过度稀疏。
6. 细胞分化和实验处理：根据需要，可以进行细胞的分化处理或实验处理，如加入药物、生化试剂等。
在处理时要注意药物的浓度、处理时间和处理温度等。
7. 细胞冻存：当需要长期保留细胞时，可以进行细胞冻存。
将细胞与冻存液混合，分装入冻存管中，置于液氮中冻存，以备将来使用。
细胞培养注意事项- 细胞培养实验应在无菌条件下进行，避免污染。
- 培养器具应事先消毒处理，防止细菌、真菌和病毒的污染。
- 培养基的配制要准确无误，严格按照操作手册或厂家提供的方法进行。
- 培养过程中要保持培养器的密闭性，以确保适宜的气体交换和温度控制。
MTT配制原理操作步骤结果分析注意事项
MTT配制原理操作步骤结果分析注意事项MTT（3-(4,5-二苯基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑）是一种常用的细胞增殖试验试剂，用于评估化合物对细胞生长和代谢的影响。
本文将详细介绍MTT配制、原理、操作步骤、结果分析以及注意事项。
一、MTT配制MTT的化学名称为3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，是一种黄色的晶体粉末。
配制MTT试剂的步骤如下：1.称取适量的MTT粉末，并通过过滤器将其溶解于生理盐水或无菌培养基中。
溶液应均匀搅拌，直至溶解完全。
2.过滤清洁，并将溶液分装至无菌试管中。
可以根据实验需要制备不同浓度的MTT溶液。
3.将试管密封，并在4°C保存。
二、MTT原理MTT试验是通过测定细胞内线粒体的还原能力来评估细胞代谢和活力。
MTT溶液可以被细胞内的还原酶（如线粒体呼吸链酶）还原为紫色的形式中间产物，称为甲基紫（formazan）。
甲基紫是水不溶性的，需要使用溶解剂（如二甲基亚砜）将其溶解后，通过分光光度计测量吸光度来反映细胞数量和代谢活力。
三、MTT操作步骤MTT实验的主要操作步骤如下：1.细胞培养：将需要进行实验的细胞培养至对数生长期，保证细胞状态良好。
2.细胞处理：将细胞按照需要的实验条件进行处理，例如不同浓度的化合物处理、不同时间的处理等。
3. MTT加入：将细胞处理完后，向培养基中加入适量的MTT溶液，使其终浓度为0.5mg/mL。
将培养皿放入细胞培养箱，继续培养一段时间（一般为3-4小时）。
4.MTT溶解：MTT溶液和培养基混合后形成甲基紫，需要加入适量的溶解剂（如二甲基亚砜）进行溶解，使甲基紫完全溶解。
5. 吸光度测定：使用分光光度计在570nm波长下测量甲基紫的吸光度。
吸光度值越高，表示细胞生长和代谢活力越强。
四、MTT结果分析MTT实验的结果分析主要根据细胞的吸光度值来评估细胞的代谢和增殖能力。
细胞培养注意事项
细胞培养注意事项（from Internet）1）无菌操作：a.实验进行前，无菌操作台一紫外灯照射30～60min灭菌，以70%酒精擦拭无菌操作台面，实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%酒精擦拭无菌操作台面。
b.实验用品以70%酒精擦拭后才带入无菌操作台内，实验操作应在台面中央无菌区域，勿在边缘非无菌区域操作。
各种操作动作要轻、准确，不能乱碰。
吸取两种以上的使用液时，要注意更换吸管。
c.小心去用无菌实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶身并握住瓶身，倾斜45O角取用，将瓶盖改口朝上放置桌面。
d.操作过程当中，应小心毒性物品，例如DMSO等，避免尖锐针头伤害等。
e.定期检测CO2钢瓶的压力，培养箱的CO2浓度、温度、水盘收否有污染（本实验室使用的为蓝盖瓶装无菌水，应每周更换。
f.定期打扫细胞房：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子，然后用3‰新洁尔灭or0.5%过氧乙酸擦拭g.CO2培养箱灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭or0.5%过氧乙酸，可以的话再用紫外灯照射2）实验用品（均为无菌）a.培养基&胰酶细胞培养基通常需添加10%血清，1%双抗（penicillin/streptomycin，P/S）。
血清中若出现凝絮物，普遍原因是血清中的脂蛋白变性及解冻后，血清中存在血纤维蛋白造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。
胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。
培养基使用前应从冰箱中取出预热。
b.（使用过的玻璃器皿要先泡入来苏尔/洗涤剂溶液中，刷洗干净，用清水洗净，水分稍凉干后再泡酸液）玻璃瓶用酸液浸泡12h后，用自来水冲洗15+次，最后用双蒸水过3+次，先烘干，再用，铝箔纸包覆瓶盖，高温高压蒸汽灭菌，放在烘箱中烘干，使用之前，在超净台上用紫外照射30min后，可使用。
细胞培养PBS配方
细胞培养PBS配方
所需试剂和设备:
-NaCl(氯化钠)
-KCl(氯化钾)
-Na2HPO4(磷酸氢二钠)
-KH2PO4(磷酸二氢钾)
-无菌水
-电子天平
-烧杯和量筒
-反应管和磨研器
步骤:
1.称取所需试剂。
根据下述配方，称取正确比例的NaCl、KCl、
Na2HPO4和KH2PO4、确保所有试剂都是无菌的，并在称取时保持清洁卫生。
2.备制1L的PBS溶液。
将称取的试剂添加到烧杯中，并用无菌水稀
释至1L。
3.搅拌混合。
使用一个电子磨研器或类似的设备，将溶液进行彻底的
混合以确保所有试剂充分溶解。
尽可能避免气泡的形成。
4.pH调节。
使用pH计来测定溶液的pH值。
根据需要，使用NaOH或HCl溶液调节pH值。
PBS的理想pH值为7.4左右。
5.灭菌。
将溶液装入无菌试管中，并将其密封。
以121°C的温度下，在高压蒸汽灭菌器中处理溶液。
处理时间为15-20分钟。
注意事项:
-在制备PBS时务必保持实验室的环境无菌，因为这种溶液广泛应用
于细菌和真菌的生长培养中。
-要使用新鲜的试剂来制备PBS，以避免试剂的老化和变质。
-处理溶液时要小心，避免对溶液的污染。
使用无菌操作来减少污染
的风险。
-在制备PBS溶液之前，请先确保相关设备（如烧杯、磨研器等）已
经过彻底清洁和消毒处理。
细胞培养-Protocol
细胞培养是一项常用的生物技术，其原理是基于细胞在适当的培养条件下能够维持存活和增殖的能力。
通过细胞培养，可以获得大量的细胞样本，用于研究、药物筛选、疾病治疗等应用。
以下是细胞培养的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、原理细胞培养的基本原理是模拟细胞在生物体内的生长环境，提供细胞生存和增殖所需的基本条件。
这些条件包括适当的温度、湿度、营养物质（如氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等）和气体环境（如氧气、二氧化碳等）。
通过提供这些适宜的条件，细胞可以在体外环境中维持生存和增殖。
细胞培养中涉及的关键生物学过程包括细胞的贴壁、增殖和传代。
细胞的贴壁是指细胞在培养瓶内附着于瓶壁上的过程，这通常发生在细胞悬液加入培养液之后。
细胞贴壁后，会开始进行有丝分裂，进行增殖生长。
当细胞数量增加到一定程度时，需要将培养瓶中的细胞传代到新的培养瓶中，以维持细胞的适宜生长密度。
二、所需试剂和耗材细胞培养所需的主要试剂和耗材包括：1.培养基：为细胞提供基本的营养物质，如胎牛血清、氨基酸、葡萄糖等。
2.添加剂：包括抗生素、抗真菌药物等，用于防止培养过程中的污染。
3.培养瓶：用于细胞的培养，有不同的规格和形状。
4.移液器：用于吸取和转移细胞悬液和培养液。
5.离心管：用于离心收集细胞。
6.过滤器：用于过滤培养液中的杂质和颗粒。
7.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
8.无菌操作台：用于进行无菌操作，防止污染。
三、实验仪器细胞培养常用的实验仪器包括：1.细胞计数器：用于细胞计数和细胞密度测量。
2.显微镜：观察细胞的生长情况和形态变化。
3.CO2培养箱：为细胞提供适宜的生长温度和气体环境。
4.高压灭菌器：用于消毒处理实验器材和试剂。
5.超净工作台：用于进行无菌操作。
6.分光光度计：用于测量细胞生长的生化指标，如蛋白质含量等。
四、准备工作在进行细胞培养前，需要进行以下准备工作：1.选择适当的细胞：根据实验需求选择适合的细胞，了解其特性、来源和培养条件。
细胞培养注意事项(入门级)
细胞培养注意事项（入门级）总的原则：无菌操作、保证细胞培养环境的稳定性按时间顺序整理1、细胞房和生物安全柜（或超净工作台）先开紫外照射30min。
作用：对环境灭菌（空气）。
（备注：如果着急，至少也要开15分钟）在做实验之前考虑好需要哪些物品。
开始照射之前，将所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超净工作台）里面。
常用移液枪或电动移液器等，需要在工作台上放置一套专用设备。
细胞培养箱一般都已经调整好。
定期留意一下二氧化碳是否足够。
不够及时更换。
2、显微镜需要定期消毒酒精擦拭。
注意：显微镜一般都放在细胞房。
3、进入实验之前，首先给自己带上拖鞋、头套，口罩，实验服，手套（手套带双层）。
注意：手套要将袖口套进去。
实验服、拖鞋最好是细胞房专用。
4、开始操作之前先观察细胞。
首先观察细胞培养液的颜色。
现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂（绝大部分是酚红）。
细胞在培养生长过程中，不断在培养液上清中累积酸性物质，时间长了，培养液变为黄色（同时培养液中营养物质耗尽）。
其次镜下观察细胞的生长状态是否良好，是否需要传代。
如果生长状态不好，需要对培养液进行调整（一般是加大血清浓度）。
过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落，则进行传代。
如果长势良好，且细胞培养液颜色未发生变化，可以酌情进行1/2、1/3、1/4换液，也可以全换液。
总之，视细胞生长情况而定。
5、细胞培养预准备：首先是准备各种溶液。
第一是配制溶液过程中要用到的水。
水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。
去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。
或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。
第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。
可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。
现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。
如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。
可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。
简述配制培养基的基本步骤及注意事项
简述配制培养基的基本步骤及注意事项配制培养基是在实验室中进行细胞培养和微生物培养的重要步骤。
正确的配制培养基对于细胞和微生物的生长和繁殖至关重要。
下面将简述配制培养基的基本步骤及注意事项。
一、准备培养基所需的原料和试剂配制培养基所需的原料和试剂包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、盐酸、硝酸钠等。
在备用的容器中准备好这些原料和试剂，确保其纯度和质量。
二、称量原料和试剂按照所需的培养基配方，准确称量所需的原料和试剂。
注意要使用准确的称量工具，并遵循准确的称量方法，以确保配制的培养基的准确性和一致性。
三、溶解原料和试剂将称量好的原料和试剂逐一加入适量的蒸馏水中，并充分搅拌溶解。
溶解过程中要注意控制溶解温度和时间，避免结晶或沉淀的产生。
四、调节pH值根据培养基配方的要求，使用盐酸或硝酸钠等酸碱溶液逐渐调节培养基的pH值。
调节过程中要注意使用准确的pH计，并逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值过大或过小。
五、加入其他添加物根据具体需要，可以添加抗生素、染料或其他添加物来增强培养基的特定功能。
添加时要注意添加的量不能过多，以避免对细胞或微生物的生长产生不良影响。
六、灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死其中可能存在的细菌、真菌或其他微生物。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌和过滤灭菌。
要选择适合的灭菌方法，并严格按照操作规程进行灭菌处理。
七、保存和使用灭菌后的培养基应尽快冷却并储存在无菌条件下。
使用时要注意避免污染，使用无菌的培养皿或试管，并采取无菌操作，以确保培养基的纯净度。
在配制培养基的过程中，我们需要注意以下几点：1. 严格按照培养基配方的要求进行操作，避免原料和试剂的误用或误量。
2. 使用纯净的蒸馏水和高质量的原料和试剂，以确保培养基的质量和纯度。
3. 在配制过程中要注意溶解的充分和均匀，避免结晶或沉淀的产生。
4. 调节pH值时要小心操作，逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值的剧烈变化。
5. 添加其他添加物时要谨慎，避免添加过多或添加不当。
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细胞培养过程中的注意事项及试剂配制细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum 和培养用液）。
二.无菌操作 无菌室的灭菌： 1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消： (1)新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g ：浓硫酸200ml ：蒸馏水1000ml ）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。
7.高压消毒后烘干(2)旧的玻璃器皿的洗消： 1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3次。
3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。
4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。
（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上） 5.烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。
金属器械洗消： 金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。
放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。
橡胶和塑料： 橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸馏水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：1 . 针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH 泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上(凹向上)，然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。
注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。
2. 胶塞烘干后用2％氢氧化钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟），自来水洗净，烘干。
然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。
最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。
3. 胶帽，离心管帽烘干后只能在2％氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。
然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。
最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。
4. 胶头可用75％酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培养瓶，培养板，冻存管：6.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70％酒精浸泡消毒。
塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在紫外线下消毒。
也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2—3周时间洗除残留的氧化乙烯。
用20000—100000rad的r射线消毒塑料制品效果最好。
为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。
其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。
密写墨水的配制：氯化钻(CoC12·6H2O)2g，30％盐酸10ml，蒸馏水88ml。
注意事项： 1.严格执行高压锅的操作规程：高压消毒时，先检查锅内是否有蒸馏水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压消毒效果。
检查安全阀是否通畅，以防高压时爆炸。
2.安装滤膜时注意光面朝上：注意滤膜光滑一面是正面，要朝上，否则起不到过滤的作用。
3.注意人体的防护和器皿的完全浸泡：A.泡酸时要戴耐酸手套，防止酸液溅起伤害人体。
B.从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面，会腐蚀地面。
C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有气泡，以防止泡酸不彻底。
四.细胞培养用液的配制与消毒器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。
具体步骤：(1)水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.(2)PBS 的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)： 1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
(3) 胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2 、Mg2 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
(4)青、链霉素溶液的配制于消毒 1. 所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
2.具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
1单位＝1微克？(5).RPMI1640的制备与消毒： 1.溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml,使青链霉素的浓度最终各为100单位/ml。
然后用一个当量的盐酸和NaOH调PH到7.2左右。
最后定容至1000ml，摇匀。
2.安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。
然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。
3.抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。
通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
4.分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。
5.使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
(6)血清的灭活：细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭火30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。
(7)HEPES溶液：HEPES 的化学全称位羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid）。
对细胞无毒性作用。
它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。
使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
1mol/L HEPE缓冲液配制方法如下：准确称取HEPTS 238.3g，加入新鲜三蒸水定容至1L。
过滤除菌，分装后4℃保存。
注意：因为现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20m mol/L。
如：称取4.766克HEPES 溶于20ml三蒸水中，过滤除菌后可完全（20ml）加入1L培养液中，或者每100ml培养液中加入2ml即可。
(8)谷氨酰胺：合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。
在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。
由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。