磷钼蓝分光光度法测量海水中活性磷酸盐
磷钼蓝分光光度法测定水中磷酸盐的不确定度评定
本文依据《 测量不确定评定与表示》 及《 测 量不确定度评定与表示指南》 ， Ｊ对磷钼蓝分光光 度 法测 定水 中磷 酸 盐 过 程 中产 生 的不 确 定 度 进 行
稿 件 修 回 日期 ：０ ８０ －９ ２０ －９２
作者简介 ： 黄锋 （９ ９ ） 男 ， １７ 一 ， 湖南澧县人 ， 士 ， 硕 主要从 事卫生理化检验研究及质量管理工作 。
１ ３ １ 测 定 方法 ．．
理性提供科学依据 。
吸取 水样 ５ ． ０ ０ｍＬ于 比色 管 中 ， 人 ４ ０ｍ 加 ． Ｌ
１ 实验 部分
１ １ 实 验原 理 ．
钼 酸 铵 一硫 酸 溶 液 摇 匀 ， 人 ２滴 氯 化 亚 锡 溶 液 加
摇 匀 ，０ｍ ｎ后 ， ６ ０ｎ 波 长 ， １ａ 比色 皿 ， １ ｉ 于 ５ ｍ 用 ｍ 以纯水 作参 比 ， 定 吸光度 值 。 测
ｗ ｔ ａ ｃｅ ｕ ｌ ｏ０ ０ ４ ／Ｌ ａ ｄｔｅｃ ｎｒｌ ｎ ｔｅｓ ｎ ａｄ ｃ ｒｅａ ｄｍｅｈ ｄｅｒｒ ｈ ｕｄｂ ｔ ｎ ｔｅ ｅ ｒ ｈ ａ ｒｗ ｓＵ ｑ ａ ｔ ． ３ ６ｍｇ ， ｎ ｈ ｏ ｔ ｔ ｄ ｒ ｕｖ ｎ ｔｏ ｒ ｏ ｌ ｅｓ ｅ ｇ ｎ ｄｆ ｅ ｅ ｏｏ ｈ ａ ｏｓ ｒ ｈ ｏｔ
分 析 ， 出影 响不 确定 度 的因 素 ， 不确 定 度 进 行 找 对 评估 Ｊ为实 验 室 质 量 控 制 及 检 测 结 果 报 告 的 合 ，
磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷精选文档
磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷1 适用范围和应用领域本法引自海洋监测规范，适用于海水中活性磷酸盐的测定。
水样经 μm 滤膜过滤后贮于聚乙烯瓶中。
若样品采集后不能立即分析，则应快速冷冻至-20℃保存，样品熔化后立即分析。
2 方法原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm 波长测定吸光值。
3 试剂及其配制除非另作说明，所用试剂均为分析纯，水为二次水或等效纯水。
硫酸溶液：c (H 2SO 4)= mol/L在搅拌下将300 mL 硫酸(H 2SO 4，ρ=1.84 g/mL)缓缓加到600 mL 水中。
3.2 酒石酸锑钾-钼酸铵混合溶液钼酸铵溶液：溶解28 g 钼酸铵〔(NH 4)6Mo 7O 24·4H 2O 〕于200 mL 水中。
溶液变混浊时，应重配。
酒石酸锑钾溶液：溶解6 g 酒石酸锑钾(C 4H 4KO 7Sb·21H 2O)于200 mL 水中 ，贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
混合溶液:搅拌下将45 mL 钼酸铵溶液加到200 mL 硫酸溶液中，加入5 mL 酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
抗坏血酸溶液溶解20 g 抗坏血酸(C 6H 8O 6)于200 mL 水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
磷酸盐标准贮备溶液：ρp = mg/mL称取1.318 g 磷酸二氢钾(KH 2PO 4)，优级纯，在110～115℃烘1～2 h)溶于10 mL 硫酸溶液及少量水中，全量转入1 000 mL 量瓶，加水至标线，混匀，加1 mL 三氯甲烷(CHCl 3)。
此溶液 mL 含 mg 磷。
置于阴凉处，可以稳定半年。
无机磷的测定
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫做“钼蓝
”的物质（磷钼黄被还原为磷钼蓝）
(NH4)3[PMo12O40 ]
H3PO4•2Mo2O5 H3PO4•10MoO3•2Mo2O5
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分析步骤
■ 绘制标准曲线 按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml,
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。
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谢谢观看
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-----精含磷洗衣粉、洗涤剂） 食物废渣 人体排泄
■ 工厂和畜牧业废水 化工行业（造纸业、磷肥工业） 生化制药（生物制药企业） 金属表面处理 食品工业 ……
■ 降雪降雨
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影响
■ 水体的富营养化 缓慢流动的湖泊、水库、内海等水域的生物营养成分（如 氮、磷等），因长期不断补给而过多积累，导致水草、藻 类等大量繁殖，引起水质恶化、鱼群死亡的现象。
所需试剂
■ 硫酸溶液 ■ 钼酸铵溶液 ■ 酒石酸锑钾溶液 ■ 混合溶液 ■ 抗坏血酸溶液 ■ 硫酸盐标准储备溶液 ■ 磷酸盐标准使用溶液
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无机磷的测定复习课程
■ 水样测定 按以下步骤测定样品： ① 量取50 ml经0.45 μm微孔滤膜过滤的水样至带刻度具
塞比色管中，按上一步骤②测定吸光值Aw。 ②同时量取50 ml水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
■ 记录与计算 据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)，
或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
由于观察到磷为玻璃所吸收，长期贮存不应采用玻璃瓶。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
磷钼蓝分光光度法
■ 适用范围和应用领域 □ 本法适用于海水中活性磷酸盐的测定 □ 本方法为仲裁方法
■ 方法原理 在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，
■ 磷含量增加，导致红色浮游生物爆发性繁殖而引发的 近海海水出现的“赤潮”和城市水系（湖泊、水库）中出 现水生植物疯长的“水华”现象。
采样和样品贮存
■ 含磷酸盐的水样，在贮存时由于生物、酶和吸附作用， 使磷酸盐的浓度在采样后1小时内就会发生变化。所以样品 采集后应尽快分析，最好在半小时之内进行，不要超过两小 时。若不能立即分析，采取措施固定。
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
5磷酸盐的测定
海水中磷酸盐的测定一、实验目的掌握抗坏血酸还原磷钼蓝法测定海水中活性磷酸盐的基本原理，熟悉样品的采集和保存，测定的操作过程和注意事项，如试剂的配制，分光光度计或营养盐自动分析仪的使用等。
二、方法原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄络合物，在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄络合物被抗坏血酸还原为磷钼蓝络合物，于882nm波长处进行分光光度测定。
三、试剂及其配制1. 磷酸盐标准液（1）磷酸盐标准贮备溶液：c（PO43--P）=10000 μmol/L称取1.3609g磷酸二氢钾（KH2PO4，优级纯，在100-115℃烘2h，置于干燥器中冷却至室温），用少量水溶解后，全量转移至1000ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。
低温冷藏，有效期六个月。
（2）磷酸盐标准使用溶液：c（PO43--P）=100 μmol/L移取1ml磷酸标准贮备溶液于100ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀，贮存于棕色玻璃瓶中，有效期1天。
2. 硫酸溶液：体积分数为17%在水浴冷却和不断搅拌下，将60ml硫酸（H2SO4, ρ=1.84g/ml）缓慢加入300ml 水中，贮存于玻璃中3. 钼酸铵溶液：ρ=30.0g/L称取15.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶于水中并稀释至500ml，贮于聚乙烯瓶中，避光保存。
4. 抗坏血酸溶液：ρ=54.0g/L称取5.40g抗坏血酸（C6H8O6）溶于水中并稀释至100ml。
此液贮于聚乙烯瓶中，避免阳光直射。
有效期为一星期，在5-6℃下低温保存，可稳定一个月。
5. 酒石酸锑钾溶液：ρ=1.4g/L称取1.4g酒石酸锑钾（KSbO·C4H4O6·1/2H2O）溶于水中并稀释至1000ml，贮于聚乙烯瓶中，有效期为六个月。
6. 硫酸-钼酸铵-酒石锑钾混合溶液依次量取100ml硫酸溶液，40ml钼酸铵溶液，20ml酒石酸锑钾溶液，混合均匀。
临用时配制。
实验3两种方法测定海水中活性磷酸盐(精)
一般情况下，活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)
总磷(TP)
颗粒态总磷(PP) 溶解态总磷(TDP)
溶解有机磷 (DOP)
溶解无机磷 (DIP)
方法1：目测法测定磷酸盐的浓度
测定原理：
当加入(硫酸一钼酸铵一抗坏血酸一酒石酸氧 锑钾)混合试剂于水样后，水样中的活性磷酸 盐与钼酸铵形成磷钼黄，在酒石酸氧锑钾存 在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼蓝，根 据颜色的深浅判断磷酸盐的浓度，颜色越深， 磷酸盐浓度越高，颜色越浅，磷酸盐浓度越 低。
若磷较多，可直接测定磷钼黄，但是在 磷较少的情况下，一般都用更灵敏的钼 蓝法。
原理中的反应式
在酒石酸氧锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还 原为磷钼蓝
即在酒石酸氧锑钾存在下， 加入抗坏血酸，使磷钼 酸中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫 做“钼蓝”的物质(磷钼黄被还原为磷钼蓝)
(NH4 )3[PMo12O40 ]
标准溶液配置：容量瓶 玻璃棒
实验试剂
硫酸溶液 钼酸铵溶液
混合试剂
抗坏血酸溶液 石酸氧锑钾溶液 磷标准溶液的作用
水样测定
1）用具塞量筒量取两份50毫升水样于50毫升比色 管中，
2）加入5毫升混合试剂，混匀，
3）10分钟后在720毫微米处用5厘米比色皿对照 蒸馏水测量吸光值A，
4)所获得的数据，对照教师提供的工作曲线，查 出所对应的浓度。记录所获得的结果。不同于方 法1。
722分光光度计(带比色皿)的使用
控制面板
数据的记录及结果的计算
1 目测法： 2分光光度计方法法：
测定步骤
（1）用具塞量筒量取50毫升水样，于50毫升比色 管中，(每一水样取两份)
流动注射测定海水磷酸盐含量的效果分析
流动注射测定海水磷酸盐含量的效果分析摘要：当前我国近海海水普遍呈现富营养化状态，主要表现为磷酸盐含量多。
虽然海水中的游离磷和总磷浓度较低，毒性作用不是很明显，但潜在的毒性已经引起人们的关注。
因此，有必要对海水磷酸盐含量进行测定，并且提出相关的处理方法。
本文为此具体分析了流动注射测定海水磷酸盐含量的效果，认为其测定准确度高，快速简便，为其它的彻底去除活性磷酸盐方法提供经济方便的前处理技术。
关键词：海水；磷酸盐；流动注射测定；含量随着社会的发展，我国沿海地区的开发建设规模不断扩大，其环境危害也逐渐引起人们的关注。
当前影响近岸海域水质的主要污染因子依然是无机氮和活性磷酸盐，比如2013年渤海年严重污染海域面积较2008年增加了近1000平方公里、中度污染海域面积增加了2300多平方公里，海水中主要污染物无机氮、活性磷酸盐的含量居高不下【1-2-3】。
海水磷酸盐的准确测定是其应用的基础，由于海水样品体积较大，组分更加复杂，海水磷酸盐测定和地质样品十分不同【4】。
本文为此具体探讨了流动注射测定海水磷酸盐含量的效果，现报告如下。
1 实验方法1.1 测定原理本文采用流动注射测定，使用磷钼蓝分光光度法，在强酸性及还原剂存在下，磷酸根与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再被还原成蓝色的钼蓝，其蓝色的深浅也样品中含磷量成正比。
1.2 测定步骤标准曲线的绘制取25mL比色管，分别加入O.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00mL磷酸盐标准溶液，稀释到刻度线。
各加入1.0mL抗坏血酸溶液，混匀，30秒后加入2.0mL酸铵溶液，混匀。
放置显色15min。
选择1Omm比色皿在690ml 处，用0浓度溶液做参比，测定A。
然后各溶液测得的A均减去0浓度溶液A，得到校正吸光度。
用校正吸光度对P-含量（mg）做图。
重心法获得换算公式，或者经线性分析得校正曲线方程。
1.3 样品测定在完全相同的条件下，取过滤所得澄清透明溶液，视待测溶液P浓度的不同决定稀释倍数，测定样品的A，根据工作曲线或者换算公式或者校正曲线方程得到样品P浓度。
化验室磷钼蓝分光光度法测定水质总磷酸盐操作规程
化验室磷钼蓝分光光度法测定水质总磷酸盐操作规程一、实验目的通过磷钼蓝分光光度法测定水质中的总磷酸盐含量。
二、实验器材和试剂1.分光光度计2.恒温水浴器3.量筒、比色皿、试管等4.水质样品5.磷钼酸铵溶液：5%(w/v)的磷钼酸铵固体在85%(v/v)的硫酸中溶解制备而成。
三、实验步骤1.取适量的水质样品，加入一个无菌的量筒中，将样品液体转移到一个试管中。
2.加入适量的磷钼酸铵溶液，充分混合，并封闭试管。
3.将试管放入恒温水浴器中，在95-100℃条件下加热30分钟。
4.从恒温水浴器中取出试管，放置冷却至室温。
5. 使用分光光度计设置波长为 700nm 进行校准。
6.使用比色皿盛放一个对照样品，加入对照样品中的磷酸盐溶液和硫酸。
7.使用比色皿盛放相同体积的试样溶液，加入磷酸盐溶液和硫酸。
8.将比色皿放入分光光度计中测量吸光度，并记录结果。
9.根据吸光度计记录的数据，通过标准曲线计算样品中的总磷酸盐含量。
四、注意事项1.在加入磷钼酸铵溶液时，应避免溅入眼睛和皮肤中。
2.加热试管时应避免磷酸盐溶液的外溢。
3.使用分光光度计进行测量时，应确保仪器的准确性和精度进行校准。
4.在使用比色皿盛放样品溶液时，应保持其清洁和干燥，以免影响测量结果。
五、实验结果处理1.根据标准曲线计算样品中的总磷酸盐含量。
2. 结果以 mg/L 表示。
六、实验安全注意事项1.在操作过程中应注意防止试剂和样品的污染。
2.操作过程中应遵守实验室的安全操作规程，佩戴实验室安全装备。
七、实验设备和试剂清洗1.各实验器材彻底清洗干净，并用纯净水漂洗数次。
2.水质样品和废液应按照规定的方法进行处理。
磷钼蓝分光光度法测量海水中活性磷酸盐
磷钼蓝分光光度法测量海水中活性磷酸盐1 适用范围和应用领域适用于海水中活性磷酸盐的测定2 方法原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
3 试剂及其配制3.1硫酸溶液[c(H2SO4)=6.0 mol/L] 在搅拌下将300 mL硫酸(H2SO4,ρ=1.84g/mL)缓缓加到600 mL水中。
酒石酸锑钾-钼酸铵混合溶液3.2 钼酸铵溶液：溶解56 g钼酸铵〔(NH4)6Mo7O24·4H2O〕于400 mL水中。
溶液变混浊时，应重配。
3.3酒石酸锑钾溶液：溶解12 g酒石酸锑钾(C4H4KO7Sb·1/2H2O)于400 mL水中，贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
3.4混合溶液: 搅拌下将45 mL钼酸铵溶液加到200 mL硫酸溶液中，加入5 mL 酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
3.5 抗坏血酸溶液：溶解20 g抗坏血酸(C6H8O6)于200 mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
3.6 磷酸盐标准贮备溶液：（0.300 mg/mL -P）称取1.318 g磷酸二氢钾(KH2PO4)，优级纯，在110～115℃烘1～2 h)溶于10 mL硫酸溶液及少量水中，全量转入1000 mL量瓶，加水至标线，混匀，加1 mL三氯甲烷(CHCL3)。
此溶液1.00 mL含0.300 mg磷。
置于阴凉处，可以稳定半年。
3.7 磷酸盐标准使用溶液：（3.00 μg/mL-P）量取1.00 mL磷酸盐标准贮备溶液至100 mL量瓶中，加水至标线，混匀，加两滴三氯甲烷(CHCL3)。
此溶液1.00 mL含3.00 μg磷。
有效期为一周。
4 仪器及设备仪器及设备如下---分光度计：配5cm测定池；---量筒：容量10ml、50ml、100ml、250ml、500ml---量瓶：容量100ml、1000ml---带刻度具塞比色管：50ml---刻度吸管：容量1ml、5ml、10ml---自动加液器：容量1ml---一般实验室常备仪器和设备5 分析步骤5.1 绘制标准曲线5.1 量取磷酸盐标准使用溶液0，0.75，1.50，2.25，3.00，3.75，4.50 ，6mL于25 mL具塞比色管中，加水至25 mL标线，混匀。
磷钼蓝分光光度法
磷钼蓝分光光度法1适用范围本方法适用于炉水中含量在0.02～10.0mg/L磷酸盐的测定。
2方法提要在酸性溶液中，用过硫酸钾作分解剂，将聚磷酸盐和有机磷转化成正磷酸盐。
正磷酸盐与钼酸铵反应生产黄色的磷钼杂多酸，再用抗坏血酸还原成磷钼蓝，于710nm最大吸收波长处用分光光度法测定。
3仪器2800分光光度计4试剂4.1硫酸溶液：1＋354.2酒石酸锑钾：AR4.3过硫酸钾：40g/L称取20g过硫酸钾，精确至0.5g，溶于500mL水中，贮存于棕色瓶内（保存期一个月）。
4.4抗坏血酸：20g/l称取10g抗坏血酸，精确至0.5g，称取0.2gEDTA，精确至0.01g，溶于200mL水中，加入8.0mL甲酸，用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）。
4.5钼酸铵：26g/L称取13g钼酸铵，精确至0.5g，称取0.5g酒石酸锑钾，精确至0.01g，溶于200mL水中，加入230mL硫酸溶液（1＋1），混匀，冷却后用水稀释500mL，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）。
4.6磷酸盐标准溶液：1mL＝0.05mg4.6.1贮备液：称取0.7165g于105℃干燥过的磷酸二氢钾，溶于水中，转入1000mL容量瓶，稀释至刻度摇匀，此溶液1mL＝0.5mg PO43-。
4.6.2标准液：吸取50mL贮备液于500mL容量瓶中，稀释至刻度，此溶液1mL＝0.05mgPO43-。
5分析步骤：5.1工作曲线的绘制取7个50mL容量瓶，分别取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL磷标准溶液，用约20mL水稀释，依次向各瓶中加入2.0mL钼酸铵溶液，3.0mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下放置10分钟，在710nm，用比色皿，以试剂空白对照，测定各自吸光度，利用仪器建立A=MC+N线性回归方程，保存方法号。
5.2分析步骤取10mL水样于150mL锥形瓶中，加入1.0mL硫酸溶液（1＋35），5.0mL 过硫酸钾溶液，用水调节体积至25mL，放置于电炉上缓慢加热煮沸至溶液快蒸干为止，取出后冷却至室温，定量转移至50mL容量瓶中，加入2.0mL钼酸铵溶液，3.0mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下放置10分钟。
海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法
FHZDZHS0067 海水无机磷的测定磷钼蓝萃取分光光度法F-HZ-DZ-HS-0067海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法1 范围本方法适用于海水中活性磷酸盐的测定。
2 原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，以抗坏血酸还原为磷钼蓝，用醇类有机溶剂萃取，于波长700nm处测定吸光度。
硫化物含量大于1mg/L时，对本法有明显的影响，此时，在水样酸化后，通氮气10min，将硫化氢驱除，可消除干扰。
砷酸盐含量大于0.5mg/L时，对本法有明显影响。
通常海水中砷含量约0.003mg/L，其影响可忽略不计。
硅酸盐含量大于 1.4mg/L时，对本法有影响。
河口水和大洋深层水中硅酸盐含量常大于1.4mg/L，应进行校正。
3 试剂除非另作说明，本法所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水或等效纯水。
3.1 正已醇[CH3(CH2)5OH]。
3.2 无水乙醇(C2H5OH)。
3.3 硫酸溶液，1+2。
3.4 钼酸铵溶液：溶解28g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]于200mL水中。
溶液变混浊时，应重配。
3.5 酒石酸锑钾溶液：溶解6g酒石酸锑钾(C4H4KO7Sb·1/2H2O)于200mL水中，贮存于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.6 混合溶液：搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸（1+2）中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，贮存于棕色玻璃瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.7 抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸(C6H8O6)于200mL水中，贮于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定一个月。
3.8 磷酸盐标准溶液3.8.1 磷酸盐标准贮备溶液，0.300mg/mL-p：称取1.3181g磷酸二氢钾(KH2PO4，光谱纯，预先在110℃～115℃烘1h～2h，置于干燥器中冷却至室温)溶于10mL硫酸（1+2）中，移入1000mL 容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。
无机磷的测定
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无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物 可分以下几类。 (1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。 无机磷形态 (2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、 聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
分析步骤
■ 绘制标准曲线
按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml, 4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。 ② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。 ③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一
种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
■
在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。
■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)，
通常指能被植物直接吸收的。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
实验报告三：钼蓝法测定水中无机磷酸盐
实验三钼蓝法测定水中无机磷酸盐一、实验目的1、掌握钼蓝法测定磷酸盐含量的方法和原理。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理在强酸性条件下，水样中的活性磷酸盐与钼酸铵反应，生成淡黄色的磷钼黄。
磷钼黄被氯化亚锡还原成蓝色的磷钼蓝。
蓝色深浅与活性磷酸盐含量成正比，在690nm波长处有最大吸收值。
通过比色法可测出水样中活性磷酸盐的含量。
注意事项（1）实验用玻璃器皿应用酸洗涤，不应用含有磷的洗涤，以免玻璃表面吸附作用而造成磷酸盐的污染和样品中磷酸盐的损失。
（2）若水样有明显颜色，则应在锥形瓶里的100ml水样中加400mg活性炭，摇动5min，用2～3张重叠滤纸过滤后做测定。
定性滤纸和活性炭会带进微量磷酸盐，应用同样的活性炭做空白实验。
（3）显色后应在30min内测完溶液吸光值，30min后溶液的颜色将逐渐变浅。
（4）若对精确度要求较高时，应增加平行实验。
三、实验仪器和实验试剂实验仪器：分光光度计722型或其他型号吸管5.0ml、2.0ml、1.0ml 6支量程为50ml的具塞离心管5支量程为50ml的容量瓶一个量程为250ml的烧杯量筒滴管移液枪实验试剂：硫酸溶液（体积比1:1）氯化亚锡甘油溶液（2.5%）钼酸铵—硫酸混合试剂（体积比1:3）钼酸铵溶液（10%） KH2PO4标准贮备溶液 KH2PO4标准使用溶液四、实验内容及步骤1、配制磷标准溶液及水样显色:取5支50ml具塞离心管，编好序号，分别加入0.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml…… KH2PO4标准使用溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
分别加入2.0ml钼酸铵—硫酸混合试剂，摇匀，静置3min。
分别加入氯化亚锡甘油溶液4滴，摇匀，静置10min。
移取50.00ml一定量澄清水样于50ml具塞离心管，分别加入2.0ml钼酸铵—硫酸混合试剂，摇匀，静置3min。
分别加入氯化亚锡甘油溶液4滴，摇匀，静置10min。
2、测定标准溶液吸光度并绘制标准曲线：用3cm比色皿，以试剂溶液作参比，于690nm波长测定吸光度（A）。
《海水中痕量活性磷酸盐的测定 流动分析-磷钼蓝固相萃取-分光光度法》(报批稿)编制说明
海水中痕量活性磷酸盐的测定流动分析-磷钼蓝固相萃取-分光光度法（编制说明）目录一、制定标准的背景、目的和意义 (1)二、工作简况 (1)1、任务来源、标准负责起草和参加起草单位 (1)2、主要工作过程 (2)3、标准主要起草人及其所做的工作 (4)三、标准编制原则和确定标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）的论据（含试验、统计数据） (5)1、标准编制原则 (5)2、确定标准主要内容的依据 (5)四、主要试验（或验证）的分析、综述，技术经济论证，预期的经济效果 (13)1、主要试验（或验证）的分析、综述 (13)2、预期的经济效果 (13)五、与有关现行法律、法规和标准的关系 (14)六、标准作为推荐性行业标准的建议 (14)七、贯彻该标准的要求和措施建议 (14)八、其他应予说明的事项 (15)一、制定标准的背景、目的和意义磷是海洋浮游植物生长所必需的营养元素，磷的可利用性直接影响初级生产力的大小。
活性磷酸盐作为无机磷的主要形式，在磷的海洋生物地球化学过程中扮演着重要角色。
在大洋中，特别是一些寡营养海域，海洋表层活性磷酸盐被浮游植物大量摄取，浓度往往低至nmol/L级别。
由于传统分析方法的灵敏度较低，导致这些区域活性磷酸盐数据相对匮乏，限制了科学家对海洋磷循环过程的认识。
获取寡营养海区海水中活性磷酸盐浓度的高通量数据，是大洋调查和海洋环境保护的需要，也是海洋生物地球化学研究的需要。
为准确获取数据，除了拥有灵敏、可靠的分析方法，标准化指导性技术文件是必不可少的。
目前，国内外已有的海水活性磷酸盐的标准分析方法能有效分析海水中常量浓度的活性磷酸盐，但是无法满足痕量活性磷酸盐的测定需求。
而国内外海水痕量活性磷酸盐的测定方法均为研究性方法，我国尚无痕量活性磷酸盐测定的国家标准或行业标准，国外亦无类似的标准。
由厦门大学与自然资源部第三海洋研究所自主研发的基于流动分析-磷钼蓝固相萃取-分光光度法测定海水痕量活性磷酸盐的分析方法，检出限达到nmol/L级别。
磷钼黄分光光度法测定水样中的磷酸盐
磷钼黄分光光度法测定水样中的磷酸盐一、实验目的（1）掌握分光光度计的使用方法（2）学会选择分光光度计测定磷酸盐的条件（3）掌握磷钼黄分光光度法测定水样中的磷酸盐的原理和方法二、实验原理1、在强酸条件下，水样中的磷酸盐与钼酸铵反应，生成淡黄色的磷钼黄。
2、磷钒钼酸可在波长420nm的波长下测定3、通过比色法可测出水样中磷酸盐的含量4、2H3PO4+22(NH4)2MoO4+2NH4VO3+23H2SO4=P2O5・V2O5・22MoO4+23(NH4)2SO4+26H2O三、实验仪器与试剂仪器:分光光度计，分析天平实验试剂：磷酸盐标准溶液（1ml含1mgPO43-）钼酸铵-偏钒酸铵-硫酸显色溶液（钼钒酸显色溶液）四、实验步骤1.吸收曲线的绘制吸取0.0mL、1.0mL磷酸盐标准溶液于两个50mL容量瓶→15mL硫酸，摇匀→5mL 钒钼酸显色液→摇匀定容→1cm比色皿→以试剂空白为参比溶液→在340nm-450nm之间，每隔10nm测一次吸光度值→在最大吸收峰处每隔2nm测一次吸光度→记录数据2.显色剂用量的选择取七个50mL的容量瓶→各加入1mL磷酸盐标准溶液→加入15mL硫酸→分别加入0.20mL、0.5mL、1.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL、9.0mL钒钼酸显色液→摇匀→稀释至刻度线→1cm比色皿→蒸馏水为参比溶液→在最大吸收波长处测定各溶液吸光度→记录数据。
3.标准曲线的绘制：1mL磷酸盐标准溶液→100mL容量瓶→定容→7个50mL的容量瓶中分别加入0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL磷酸盐稀释溶液→钼矾酸显色剂→摇匀稀释→1cm比色皿→试剂空白为参比溶液→最大吸收峰处测各溶液的吸光度→记录数据4．水样的测定：2mL水样→50mL容量瓶→按标准曲线的制作步骤加试剂→以试剂空白作参比→测量吸光度→记录数据五、实验记录及数据处理=V显水=C水。
实验五 活性磷酸盐
实验五活性磷酸盐（磷钼蓝法）一、传统方法原理水样中的活性磷酸盐采用磷钼蓝法测定。
活性磷酸盐在一定的酸性条件下可与钼酸铵作用，生成淡黄色的磷钼酸铵，但磷钼酸铵发色能力弱，在通常的磷浓度下显不出黄色来。
磷钼酸铵可被还原剂抗坏血酸还原成发色能力很强的蓝色化合物——“钼蓝”，还原后的溶液在690nm处有较大吸收，可用比色法分析。
二、仪器及设备1．分光光度计及配套比色皿2．具塞比色管3．容量瓶、移液管等常规实验室设备三、试剂及其配制1．硫酸溶液（1:2）：在不断搅拌下将浓硫酸缓缓倒入同体积蒸馏水中，冷却后盛于试剂瓶中。
2．酒石酸锑钾：溶解6g酒石酸锑钾于200ml水中，贮于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3．钼酸铵溶液（10%）：称取5g钼酸铵固体[(NH4)6Mo7O24·4H2O]，溶解后稀释至50ml，若溶液浑浊应取其澄清液贮于聚乙烯瓶中。
4．钼酸铵—硫酸混合试剂：45ml钼酸铵溶液与200ml硫酸溶液混合，加入5ml酒石酸锑钾溶液，混匀后贮于聚乙烯瓶中，此溶液避光保存可稳定数日，如发现混浊须重新配制。
5．抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶中。
此溶液4℃避光保存，可稳定1个月。
6．磷标准贮备液（0.2mg PO43--P/mL）：称取KH2PO4（AR，于115℃下烘1h）0.8790g 溶于蒸馏水中，并转入1000ml容量瓶中定容。
7．磷标准使用液（2ug PO43--P/mL）：移取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中定容。
四、测定步骤1．绘制工作曲线①取6个25ml具塞比色管，分别加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2..50ml磷标准使用液，加水至标线，混匀。
②分别加入钼酸铵—硫酸混合试剂1ml，混匀后放置3min；再分别加入抗坏血酸溶液1ml，混匀后显色10min。
③用分光光度计在690nm波长处，于比色皿中对照蒸馏水测定上述溶液的吸光度E值（其中试剂空白吸光度为E0）。
10 活性磷的测定
加入蒸馏水定容至50.00ml 加蒸馏水后的溶液 浓度(μ mol· -1) L 加入混合酸（ml） 水浴加热显色(min) 吸光度值A 0 8.00 15 0 2.00 8.00 15 4.00 8.00 15
混合酸100ml： 3%钼酸铵20ml+ 5N硫酸50ml+抗坏血酸20ml+酒石酸锑钾10ml
用分光光度计在690nm处测溶液的吸光度，从工作曲线上查 活性磷酸盐磷的浓度。本法检测最低浓度为0.3(P)μmol/L，测定 上限为10(P)μmol/L。
实验步骤
1. 配制磷酸盐的标准系列（工作曲线）及水样：
按下列表格逐项依次准确加入比色管中，并充分摇均匀。
比色管号 标液的量（ml） 1 0 2 2.50 3 5.00 4 7.50 5 10.00 6 0 水样50.00ml 6.00 8.00 15 8.00 8.00 15 ? 8.00 15
பைடு நூலகம்
上述溶液配制好后充分摇匀，显色15min。用分光光度计
在690nm波长处于20mm比色皿进行比色测定，以1号管的溶液 为空白（对照）测出各管的吸光度值，用标准系列的吸光度值 制出工作曲线，用水样的吸光度值在工作曲线上查出其相对应 的磷酸盐的浓度。
实验十 活性磷的测定
（钼蓝比色法）
实验目的
1.掌握磷钼蓝法的测定原理和操作； 2.巩固分光光度计的使用和比色分析的基本原理。
实验原理
水中的活性磷酸盐与钼酸铵试剂在强酸条件下作用，生成黄 色的磷钼酸铵，黄色的磷钼酸铵在一定的酸性条件下，可被还 原剂还原成蓝色的磷钼蓝。其反应方程式如下：
PO43- + 3NH4+ + 12MoO42- + 24H+ === (NH4)3PO4· 12MoO3 (黄色) + 12H2O (NH4)3PO4· 12MoO3 + Vc (抗坏血酸) + H+ → (MoO2· 4MoO2)2· 3PO4 H (磷钼蓝的大致成分)
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磷钼蓝分光光度法测量海水中活性磷酸盐
1 适用范围和应用领域
适用于海水中活性磷酸盐的测定
2 方法原理
在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
3 试剂及其配制
3.1硫酸溶液[c(H
2SO4)=6.0 mol/L] 在搅拌下将300 mL硫酸(H
2
SO4,ρ=1.84
g/mL)缓缓加到600 mL水中。
酒石酸锑钾-钼酸铵混合溶液
3.2 钼酸铵溶液：溶解56 g钼酸铵〔(NH
4)
6
Mo
7
O
24
·4H
2
O〕于400 mL水中。
溶
液变混浊时，应重配。
3.3酒石酸锑钾溶液：溶解12 g酒石酸锑钾(C
4H
4
KO
7
Sb·1/2H
2
O)于400 mL水中，
贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
3.4混合溶液: 搅拌下将45 mL钼酸铵溶液加到200 mL硫酸溶液中，加入5 mL 酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
3.5 抗坏血酸溶液：溶解20 g抗坏血酸(C
6H
8
O
6
)于200 mL水中，盛于棕色试
剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
3.6 磷酸盐标准贮备溶液：（0.300 mg/mL -P）称取1.318 g磷酸二氢钾(KH
2PO
4
)，
优级纯，在110～115℃烘1～2 h)溶于10 mL硫酸溶液及少量水中，全量转入1
000 mL量瓶，加水至标线，混匀，加1 mL三氯甲烷(CHCL
3
)。
此溶液1.00 mL含0.300 mg磷。
置于阴凉处，可以稳定半年。
3.7 磷酸盐标准使用溶液：（3.00 μg/mL-P）量取1.00 mL磷酸盐标准贮备溶
液至100 mL量瓶中，加水至标线，混匀，加两滴三氯甲烷(CHCL
3
)。
此溶液1.00 mL含3.00 μg磷。
有效期为一周。
4 仪器及设备
仪器及设备如下
---分光度计：配5cm测定池；
---量筒：容量10ml、50ml、100ml、250ml、500ml
---量瓶：容量100ml、1000ml
---带刻度具塞比色管：50ml
---刻度吸管：容量1ml、5ml、10ml
---自动加液器：容量1ml
---一般实验室常备仪器和设备
5 分析步骤
5.1 绘制标准曲线
5.1 量取磷酸盐标准使用溶液0，0.75，1.50，2.25，3.00，3.75，4.50 ，6mL于25 mL具塞比色管中，加水至25 mL标线，混匀。
5.2 各加1.5 mL混合溶液，1.5 mL抗坏血酸溶液，混匀。
显色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波长处测定其吸光值Ai。
其中零浓度为标准空白吸光值A0。
5.3 以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横坐标，绘制标准曲线。
5.2 水样测定
按以下步骤测定样品
A）量取25 mL经0.45 μm微孔滤膜（用0.5mol/L的盐酸浸泡1~2个小时）过滤的水样至具塞比色管中，按标准曲线绘制的步骤测定吸光值Aw。
b)同时量取25 mL水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
6 记录与计算
将测定数据记入表1及表2中，据(Ai-A0)做在工作曲线上查得水样中活性磷酸盐浓度(ug/L-P)，亦可用工作曲线的线性回归方程计算。
7 精密度和准确度
相对误差1.8%；重复性（r）0.015ug\L；重复性相对标准偏差2.1%；再现性（R）0.13ug\L，再现性相对标准偏差2.4%。
8 注意事项
本方执行中应注意如下事项：
---除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二次水或等效纯水。
---水样采集后应马上过滤，立即测定。
若不能立即测定，应置于冰箱中保存，
但也应在48h 内测完。
---过滤水样的微孔滤膜，需用0.5mol\L 盐酸浸泡，临用时用水洗净。
---硫化物含量高于2mg\L-S 时干扰测定。
此时，水样用硫酸酸化，同氮气15in ，强硫化氢除去，可消除干扰。
---磷钼蓝颜色在4h 内稳定。
9 实验结果
标准曲线
标准曲线Y=0.1034+0.1015*x
实验数据及结果
吸光值
磷酸盐浓度。