革兰氏染色的一般步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤革兰氏染色技术（Gram staining）是微生物学中常用的染色方法，利用这种方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
它是由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明的，被广泛应用于细菌的鉴定和分类。
革兰氏染色技术的关键操作步骤包括以下几个方面：一、准备细菌培养物在进行革兰氏染色之前，首先需要准备细菌培养物。
通常使用处于对数生长期的细菌培养物，用无菌技术从培养物中取一小滴液体，均匀涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。
二、固定细菌涂片细菌涂片需要进行固定，以保持细菌的形态特征。
常用的固定剂是甲醇或乙醇，将涂片逐渐浸入固定剂中，浸泡数分钟至数十分钟，然后取出晾干。
三、染色1. 注碘液处理在固定的细菌涂片上滴加碘液，覆盖整个涂片。
碘液可以使细菌细胞内的格拉氏阳性菌染成紫色。
2. 酒精洗涤用酒精溶液冲洗细菌涂片，直至涂片上的紫色不再出现，一般持续几秒至十几秒钟。
这一步是关键的洗涤步骤，通过酒精的洗涤，可以去除革兰氏阴性菌的多余染色。
3. 闪碱洗涤用闪碱洗涤涂片，一般可以持续几秒至十几秒钟。
闪碱的作用是去除细菌涂片上的酒精和碘溶液，同时使革兰氏阳性菌继续保持紫色。
4. 洗涤与干燥最后用清水冲洗细菌涂片，使其干燥。
四、观察与解读完成染色步骤后，可以使用显微镜观察细菌涂片。
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征，进一步判断和鉴定细菌。
总结与回顾：革兰氏染色技术是微生物学中常用的染色方法，它可以通过染色结果将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的关键操作步骤包括准备细菌培养物、固定细菌涂片、染色、观察与解读。
其中，注碘液处理、酒精洗涤和闪碱洗涤是整个染色过程中的核心步骤，通过这些步骤的操作，可以使革兰氏阳性菌保持紫色，革兰氏阴性菌去除多余染色。
对于细菌的鉴定和分类来说，革兰氏染色技术是一个简单、快速且有效的方法。
简述革兰氏染色方法的步骤及原理。
简要方法步骤:涂片→干燥→冷却→结晶初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染→干燥→镜检。
原理:与两类细菌的细胞壁成分笔结构有密切关系。
革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。
当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。
而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少,经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。
革兰氏染色步骤6则
革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色实验步骤
.；. 革兰氏染色一．实验流程：1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。
9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
简述革兰氏染色方法
简述革兰氏染色方法革兰氏染色方法是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
本文将从原理、步骤、应用以及优缺点等方面进行简述。
一、原理革兰氏染色方法是根据细菌细胞壁的化学组成差异而设计的。
细菌细胞壁是由多层薄而紧密的多糖和脂蛋白组成的，其中革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的胞内酶和胞外酶，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，胞内酶和胞外酶含量较少。
二、步骤1. 准备细菌涂片：将待染菌液滴于玻璃片上，用铅笔或曲别针将菌液均匀地涂开，然后用火焰烘烤片面，使其固定。
2. 染色：将涂片放在染色架上，先用蔗糖水浸润片面，然后滴加革兰氏紫液，静置1分钟。
3. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
4. 酒精分解：滴加碘酒，静置1分钟，使细菌细胞壁与染色剂形成络合物。
5. 洗涤：用95%乙醇冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
6. 染色：滴加伊红，静置1分钟，使细菌细胞壁和胞质染成红色。
7. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
8. 干燥：将片面用吹风机吹干，然后用显微镜观察。
三、应用革兰氏染色方法广泛应用于细菌学和临床微生物学领域。
通过革兰氏染色，可以快速区分细菌的类型，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
革兰氏阳性菌常见于致病菌中，如葡萄球菌、链球菌等；而革兰氏阴性菌常见于肠道菌群中，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
四、优缺点1. 优点：革兰氏染色方法操作简单、快速，可以在短时间内对细菌进行初步分类。
此外，染色结果直观明确，易于观察和分析。
2. 缺点：革兰氏染色方法对于某些细菌可能存在染色困难或染色效果不明显的情况，这可能会导致结果的不准确。
另外，染色后的细菌仅能观察细胞形态和分布情况，无法提供更详细的细胞结构信息。
总结：革兰氏染色方法是一种简单、快速的细菌染色方法，通过染色结果可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
该方法在细菌学和临床微生物学中有着广泛的应用，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。
这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。
步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）蒸馏水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。
干燥，镜检。
革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色一．实验流程：1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。
9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
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环境微生物：革兰氏染色
二、革兰氏染色原理
为什么通过革兰氏染色G+呈兰色，G-呈红色？
①脱色剂----95%乙醇为脂溶剂破坏G﹣的外膜、肽聚 糖层和 细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的 复合物从细胞中渗漏出来，当再用藩红复染时，显 现红色。
②但在G+细胞中，乙醇使厚的肽聚糖层脱水，导致孔 隙变小， 由于结晶紫和碘的复合物分子较大，不能 通过细胞壁，保持紫色。
革兰氏染色
革兰氏染色步骤 革兰氏染色原理
革兰氏染色
革兰氏染色—由丹麦科学家 Gram在1884年建立，是细菌学上最 重要的鉴别染色法。通过革兰氏染 色法可将细菌分成革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色
1884年，丹麦医生C.Gram发明 程序： （1）初染（结晶紫1-2min） （2）媒染剂（碘液1min） （3）脱色（95%乙醇20~30S） （4）复染（蕃红1 ~ 2min） 结果判断：菌体呈紫色的为革兰氏阳性菌（G+）
球菌
肺炎链球菌
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
杆菌
变形杆菌
大肠杆菌
绿脓杆菌
螺菌
幽门螺杆菌
霍乱弧菌
钩端螺旋体
感谢观看，欢 迎批评指正
菌体呈红色的为革兰氏阴性菌（G-）
一、革兰氏染色步骤
3.媒染— 碘-碘化钾 溶液浸湿
1min
4. 脱色—95%乙醇溶液 进行颜色洗脱30s
5.复呈现第一次染色的效果紫色，
革兰氏阳性菌（紫阳G+）；
• 呈现第二次染色的效果红色；称
革兰氏阴性菌（红阴G -）
革兰氏染色步骤和原理
革兰氏染色步骤和原理革兰氏染色是微生物检测和分类中最常用的染色方法之一、它是由丹麦细菌学家洛尔德·克里斯廷·革兰于1884年发明的。
革兰氏染色通过染色的方式将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，从而有助于快速诊断和鉴定细菌。
1.取一块无菌玻璃片，将其浸泡在80%酒精中，用火鉴或酒精灯将其加热烘干。
3.用无菌棉签取适量菌液，涂抹在玻璃片上，并尽量保持均匀。
4.用火鉴或酒精灯加热玻璃片，使细菌在玻璃片上固定。
5.将固定的玻璃片浸泡在革兰碘液中，浸泡2分钟，使细菌固定。
6.将玻璃片从革兰碘液中取出，用蒸馏水冲洗干净。
7.将玻璃片放在洗涤盘中，滴入革兰染色剂，染色剂液体覆盖玻璃片。
8.把玻璃片放在盛有革兰染色剂的洗涤盘上，静置30秒钟。
9.将玻璃片从革兰染色剂中取出，用蒸馏水冲洗干净。
10.用酒精清洗涤盘中的染色剂，直到洗涤盘中的染色剂变为浅紫色。
11.用蒸馏水冲洗玻璃片，直到从玻璃片上冲洗下的清水不在有颜色。
12.用滴状水用于玻璃片上，除去上面的残余水分。
13.用显微镜观察玻璃片上的细菌，根据染色后细菌的颜色和形状，判断细菌是否革兰阳性或革兰阴性。
革兰阳性菌的细胞壁主要由多层厚厚的胞壁肽聚糖复合物组成，细胞壁对革兰染色剂有高度的亲和力，因此在染色后能保持染色剂的颜色，呈现紫色或深紫色。
革兰阴性菌的细胞壁则相对较薄，同时细胞壁外还有一层脂质结构，染色剂难以渗透进入细胞壁内部，因此在酒精处理过程中，会溶解掉染色剂，导致细胞失去染色，最后用对比性染色（如用红色染料）重新染色，呈现红色。
通过上述步骤和原理，我们可以将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类，辅助进行细菌鉴定和分类。
革兰氏染色的速度快、操作简单，因此在临床医学和实验室中得到广泛应用。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法，是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色法，其主要步骤如下：
（1）制片
取活跃生长期的菌种培养物常规涂片、干燥、固定。
涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。
（2）初染
滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。
（3）媒染
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。
（4）脱色
用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，加入95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。
脱色时间一般为20-30s。
（5）复染：
用番红液复染约2min，水洗。
（6）镜检：
干燥后，用油镜观察。
菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。
1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。
2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。
3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2至3次，用2至3秒后待冷却。
4.初染：滴加1至2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。
5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。
6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。
7.水洗：同步骤5。
8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。
9.复染：滴加1至2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。
10.水洗：同步骤5。
11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色步骤和原理
革兰氏染色步骤和原理第一步：准备好白色的玻璃板和酒精革兰氏染色是一种常用的细菌检测方法，可以快速检测出细菌的形态、分布和数量。
该方法是由丹麦微生物学家革兰氏于1884年发明的，经过多年的临床实践和改良，现在已成为临床医学和微生物学领域中的重要检测手段之一。
1.样品制备：首先要准备好待检测的细菌样品，通常需要从血液、尿液、痰液、分泌物或其他体液中获得。
为了确保样品的洁净和完整性，最好将样品进行稀释，减少样品的干扰，同时也便于操作。
2.染色处理：将制好的样品涂在载玻片上，使其干燥，然后用甲醇进行固定处理，使细胞蛋白质凝固，并烘干。
随后将载玻片以45度角倾斜，加入革兰染色液，静置约1分钟，然后用水冲洗2-3秒钟。
再加入碘酒，静置1分钟，然后再用水冲洗2-3秒钟。
洗涤后可以在载玻片上滴一两滴乙醇，退色1-2秒钟，再用水冲洗，并用滤纸吸干表面水分。
3.洗涤：将载玻片表面涂上感兴趣的菌株的染色处理，静置一定时间后，用盐水等进行洗涤，去除载玻片表面无关物质，使细胞染色更加清晰。
4.显微镜观察：用油镜片把载玻片放到显微镜上，通过放大镜片观察载玻片上的细菌。
革兰氏染色能够使革兰氏阳性的细菌形成紫色，而革兰氏阴性的细菌则形成粉色。
革兰氏染色的原理基于细菌细胞壁化学成分的差异性。
革兰氏阳性菌细胞壁厚，主要由多层厚壁多聚糖和蛋白质组成，其细胞壁中还含有少量脂质和磷酸化甘露醇，能够吸附革兰染色液，形成紫色颗粒。
而革兰氏阴性菌细胞壁相对较薄，主要由一层厚度较小的胞外膜和较厚的革兰氏染色物质组成，故染色后革兰氏阴性菌呈粉色。
革兰氏染色方法简单、便捷、易于操作，能够快速鉴别出不同类型的细菌，是一种常用的细菌检测方法。
这种染色方法对细菌的形态、数量和分布都能进行精确的检测和分析，对于临床医学和微生物学领域的细菌研究和治疗具有重要意义。
革兰氏染色法的判断标准
革兰氏染色法的判断标准革兰氏染色法是一种常用的细菌分类染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的判断标准主要通过观察细菌在染色过程中的颜色变化、细菌形态及细菌细胞壁的特点来区分。
革兰氏染色法的步骤一般包括涂片、热固定、染色和洗净四个步骤。
在进行染色前，需将细菌培养于富含养分的琼脂培养基上，并培养到相应的菌落数量。
接下来，将细菌采用涂片法涂布于玻璃片上，然后进行热固定，即将涂片在火焰上烘烤几秒钟，使细菌固定在玻璃片上，以免在染色过程中被冲走。
接着，将涂片浸于基础染色剂——结晶紫溶液中，使染色剂覆盖整个涂片，然后静置片刻，再用去离子水洗净。
随后，在加入碘液后，再次涂上碱性酒精，最后用脱脂纸吸干液体。
革兰氏染色法通过不同染色剂与细菌细胞壁的相互作用来判断细菌的革兰氏染色性质。
革兰氏阳性细菌染色之后呈紫色或深蓝色，而革兰氏阴性细菌染色之后呈红色。
这是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁含有较多的多聚糖和脂肪酸，并且细胞壁的厚度较大，可以较好地保留染色剂，因而呈紫色或深蓝色。
而革兰氏阴性细菌的细胞壁相对较薄，且由脂多糖组成，不易保留染色剂，因此呈红色。
除了颜色变化，革兰氏染色法还可以通过观察细菌的形态来进行判断。
革兰氏阳性细菌多为球形或梭状菌，常以单个或成对形式存在；而革兰氏阴性细菌形态多样，有球形、棒状、弯曲杆状等。
此外，革兰氏染色法还可以通过观察细菌的细胞壁特点来进行判断。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由厚壁的肽聚糖层和革兰氏阳性细菌特有的Teichoic酸层组成；而革兰氏阴性细菌的细胞壁包括内外膜，内膜是细胞膜，外膜有脂多糖构成，中间仅有一层较薄的肽聚糖层。
总之，革兰氏染色法通过观察细菌在染色过程中的颜色变化、细菌形态及细菌细胞壁的特点来判断细菌的革兰氏染色性质。
这一方法可以帮助生物学家迅速区分细菌类型，从而进行后续的细菌鉴定及分类工作。
革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色一．实验流程：1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置)。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定:让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）.5、染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95％乙醇脱色20—30s至流出液无紫色，立即水洗。
9、复染:滴加蕃红复染3—5min，水洗.至此,革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌:埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等)、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
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革兰氏染色的一般步骤革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色，再用稀释石炭酸复红复染。
染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）。
被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）。
革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。
致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。
百日咳杆菌、大肠杆菌（大肠埃希菌）、铜绿假单胞菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、沙门菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性菌。
所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。
又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）纯化水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。
干燥，镜检。
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。
实验三细菌的革兰氏染色法一、目的要求了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decoorising agent）和复染液（counterstain）。
碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crysta vioet）。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethano）。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。
三、器材大肠杆菌，金黄色葡萄球菌；草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液，95%乙醇，载玻片，显微镜等。
四、操作步骤1．涂片将培养24小时的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），自然干燥、固定。
固定时通过火焰1～2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色（1）初染：滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）一滴，染色1-2min，倾斜后缓慢冲洗，用吸水纸吸干。
（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，倾斜后缓慢冲洗，吸水纸吸干。
（3）脱色：将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，倾斜玻片，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20～30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染：用番红液染1～2分钟，水洗。
（5）镜检：自然干燥后，置油镜观察。
革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合制片，作革兰氏染色对比。
注意：革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。
此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
五、实验结果与讨论微生物染色液的配制一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液A液：美蓝(methylene blue) 0．6g95%酒精 30mlB液：KOH 0．01g蒸馏水 100ml分别配制A液和B液，配好后混合即可。
二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(basic fuchsin) 0．3g95%酒精 10mlB液：石炭酸 5．0g蒸馏水 95ml将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A液。
将石炭酸溶解于水中，配成B液。
混合A液及B液即成。
通常可将此混合液稀释5—10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。
三、革兰氏(Gram)染色液1．草酸铵结晶紫染液A液：结晶紫(crystal violet) 2g95%酒精 20mlB液：草酸铵(ammonium oxalate) 0．8g蒸馏水 80ml混合A、B二液，静置48小时后使用。
2．卢戈氏(Lugol)碘液碘片 1．0g碘化钾 2．0g蒸馏水 300ml先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
3．95%的酒精溶液(脱色用)。
4．番红复染液番红(safranine O) 2．5g95%酒精 100ml取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
四、芽孢染色液1．孔雀绿染液孔雀绿(malachite green) 5g蒸馏水 100ml2．番红水溶液番红 0．5g蒸馏水 100ml3．苯酚品红溶液碱性品红 11g无水酒精 100ml制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
4．黑色素(nigrosin)溶液水溶性黑色素 10g蒸馏水 100ml称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中，置沸水浴中30分钟后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，加0．5ml甲醛，备用。
五、荚膜染色液1．黑色素水溶液黑色素 5g蒸馏水 100ml福尔马林(40%甲醛) 0．5ml将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟，然后加入福尔马林作防腐剂。
2．番红染液与革兰氏染液中番红复染液相同。
六、鞭毛染色液A液：单宁酸 5gFeCl3 1．5g蒸馏水 100ml福尔马林(15%) 2．0mlNaOH(1%) 1．0ml配好后，当日使用，次日效果差，第三日则不宜使用。
B液：AgNO3 2g蒸馏水 100ml待AgNO3溶解后，取出10ml备用，向其余的90mlAgNO3中滴入浓NH4ON，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。
再将备用的10mlAgNO3慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。
如所呈雾不重，此染剂可使用一周，如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
七、富尔根氏核染色液1．席夫氏(Schiff)试剂将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中，振荡5分钟，冷至50℃左右过滤，再加入1mol/LHC120ml，摇匀。
待冷至25℃时，加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g，摇匀后装在棕色瓶中，用黑纸包好，放置暗处过夜，此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用)，再加中性活性炭过滤，滤液振荡1分钟后，再过滤，将此滤液置冷暗处备用(注意：过滤需在避光条件下进行)。
在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。
2．Schandium固定液A液：饱和升汞水溶液50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
B液：冰醋酸取A液9毫升+B液1毫升，混匀后加热至60℃。
3．亚硫酸水溶液10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，1mol/LHCl5ml，加蒸馏水100ml混合即得。
八、Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 75ml福尔马林(40%甲醛) 25ml冰醋酸 5ml1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。
先将苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
九、乳酸石炭酸棉蓝染色液石炭酸 10g乳酸(比重1．21) 10ml甘油 20ml蒸馏水 10ml棉蓝(cottonblue) 0．02g将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。
十、瑞氏(Wright)染色液瑞氏染料粉末 0．3g甘油 3ml甲醇 97ml将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨，先加甘油，后加甲醇，放玻璃瓶中过夜，过滤即可。
十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角烧瓶中，慢慢加入0．6g氯化美蓝(met hylene blue chloride)，旋摇三角烧瓶，使其溶解。
放5—10℃下，12—24小时，然后加入4ml冰醋酸。
用质量好的滤纸如WhatmanNo．42或与之同质量的滤纸过滤。
贮存于清洁的密闭容器内。
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