树脂型pcr产物纯化及胶回收试剂盒操作方法

树脂型PCR 产物纯化及胶回收试剂盒

操作方法

（一）从反应液中回收PCR产物

1•将0.4ml纯化树脂（使用前充分混匀）与50~100卩l无石蜡油的PCR反应液颠倒混匀3 分钟。然后装入离心纯化柱，13,000rpm 离心30 秒，倒掉收集管中的废液。

2. 加入500卩l 80瞬丙醇（或乙醇），13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。

重复第2步一次，此步骤13,000rpm 离心2分钟，务必将异丙醇（或乙醇）除尽。如果离心纯化柱上还残留有异丙醇（或乙醇），13,000rpm再离心1分钟。

3. 将离心纯化柱套入干净的1.5ml 或2ml 离心管中，开盖放置2~3分钟，使残留的乙醇充分

挥发干净。加入50卩l TE缓冲液（若用于测序，则加50 ^1超纯水）于纯化树脂上，不能粘在管壁上。放置2分钟后，13,000rpm离心30秒。TE缓冲液或超纯水的用量视用户对浓度的要求而定。离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。

4. 离心管中的液体即是纯化的PCF产物，取4卩1电泳（0.8%琼脂糖，120V, 10 分钟）检测

并目测定量。-20 C保存备用。

（二）从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段

1•将无石蜡油的PCR反应液或酶切反应液（50卩l~100卩l反应体系）在1%勺普通琼脂糖凝胶上电泳，切下所需的DNA条带装入2ml离心管中。

尽量切掉不含DNA勺琼脂糖凝胶，这样可简化操作、提高回收量及DNA片段

的质量。

2. 200mg~400m琼脂糖凝胶中加入0.4ml纯化树脂（使用前充分混匀），70C保温5~10 分

钟，每两分钟颠倒混匀 1 次，使琼脂糖凝胶完全融化。

对于高浓度的琼脂糖凝胶（＞2%，每200mg的琼脂糖凝胶中加入0.5ml纯化树脂，加热融胶的时间延长到15分钟。

3•将混和液转移入离心纯化柱，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。

4. 加入500卩I 80瞬丙醇（或乙醇），13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。

重复第4步一次，此步骤13,000rpm离心2分钟，务必将异丙醇（或乙醇）除尽。如果离心纯化柱上还残留有异丙醇（或乙醇），13,000rpm再离心1分钟。

5. 将离心纯化柱套入干净的1.5ml或2ml离心管中，开盖放置2~3分钟，务必使乙醇充分挥发

干净，加入40卩I TE缓冲液（若用于测序，则加40卩1超纯水）于纯化树脂上，不能粘在管壁上。放置2分钟后，13,000rpm离心30秒。

TE缓冲液或超纯水的用量视用户对浓度的要求而定。离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。

6. 离心管中的液体即是纯化的DNA片段，取4卩1电泳（0.8%琼脂糖，120V, 10 分钟）检测

并目测定量。-20 C保存备用。

常见问题及参考意见