鸡外周血淋巴细胞分离液说明书
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
外周血淋巴细胞分离方法
实验 18 外周血淋巴细胞分离方法目的了解密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理及其操作过程。
原理淋巴细胞分离掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合制成。
它具有分子量大、无化学活性、20℃时比重为1.077士0.001的特性。
血液中各种细胞的比重不同，淋巴细胞与单核细胞的比重约为1.070，而粒细胞和红细胞的比重为1.092左右。
将血液加至分离液上，通过离心，可使一定比重的细胞按相应密度梯度进行分布，从而将淋巴细胞与其它血细胞分离开。
材料1. 淋巴细胞分离液(比重1.077土0.001)。
2. 肝素。
3. 无Ca2+、Mg2+的Hanks溶液，pH7.2～7.6。
4. RPMI-1640培养液(含10%小牛血清)。
5. 其它:注射器、吸管、滴管（均为无菌）,血球计数板，水平离心机，显微镜等。
方法1. 无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。
2. 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液:Hanks液:淋巴细胞分离液的比例为1:1:1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。
3. 经水平式离心2000r/min×20min，小心取出试管。
4. 用平口吸管小心吸取中层呈白色雾状的淋巴细胞层，用Hanks溶液洗涤两次，每次离心1500r/min ×10min。
5. 弃上清，加RPMI-1640培养液1ml混匀，取少许进行细胞计数及活力测定。
（1）细胞计数: 取1滴细胞悬液置血球计数板上，静置片刻，显微镜下计数四角四个大方格内的细胞数（见图15），按下列公式计算出细胞总数。
四个大方格细胞总数×稀释倍数×细胞悬液毫升数×104细胞总数= 4（2）台盼蓝拒染法测定细胞活力: 取4份0.2%台盼蓝与1份4.25%生理盐水混合，将台盼蓝生理盐水溶液与细胞悬液等量混合，在3分钟之内压片，在光学显微镜下计数未染色的细胞（为活细胞）与染色细胞（染成兰色,为死细胞），计算活细胞占细胞总数的百分数。
详细的淋巴细胞的分离、计数图文教程
<交界液面：一定不要打乱 >
离心 〔200lt;1000rpm,5min> 重复2次
血浆
分层液 红细胞 粒细胞
淋巴细胞与 单核细胞层
用Hank’s液重悬细胞 取10ul细胞悬液与90ul白细胞 计数液或台盼兰计数液混合
取10ul于细胞计数板上
细胞计数
细胞计数
本实验：淋巴细胞
实验方案
抽取外周血 分离淋巴细胞 细胞计数
实验材料
1. 肝素抗凝血 2. Hank’s液 3. 淋巴细胞分离液 4. 水平离心机 5. 显微镜 6. 细胞计数板
实验步骤
肝素抗凝静脉血1.5ml 加1.5mlHank’s液稀释
置于2ml淋巴细胞分离液上
稀释后的 抗凝血
淋巴细胞 分离液
数上不数下,数左不数右.
细胞计数板
实验结果
细胞数量：
单个核细胞浓度〔细胞数/ml>
= 2个大方格内细胞总数
×104×10 <稀释倍数
2
细胞活力检测：〔死细胞被染成蓝色,活细胞不着色
活细胞数
活细胞百分率 =
细胞总数
× 100%
密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：
纯度在90%以上 淋巴细胞约占90-95% 细胞收获率可达80-90% 活细胞百分率在95%以上
注意事项
稀释的肝素抗凝血,沿管壁轻轻叠加于分离液上, 使两者形成一个清晰地界面.
细胞经离心分层后,缓慢小心吸取,切勿打破形成 的细胞层.
细胞计数的仪器
血细胞分析仪，临床常用
装有自动显微镜观察系统
自动细胞计数仪
知识回顾 Knowledge Review
T淋巴细胞的分离、计数
XX医学院免疫学教研室
外周血淋巴细胞Ficoll分离法
外周血淋巴细胞Ficoll分离法
实验材料： 50ml离心管,吸管，移液枪
试剂：生理盐水或PBS，淋巴细胞分离液(天津灏洋生物)，无菌蒸馏水，IMDM 培养基（Hyclone公司），FBS(Hyclone公司)
准备工作：将所需耗材提前准备好放于操作台边，确保所有试剂新鲜无菌操作步骤：
1、取中心血站供应的抗凝血用无钙、镁PBS稀释3-4倍。
2、将Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077）事先分装于离心管中，使其沉于管
底。
3、将经稀释的血细胞悬液，用吸管将细胞悬液沿离心管壁缓慢加入，不让细胞
悬液冲破分层液界面，使其悬于分层液上方，细胞悬液和Ficoll的体积比为2:1。
4、以2000r/min离心20min后，不同细胞可依密度不同而分布于各位置上。
白
膜层即为淋巴细胞。
5、收集混浊的白膜层细胞即获得的淋巴细胞，用无钙、镁PBS离心洗涤，
1200r/min，5min, 洗涤2次。
6、弃上清，加入2-3ml无菌蒸馏水裂解红细胞，吹打细胞使均匀分散，作用20s
后加生理盐水稀释终止，在此可取少量细胞悬液，按稀释倍数计数。
再次离心洗涤细胞，1200r/min，5min,。
7、弃上清，将细胞用适量培养液（IMDM培养液含10%FBS）轻轻吹打成均匀分散
的细胞悬液，再根据实验需要分组培养。
注意事项：将细胞悬液加入淋巴细胞分离液上层时，力度不能太大，以免破坏分层。
收集白膜层细胞要小心，如果破坏分层会看不清楚，导致损失细胞。
用蒸馏水裂解时，切忌时间过长，否则会导致所有细胞裂解死亡。
淋巴细胞分离液说明书
Lonza Walkersville, Inc.biotechserv@Tech Service: 800-521-0390Document # INST-17-829-1 06/07Walkersville, MD 21793-0127 USA© 2007 Lonza Walkersville, Inc.Lymphocyte Separation MediumInstruction For Use17-829EIntroductionLymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.Protocol1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)should be used.Note: Always treat human and other primatesource material as potentially infectious and take safety precautions.2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-freePBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clearplastic centrifuge tube with a cap. For largevolumes use a similar ratio of diluted blood toLSM.3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.4. Remove plasma-PBS without disturbing theinterface.5. Collect the interface with a cannula and dilute to20 ml in serum-free medium, such as RPMI1640.6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.7. Discard supernatant fluid and resuspend pelletin 2-3 ml serum-free medium.8. Count nucleated cells on a hemocytometer orelectronic counting device.9. Lymphocytes will be concentrated at theinterface, along with some platelets andmonocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium anderythrocytes will pellet at the bottom of the tube.References1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cellsand granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and ofgranulocytes by combining centrifugation andsedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.Suppl. 97:77-89.2. Boyum, A. 1976. Isolation of lymphocytes,granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.3. Boyum, A. 1977. Separation of lymphocytes,lymphocyte subgroups and monocytes: areview. Lymphology. 10-2:71-6.4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.5. Boyum, A. et al. 2002. Separation of HumanLymphocytes from Citrated Blood by DensityGradient (NycoPrep) Centrifugation: MonocyteDepletion Depending upon Activation ofMembrane Potassium Channels. Scand. J.Immunol. 56-1:76-84.6. Koistinen, P. 1987. Human peripheral blood andbone marrow cell separation using densitygradient centrifugation on Lymphoprep andPercoll in haematological diseases. Scand. J.Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.Methods. 20:255-62.Product Use StatementTHESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.INST-17-829-1 06/07Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarksherein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.1。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。
2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。
3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。
4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。
5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。
6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。
7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。
8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。
9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。
10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。
二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。
2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。
3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。
4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。
三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。
3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。
4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。
5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。
6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。
7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。
8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。
四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。
3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。
4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。
总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。
正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。
SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验最佳条件的筛选
SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验最佳条件的筛选刘宸铄;刘芳;杨鸣琦【摘要】[目的]探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件.[方法]体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 mL1)、ConA质量浓度(5.0,7.5,10.0,12.5和15.0 μg/mL)、培养时间(36,48,60 h)3个因素进行组合设计培养T淋巴细胞,每个组合设3个重复,SRB显色后用酶标仪在492 nm波长处测量OD492值,计算刺激指数(Stimulation index,SI),筛选SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳条件.[结果]SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验的最佳条件为:淋巴细胞含量1×106 mL-1,ConA质量浓度5.0 μg/mL,培养时间48 h.[结论]确定了体外培养鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳ConA质量浓度、培养时间及淋巴细胞含量,证实用SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖结果可靠,是切实可行的淋巴细胞数量与活性检测方法.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(041)007【总页数】5页(P15-18,24)【关键词】鸡;外周血T淋巴细胞;细胞增殖;磺酰罗丹明B法【作者】刘宸铄;刘芳;杨鸣琦【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】R446.63;S858.31磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)法是美国国家癌症研究院(NCI)推荐的一种抗癌药物筛选方法，该方法发明于1990年，具有快速、经济、灵敏的特点[1]，其测量结果不受时间影响，如今已广泛应用于细胞数量与活性的检测。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。
确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。
2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。
将离心管中的血浆小心吸除。
3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。
这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。
4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。
分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。
5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。
此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。
6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。
7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。
再吸去上清液，保留沉淀。
8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。
需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。
因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。
此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。
总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。
准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。
该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。
一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。
离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。
细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。
辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。
脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。
二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。
同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。
2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。
置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。
3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。
倒掉上清液，留下沉淀。
重复该步骤2-3次。
洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。
离心1000r/min 20分钟。
此步骤可以使淋巴细胞充分分离。
4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。
然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。
淋巴细胞分离液
二、巨噬细胞吞噬功能测定
实验目的
熟悉小鼠腹腔巨噬细胞的制备方法。 了解巨噬细胞吞噬作用的原理和检测方法。
试剂:
1．淋巴细胞分离液（比重1.0770.001）。 2．肝素溶液 用生理盐水配制成500U/ml。 3．Hanks液。 4．2g/L台盼蓝染液。 5．标本 肝素抗凝的人外周静脉血。 6. 白细胞稀释液。
实验方法
1．室温下，将2ml抗凝血与2ml Hanks液混合
抗凝全血 缓冲液
实验方法
2．取分离液2ml置入灭菌离心管内，用毛细 吸管将稀释血液4ml沿管壁加入离心管，使 稀释血液重叠于淋巴细胞分离液上（分离液 与稀释血液体积比例为1：2）。
定时间内来不及测定，可将未加盐酸异丙醇的培 养板置4C保存。测定前取出，室温静置10min 后再加盐酸异丙醇。
实验讨论
1. 试讨论MTT比色法检测淋巴细胞转化的优缺点？ 2. MTT比色法容易因细菌污染导致实验失败，应采取
哪些措施可减少实验误差，使结果可信？
福建医科大学 陈敏
实验三 细胞吞噬率与 吞噬指数测定
实验原理
T淋巴细胞在有丝分裂原PHA等刺激后，细 胞的形态和代谢发生变化，发生一系列增殖反应， 如出现细胞体积增大、核染色质疏松、蛋白质和 核酸合成增加，并转化为淋巴母细胞。
试剂与器材
1. RPMIl640 培养液。 小牛血清10%、青霉素 100u/m1 、链霉素
100ug/m1，用无菌3% NaHCO3调pH至7.2～7.4。 2. 植物血凝素（PHA）。
吸取白细胞层涂片 染色镜检观察细胞形态
操作步骤
1．取肝素抗凝血0.2ml，注入预先加有1.8 ml RPMI 1640培养液的培养瓶内，同时加入PHA(500g/ml ) 0.1 ml，对照瓶内不加PHA。混匀后置37C、 5%CO2培养箱内孵育72h，期间每天旋转摇匀一 次。
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书主要用途：淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。
可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。
技术背景：全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。
为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。
产品内容：淋巴细胞分离液（200）毫升产品说明书1份产品特点：-密度变化率依照Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。
-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格检测标准：热源检测结果：＜0.5EU∕ml无菌检测结果：已检测应用人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。
这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血细胞及组织匀浆。
实验步骤实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。
然后进行下列操作。
（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。
1．准备无菌的锥形离心管2．加入淋巴细胞分离液3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。
3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。
（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g5．小心取出离心管，切记不要震动6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。
大鼠外周血淋巴细胞分离液
大鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期说明书修订日期：：2015.10.21Cat number ：KGA832Store at 4 for 12 months ℃For Research Use Only （科研专用）一、试剂盒组份名称 规格 A各种动物外周血淋巴细胞分离液 200ml B全血及组织稀释液（赠品） 200ml C 细胞洗涤液（赠品） 200ml注：本试剂内容中各单品可根据货号单独购买，客户可根据试剂使用情况自行选择购买。
适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞，无菌条件下所分离的淋巴细胞可用于细胞培养等。
本品仅供科研使用。
二、试剂盒原理本分离液为FICOLL 、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。
抗凝外周血可在分离液中分层。
离心时，在FICOLL 、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层，红细胞污染可忽略不计。
大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。
其他人及动物多重比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
三、试剂盒以外自备仪器和试剂可提供400g 离心力的水平转子离心机、15ml 玻璃离心管、吸管等。
四、试剂盒试剂盒使用注意事项使用注意事项1. 使用前，本分离液需复温至18-22℃。
为获得最佳的实验结果，最好在取血后2小时内进行试验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。
2. 实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用Ca 、Mg 离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。
本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗涤液不含Ca、Mg离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分，推荐使用。
3. 最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。
应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。
4. 当血液样本粘度过高或血样样本大于等于3ml时，最优稀释方法：将血液于18-22℃以250g离心10分钟，弃去血浆，补充添加全血及组织稀释液，添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍，混匀备用。
PBMC的分离
PBMC的分离物品准备：外周血来源的白细胞浓缩液、生理盐水、50ml注射器×1、20ml注射器×3、10ml注射器×2、50ml离心管×7、15ml离心管×4、淋巴细胞分离液分离步骤：1、将外周血来源的白细胞浓缩液用生理盐水1：1稀释，从离心管边缘轻轻加于淋巴细胞分离液上面（淋巴细胞分离液与外周血来源的白细胞浓缩液等体积），离心（2000r/min，20min，22℃），分离白膜层细胞即外周血单个核细胞（PBMC）。
2、用培养液洗涤5-6次（离心速度1500r 15min-1500r 15min-1000r10min-800r 10min-800r 5min），用含10%的胎牛血清的RPMI 1640液调整细胞浓度为2×106 /ml，加入6孔板，于37℃，5% CO2孵育箱培养2h，吸去悬浮的细胞，用温热的RPMI 1640培养液洗涤2遍，所得的贴壁细胞即DC前体细胞。
3、所吸去的悬浮细胞为淋巴细胞，用含10％的胎牛血清的RPMI 1640（含终浓度为800U/L的rhIL-2）重悬，计数并调整细胞密度为1×106/ml，置于75cm2培养瓶内，37℃，5% CO2孵育箱培养，隔天换含新鲜IL-2的RPMI 1640培养液维持细胞活力，待用。
注意事项：1、密度梯度离心时，加速度宜慢2、密度梯度离心时间不宜过长，对细胞损伤较大3、如分离后的细胞悬液中有较多红细胞，可使用红细胞裂解液，37℃裂解5min，注意裂解时间不宜过长，以免一项单核细胞活性4、稀释血和分离液的比例可以是1：1或2：1，最好达离心管的1/2-2/3，1/2最好，分层明显，即50ml的离心管只装到30ml5、吸取白膜层时，注意不要吸到分离液，可以先吸去血浆层6、注意淋巴细胞分离液和细胞培养液使用前都应水浴至室温7、离心后离心管中液体分为5层：血浆层、PBMC层、分离液层、粒细胞层、红细胞层。
和田黑鸡淋巴细胞的分离和总RNA提取
和田黑鸡淋巴细胞的分离和总RNA提取李玮;艾东旭;李莲瑞【摘要】探讨和田黑鸡淋巴细胞最佳分离条件和淋巴细胞总RNA提取方法,为和田黑鸡淋巴细胞的免疫学研究提供最为有效的实验材料.采用离心法分离鸡外周血淋巴细胞并检测淋巴细胞活力.利用Trizol法提取和田黑鸡的外周血淋巴细胞总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的RNA进行检测,并用核酸测定仪测定总RNA.结果表明;使用1;1比例的无Ca2+、Mg2+-Hank'S稀释液稀释抗凝血后,在室温、2 000 rpm/min、35 min的条件下离心分离所得的淋巴细胞效果最好.琼脂糖凝胶电泳结果显示出28S、18S和5.8S三条带,使用核酸测定仪测定的总RNA的OD260/280值为1.996,浓度为283 μg/ml,表明提取了高质量的总RNA,为开展后续的研究奠定了坚实的基础.%The experiment investigated the optimum separation conditions and the total RNA extraction method of lymphocyte, which provide the most effective experimental materials for the immunological study of lymphocytes in Hetian black chicken.Lymphocyte was separated by centrifugation and detected the cell activity.The total RNA was extracted from the peripheral blood lymphocytes by Trizol method.The results showed that the best effect of centrifugal separation was 1;1 ratio of Ca2+, Mg2+-Hank'S dilution of anticoagulant, room temperature, 2000 rpm/min, 35 min.Agarose gel electrophoresis showed three band of 28S, 18S and 5.8S,the OD260 / 280 value of Total RNA was 1.996 and the concentration was 283 μg/ml, which indicating that high quality total RNA was extracted, laying a solid foundation for the follow-up studies.【期刊名称】《塔里木大学学报》【年(卷),期】2016(028)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】和田黑鸡;淋巴细胞;总RNA【作者】李玮;艾东旭;李莲瑞【作者单位】塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔市 843300;塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔市 843300;塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔市 843300;新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆阿拉尔市 843300【正文语种】中文【中图分类】S826和田黑鸡，又称“尼雅黑鸡”或“洛浦黑鸡”，是和田一种古老、独特的优良肉蛋兼用型地方品种，具有抗逆抗病性强、耐粗饲、抗高温等特点[1]。
小鼠外周血淋巴细胞分离液
小鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期：2016.03.31 Cat number：KGA831Storage RT for2yearsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明小鼠淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，主要成分聚蔗糖（Ficoll）或葡聚糖与泛影酸葡甲胺或泛影酸钠，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。
二、试剂盒组份组份Cat:KGA831保存条件小鼠淋巴细胞分离液200ml室温，有效期两年。
样本稀释液（赠品）200ml清洗液（赠品）200ml三、试剂盒以外自备仪器和试剂离心机（最大离心力要求达到1200g）四、操作方法首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A：稀释后的血液样本量小于5ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血浆层。
第二层为环状乳白色淋巴细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。
鸡外周血淋巴细胞的分离和体外培养
2011 年第33 卷第11 期China Poultry Vol．33No．11．2011 研究简报鸡外周血淋巴细胞的分离和体外培养谢昆，蒋成砚，全舒舟，王冉（红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自661100 ）本试验探索了不同密度淋巴细胞分离液对鸡ConA，100 ml/L 的胎牛血清，100 μg/mL 青霉素和外周血淋巴细胞的分离效果，以及ConA 不同的浓100 μg/mL 链霉素的RPMI-1640 液悬浮，取一滴度和培养时间对鸡淋巴细胞的成活率的影响，研究细胞悬液计数，将细胞悬液稀释至5×106 个/mL。
结果为禽类淋巴细胞的分离及细胞因子的诱导培1.4 鸡外周血淋巴细胞的培养养研究奠定基础。
将稀释至5×106 个/mL 的细胞悬液，分装于1 材料与方法细胞培养瓶中， 5 CO2 培养箱中25 ℃分别培1.1 材料养8、12 、18 、24 h 后，取1 滴细胞悬液0.4 台盼蓝鸡购买于蒙自农贸市场。
取颈部静脉血液染色计数淋巴细胞活率。
20 mL 左右置于预先加入500 μL 肝素钠溶液 2 结果（10 mg/mL ?┑奈蘧 胄墓苤校 ≡缺赣谩?2.1 不同密度淋巴细胞分离液对鸡外周血淋巴1.2 试剂细胞的分离效果人淋巴细胞分离液（密度：1.077 ）购自上海恒通过比较密度分别为1.077 、1.085 、1.092 的淋信化学试剂公司；泛影葡糖胺购自蒙自县医院；刀巴细胞分离液的分离结果，发现 3 个密度的分离豆蛋白 A （ConA ）购自Sigma 公司；改良型液分层都明显，1.085 g/mL 的淋巴细胞分离液白RPMI-1640 购自赛默飞世尔生物化学制品（北膜层稍厚，1.092 g/mL 其次，1.077 g/mL 较薄。
京）有限公司；肝素钠购自国药集团化学试剂有限1.085 g/mL 淋巴细胞分离液可有效分离出鸡外周公司；优质新生牛血清购自中美合资兰州民海生血淋巴细胞（见表1）。
人外周血淋巴细胞分离管说明书
人外周血淋巴细胞分离管说明书【产品名称】产品名称：人外周血淋巴细胞分离管英文名称：Lymphocyte Separation Tube for Human Peripheral Blood【包装规格】货号产品描述规格7922112筛板分离管，单支规格为15ml20支/盒7922021筛板分离管，单支规格为50ml25支/盒【预期用途】用于从人外周抗凝全血中分离淋巴细胞。
【检测原理】本品采用密度梯度沉降法，根据细胞密度差异，借助分离液和离心，进行细胞分离纯化。
细胞梯度密度分离液产生一定程度的密度梯度，将抗凝全血倒入分离管。
离心后，红细胞、粒细胞沉于管底；PBMC（单个核细胞，包括淋巴细胞和单核细胞等）漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。
吸取分离液液面的细胞，就可从外周血中分离到淋巴细胞。
【检验方法】1.检查。
如图（A）所示。
取出分离管，观察筛板材料之上是否有游离的分离液，筛板下方是否有气泡。
如果有，请用离心机20℃，800g，离心1min。
2.倒入血液。
血液样品必须为抗凝全血，无需稀释。
如图（B）所示。
3.离心。
20℃，800g，15min。
设置较慢的加速与减速（如果共有十档且第十档为最高档，加速与减速应该调整到第三档）。
4.将部分血浆吸出后，直接将筛板上方剩余的少量血浆、PBMC细胞层和少量分离液直接倒入干净的离心管中。
如图（C）所示，PBMC层在血浆下面，分离液上面。
5.RPMI1640洗涤1-2次（20℃，250g，10min）。
用0.9%(W/V)生理盐水或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。
人外周血淋巴细胞分离管分离血液的过程【主要组成成分】本品为筛板管，主要组成成分是聚蔗糖、泛影酸及PP或PE材质筛板。
【储存条件及有效期】未开封2~30℃避光保存，有效期为2年。
【适用仪器】水平转子离心机。
【样本要求】本品要求样本为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
提取外周血淋巴细胞
/bbs/topic/791076?keywords=淋巴细胞分离淋巴细胞是许多实验最基本的技术，也是关键的技术之一。
现在大多数用的密度梯度离心法。
一般我用5ml抗凝血就可以得到pbmc大约4－5x106的细胞。
现在将我分离淋巴细胞的经验于大家共分享。
我的经验1，新鲜血（肝素抗凝20u/ml）＋1640（无血清）培养液按照1：1 稀释2. 在10ml玻璃试管中预先加入淋巴细胞分离液，使分离液：1640：新鲜血=1:1:1(最好用玻璃试管，分离液的量可以增加些，我的经验是1：1；1足够了！！）3.小心的将稀释后的血液加到分离液的上面，开始的加入一定一定要慢，要尽量的贴近液面加。
4. 离心 .转速：1500/分温度20c －28c时间：20分钟no break（就是不要刹车，这个很重要，不然由于急剧的减速度，会把已经分离的单个核细胞层又弄混了，加速度也最好不要太大)5。
取出试管，看看是不是分为好几层？？顺次为血浆---单个核细胞层－－分离液－－红细胞6.用毛吸管吸取上面的血浆层，注意无菌，保存好，留着有用！！！！7.用毛吸管，吸出单个核细胞层（白白的那一层），重悬于（2—5倍体积的不完全培养液中）.你会问：混在其中的淋巴细胞分离液怎么办？别着急。
还有办法的。
8 离心。
转速：2000－2300/分（转速一定要提高，不然淋巴细胞很难与分离液分开！！)时间：10分钟温度：4c9震荡后，用培养液重悬至1ml（为什么？嘿嘿，马上告诉你）10.细胞计数＋洗涤细胞。
刚才不是重悬到1ml吗？取一些放于96孔板中留着计数用（100ul足够了），然后细胞悬液在离心机上离心，在离心的同时，计数你得到的pbmc吧。
这样是不是很节省时间？？11.计数细胞：计数细胞用的细胞计数板的结构是四个角有4个大正方形，每个正方形有16个小正方形.a. 取96板中的细胞悬液10ul，用3％冰醋酸稀释到原来的4倍（这样既能溶解红细胞，又保证细胞浓度不是很大，方便计数）b. 从上面的稀释悬液中取9ul于细胞计数板上，开始计数细胞c.计数原则：对于压线的细胞，只说左边的和上边的。
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鸡外周血淋巴细胞分离液说明书
【产品规格】200ml/Kit 【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
名称
产品编号
规格200ml 200ml 200ml 1份
A B C D
鸡外周血淋巴细胞分离液样本稀释液（赠品）清洗液（赠品）2010C11192010X1118说明书
【实验前准备】A ．适用仪器
最大离心力可达1200g 的水平转子离心机B ．耗材
产品名称产品货号339650339651339652339653
产地15ml 离心管散装美国NUNC 15ml 离心管架装美国NUNC 美国NUNC 美国NUNC
50ml 离心管散装50ml 离心管架装无菌胶头滴管或塑料滴管【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液（产品编号：2010C1119）混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：
情况A ：稀释后的血液样本量小于5ml 时，实验方法如下：
1.取一支15ml 离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于
3ml ）。
2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g ，离心20-30min （注：
根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血浆层。
第二层为环状乳白色淋巴
细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中
加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：
1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。
2.将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上，550-650g（最大离心力可至1000g），
离心20-30min。
（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。
加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
3.剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤9。
【注意事项】
1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
为获得最佳的实验结果，最
好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。
血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离
心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒
细胞数量增加。
4.吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
5.如所实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨生物以寻求技术支持帮助。
【储存条件及有效期】
18-25℃保存，有效期2年。
本品易感染细菌，需无菌条件操作。
无菌条件下操作，启
封后置常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
红细胞白细胞血小板
（4.0-10.0）×109
含量（个/L）（4.0-5.5）×1012中性粒细胞淋巴细胞单核细胞（1.0-3.0）×1011
50%-70%20%-40%3%-8%
【相关实验技术方案】
1.所获得淋巴细胞的培养技术。
2.所获得淋巴细胞的核酸提取技术。
3.所获得淋巴细胞的鉴定方法
A.流式细胞技术
B.免疫组化技术
C.原位杂交技术
D.PCR技术
注：上述技术方案详情请登陆上海研谨生物公司官网搜索细胞分离、
纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册”，并在说明书项目栏下下载使用。
【可能存在的问题及解决方法】
1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
出现情况出现原因建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层离心后目的细胞存在于分离液中
离心后白环层弥散转速过小或离心时间过短
转速过大或离心时间过长
细胞密度过大
适当增减转速
调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小
2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。
不同地
区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。
建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
3.本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于400g，最大不得大于1200g。
离心时间以20-30min为准。