柱后衍生化高效液相色谱法测定妥布霉素滴眼液的含量
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摘 要 : 目的 建 立 高 效 液 相 色 谱 一 后 衍 生 法 测 定 硫 酸 妥 布 霉 素 含 量 的 方 法 。 方 法 柱 色 谱 柱 为W aesS n i tr u F r C 。 e
( .mm x mm , 5 46 10 5 m) ;流 动 相 为 含 戊 烷 磺 酸 钠 和 冰 醋 酸 的 硫 酸 钠 溶 液 ;柱 温 3 ℃ , 流 速 12 / n 0 .mLmi 。柱 后 衍 生 化 试 液 为
wa 0 s ℃ a o r t f1 mL mi .OP s l t n wa s d f r o tc l mn d r a ia i n o l e a o r t f 3 t f w eo .2 al a / n A o u i su e s. o u e i t t n i 。 t f w eo o o p v z o n al a
九 m 4 n .R s l T ecl rt nc re s iernte a g f .1 2 8 / .= .9 9 . h v rg e 4 0 m) eut s h ai a o uv n a n eo 6 .2 mgL r 0 9 9 T e ea e b i wa l i hr 4 5 a
Ab ta t Ob t e T sa l h ameh du igHP C wi ot ou eiaiain fr eet g sr c jci oetbi to s L t p s— lmn d r t t o tci e v s n h c v z o d n tba cnsl t do s eh d A Wl r S n i 。 ou (. mmx mm, g wa sd a dte bl o rmy i f e rp .M t o s a s u Fr C,c lmn4 6 u a t e e 0 1 5 5 m) s e ,n i u h mo e
0 mL mi .Th mp rtr f o tc lmn ra t nwa e t 0 d tce yf o ec n ed tco ( e 6 n .5 / n et eau eo s—ou ci sst ℃, ee tdb u rs e c ee tr 九 x3 0 m, e p e o a6 l
rc v r(= ) s 9 %. n ls n T eme o rsne i s d o dg o c rc ' r rcs n eo eyn 9wa .5 Co cu i h t dpeetdi t s t ys we o da ua vmoepei o , 9 o h n h u h c i
72 7
柱 后 衍 生 化 高 效 液 相色 谱 法 测 定 妥 布 霉 素 滴 眼 液 的含 量 何 丹 等
结构 相似 的杂质 [,其 中妥布 霉 素与 卡那 霉素 B的唯 z 】
一
1 仪 器与试 剂
不 同之 处 在于 其 3位脱 氧 [,见 图 l ’ 3 ] 。本 文 建 立 的
WaesAl a c 6 5 效液 相 色 谱 仪( 括 柱 tr l n e2 9 高 i 包 后衍 生装置1 ;Waes2 7 荧 光 检 测 器 ;MiiQ tr 4 5 l.
匀 ,即得浓 度为41~ 22 mgL .5 6 .8 / 的系 列对照 品溶 液 。 按上 述色 谱条 件 测定 ,以峰 面积A对 浓 度C 行 线性 进 回归 ,得 回归方程 为 :
行 含 量测 定【,但 微 生物效 价 测定 法不 能排 除产 品中 】 理 化 性 质 与 妥 布 霉 素 相 近 的其 他 氨 基 糖 苷 类 杂质 的
干 扰 。妥 布霉 素 中可 能存 在新 霉胺 和 卡那 霉素 B 两种
抗 菌 作 用 。 因其 无 紫 外 吸 收 , 美 国药 典 3 版采 用 柱 1
前 衍 生 化 高效 液 相 色 谱 法 测 定 含 量 ,但 操 作繁 琐 ,
影 响 因 素 多 , 不 易 控 制 , 衍 生 化 试 剂 易 污 染 色 谱
收 稿 日期 :2 0 —22 0 9 1—5
作者简介 :何丹 ,女,生于 17 年 ,硕 士,讲师 。E mali otr 6 . m 97 — i l c @1 3c :d o o
空 白辅 料和 杂质对 妥布霉 素 的测定无 干扰 。
2 线性关系考察 . 3 精 密 称 取 妥 布 霉 素对 照 品00 0 6 ,置 1 0 .2 7 g 0 mL
量瓶 中 ,加水 溶 解 并 稀释 至 刻 度 ,摇 匀 ,作 为对 照 品储 备液 。精 密量 取对 照 品储备 液 1 .、5 .、 、25 、75
邻 苯二 甲醛溶液 ,流速05 / n .mL mi ,衍 生化反 应温度6  ̄ 0C,荧光激 发波长3 0 m,发射 波长4 0 m。结果 硫 酸妥布 霉素在 6n 4n
41~ 22 mgL 度 范 围 内线 性 关 系 良好 (=09 9 ) 平 均 回 收 率 = ) 95 。结 论 .5 6 .8 /浓 r . 9, 9 9为9 . %
性 好 ,可 用 于 硫 酸 妥 布 霉 素 的定 量 分析 。
该 方 法 简 便 快 速 ,结 果 准 确 可 靠 ,重 复
关键词 :妥布霉素 ;高效液相色谱法 ;柱后衍 生;荧光检测 中图分类号 :R 7 . 9 81 文献标识码 :A
De e m i to ft br m ycn s f t o PLC t r na i n o o a i ula edr psby H
smp i i n e r d cb l y a e o i l t a d r p o u i i t sar c mme d b eo t n f r u l y c n r l f o r my i u f t r p . cy i n a l p i ai o to t b a cn s l ed o s o o q t o a Ke r s T b a c n HP C; o tc l mn d rv t ai n F u r s e c e e t n ywo d o r my i ; L P s— o u e i a i t ; l o e c n ed t ci z o o
硫 酸妥 布 霉 素( b a cn sl t) t rmy i uf e为氨 基 糖 苷类 o a
广 谱 抗 生 素 ,对 革 兰 阳性 菌 和 阴性 菌 均 具 有 良好 的
柱 。英 国药 典2 0 版采 用HP C联用 电化学 检测 器进 08 L
行 分 析 。 中 国药 典2 0 年 版 则采 用微 生物 检 定 法进 05
Acd mi超纯 水系统 。 ae c 妥 布 霉 素 滴 眼 液 ( 号 : 0 E0 J 0 F 4 ; 批 9 8 ; 9 2 J
B
高效 液 相色 谱. 后衍 生法 是一 种 简便 、快 捷 的分 析 柱
方 法 ,较 柱 前衍 生 具 有 更好 的稳 定性 生 且 妥布 霉 素
与卡那 霉素B、新霉胺 能得 到 良好 分离 。
0 D0 J 国爱 尔 康 眼药 厂 ) 9 7美 ,妥布 霉 素 对 照 品( 国 中
药 品 生物 制 品检 定 所 ,批 号 :1 0 2 . 0 4 2 ;卡 3 5 72 0 0 )
水稀释 至刻度 ,摇 匀 ,精密量 取5 mL,置1 0 量瓶 0 mL 中 ,用 水 稀释 至 刻 度 ,摇 匀 ,按 上述 色 谱 条件 进 样
1 、1 mL,置 5 mL 瓶 中 ,加水 稀 释 至 刻度 ,摇 0 5 0 量
21 色 谱条件 .
色谱 柱 为WaesS n i 46 tr u Fr C ( .mmx 5 mm, e 0 1
5 m) u ;流 动 相 为 含 戊 烷 磺 酸 钠 和 冰 醋 酸 的硫 酸 钠 溶 液㈣( 无 水硫 酸 钠 2 .g 取 84 ,加 水 1 0 mL 解 后 , 00 溶 加 戊烷 磺 酸 钠26 和冰 醋 酸 10 .g . mL,振 摇使 溶 解 ) ; 柱 温3 ℃ ;流 速 1 mL mi 。衍 生化 试 液 [ 1 硼 0 。 / n 2 5 :取 — 6 酸 93 S 氢 氧 化 钠 4 7 , 加 水 1 0 mL 解 后 , 用 .g W .g 00 溶 氢氧化钠 或硼酸调节p H值 至 1 . , 加 聚 氧 乙烯 月 00 桂 醚 10 、2 巯 基 乙 醇2 和邻 苯二 甲醛 乙醇 溶 液 .g 一 mL r.— 1 )O ,振摇 使溶解 ;流速05 / n 08 o1mL . mLmi;衍 生 化反应 温度 为6  ̄ 0C;荧 光检测器 激发 波长3 0 m,发 6n
1 g ,记录色 谱 图 ,见 图2 0L 。结果 表 明专属 性 良好 ,
那 霉素 B 照 品( 国药 品生 物 制 品检 定 所 ,批 号 : 对 中 3 5 82 0 0 ) 0 4 .0 5 1;新霉胺 对 照 品( 中国药 品生物 制 品检 定 所 ,批 号 :3 4 2 0 0 ) 0 1 .0 3 7 ;水 为超 纯水 ;其他 试 1 剂均 为分析 纯 。 2 方 法 与结果
中国抗 生素 杂志2 1 年1 月第3 卷第1 期 00 0 5 0
7l 7
文 章编 号 : 10 —6 92 1)00 7 —3 0 18 8 (00 1—7 10
柱 后衍生化高效液相色谱法测定妥布霉素滴 眼液 的含量
何 丹 -杨 林
( 1重庆 医科 大学药学院,重庆 市药物工程研 究中心,重庆 市生物化学与分 子药理 学重点实验 室,重庆 4 0 1 006 2 重庆 市药品检验所 ,重庆 4 0 1) 0 0 5
wih po t c l m n d r va i to t s— o u e i tza i n
HeDa a n ndYa g Li n n
( C o g ig ei l ies yC o g igD u n ier g e t , h n qn e aoa r f ic e s y 1 h n qn dc vri , h n qn rgE gn e n ne C o g igK yL b rt yo ohmir&Moeua M a Un t i C r o B t l l c r P amaoo yC o g ig4 0 ; h n qn ntuefr u o t lC o g ig4 0 ) h r clg hn qn 0 0 2 o g ig Istt o gC nr , h n qn 0 0 1 C 6 i Dr o 1 5
A
H2 、 N 1
C
H
N H2
H
0 H
、
NH2
H. > o<
0H HO, OH
A: 妥布霉素; 卡那霉素B; 新霉胺 B: c:
图 l 妥 布 霉 素 及其 主要 杂 质 的结 构
F g 1 S r c r so b a cn a dc if mp rt s i . tu t e f o r my i n h e u i e u t i i
p ae s o im l t slt n(o ti e t eufn t du sla dgail ct c )c lmnt ea r h s du s f e oui c na p na sl a s i wa s ua o n n o e o m t n l a aei ai . ou mp rt e a c
( .mm x mm , 5 46 10 5 m) ;流 动 相 为 含 戊 烷 磺 酸 钠 和 冰 醋 酸 的 硫 酸 钠 溶 液 ;柱 温 3 ℃ , 流 速 12 / n 0 .mLmi 。柱 后 衍 生 化 试 液 为
wa 0 s ℃ a o r t f1 mL mi .OP s l t n wa s d f r o tc l mn d r a ia i n o l e a o r t f 3 t f w eo .2 al a / n A o u i su e s. o u e i t t n i 。 t f w eo o o p v z o n al a
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柱 后 衍 生 化 高 效 液 相色 谱 法 测 定 妥 布 霉 素 滴 眼 液 的含 量 何 丹 等
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不 同之 处 在于 其 3位脱 氧 [,见 图 l ’ 3 ] 。本 文 建 立 的
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行 含 量测 定【,但 微 生物效 价 测定 法不 能排 除产 品中 】 理 化 性 质 与 妥 布 霉 素 相 近 的其 他 氨 基 糖 苷 类 杂质 的
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前 衍 生 化 高效 液 相 色 谱 法 测 定 含 量 ,但 操 作繁 琐 ,
影 响 因 素 多 , 不 易 控 制 , 衍 生 化 试 剂 易 污 染 色 谱
收 稿 日期 :2 0 —22 0 9 1—5
作者简介 :何丹 ,女,生于 17 年 ,硕 士,讲师 。E mali otr 6 . m 97 — i l c @1 3c :d o o
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2 线性关系考察 . 3 精 密 称 取 妥 布 霉 素对 照 品00 0 6 ,置 1 0 .2 7 g 0 mL
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关键词 :妥布霉素 ;高效液相色谱法 ;柱后衍 生;荧光检测 中图分类号 :R 7 . 9 81 文献标识码 :A
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高效 液 相色 谱. 后衍 生法 是一 种 简便 、快 捷 的分 析 柱
方 法 ,较 柱 前衍 生 具 有 更好 的稳 定性 生 且 妥布 霉 素
与卡那 霉素B、新霉胺 能得 到 良好 分离 。
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水稀释 至刻度 ,摇 匀 ,精密量 取5 mL,置1 0 量瓶 0 mL 中 ,用 水 稀释 至 刻 度 ,摇 匀 ,按 上述 色 谱 条件 进 样
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色谱 柱 为WaesS n i 46 tr u Fr C ( .mmx 5 mm, e 0 1
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中国抗 生素 杂志2 1 年1 月第3 卷第1 期 00 0 5 0
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文 章编 号 : 10 —6 92 1)00 7 —3 0 18 8 (00 1—7 10
柱 后衍生化高效液相色谱法测定妥布霉素滴 眼液 的含量
何 丹 -杨 林
( 1重庆 医科 大学药学院,重庆 市药物工程研 究中心,重庆 市生物化学与分 子药理 学重点实验 室,重庆 4 0 1 006 2 重庆 市药品检验所 ,重庆 4 0 1) 0 0 5
wih po t c l m n d r va i to t s— o u e i tza i n
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A
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C
H
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A: 妥布霉素; 卡那霉素B; 新霉胺 B: c:
图 l 妥 布 霉 素 及其 主要 杂 质 的结 构
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