分析方法验证方案

异烟肼含量测定分析方法验证方案验证原因：验证类型：

新项目验证再验证

其它

预验证

回顾性验证转移验证

方法描述：

本分析方法为中国药典2010版二部方法。为确保其检测结果准确，对该分析方法的专属性、精密度（系统精密度、方法精密度、中间精密度）、线性和范围、准确度、耐用性进行评价。

验证依据：

中国药典2010年版分析方法（295页）

验证时间：

2010年07月09日～2010年07月10日

验证项目组成员及职责：

a)人员培训：

b)仪器设备、标准品和试剂：

仪器设备

标准品和试剂

c)样品

色谱条件

色谱条件

色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm ，内径：4.6mm ，填料 C18 ，填料粒度：5µm 检测波长：262nm，带宽30

柱温：25℃

进样量：20µl

流速：1.0ml/min

流动相A：0.02mol/l磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH至6.0），流动相B：甲醇

A:B=85:15

停止时间：12min

1.系统精密度

1.1.溶液配制

系统精密度溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。

1.2验证过程及结果

系统精密度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保留时间。

可接受标准：异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保留时间RSD≤2.0%。

结论：

2.重现性试验（方法精密度）

2.1.1.对照溶液：取异烟肼工作标准品10mg，精密称量，置100ml容量瓶中，用水溶解

并稀释至刻度。

2.1.2.方法精密度溶液：取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中，精密称定，用水溶解并

稀释至刻度。用此方法配置同一批号的样品溶液6份。

2.2.验证程序及结果

工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。记录异烟肼峰面积，计算样品含量。

可接受标准：异烟肼含量的RSD≤2.0%。

结论：

3.线性和范围

3.1.1.a供试品溶液：取异烟肼50mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释

至刻度，混匀，即得。

3.1.2.线性点溶液：精密移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中，用

水稀释至刻度，得到浓度约为50ug/ml（d供试品溶液）、100ug/ml（c供试品溶液）、250ug/ml（b供试品溶液）、500ug/ml （a供试品溶液）的线性点溶液，再精密移取1ml b供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为2.5ug/ml （e供试品溶液）。

3.2.验证程序及结果

按色谱条件分别对线性点溶液进行分析，每个溶液进样1次。以浓度为X轴，主峰峰面积平均值为Y轴，画出线性图，求出回归方程，计算线性相关系数R。

可接受标准：R≥0.999

结论：

4.准确度

4.1.1.对照溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻

度，混匀，即得。

4.1.2.准确度溶液：以对照溶液浓度为100%，配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。

即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。每个浓度的准确度溶液配制3份。

4.2.验证程序及结果

按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析，每个溶液各进2针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。

可接受标准：该定量方法的回收率应为98.0%～102.0%。回收率 RSD≤2.0%。

结论：

5.耐用性

5.1.1.混合溶液：精密称取10mg异烟酸和10mg异烟肼样品置100ml容量瓶中，用水溶

解并稀释至刻度，混匀，即得。

5.2.验证过程及结果

按下列条件改变方法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。计算相对保留时间RRT偏差绝对值。

a.改变柱温为23℃和27℃

b.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。

c.改变0.02mol/l磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH至6.0)与甲醇配比为87:13和83:17。

d.选用同一填料的两个不同色谱柱比较

可接受标准：理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间。分离度R＞1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20％。

结论：

验证结论：验证结果见表

偏差及处理：

分析方法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。再验证

再验证周期为3年。