实验室简介

下次实验内容：
革兰氏染色 细胞大小测定
四、步骤
1 涂片： 载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均
匀的薄层 2 干燥： 3 固定：加热固定 4 染色：结晶紫染1min或蕃红染2-3min 5 水洗： 6 干燥： 7 镜检：低倍镜观察以确定目标和范围，再
换用油镜观察绘图。
油镜使用主要步骤
▲观察前准备：显微镜的准备和调试视野明亮 ▲低倍镜观察 ▲高倍镜观察（此步可以省略） ▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后
实验室简介
1. 实验守则 2. 安全制度 3. 赔偿制度 4. 实验室规则 5. 显微镜规则
实验一 油镜的使用
1. 目的 了解普通光学显微镜原理及构造。 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使
用方法、保养常识 。★ 用油镜观察细菌基本形态。
2. 显微镜构造及其使用原理
调焦 ▲显微镜油镜头的清洗和归位（擦油镜试剂清洗） 注意！！！ —显微镜调焦方法
实验报告
实验报告集P 1-2 细菌形态示意图绘图要求： ① 选择形态典型的部分细菌细胞绘图。 ② 仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大
小比例应适宜，且形态上应有所区分。 ③ 细菌与视野相对大小应符合实际，绘空心图。 注明菌名、放大倍数。
实验三 简单染色法
一、目的要求 1学习制染色片技术，学习简单染色的原
理。 2 进一步掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色方法。 4 巩固显微镜油镜的使用方法。
二、基本原理
细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下 表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染 色处理，使细胞着色，便于观察。
NA＝η×sinα/2
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（3）分辨率：是指显微镜能辨别物体两 点之间的最小距离。用D来表示，公式 （Abbe公式）如下：
λ D＝
2×NA ＝λ/ 2( η·sin α/2)
2.3．油镜使用注意事项
由于物镜放大倍数与其焦点距离长度相 反，即物镜放大倍数越高，其工作距离 越短。一般油镜的工作距离在0.15mm左 右，所以用油镜观察标本时应特别小心。 同时，还要避免压碎玻片，甚至损坏油 镜镜头。
简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细 菌形态、大小、及排列方式。
染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体 并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色 能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用 何种方法均应维持细胞原有形态。
三、实验材料
四联球菌（48 h 培养）斜面菌种 枯草杆菌（10 h 培养）斜面菌种
降低分辨率的措施
（1）降低λ，选择波长较短的光源。 （2）增大介质的折射率。 （3）增大物镜的镜口角。 （4）增加明暗反差，使标本的明暗对比增强。
实验二 微生物学实验的无菌操作
一、目的要求 1．了解无菌操作的意义。 2．熟悉并掌握无菌操作的要点和步骤。
无菌操作：不让除我们接种的微生物以外其它微生物 侵入的技术。
2.1构造的复习
2.2 光学显微镜的原理
（1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。 目镜：10X，13X，15X，16X
低倍镜：10X 物镜： 高倍镜：40X
油镜：100X
（2）数值孔径（简写为NA）： 是物镜前透镜与被检物体之间介质的
折射率η和镜口角α半数的正弦的乘积， 可用公式表示：