盐析法分离蛋白质

沉淀分类
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沉淀法分类
盐析法 有机溶剂沉淀法 选择性变性沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 高价金属离子沉淀法
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蛋白质的理化性质的回顾
活性蛋白 非活性蛋白 理化性质 溶解度 提取方法
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2. 盐析沉淀
盐析沉淀步骤 加沉淀剂方式 陈化条件 脱盐处理
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蛋白质起始浓度的影响
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二次盐析
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盐析操作
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3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可 先于pH 3.0左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白 质(pI=3．O)。工业生产胰岛素(pI＝5.3)时，先调pH至8.0 除去碱性蛋白质，再调pH至3.0除去酸性蛋白质(同时加入一 定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。
盐种类 盐浓度 温度 pH值
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无机盐种类的影响
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃）
(○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4;
(■)柠檬酸三钠
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温度的影响
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pH对β的影响
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盐析沉淀基础
Cohn方程式logS=β-KsI
Ks盐析
β盐析
二次盐析
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图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图
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不同蛋白质的溶解度曲线
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蛋白质的盐析分布曲线
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溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)
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盐析影响因素
对β影响 对Ks影响
第4章 盐析法
知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机
溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金 属离子沉淀法。
重点：上述几种沉淀方法的概念、原理
及其适用范围；盐析法的影响因素对沉 淀效果的影响，并能根据实际情况予以 灵活应用和选择。
难点：常用沉淀方法的灵活运用。
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1. 沉淀法概述
沉淀定义
沉淀特点
应用范围
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盐析机理示意图
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盐析的机理
①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶 解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度， 破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降 ；
②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；
③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水 分子的极化，使水活度降低。
②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调pH 4.0后出现含碱 性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解，加入20～40%饱和度的硫 酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得 较纯的碱性磷酸酯酶。
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4 有机溶剂沉淀原理图
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有机溶剂沉淀实例
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5 选择性热变性沉淀实例
酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氢二钠溶液， 37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集 上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷 却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳 定性较高的醇脱氢酶。
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6 其他沉淀法
（1）非离子型聚合物沉淀法 （2）聚电解质沉淀法 （3）金属离子沉淀法 （4）亲和沉淀
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7 凝聚和絮凝技术
凝聚技术 絮凝技术
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第五章 沉淀法课后练习
1. 名词解释： 盐析法，有机溶剂沉淀法，选择性变性沉淀 法，等电点沉淀法，盐溶，盐析，β盐析， Ks盐析，二次盐析
2. 盐析的机理 3. 有机溶剂沉淀的机理 4. 二次盐析如何实现？
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