最新厌氧型细菌及检验
临床检验主管技师 微生物检验 第十七章 厌氧性细菌及检验
第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。
G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。
致病性属条件致病性的内源性感染。
厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。
据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。
又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。
（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。
（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。
一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。
厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。
内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。
感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。
感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。
厌氧菌概述——标本的采集与送检重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。
适宜标本血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等不宜标本鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
微生物厌氧性细菌
• 致病物质——破伤风痉挛毒素（外毒素）
为神经毒素，毒性强（iug），与脊髓前角运动细胞及脑干细胞 有高度的亲和力
破伤风痉挛毒素可与中枢神经抑制性突触前膜的神经节苷脂结 合，阻断抑制性介质的释放，导致神经持续兴奋，骨骼肌强直性痉 挛，肌张力↑
化，组织水肿、坏死等 – 机体免疫功能下降或菌群失调 – 寄居部位改变 – 细菌协同作用
2024/6/21
• 感染特征
– 内源性感染，部位广泛，多呈慢性过程 – 无特定病型，多为化脓性感染（局部、全身
） – 分泌物粘稠，有色，恶臭 – 常用抗生素无效 – 普通培养不长
2024/6/21
• 所致疾病——遍布全身各组织器官
2024/6/21
2024/6/21
2024/6/21
第二节 无芽胞厌氧菌
• 临床常见菌
G+ 消化链球菌属、消化球菌属 – 球菌
G- 韦荣菌属
– 杆菌
G+ 丙酸杆菌、双岐杆菌、真杆菌、乳杆菌 G- 类杆菌、梭杆菌
2024/6/21
• 致病条件（厌氧菌感染因素）
– 组织的氧化还原电势降低（Eh） 血管损伤，肿瘤压迫，烧伤，动脉硬
第十三章 厌氧性细菌
概述 厌氧菌——是一群必须在无氧环境下。才能生长繁 殖的细菌
厌氧性芽胞梭菌（外源性感染——致病菌） – 根据芽胞有无
无芽胞厌氧菌（内源性感染——条件致病菌） – 根据耐氧性
• 专性厌氧菌（对氧极度敏感，对氧中度敏感） • 中度厌氧菌 • 微需氧菌 • 耐氧菌
2024/6/21
• 厌氧菌的分布
▪ 培养特性
厌氧菌及检验
二、厌氧菌感染
（一）厌氧菌在正常人体的分布
厌氧菌与需氧菌一起组成了人体的 正常菌群。人体许多部位厌氧菌在种类 和数量上远多于需氧菌，如在结肠中 99%的细菌都是厌氧菌。 临床厌氧菌感染中，由正常菌群的 无芽胞厌氧菌的感染最为多见。
常见厌氧菌在正常人体的分布
主要菌属
芽胞厌氧菌 梭菌属 无芽胞厌氧菌 革兰阳性杆菌 丙酸杆菌属 双歧杆菌属 乳杆菌属 优杆菌属 放线菌属 革兰阴性杆菌 类杆菌属 普雷沃菌属 紫单胞菌属 梭杆菌属 革兰阳性球菌 消化球菌属 消化链球菌属 革兰阴性球菌 韦荣菌属 0 ＋ ＋ ＋ ＋－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋－ ＋－ ＋＋ ＋＋ 0 0 0 0 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋－ ＋ ＋ ＋ ＋＋ 0 0 ＋＋ 0 ＋ 0 0 ＋－ ＋－ ＋＝ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋－ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋－ 0 ＋－ 0 0 ＋－ ＋－ ＋＋ ＋－ 0 0 0 ＋＋ ＋－ ＋－
5. 厌氧袋运送法
6. 棉拭运送法 （略） 应在20~30min内处理完毕，最迟 不超过2h，防止标本中兼性厌氧菌过 度生长，抑制厌氧菌的生长。如不能 及时接种，应将标本保存于室温（因 冷藏对厌氧菌有害气味 直接涂片 染色镜检
分离培养
（接种非选择性及选择性培养基）
（二）厌氧菌感染的原因 1. 局部组织的氧化还原电势降低 如血 管损伤、烧伤、动脉硬化、肿瘤压迫、组织 坏死等，可造成局部组织的缺血、缺氧，使 Eｈ降低；此外，大面积外伤伴有需氧菌感 染消耗了氧，为厌氧菌感染提供了条件。 2 . 机体免疫功能下降 如接受免疫抑制 剂、放疗或化疗的患者；糖尿病、慢性肝、 肾疾病病人及老人、婴幼儿、早产儿等，因 免疫力下降易併发厌氧菌感染。
临床常见细菌 厌氧菌
（二）微生物学检验
1.标本 ➢ 避免正常厌氧菌群的污染和接触氧气 2.鉴定 ➢ 涂片镜检:G+大杆菌，有荚膜，白细胞少，并伴有杂
菌，有初步诊断价值。 ➢ 分离培养：厌氧培养，如有菌生长，取可疑菌落进
行形态学和生化反应鉴定。
（三）临床意义
➢ 感染途径：创伤和消化道 ➢ 感染条件：厌氧微环境 ➢ 致病物质：外毒素、多种侵袭性酶和荚膜 ➢ 所致疾病：气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎
二、产气荚膜梭菌 （一）生物学特性
1.形态与染色 G+粗大杆菌，无鞭毛，可形成明显的荚膜。芽胞
直径小于菌体宽度，位于中央或近极端。
2.培养特性 生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好
血琼脂平板：双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应（α毒素） 牛奶培养基：“汹涌发酵”
汹涌发酵
双层溶血环
卵黄琼脂平板Nagler反应
第二节 无芽胞厌氧杆菌
一、 脆弱类杆菌
占临床厌氧菌分离株的25%，居临床厌氧菌分离 株的首位。在一定条件下可引起人体内源性感 染，如脑脓肿、腹膜炎、阑尾炎、女性生殖系 统及盆腔感染。
脆弱拟杆菌的两极浓染及菌体的多形性
二、产黑色素普雷沃菌
条件致病菌，可引起内源性感染，常与其他厌氧 菌、需氧菌或兼性厌氧菌引起混合感染。是引起口 腔与牙周感染、肺部感染及女性生殖系统感染常见 菌之一。
（三）临床意义
➢ 感染途径：创伤和消化道 ➢ 感染条件：厌氧微环境 ➢ 致病物质：肉毒毒素（毒性最强） ➢ 所致疾病：肉毒素中毒
防治原则： ➢ 加强食品管理和监督 ➢ 食品进食前加热煮沸 ➢ 治疗应尽早注射多价抗血清
四、艰难梭菌
➢ 革兰阳性粗大杆菌，有些 菌株有周身鞭毛，芽胞位 于菌体次极端，
微生物学检验厌氧性细菌及检验
莫氏立克次体 鼠蚤 地方性斑疹伤寒
恙虫病立克次体 恙螨
恙虫病
普氏立克次体
所致疾病：流行性斑疹伤寒
传染源：病人
传播媒介：人虱
人虱
传播方式：
人
人
人虱
流行性斑疹伤寒传播方式
莫氏立克次体
所致疾病：地方性斑疹伤寒
传染源：鼠等
传播媒介：鼠蚤
鼠
传播方式：
鼠蚤 鼠虱
鼠蚤
人
鼠
地方性斑疹伤寒传播方式
免疫性
以细胞免疫为主 病后免疫力牢固
艰难梭菌
革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无 荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性 粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值
革兰阴性无芽孢厌氧菌
类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
测验7
菌体细长，两端尖细，中间膨大，菌体 中常有紫色颗粒（革兰染色），可能的 细菌是 A 产气荚膜梭菌 B 具核梭杆菌 C 放线菌 D 双歧杆菌 E 脆弱类杆菌
Nagler反应
在卵黄琼脂平上，产气荚膜梭菌产生的 卵磷脂酶分解卵磷脂，菌落周围出现白 色混浊圈；若培养基中加入相应抗体， 则不出现混浊。此现象成为Nagler反应。
破伤风芽孢梭菌－－检查方法
显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
厌氧型细菌及检验共50页文档
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
END
厌氧型细菌及检验
Hale Waihona Puke •6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
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7、心急吃不了热汤圆。
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8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
•
9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
•
10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
17章 厌氧性细菌检验
微生物学检验
• 分离培养 • PCR毒素鉴定 • 质谱方法 • VIDAS检测细菌AB毒素
第三节 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
第三节 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
临床常见革兰阴性无芽胞厌氧杆菌（non-spore-forming anaerobic gram-negative bacilli）的有
肉毒梭菌
• 芽胞椭圆形，粗于菌体，位于次极端，呈汤匙状或网球拍状 • 神经毒素分A～G 7个型，各型毒素只能被同型抗毒素中和 • 肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏
致病性
• 致病物质 – 肉毒毒素 剧毒（对人致死量为0.1µg)
• 食物中毒
– 进食污染食物（多为罐头、肉制品、豆制品）发生食 物中毒--食入毒素
3～10:1 1:1 10:1 1:1 1:1 1,000:1
103-5/g 10:1 109-10/ ml 5:1
常见厌氧菌 丙酸杆菌，梭状芽孢杆菌 丙酸杆菌
韦荣球菌，普雷沃菌，卟啉单胞菌， 消化链球菌，拟杆菌（脆弱拟杆菌 除外），真杆菌 同牙垢 同牙垢 同牙垢 乳杆菌 厌氧链球菌，乳杆菌
拟杆菌，梭杆菌，真杆菌，双歧杆 菌，厌氧球菌 梭杆菌
• 严格厌氧，在血琼脂平板上，48h培养后，菌落直径3～5mm， 圆形，略凸起，白色或淡黄色、不透明、边缘不整齐、表面 粗糙。在CCFA平板上生长的菌落在紫外线照射下可见黄绿色 荧光
致病性
• 产生A、B两种毒素
– A毒素为肠毒素，能使肠壁出血坏死，液体积蓄 – B毒素为细胞毒素，能直接损伤肠壁细胞，造成伪膜性结
• 对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin) • 质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)
厌氧性细菌及检验
厌氧性细菌及检验● 考点概念及分类厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的别离与鉴定〔内容讲解〕一、厌氧菌概述概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
生物学分类：主要厌氧菌的分类如以下列图：厌氧菌在正常人体的分布正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。
厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌，最多的是类杆菌。
二、厌氧菌标本的采集与送检注意：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量预防接触空气。
1.采集〔不同部位采纳不同采集方法〕标本来源搜集方法封闭性脓肿针管抽取妇女生殖道后穹窿穿刺抽取下呼吸道分泌物肺穿刺术胸腔胸腔穿刺术窦道、子宫腔、深部创伤用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽吸组织无菌外科切开尿道膀胱穿刺术标本送到实验室，应在20～30分钟内处理完毕，不超过2h。
如不能及时接种，可将标本置室温保存。
〔1〕针筒运送；〔2〕无菌小瓶运送；〔3〕棉拭子运送；〔4〕厌氧罐或厌氧袋运送。
三、厌氧菌的别离与鉴定〔一〕直接镜检依据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估量。
菌名革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌G-b 两端钝圆，着色深，中间色浅且不均匀，且有气泡，长短不一产黑素普雷沃菌G-b多形性，长短不一，有浓染和空泡，无鞭毛和芽胞。
标本有恶臭，琥珀味，紫外线照耀发红色荧光具核梭杆菌G-b 菌体细长，两头尖，紫色颗粒菌体长轴成双排列，标本有丁酸味坏死梭杆菌G-b 高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌G-c 极小的革兰阴性球菌消化链球菌G+c 革兰阳性呈链状的小球菌乳酸杆菌G+b 细长，有时多形性，呈单、双、短链或栅状排列痤疮丙酸杆菌G+b排列特别呈X、Y、V或栅状，标本有丙酸气味双歧杆菌G+b 多形性，有分支呈Y、V形成棒状，标本有醋酸气味放线菌G+b 分支呈棒状、X、Y、V或栅状，脓汁中得黄色颗粒，有琥珀酸味破伤风杆菌G+b 细长、梭形或鼓槌形，有芽胞，有周鞭毛产气荚膜梭菌G+b 粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜困难梭菌G+b 粗长杆菌，有芽胞，有鞭毛，近来觉察有荚膜〔二〕别离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段，初代培养的一般原则是：〔1〕先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；〔2〕尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；〔3〕最好多项选择1～2种覆盖面不同的选择性培养基；〔4〕尽量保证培养基新奇；〔5〕要考虑到微需氧菌存在的可能。
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十七章_厌氧性细菌及检验
第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。
G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。
致病性属条件致病性的内源性感染。
厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。
据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。
又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。
（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。
（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。
一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。
厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。
内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。
感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。
感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。
厌氧菌概述——标本的采集与送检厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
厌氧菌ppt课件
三、临床常见的厌氧菌
• （一） 厌氧性球菌 • （二） 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 • （三） 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 • （四） 梭状芽胞杆菌属
（一） 厌氧性球菌
• G＋C：主要包括消化球菌属（黑色消化球
菌Peptococcus niger）和消化链球菌属 （Peptostreptococcus anarobius）等9个种。
表1-2 不同部位标本采集法
标本来源 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物
胸腔 组织 尿道 窦道、子宫腔、 深部创伤
收集方法 针管抽取 后穹窿穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺 用静脉注射的塑料导管 穿入感染部位抽吸
在紧急情况下，可用棉拭子取材，并采用 适合的培养基传送，做厌氧菌培养，最理想 是能取得组织标本，因厌氧菌在组织中比在 渗出物中更易生长，而且组织标本可真实反 映出感染过程的细菌学变化。
3.厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；
4.厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲 硝唑（灭滴灵）普遍敏感。 5.厌氧菌的分离鉴定较繁琐，目前国内大多医院尚 未开展此工作，而发达国家早已列为临床检验常规。
种类
•主要可分为两大类，一类是有芽胞厌氧菌，
另一类是无芽胞厌氧菌。
•据目前最新资料显示，有芽胞厌氧菌只有
以及深部脓肿渗出物，经气管抽取的肺 渗出物或直接由肺抽取渗出物以及其它组 织穿刺液等。
下列标本无送检价值，不宜做 厌氧菌培养：
①鼻咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管 抽取物；④胃和肠道内容物、肛拭；⑤接近 皮肤和粘膜的分泌物；⑥褥疮溃疡及粘膜层 表面；⑦排出的尿或导尿；⑧阴道或子宫拭 子；⑨前列腺分泌物。
每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标本 的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，厌氧菌的 代谢产物中有某些带气味的物质，对厌氧菌的鉴定 很重要。均要求详细记录 。
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（一）G+的杆菌 双歧杆菌
（二） G-的杆菌 类杆菌属
（三）G+的球菌 消化球菌属
（四）G-的球菌 韦荣氏菌属
0
0
+ ++ 0 ±
0
+
++ ++ + +
+
+
++ ++ ± ++
0
+
++ + ± +
致病的原因
❖ 1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等
❖ 2 机体免疫力低下
分离和鉴定
临床标本
1 肉眼观察及有无气味 2 涂片观察与直接镜检
分离培养 （接种血平板及选择性培养基）
增菌培养 （接种液体培养基）
2~7天
厌氧培养
确定厌氧菌
每个平板挑5个以上的菌落 每个菌落接种2个平板48h培养
需氧培养
厌氧培养
有生长 无生长
有生长 无生长
兼性厌氧菌 专性厌氧菌 需氧菌 药物敏感实验 分类鉴定 菌种保存 形态和染色 菌落 生化反应 药敏性实验 气液相色谱 其它，PCR等等
厌氧型细菌及检验
二 分类
1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种
2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属，300多个菌 种和亚种
三 感染
❖ 分布 ❖ 原因 ❖ 临床症状
厌氧菌在正常人体内的分布
厌氧菌
皮肤 上呼吸道 口腔 肠道 尿道 阴 道
一芽孢菌
G+杆菌
梭状芽孢杆菌属
0
二无芽孢菌
0
± ++ ± ±
❖ 破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破 伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神 经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素 是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种 氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破 坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的 痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量 15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅 次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力
❖ 2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板 上可产生双溶血环
❖ 3）荧光
❖ 3 抗生素敏感实验 ❖ 4一些特殊的敏感实验—— ❖ 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 ❖ 5生化特性 ❖ 6气液相色扑 ❖ 7 PCR等等
有芽孢的厌氧菌
❖ 简介 梭菌属 G+ 陈旧性培养基G-
四 破伤风梭菌
❖ 大量存在于人和动物的肠道 ❖ 粪便污染
三）微生物学检验
❖ 标本采集 ❖ 检验程序 ❖ 检验方法和鉴定
五 气性坏疽病原菌
❖ 以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重 的急性外伤感染
二）致病性与免疫性
❖ 破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵 入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧 菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是 破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口（如 剌伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧 伤、坏死组织多，局部组织缺血或同时有需氧菌 或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局 部氧化还原电势降低。有利于破伤风杆菌生长
❖ 3） 厌氧培养法 ❖ a 厌氧罐培养法 ❖ b 气袋法 ❖ c 气体喷射法 ❖ d 厌氧手套箱法 ❖ e 其它等等
❖ 2 次代培养和厌氧菌的确定
❖ 3 分离培养中可能失败的原因 1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜
检
2）标本在空气中放置太久或接种时时间 过长
3）未用新鲜配制的培养基
❖ 4）未用选择性培养基 ❖ 5）无合适的厌氧罐或装备出现问题 ❖ 6）培养时间不足 ❖ 7）…………………..
标本的采集
标本来源
收集的方法
封闭性脓肿
针管抽取
妇女生殖道
后穹隆穿刺抽取
下呼吸道分泌物
肺穿刺术
胸腔
胸腔穿入
组织
无菌外科切开
尿道
上阴部膀胱穿刺
标本的送运与处理
❖ 针筒送运法 ❖ 无菌小瓶送运法 ❖ 棉拭送运法 ❖ 大量标本送运法 ❖ 组织块送运法 ❖ 厌氧袋送运法
检验的方法
❖ 1 直接镜检 一些特殊的特点，临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用
2 分离培养
❖ 1 初步培养 ❖ 1 ）培养基的选择 ❖ 强化血琼脂平板 ❖ 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 ❖ 七叶苷胆汁平板等等
❖ 2 ）标本的接种
❖ 每份标本应接种3个培养平板，分别放置 于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的容器中， 有时需要专用的培养基
❖ 营养要求不高，在普通琼脂平板上培养 24～48小时后，可形成直径1mm 以上不 规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似 羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。 在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱 肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分 被消化，微变黑，产生气体，生成甲基 硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。
❖ 一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化 氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸 盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖 体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力 强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸 40～50分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑 菌作用。
鉴定实验
❖ 1 形态和染色 ❖ 重要的是为下一步的鉴定提供参考，
❖ 时间
❖ 破伤风梭菌革兰氏染色改变 ❖ 拉丝实验 加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性
不能为阳性
❖ PH ❖ 痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性 ❖ 6.0及以下革兰氏阳性杆菌
❖ 2 菌落性状
❖ 1）色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生黑 色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红色色素
❖ 伤口被污染导致----------注意消毒清洁 ❖ 芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，
呈梭状 ❖ 可以被用来生物技术， ❖ 外毒素致毒
一）生物学性状
染色，培养 生化 对我们实验诊断来说最重要
❖ 破伤风梭菌菌体细长，长4～8um ，宽 0.3～ 0.5um ，周身鞭毛，芽胞呈圆形， 位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓 槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为 革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革 兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌， 最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，
临床的症状
❖ 1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 ❖ 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 ❖ 染的特征 ❖ 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 ❖ 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 ❖ 性的 ❖ 3 其它等等
厌氧菌标本的采集和送检
❖ 标本的采集和送检-----------1 标本决不能被正常菌群污染； 2 应尽量避免空气