TAF1基因编码区C1040T位点单核苷酸多态性与心肌梗死相关性分析

王丽丽，等．ＴＡＨ基因编码区Ｃ１０４０Ｔ位点单核瞢酸多态性与心肌梗死相关性分析１２７９

残基，限制纤溶酶的产生，抑制谷一纤溶酶原的激活和由谷一纤溶酶向赖一纤溶酶的转变；ＴＡＦＩａ还可泼逶过增加撬纾溶酶对纤溶酶挪裁的敏感性两调节纤溶酶水平，使纤溶系统受到抑制。研究发现ＴＡＦＩ作为凝ｍ积纤溶系统二者之间平衡的因子，可能在许多瞳捡性疾病中起到一定静作用。ＴＡＦＩ及其编码基因的多态性可能成为预测动脉粥样硬化性心脑血管疾病发生血栓事件的一个新标志物【ｌ。］。为此，本磋究检测了心飘梗死患者ＴＡＦＩ基因位点Ｃ１０４０Ｔ的基因型频率分布特点以及麒多态性与心肌梗死的相关性。

１对象与方法

１．１研究对象１００饼心脱梗死患者，其中男健７８例、女性２２例，平均年龄（５９．８±８．５）岁。均符合１９７９年ＷＨＯ关予缺血性心脏病的诊断标准，荠全部经选择性冠状动脉造影证实，以左前降支、左回旋支、右冠状动脉及主要分支中的任何一支血管直径狭窄程度ｉ＞５０％为阳性。正常对照组∞铡，其中男性７ｌ侧，女性１９例，平均年龄（５８．６４－８．２）岁，常规健康体检无高血压、冠心病及脑卒中等心脑血管病史。所有研究对象均来自由客遗嚣汉族人群，无斑缘关系。本研究经山东大学第二医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

１。２方法

１．２．１ＤＮＡ提取抽取外周静脉血５ｍＬ，ＥＤＴＡ抗凝。将抗凝血离心后取白细胞层用于ＤＮＡ提取。ＥｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ４℃保存，ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ一２０ｏＣ保存。ＵＮＩＱ．１０柱式血液撼因组ＤＮＡ抽提试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

１．２．２ＴＡＦＩ基因冁ｆ３２５＆的分型基因分型是运用ＰＣＲ，ＲＦＬＰ的方法，用全基因组ＤＮＡ扩增含有ＴＡＨＣ１０４０Ｔ位点的ＤＮＡ片段，ＰＣＲ引物的设计和溅序参考ＺｏｆｉｏＥ等研究报告中的方法辩ｌ，ＰＣＲ上游引物是：５’．ＧＣＴｌ３＂ＧＴＩ＇ＣＡＧＣＡＴ］＇ＧＴＣＡＴＡＧ－３７，下游引物为：５＇－ＣＡＡＩＴＧＴＧＡＴＩ℃ＣＣＡＴＡＡＡＧＴＧ－３’。ＰＣＲ反应体系∞皿，其中包括引物各１５ｐｍｏｌ，１ＵＴａｑＤＮＡ聚合酶，２．５ｍｍｏｌ／ＬＭ［ｇＣｌ２，２００ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ和模板ＤＮＡ０。５淄。其反应条件：预变性９５℃１ｍｉｎ；９５℃ｌｍｉｎ，６０ｏＣｌｍｉｎ，７２℃ｌｍｉｎ，共３０个循环；延伸７２℃５ｒａｉｎ（ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲＳｙｓｔｅｍ９７００）。含有ＴＡＦＩ基因Ｃ１０ｄＯＴ的ＰＣＲ产物其大小为４５３ｂｐ。扩增产物经限制性内切酶Ｓｐｅｌ０．５皿，ＮＥＢ缓冲液２皿，ＢＳＡ０．２皿，在３７℃消化３ｈ后，通过２％琼脂糖凝胶电泳并用澳乙锭染色，最终通过凝胶成像系统进行观察。

ｌ。３统计学处理繇有资料酶统计处理采臻ｓｐｓｓｌ０．０统计软件。基因型和等位基因频率采用直接计数法统计。研究对象与Ｈａｒｄｙ。Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡的符合程度、基嚣鍪霸等位基因频率的组闯毙较采用四格表ｘ２检验。计量资料用贾±ｓ表示，并用ｔ检验分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

２结果

２．１心梗组和对照组的临床特点拢较心鲑霆梗死组的男女比例为７８（７８％）：２２（２２％），正常对照组的男女比例为７１（７８．９％）：１９（２ｔ。ｌ％），经ｙ２检验两组之闻差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；心肌梗死维的平均年龄为（５９．８±８．５）岁，正常对照组的平均年龄为（５８。６±８。２）岁，经ｔ检验两组之闽差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。

２．２Ｔｈｒ３２５Ｉｌｅ基因分型结果编码ＴＡＦＩ的ＣＰＢ２基因１０４０位点从单核苷酸Ｃ突变为Ｔ产生了Ｓｐｅｌ酶的限制性酶切位点，从而导致了该基因编码区域相应位。点（３２５）的氨基酸从苏氨酸（伽）变为异亮氨酸（＆）。含有ＴＡＨ基因Ｃ１０４０Ｔ憋ＰＣＲ产物其大小为４５３ｂｐ。扩增产物经Ｓｐｅｌ酶在３７℃酶切３ｈ。纯合子Ｉｌｅ３２５变异体经酶消化后产生一个片段为４５３ｂｐ，纯合子Ｔｈｒ３２５经黪作孀后产生两个片段分别是２３６ｂｐ和２１７ｂｐ，而杂合子Ｔｈｒ３２５Ｉｌｅ则产生三个片段分别是４５３ｂｐ、２３６ｂｐ和２１７ｂｐ。这些片段通过２％琼脂糖凝胶电泳并爝溴乙锭染色来分桥，ＰＣＲ产物经直接测序证明该多态性位点的存在与酶切结果相一致（见圈ｔ，２）。

图ｌＴＡＦＩ基殿３１ａｒ３２５Ｉｌｅ的基因型电泳络果

其孛ｌ、８：ＤＮＡ分子量标准；２、７：Ｉｌｅ３２５Ｉｌｅ纯合子；３，６：

，Ｉ＇Ｉｒ３２５ｎｅ杂合子；４、５：％ｒ３２５Ｔｈｒ纯合子。

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