最终版 MSC功能及应用 间充质干细胞临床应用 个 券
MSC
为什么MSC的免疫下调作用只能存在一段时间呢，会不会 的免疫下调作用只能存在一段时间呢， 可能和MSC在体内保留的数量有关，MSC在异基因受体 在体内保留的数量有关， 的体内能持续存在吗？ 的体内能持续存在吗？
AML AML来源的 来源的MSC不表达 不表达CD105，在体外增殖能力差，丧失多向分化能 来源的 不表达 ，在体外增殖能力差， 支持造血功能也存在缺陷。研究者们推测AML骨髓中的白血病细 力，支持造血功能也存在缺陷。研究者们推测 骨髓中的白血病细 胞克隆、异常的细胞因子等与MSC之间存在相互作用，这可能影响了 之间存在相互作用， 胞克隆、异常的细胞因子等与 之间存在相互作用 MSC的生物学特性 的生物学特性
MSCs不能激活T细胞，也不是CD8+细胞毒T细胞的靶 目标。CD8+T淋巴细胞能杀伤供者铬标记的单个核细胞 却不能杀伤同一供者来源的MSCs。此外杀伤细胞抑制 性受体(KIR)不相合时，自然杀伤细胞也不能杀伤 MSC。
MSC的免疫调节性 的免疫调节性
成熟DC启动免疫排斥及 反应， 成熟 启动免疫排斥及GVHD反应，未成熟（iDC）及淋巴样 诱导免 启动免疫排斥及 反应 未成熟（ ）及淋巴样DC诱导免 疫耐受。 疫耐受。 体外实验证明MSC抑制了 抑制了CD4+单核细胞向 的分化；Msc在Dc成熟的 单核细胞向DC的分化 体外实验证明 抑制了 单核细胞向 的分化； 在 成熟的 过程中下调APC相关分子，如CD1a、CD40、CD80、CD83、CD86和 相关分子， 过程中下调 相关分子 、 、 、 、 和 HLA-DR的表达，体系去除 的表达， 并加入DC的诱导剂后可逆反这种抑制作 的表达 体系去除MSC并加入 的诱导剂后可逆反这种抑制作 并加入 这说明此作用是可逆的； 共培养后的DC与单纯 相比， 用，这说明此作用是可逆的；与Msc共培养后的 与单纯 相比，其 共培养后的 与单纯DC相比 刺激CD4+增殖的能力有所减弱，炎性因子如 增殖的能力有所减弱， 刺激 增殖的能力有所减弱 炎性因子如IFN-γ、IL-12、TNF-α分泌 、 、 分泌 减少，炎性银子如IL-10分泌增加。 分泌增加。 减少，炎性银子如 分泌增加 最近研究报道MSC不仅对单核细胞来源 不仅对单核细胞来源DC,并且对 并且对CD34+细胞来源的 细胞来源的DC 最近研究报道 不仅对单核细胞来源 并且对 细胞来源的 的分化和功能也有抑制作用。虽然在MSC抑制 抑制CD3和CD28抗体刺激的 抗体刺激的T 的分化和功能也有抑制作用。虽然在 抑制 和 抗体刺激的 细胞的增殖体系中无APC的存在，但结果提示，MSC抑制 的发育和成 的存在， 抑制DC的发育和成 细胞的增殖体系中无 的存在 但结果提示， 抑制 熟时其免疫调节功能的机制之一。 熟时其免疫调节功能的机制之一。
msc干细胞代数
msc干细胞代数摘要：1.MSC干细胞简介2.MSC干细胞的应用领域3.MSC干细胞的研究进展4.MSC干细胞的临床应用前景5.我国在MSC干细胞研究的发展正文：一、MSC干细胞简介MSC（Mesenchymal Stem Cells，间充质干细胞）是一种具有自我更新和多向分化潜能的干细胞。
它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪和脐带血。
由于其独特的生物学特性，MSC干细胞在再生医学和生物技术领域具有广泛的应用前景。
二、MSC干细胞的应用领域1.组织修复与再生：MSC干细胞可以分化为不同类型的细胞，如骨细胞、软骨细胞、心肌细胞等，用于修复和再生损伤的组织。
2.免疫调节：MSC干细胞具有免疫调节作用，可以抑制炎症反应和免疫细胞活性，应用于炎症性疾病和自身免疫性疾病的治疗。
3.肿瘤治疗：MSC干细胞可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，作为生物治疗手段应用于肿瘤治疗。
4.药物筛选：MSC干细胞可以用于药物筛选，评估药物的安全性和有效性。
三、MSC干细胞的研究进展近年来，MSC干细胞研究取得了显著进展。
科学家们发现，通过特定的诱导条件，MSC干细胞可以分化为不同类型的细胞，并应用于各种疾病的治疗。
同时，基因编辑技术的应用使得MSC干细胞研究更加精准和高效。
四、MSC干细胞的临床应用前景随着MSC干细胞研究不断深入，其在临床应用方面的前景十分广阔。
如骨关节炎、心肌梗死、肝硬化等疾病的治疗有望通过MSC干细胞疗法得到显著改善。
此外，MSC干细胞还可以应用于美容护肤、抗衰老等领域。
五、我国在MSC干细胞研究的发展我国在MSC干细胞研究方面取得了世界领先的成果。
政府高度重视干细胞研究，制定了一系列政策支持干细胞产业发展。
同时，我国科研团队在MSC 干细胞分离、培养和应用方面取得了突破性进展，为临床应用奠定了坚实基础。
总之，MSC干细胞作为一种具有广泛应用前景的干细胞，其在组织修复、免疫调节、肿瘤治疗等领域具有重要价值。
临床研究用人间充质干细胞质量评价
临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。
在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。
然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。
本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。
纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。
因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。
例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。
同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。
通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。
间充质干细胞的免疫调节作用及临床应用
Human gene therapy, 2015, 26(8): 506-517.
MSCs have been shown to exert profound anti-inflammatory and immunomodulatory effects on almost all the cells of the innate and adaptive immune systems via a variety of mechanisms, notably cytokine and chemokine secretion. 间充质干细胞具有很强的抗炎作用和显著的免疫调 节效果，其通过一系列复杂的调控机制几乎对固有免疫 和获得性免疫所有的免疫细胞都具有调节作用，最显著 的调节机制是细胞因子和趋化因子的分泌。 Cytokines most commonly do not directly affect the target cells but interact with other biologically active factors to achieve the effect of immunosuppression. 细胞因子通常不直接作用于靶细胞，而是通过与其 它的生物活性物质相互作用来达到免疫抑制的效果。
MSCs exert immunomodulatory effects by both cell-to-cell contacts and by secreting biologically active substances, growth factors, cytokines and chemokines. 间充质干细胞通过细胞与细胞间的直接接触，以及 分泌生物活性物质，如生长因子，细胞因子和趋化因子 等行使其免疫调节的作用。 It should be pointed out that the immunomodulatory effects of MSCs are jointly executed by both secretory factors and direct cell-to-cell contacts. 间充质干细胞的免疫调节作用是通过分泌生物活性 物质和细胞与细胞之间的直接接触两者联合来起作用的。
MSC(间充质干细胞)
单独T细胞
T ＋狼疮BMSCs
T ＋正常BMSCs
Sun LY, et al.Scand J Rheumatol,2006
对T细胞亚群的影响
Nanjing University
The Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School
C. T＋正常 MSCs
与正常鼠BMSCs共培养：T-bet↑，GATA-3↓ 与狼疮鼠BMSCs共培养：T-bet↓，GATA-3↑
TH1↑ TH2↑
Sun LY, et al.Scand J Rheumatol,2006
Nanjing University
The Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School
生物学特性
adipocyte osteocyte chondrocyte myoblast
自我更新、多向分化潜能 易扩增传代能力
cardiocyte Nerve cell hepatocyte
MSCs
体外能够传40代，并保持稳定的 表型和多向分化的潜能
IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, SCF, SDF-1 GM-CSF, M-CSF..
The Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School
间充质干细胞的免疫调控和 临床应用
Nanjing University
The Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School
MSC功能和应用
• 化疗药物（环磷酰胺）损伤大鼠卵巢，导致大鼠卵巢功能受损（卵巢滤 泡变小），给予腹腔注射间充质干细胞后，通过旁分泌机制，分泌的细 胞生长因子（VEGF、IGF-1、HGF）直接修复损伤的卵巢组织，使得 损伤的卵巢功能得到恢复。
• 间充质干细胞也能阻断化疗药物（白消安）对雄性大鼠精子发生功能的 损伤，有效地恢复雄性大鼠的生育功能。
03
肿瘤常规治疗“三足鼎立”
放疗
化疗 手术
• 常见的毒副作用：
• 1.骨髓抑制：骨髓中血细胞前体活性下降，血流里的红细胞和白细 胞都源于骨髓中的干细胞，血液中红细胞寿命短，需要不断补充， 放化疗都是针对快速分裂的细胞，因而常常导致正常骨髓细胞受损， 造成骨髓抑制。
• 2.口腔、肠道溃疡：化疗药物对口腔黏膜上皮细胞具有直接损伤作 用，化疗后骨髓造血功能受抑制，破坏口腔黏膜组织更新，中性粒 细胞减少，引起口腔黏膜损坏。
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放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
给大鼠腹腔放射性照射（放疗）后，大鼠出现腹泻、血便、肠粘连、肠溃 疡和疤痕组织增生、肠黏膜的绒毛组织收到严重破坏而不能自我恢复；但 是，给予间充质干细胞治疗后，肠绒毛组织修复良好、溃疡愈合，而且不 出现肠粘连，大鼠的存活率明显提高。注射的间充质干细胞也能迁移到照 射部位，促进放射性照射导致的皮肤烧灼伤的愈合。
应用
心梗、中风等各种炎症 GVHD、类风湿性关节炎、 自身免疫性肝炎、移植排斥 各种炎症 移植排斥
02
临床研究： 对可能有效的治疗方法的安全性及有效性作出评价。（未用 于人体） 临床应用： 指任何在人体（病人或健康志愿者）进行药物的系统性研究， 以证实或揭示试验药物的作用、不良反应及/或试验药物的 吸收、分布、代谢和排泄，目的是确定试验药物的疗效与安 全性。临床试验一般分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期临床试验。（试 验对象是病人）
脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展
脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展摘要：目的：研究脐带间充质干细胞(hMSCs)生物学有效性。
方法：本实验以PHA刺激淋巴细胞作为反应体系，观察hMSCs与淋巴细胞共培养时增殖的变化，培养体系分为阴性对照组、阳性对照组、实验组。
结果：在共培养接触体系中不同数量hMSCs对淋巴细胞增殖具有抑制作用，且hMSCs浓度越高，抑制作用越强，具有剂量依赖性。
结论：间充质干细胞在不同类型的炎症环境中，可由静息状态转变成激活状态，通过细胞间相互作用和分泌可溶性免疫调控因子，调节多种免疫细胞的增殖、分化、活化以及炎症因子的分泌功能。
MSC的免疫调控功能是其临床应用中重要的生物学有效性质量属性，对这一质量属性的有效评价，是指导MSC产品研发及临床应用中最为相关的质量控制内容之一。
近年来人们对MSC免疫调控功能的认识及其与临床应用的相关性，在此基础上提出了针对治疗性MSC产品免疫调控功能的评价策略，为在我国建立和完善MSC生物学有效性评价体系奠定基础。
关键词：脐带间充质干细胞；物学有效性；免疫调控功能前言：间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞以及神经细胞等，其免疫原性低，几乎影响免疫系统的所有细胞，具有免疫调节作用[1]。
但其免疫调节作用机制不明确，我们通过研究hMSCs对异体淋巴细胞增殖的影响，进一步探讨hMSCs的免疫调节作用的可能机制，为hMSCs应用于临床提供一定基础。
1材料与方法1.1 材料脐带间充质干细胞(hMSCs)和淋巴细胞（PBMC）均由生产提供。
间充质干细胞无血清培养基；牛血清(FBS)；10XPBS；灭菌注射用水；PHA（植物血凝素）；CFSE；无水DMSO；荧光抗体；48孔板；流式细胞仪。
1.2 方法1.2.1 hMSCs表型鉴定调整细胞浓度，使用荧光抗体进行标记，不加抗体作为空白对照；室温避光孵育，洗涤后检测。
间充质干细胞在动物临床上的应用前景
间充质干细胞在动物临床上的应用前景
徐 郑 美 ，邵 立 宇 ，孙 宏 亮 ，王 瑶 ，许 美 花 ，鲁 文 赓
（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 １６３３１９）
摘 要 ：间充质干细胞（ＭＳＣ）是一种在治疗组织损伤 和修 复方面 极具 潜力 的“种 子细胞”，因而 受到 人 们 的 广 泛关注。目前，对于人间充质干细胞的分离、鉴定、培养方法与技术已经成熟，且在临床上的应用也在积极推进当 中。相比于人源间充质干细胞，家畜间充质干细胞目前受到较少的关注，其很多重要的参数数据鲜见报道。但是， 将家畜的间充质干细胞应用于临床治疗和动物养殖业中时，它能创造出的医疗价值和经济价值是非常可观的。因 此，间充质干细胞在家畜上的应用，必定会对整个畜牧业有着积极促进作用。论文通过对比人与家畜间充质干细 胞的分离、培养和鉴定方法，阐述家畜间充质干细胞的分离培养和鉴定，以期为相关研究提供参考和借鉴。 关 键 词 ：家 畜 ；间 充 质 干 细 胞 ；鉴 定 ；应 用
［３５］ 马思佳，霍 娇，张立实．高 尿 酸 血 症 动 物 模 型 研 究 进 展 ［Ｊ］． 卫 生 研 究 ，２０１５，４４（１）：１５８１６２．
犚犲狊犲犪狉犮犺犪狀犱犆狅狀狊犻犱犲狉犪狋犻狅狀狅狀犃狏犻犪狀犌狅狌狋
ＷＡＮＧ Ｈａｉｇｅ，ＺＨＡＮＧＢｉｎｇ，ＬＩＮＺｈｉｊｉａｎ，ＬＩＧａｏｘｉ，ＢＩＡＮ Ｍｅｎｇ
［３３］ 苏友新，赖 震，郑良朴等．痛 风 宁 颗 粒 对 鸡 痛 风 模 型 血 清 黄 嘌 呤 氧 化 酶 活 性 的 影 响 ［Ｊ］．福 建 中 医 药 ，２００６（２）：４１４２．
［３４］ 杨玲 玲，黄 丽 贞，邓 家 刚．痛 风 性 关 节 炎 动 物 模 型 研 究 进 展 ［Ｊ］．世 界 中 医 药 ，２０１５，１０（９）：１４６１１４６３，１４６７．
间充质干细胞临床应用案例
间充质干细胞临床应用案例干细胞疗法是一种新兴的治疗方法，可以在许多疾病的治疗中发挥重要作用。
间充质干细胞作为一种重要的干细胞类型，具有广泛的临床应用前景。
下面将介绍一些以间充质干细胞为主要治疗手段的临床案例。
1. 骨折愈合：一名患者在进行手术修复骨折后，接受了间充质干细胞的移植。
研究表明，间充质干细胞可以促进骨折愈合过程，加速骨折部位的修复。
经过一段时间的治疗后，患者的骨折得到了有效治愈，恢复期也大大缩短。
2. 心脏病治疗：一名患有心脏病的患者接受了间充质干细胞的移植治疗。
间充质干细胞可以促进心肌细胞的再生，修复受损的心脏组织。
经过治疗后，患者的心脏功能得到明显改善，心脏负荷能力也有所提高。
3. 关节炎治疗：一些关节炎患者在接受间充质干细胞移植治疗后，关节疼痛明显减轻，关节功能也得到了改善。
间充质干细胞可以减轻炎症反应，促进关节软骨的再生，从而改善关节炎患者的症状。
4. 脑卒中康复：一些脑卒中患者在接受间充质干细胞治疗后，能够恢复一定的运动功能和语言能力。
间充质干细胞可以促进神经细胞的再生，修复受损的脑组织，有助于脑卒中患者的康复。
5. 糖尿病治疗：一些糖尿病患者在接受间充质干细胞移植治疗后，胰岛功能得到改善，血糖控制也更加稳定。
间充质干细胞可以促进胰岛细胞的再生，有助于改善糖尿病患者的胰岛功能。
6. 肝病治疗：一些肝病患者在接受间充质干细胞移植治疗后，肝功能得到明显改善，肝脏损伤也得到修复。
间充质干细胞可以促进肝细胞的再生，有助于肝病患者的康复。
7. 肺部疾病治疗：一些肺部疾病患者在接受间充质干细胞治疗后，呼吸功能明显改善，肺部病变也有所减轻。
间充质干细胞可以促进肺部组织的修复，有助于肺部疾病患者的康复。
8. 自身免疫性疾病治疗：一些自身免疫性疾病患者在接受间充质干细胞移植治疗后，炎症反应得到控制，症状也有所减轻。
间充质干细胞可以调节免疫系统，促进免疫平衡，有助于自身免疫性疾病的治疗。
9. 眼部疾病治疗：一些眼部疾病患者在接受间充质干细胞治疗后，视力得到改善，眼部病变也有所减轻。
MSC功能及应用
•
化疗药物（环磷酰胺）损伤大鼠卵巢，导致大鼠卵巢功能受损（卵巢滤
泡变小），给予腹腔注射间充质干细胞后，通过旁分泌机制，分泌的细 胞生长因子（VEGF、IGF-1、HGF）直接修复损伤的卵巢组织，使得
损伤的卵巢功能得到恢复。
•
间充质干细胞也能阻断化疗药物（白消安）对雄性大鼠精子发生功能的 损伤，有效地恢复雄性大鼠的生育功能。
•
2.口腔、肠道溃疡：化疗药物对口腔黏膜上皮细胞具有直接损伤作 用，化疗后骨髓造血功能受抑制，破坏口腔黏膜组织更新，中性粒 细胞减少，引起口腔黏膜损坏。
自我增殖 多向分化 潜能
低免疫原性 分泌 无MHC限制 众多细胞因子 性
免疫调节 损伤修复
损伤趋化作 用“归巢” 功能
由于间充质干细胞分泌多种营养因子及G-CSF、M-CSF、GM-CSF，体外 实验证明间充质干细胞能促进造血干细胞的造血克隆形成能力；这提示间 充质干细胞治疗能提高患者的骨髓造血能力。动物实验更是直接证明间充 质干细胞能够恢复受损后的骨髓基质功能，促进骨髓损伤后的造血恢复。 给大鼠腹腔放射性照射（放疗）后，大鼠出现腹泻、血便、肠粘连、肠溃 疡和疤痕组织增生、肠黏膜的绒毛组织收到严重破坏而不能自我恢复；但 是，给予间充质干细胞治疗后，肠绒毛组织修复良好、溃疡愈合，而且不 出现肠粘连，大鼠的存活率明显提高。注射的间充质干细胞也能迁移到照 射部位，促进放射性照射导致的皮肤烧灼伤的愈合。
移植物抗宿主病
•移植物抗宿主反应是一种特异的免疫现象，发生在移植手术后，是由于移
植物组织中的免疫细胞通过第六号染色体HLA抗原识别出“非我“，对受 者发动攻击的反应，其中皮肤、肝及肠道是主要的靶目标。
•GVHD的发生却大大降低了移植的成功率，GVHD是引起异基因HSCT后
间充质细胞
间充质干细胞研究进展【摘要】间充质干细胞是一种源于中胚层的早期干细胞，具有多向分化潜能，特定的条件下可分化为骨细胞、软骨细胞和神经细胞等，支持造血，具备低免疫原性和免疫调节活性，具有广泛的科研和临床应用价值。
本文针对间充质干细胞的研究进展和在临床医学应用进行综述。
【关键词】间充质干细胞、分化、免疫调节、应用1 引言间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）就是指在胚胎发育过程中形成的成体间叶组织（如骨髓基质、脂肪、胎盘和脐带等）中留存下来未分化的原始细胞。
MSCs主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓中含量最为丰富，少量存在于血液及其他组织中。
MSCs承担着支持造血系统细胞的使命，为造血干细胞的生长、分化及自我更新提供重要的微环境，还能分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞等多种细胞。
此外，MSCs还具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应，发挥免疫重建的功能。
MSCs来源方便，易于分离、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性。
MSCs的这些特性，使其在自身免疫性疾病治疗和细胞治疗等方面具有广阔的临床应用前景。
2 MSCs的来源最常见的MSCs来源是骨髓。
外周血、脂肪和胎盘等组织也可进行MSCs提取。
此外，越来越多新的MSCs来源也逐渐被人们发现，如图1，为MSCs的研究与应用提供了更丰富多样的供体。
a b图1.间充质干细胞的来源。
a ：骨髓MSCs的提取；b ：MSCs的新来源骨髓来源的MSCs来源方便,易于分离、扩增和纯化,多次传代扩增后仍具干细胞特性,无免疫排斥,体外基因转染率高并稳定高效表达外源基因，且能最终分化成骨、软骨和神经等组织。
越来越多的实验证明脐血能分离得到MSCs。
脐血MSCs的形态、免疫表型和生长方式等生物学特征与其他来源的MSCs大致类似[1]。
Cheng等从十字交叉韧带中发现了MSCs，可诱导分化为软骨细胞、脂肪细胞、骨细胞等。
充质干细胞的功能
充质干细胞的功能一、前言充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于人体各种组织中，如骨髓、脂肪、肝、肺等。
近年来，随着对MSCs的研究不断深入，其在生物医学领域中的应用也越来越广泛。
本文将从MSCs的来源、分离与鉴定以及功能等方面进行详细介绍。
二、MSCs的来源1. 骨髓骨髓是目前最常用的MSCs来源之一。
通过穿刺取得后，通过密度梯度离心法或直接附着法等方法进行分离纯化。
2. 脂肪组织脂肪组织是另一个常见的MSCs来源。
通过脂肪吸取手术获取后，可使用胶原酶等消化酶进行分离。
3. 其他组织除了骨髓和脂肪组织外，MSCs还存在于其他许多组织中，如胎盘、牙髓、胃肠道等。
这些组织中的MSCs也可以通过相应方法进行提取和纯化。
三、MSCs的分离与鉴定1. 分离MSCs的分离主要采用密度梯度离心法或直接附着法。
其中，密度梯度离心法是指将骨髓等样本加入到含有不同浓度的离心液中，通过高速离心使细胞沉淀在不同位置，从而分离纯化MSCs。
直接附着法则是将样本直接加入培养皿中，利用MSCs对塑料表面亲和性强的特点进行选择性附着。
2. 鉴定为了确保分离出来的细胞为MSCs，需要进行一系列鉴定。
常用的方法包括：（1）免疫表型分析：通过流式细胞术等方法检测MSCs表面标记物的表达情况，如CD73、CD90和CD105等。
（2）多向分化实验：将MSCs培养在不同培养基中诱导其向成骨、成软骨或成脂肪方向分化，并通过特定染色法进行检测。
（3）基因表达谱分析：通过PCR等方法检测MSCs特定基因的表达情况，如Oct-4、Sox-2和Nanog等。
四、MSCs的功能1. 自我更新MSCs具有自我更新能力，能够在不断分化的过程中保持其干细胞特性。
这使得MSCs在体内修复和再生组织时具有重要作用。
2. 多向分化潜能MSCs具有多向分化潜能，可以向骨骼、软骨和脂肪等方向分化。
msc干细胞代数
msc干细胞代数
【最新版】
目录
1.MSC 干细胞的定义和特点
2.MSC 干细胞的代数及其影响
3.MSC 干细胞的临床应用和前景
正文
1.MSC 干细胞的定义和特点
MSC（Mesenchymal Stem Cell，间充质干细胞）是一种具有自我更新和分化潜能的干细胞，主要存在于骨髓、脂肪、脐带血等多种组织中。
MSC 干细胞具有以下特点：
（1）自我更新能力：MSC 干细胞具有较强的自我更新能力，可以在体外培养条件下不断传代扩增。
（2）多向分化潜能：MSC 干细胞可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种细胞类型。
（3）低免疫原性：MSC 干细胞表面抗原表达低，不易引起免疫反应，具有较好的免疫耐受性。
2.MSC 干细胞的代数及其影响
MSC 干细胞的代数是指其在体外培养过程中传代的次数。
随着代数的增加，MSC 干细胞的生物学特性和功能会发生一定程度的改变，主要表现在以下几个方面：
（1）增殖能力：随着代数的增加，MSC 干细胞的增殖能力会逐渐降低。
（2）分化潜能：在一定范围内，MSC 干细胞的分化潜能随着代数的
增加而增强，但超过一定代数后，分化潜能会减弱。
（3）免疫调节功能：MSC 干细胞的免疫调节功能随着代数的增加而减弱。
3.MSC 干细胞的临床应用和前景
由于 MSC 干细胞具有较强的自我更新能力、多向分化潜能和低免疫原性等特点，使其在临床应用方面具有广泛的前景。
目前，MSC 干细胞已被应用于多种疾病的治疗，如骨折、骨关节炎、心肌梗死等。
此外，MSC 干细胞在组织工程、再生医学等领域也具有重要的应用价值。
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研究的里程碑
3，2002年Exp Hematol和blood 发表文章，首次 证明MSC具有免疫抑制能力！
免疫调节
研究的里程碑
4，2006年国际细胞治疗协会（ISCT）颁布了间 充质干细胞的定义（最低鉴定标准）。
统一的标准
研究的里程碑
5，2012年Osiris公司申报MSC作为药品上市得到 加拿大FDA的批准，MSC的临床应用达到一个历 史性高度！
脐带MSC和骨髓MSC（细胞因子表达）
Cytokine IL-6 LIF IL-3
GM-CSF G-CSF SDF-1 M-CSF VEGF FLt-3
SCF β2MG
UC-MSC ++ + ++ + + + ++ + ++ ++
BM-MSC + + ++ + ++ + ++ ++
我们的结果: Haematologica. 2006 ;91:1017-26
J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150.
风险控制
稳定性评价
生产工艺
稳定性评价
P14
P18 Array-CGH and cytogenetic analyses showed that BM-MSCs expanded in vitro did not show chromosomal abnormalities. Telomerase activity and hTERT transcripts were not expressed in any of the examined cultures and telomeres shortened during the culture period. (Cancer Res 2007;67(19):9142-9149)
Annu Rev Pathol 2011;6457-478
无处不在
牙髓
外周血
脐带
MSC
胸腺 羊膜
骨髓
脂肪
脐带血
富含MSC的人体组织
图片来自网络
年龄与骨髓MSC含量的变化
研究的里程碑
1，1995年间充质干细胞首次应用于临床治疗， 评价血液肿瘤患者使用后的安全性和有效性。
安全
研究的里程碑
2，1999年science发表文章，首次证明MSC的多 向分化能力！
endogenous: Hsp, DNA, RNA, TNF,CD40L exogenous: unmethylated CpG sequences in microbial
?? Safe signals
意义：能够解释更多免疫学现象，成功地解释了坏死细胞为何能诱导免疫应答反应。
chronic phase acute pቤተ መጻሕፍቲ ባይዱase
生产工艺管理要求
《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）——干 细胞制剂的质量控制》明确提出要求： “应制定干细胞采集、分离和干细胞（系）建立的标准操作及 管理程序，并在符合GMP要求基础上严格执行。”
GMP级车间
欧盟GMP关键点（Cytotherapy 2015;17(2):128-139）
MSC在免疫中的作用
MSCs是免疫系统“安全信号”的来源
应用受限
self-MSCs
safe signals
Cell Immunol. 2012;272(2):112-6
思考
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间充质干细胞 安全性评价
“成瘤性/致癌”的担忧和恐惧是干细胞临床应用的最大障碍！
担忧和恐惧的最早来源是胚胎干细胞的强致癌性，包括后来的iPS。 What about mesenchymal stem cell (间充质干细胞)？ Think about hemopoietic stem cell (造血干细胞)！ 不是所有的干细胞都具有成瘤性/癌变！
安全性评价
临床使用安全性报道：
------ Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202
------ J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150
安全性评价
临床使用安全性报道：
8个随机对照临床试验（RCTs）发现MSC治疗组和对照 组的感染率没有差异，明确提出MSC治疗不会增加感染的风 险，MSC治疗组和对照组在恶液质和成瘤方面没有差异。
间充质干细胞 功能及临床应用
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间充质干细胞 简介
间充质干细胞
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC），来源 于发育早期的中胚层，1968年MSC在骨髓中发现，后发现其具 有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自 我复制等特点而日益受到人们的关注。
BM-MSC接种在珊瑚状羟基磷灰石微载体（3小时后的扫描电镜500X） ——Tissue Eng 2002;8(6):911-920
J Invasive Cardiol 18: 552–556；Chin Med J (Engl) 117: 1443–1448； J Am Coll Cardiol 54: 2277–2286；Stem Cells 28: 1099–1106； Clin Pharmacol Ther 83: 723–730；Leukemia 22: 593–599； Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 34: 107–110(Chinese)； Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research 11: 1277–1279 (Chinese)
MSC的新理解
MSC是机体免疫系统安全信号的来源！
Cell Immunol 2012;272(2):112-116
Danger Model
1994年Matzinger提出“danger model ”
核心：免疫系统只关心其是否受到损坏来启动免疫反应或诱导免疫耐受
signals
血液病
受到损坏（dangerous） 未受到损坏（not dangerous ）
MSC药物
负面消息（包括无效）的特点
1，活性差、功能低的间充质干细胞（自体骨髓间充质干细胞） 2，脐血单个核细胞（mononuclear cell，不是monocytes）冒充间充质干细胞 （部分医院和企业） 3，干细胞制剂里添加各种药物（激素） 4，治疗方案没有经过优化 5，各种忽悠的干细胞类型，比如：外周血干细胞（外周血含有少量的间充质 干细胞，但目前无法扩增到临床所需的细胞数）、母乳干细胞（退一步说，即 使母乳里含有干细胞，但经过胃酸和肠道消化，早就死翘翘了）、植物干细胞、 心脏干细胞（专业上有心肌干细胞）等
间充质干细胞
临床试验：全球（554+115项）2015-11-1
结果
搜索词
间充质干细胞
临床试验：中国（109+9项）2015-11-1
结果
搜索词
全球分布（区域）
MSC的全球clinicaltrials项目
Control Nude NOD/SCID Nude Balb/c Balb/c
MSC
Fibroblast MSC Fibroblast
Cytotherapy 2015;
肺部有损伤
肺部没有损伤
Circulation 2005; 112(10):1451-1461
Circulation 2005;112(10):1451-1461
间充质干细胞
长满 4X
没满 4X
间充质干细胞
鉴定标准（最低标准）：
• 贴壁生长 • 特定表面标志
阳性 (≧95%)
阴性 (≦2%)
CD105
CD45
CD73
CD34
CD90
CD14 or CD11b
CD79 or CD19
HLA-DR
• 多向分化潜能
体外分化能力: 软骨，成骨，脂肪
The International Society For Cell Therapy Cytotherapy, 8:315-317, 2006
值得反思的三点
1，间充质干细胞广泛存在于人体中，包括外周血、骨髓、脂肪、所有组 织器官的基质（ Ann Med 2005;37(7):469-479 ）。 如果间充质干细胞具有成瘤性，那么肿瘤一定伴随着每个人的完整人生！
2，每次患者输血或造血干细胞移植（骨髓移植），都伴随着输入少量的 间充质干细胞。 但从来没有证据证明输血和造血干细胞移植能导致肿瘤的出现！
VEGF165、FGF-2、EGF、 PDGF-AA、PDGF-BB、 Stem Cells 2015;33(6):1878-1891
影响MSC的质量的因素
脐带>脂肪>骨髓
空气洁净度 培养营养
健康>患者 年青>年老
活率越高越好
概念的差异
临床研究：clinical study 是以人体疾病的诊断、治疗、预后、病因和预防为主要研究内容。
活化APC
活化T-cell
诱导免疫耐受
遗憾：当时没有明确涉及dangerous signals和safe signals的定义和内涵。
Danger Model
2001年Matzinger提出具体的“dangerous 应sig用n受al限s”
Signals
Dangerous siganls
（2001年）
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间充质干细胞 功能及应用
间充质干细胞
多向分化
软骨损伤/缺损、血管新生