实验10-叶绿素含量的测定
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叶绿素含量的测定
一.实验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α比例常数。当溶液浓度以百分 浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的 吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的 吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同 波长下的吸光度而求得。
80%丙酮提取液中色素浓度计算公式: (浓度单位：mg/L） Ca= 12.21A663 – 2.81A646 Cb= 20.13A646 – 5.03A663 CT = Ca+ Cb = 17.32A646 – 7.18A663 Cx.c =(1000A470 –3.27 Ca – 104 Cb)/229
植物组织中单位鲜重各色素的含量(mg.g/L) 叶绿体色素的含量=
色素的浓度(mg.L-1) ×提取液体积 提取液体积(L) ×稀释倍数 色素的浓度 样品鲜重(或干重,面积 样品鲜重(或干重,面积,g或m2) 或干重 面积,g或
二. 试剂与材料
2.1 试剂： 丙酮、石英砂、碳酸钙 2.2材料： 菠菜的新鲜叶片。 2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、 漏斗、大试管
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶 液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液的厚度；c为溶液浓度。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在 某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长 下吸光度的总和。就是吸光度的加和性。如欲 测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类 胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三特定 波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝 卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。 在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干 扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的 最大吸收峰。
从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得 叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出 提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按 下式进行计算： 叶绿素含量（mg·g-1或mg·dm-2）= C×V A×1000 式中：C为叶绿素浓度（mg·L-1）或mg·dm-2）； V为提取液总体积（ml）；A为取样鲜重（g）或取样 面积（dm-2）。
Байду номын сангаас
植物叶绿素含量测定----丙酮提取法 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法
高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿 体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶 绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、 分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第 一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏 叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生 理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要 指标。
4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异。
五. 注意事项
注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂， 如果浓度太高可进行适当稀释 注意分光光度计的规范使用
六. 思考题
为什么植物在不同生长环境下其 Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？
叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示： A663=82.04Ca+9.27Cb A645=16.76Ca+45.60Cb Ca=12.7 A663—2.59 A645 Cb=22.9 A645—4.67 A663 Ca十b＝20.3 A645—8.04 A663 （1） （2） (3) (4) (5)
三. 实验步骤
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至10mL ↓ 适当稀释后测A645、A663
四. 结果计算
4.1 结果计算
C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数
Chl = (mg/g叶)
材料鲜重（g）
一.实验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α比例常数。当溶液浓度以百分 浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的 吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的 吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同 波长下的吸光度而求得。
80%丙酮提取液中色素浓度计算公式: (浓度单位：mg/L） Ca= 12.21A663 – 2.81A646 Cb= 20.13A646 – 5.03A663 CT = Ca+ Cb = 17.32A646 – 7.18A663 Cx.c =(1000A470 –3.27 Ca – 104 Cb)/229
植物组织中单位鲜重各色素的含量(mg.g/L) 叶绿体色素的含量=
色素的浓度(mg.L-1) ×提取液体积 提取液体积(L) ×稀释倍数 色素的浓度 样品鲜重(或干重,面积 样品鲜重(或干重,面积,g或m2) 或干重 面积,g或
二. 试剂与材料
2.1 试剂： 丙酮、石英砂、碳酸钙 2.2材料： 菠菜的新鲜叶片。 2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、 漏斗、大试管
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶 液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液的厚度；c为溶液浓度。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在 某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长 下吸光度的总和。就是吸光度的加和性。如欲 测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类 胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三特定 波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝 卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。 在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干 扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的 最大吸收峰。
从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得 叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出 提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按 下式进行计算： 叶绿素含量（mg·g-1或mg·dm-2）= C×V A×1000 式中：C为叶绿素浓度（mg·L-1）或mg·dm-2）； V为提取液总体积（ml）；A为取样鲜重（g）或取样 面积（dm-2）。
Байду номын сангаас
植物叶绿素含量测定----丙酮提取法 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法
高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿 体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶 绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、 分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第 一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏 叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生 理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要 指标。
4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异。
五. 注意事项
注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂， 如果浓度太高可进行适当稀释 注意分光光度计的规范使用
六. 思考题
为什么植物在不同生长环境下其 Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？
叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示： A663=82.04Ca+9.27Cb A645=16.76Ca+45.60Cb Ca=12.7 A663—2.59 A645 Cb=22.9 A645—4.67 A663 Ca十b＝20.3 A645—8.04 A663 （1） （2） (3) (4) (5)
三. 实验步骤
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至10mL ↓ 适当稀释后测A645、A663
四. 结果计算
4.1 结果计算
C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数
Chl = (mg/g叶)
材料鲜重（g）