实验10-叶绿素含量的测定
叶绿素测量实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素在植物中的重要作用。
2. 掌握叶绿素含量的测定方法。
3. 学会运用分光光度计测定叶绿素的含量。
二、实验原理叶绿素是植物体内的一种绿色色素，是植物进行光合作用的重要物质。
叶绿素含量是衡量植物生长状况的一个重要指标。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，依据朗伯-比尔定律，即某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。
叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，通过测定其吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜、水稻等）2. 实验仪器：分光光度计、研钵、剪刀、电子天平、移液管、量筒、试管、滤纸、吸水纸、比色杯、蒸馏水、95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉四、实验步骤1. 样品处理（1）称取新鲜植物叶片0.1g左右，放入研钵中。
（2）加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入3-5ml 95%乙醇，研磨至组织变白。
（3）静置3-5分钟，使研磨充分。
2. 滤液制备（1）取一张滤纸，放入漏斗中，用乙醇湿润。
（2）沿玻棒将提取液倒入漏斗中，过滤至10ml试管中。
（3）用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
（4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中，直至滤纸和残渣中无绿色为止。
（5）最后用乙醇定容至10ml，摇匀。
3. 吸光度测定（1）将叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。
（2）以95%乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。
4. 数据处理（1）根据实验数据，绘制吸光度-浓度曲线。
（2）根据曲线，计算叶绿素的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）绘制吸光度-浓度曲线。
（2）计算叶绿素的含量。
2. 结果分析（1）根据吸光度-浓度曲线，可以看出叶绿素在特定波长下的最大吸收峰。
（2）根据计算，可以得出样品中叶绿素的含量。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了叶绿素含量的测定方法，了解了叶绿素在植物中的重要作用。
实验10叶绿素含量的测定
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长旳光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液旳吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下旳吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量旳根据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光经过溶液时，溶液旳吸光度与溶 液旳浓度和液层厚度旳乘积成正比。其数学体现式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液旳厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b旳丙酮溶液在可见光范围内旳最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处旳吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时旳 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处旳吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处旳吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），旳关系可分别用下列方程式表达：
叶绿素含量旳测定
一.试验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱旳吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素旳含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液旳吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α百分比常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质 旳吸光系数。多种有色物质溶液在不同波长下 旳吸光系数可经过测定已知浓度旳纯物质在不 同波长下旳吸光度而求得。
漏斗、大试管
三. 试验环节
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用丙酮研磨 ↓
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
以下是 8 条关于叶绿素含量测定方法：
1. 嘿，你知道吗，分光光度法就可以测定叶绿素含量哦！就像用魔法镜一样，能把叶绿素的秘密都照出来。
比如说，在实验室里，小明拿着样本放在分光光度计前，专注地操作着，那认真的样子，简直酷毙啦！
2. 还有一种方法叫荧光分析法呢！哇哦，这就像是给叶绿素装上了信号灯，一测就知道它的情况啦！想象一下，小红在那里调试着仪器，期待着结果，那心情肯定很激动呀！
3. 说起来，高效液相色谱法也是很厉害的哟！这不就是给叶绿素来个精准的“体检”嘛！记得有一次，小王看着色谱图出来，脸上露出了惊喜的表情，嘿，肯定是发现了什么有趣的结果！
4. 重量法也能行呀！这就像称一称叶绿素有多重一样。
就像那次和小李一起做实验，看着天平上的数字，我们都在猜叶绿素到底有多少呢！
5. 浸提法也不错呢！感觉就像是给叶绿素泡个舒服的“澡”，然后就能知道它在里面的情况。
那次和朋友们一起用这个方法，大家边做边讨论，可有意思了！
6. 哇塞，难道你不知道还有纸层析法呀！这简直就是给叶绿素来一次奇妙的“旅行”嘛！上次看到老师熟练地操作着，那技术，真牛！
7. 原子吸收光谱法也能测定哦！这是不是跟找宝藏一样神奇呀！就像我们有一次好奇地看着仪器，在想它怎么就能找到叶绿素的秘密呢。
8. 近红外光谱法也很管用呢！想想看，就像是给叶绿素照了个特别的“照片”。
我记得有一次和同学一起用这个方法，大家都觉得好新奇呀！
总之呀，这些方法都各有各的奇妙之处，都能帮助我们了解叶绿素含量呢！。
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定引言：叶绿体是植物细胞中的一个重要细胞器，其中主要存在着叶绿素等色素，它们在光合作用中起着重要的作用。
研究叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定，对于了解光合作用的机理以及研究植物生理生化过程具有重要意义。
本实验旨在通过实验手段提取叶绿体色素，进行色素的分离、理化性质的研究和叶绿素含量的测定。
材料与方法：材料：菠菜叶片、研钵、磨杵、丙酮、乙醇、石油醚、叶绿素提取液、测色皿、高锰酸钾溶液、浓硫酸。
方法：1.取适量菠菜叶片放入研钵中，加入适量丙酮，用磨杵捣碎成糊状。
2.将捣碎的菠菜糊状物转移到玻璃漏斗中，用石油醚冲洗3次，使叶绿体附着物进一步析出。
3.将漏斗中的上清液收集，并加入适量乙醇，振摇混合，使叶绿素慢慢析出。
4.将释放出的叶绿体颗粒通过离心机离心沉淀10分钟，收集沉淀。
5.取收集到的叶绿体沉淀，加入适量叶绿素提取液，用乳钙酸钠解离剂进行叶绿素含量的测定。
6.将其中一部分叶绿体溶液加入高锰酸钾溶液，观察颜色变化。
7.将其余叶绿体溶液与浓硫酸混合，观察颜色变化。
结果与讨论：通过上述方法，我们成功地提取并分离出菠菜叶片中的叶绿体色素。
加入石油醚可以去除一部分杂质，使叶绿体进一步纯化。
加入乙醇可以使叶绿素从叶绿体中溶出。
通过离心沉淀，我们收集到了叶绿体的沉淀物。
叶绿体的提取液与高锰酸钾溶液反应后呈现蓝色或紫色，这是由于高锰酸钾通过氧化反应将一些具有现菌酮结构的物质氧化为合成叶绿素的前体物质所引起的。
这种反应也证实了叶绿体的存在。
叶绿体溶液与浓硫酸混合后呈现蓝绿色，这是由于浓硫酸通过剥离叶绿体周围的蛋白质和其他有机物质，将叶绿素分子释放出来，产生颜色变化。
叶绿素的含量测定是通过与乳钙酸钠解离剂反应来进行的。
乳钙酸钠解离剂能够与叶绿体中的叶绿素结合，并形成稳定的叶绿素-乳钙酸钠络合物。
这种络合物通过光密度的测定，可以根据比色法来测量叶绿素的含量。
叶绿素测定实验方法
叶绿素测定实验方法引言：叶绿素是一种存在于植物和藻类细胞中的绿色色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究光合作用的过程和效率具有重要意义。
本文将介绍一种常用的叶绿素测定实验方法，通过该方法可以准确快速地测定叶绿素的含量。
实验材料：1. 叶绿素提取液：含有乙醇和醋酸的混合液；2. 磷酸盐缓冲液：用于稀释样品和调整pH值；3. 丙酮：用于去除样品中的类胡萝卜素；4. 乙醇：用于去除样品中的脂类物质；5. 乙酸镁溶液：用于稀释样品和调整pH值；6. 纯水：用于稀释样品和制备试剂。
实验步骤：1. 取一片新鲜的叶片，用研钵将其研磨成细碎的叶浆。
添加适量的磷酸盐缓冲液，使叶浆与缓冲液的体积比为1:10，并搅拌均匀。
2. 将混合物过滤，收集滤液，滤液即为叶绿素提取液。
3. 将叶绿素提取液分装到两个试管中，分别标记为A和B。
4. 在试管A中加入适量的丙酮，用于去除样品中的类胡萝卜素。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
5. 在试管B中加入适量的乙醇，用于去除样品中的脂类物质。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
6. 分别离心试管A和B，将上清液转移到两个新的试管中。
7. 在试管A中加入适量的乙酸镁溶液，用于稀释样品和调整pH值。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
8. 在试管B中加入适量的纯水，用于稀释样品和制备试剂。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
9. 分别使用分光光度计测量试管A和B中溶液的吸光度。
选择适当的波长（通常为665nm和649nm），分别记录吸光度值为A665和A649。
10. 根据公式A = (A665 - A649) × V / M，计算叶绿素的含量。
其中，V为取样体积，M为叶绿素的摩尔吸光系数。
结果分析：通过测量试管A和B中溶液的吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
试管A中的溶液经过丙酮处理，去除了类胡萝卜素的干扰；试管B 中的溶液经过乙醇处理，去除了脂类物质的干扰。
因此，通过计算两个试管中溶液的吸光度差，可以准确测定叶绿素的含量。
叶绿素含量的测定标准
叶绿素含量的测定标准可以根据不同的方法来确定。
其中，分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。
该方法基于叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在特定波长下测定其吸光度，然后根据朗伯-比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
以下是使用分光光度法测定叶绿素含量的标准步骤：原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A=acl。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a 为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等丁各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、h的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：Ca=13.95A665-6.88A649 Cb=24.96A649-7.32A665 Cx=(1000A470-2.05Ca-1 14.8*Cb)/245 最终，叶绿素含量计算公式为：叶绿素含量（mg/g）= （色素浓度mg/L * 提取液体积ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重g)。
通常操作选取的叶片大概为0.1g，剪碎放入装有5ml 95%以纯的10ml离心管中，暗处理24h，即可测量其吸光度。
叶绿素含量实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素的提取和分离方法。
2. 掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和步骤。
3. 分析不同植物叶片中叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a和叶绿素b组成。
叶绿素在特定波长下具有特征吸收峰，利用分光光度法可以测定叶绿素的含量。
本实验采用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿素，通过测定叶绿素a和叶绿素b在最大吸收波长下的吸光度，计算出叶绿素含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、新鲜青菜、新鲜甘蓝叶片。
2. 仪器：分光光度计、研钵、剪刀、移液管、比色皿、电子天平、75%乙醇、碳酸钙、蒸馏水。
四、实验步骤1. 称取新鲜菠菜、青菜、甘蓝叶片各0.5g，分别放入研钵中。
2. 加入少量碳酸钙，用研钵研磨至叶片组织变白。
3. 将研磨好的叶片转移至75%乙醇溶液中，用移液管加入5mL乙醇，充分混合。
4. 将混合液转移至比色皿中，用蒸馏水定容至10mL。
5. 以75%乙醇为空白，分别在波长663nm和645nm处测定吸光度。
6. 根据吸光度计算叶绿素a和叶绿素b的含量。
7. 分别计算三种植物叶片中叶绿素的总含量。
五、实验结果与分析1. 叶绿素a和叶绿素b的含量计算：叶绿素a含量（mg/g）= A645nm × 1000 × 0.5 / 12.0叶绿素b含量（mg/g）= A663nm × 1000 × 0.5 / 27.02. 叶绿素总含量计算：叶绿素总含量（mg/g）= 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量3. 实验结果：菠菜叶片叶绿素总含量为：3.25mg/g青菜叶片叶绿素总含量为：2.10mg/g甘蓝叶片叶绿素总含量为：2.85mg/g4. 结果分析：通过实验结果可以看出，菠菜叶片中叶绿素含量最高，其次是甘蓝叶片，青菜叶片叶绿素含量最低。
这可能是由于不同植物叶片中叶绿素含量存在差异，与植物种类、生长环境等因素有关。
叶绿素含量的测定
植物生理学实验叶绿体色素含量的测定----分光光度法姓名学号系别班级实验日期同组姓名摘要:叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。
因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度。
叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。
叶绿体色素95 ％乙醇提取液中叶绿素a 和b 及类胡萝卜素分别在665nm ,649nm 和470nm 波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素乙醇提取液中叶绿素a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。
一、实验原理与实验目的实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
二、实验材料和方法植物材料：菠菜叶片、番茄幼苗叶片实验用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等实验试剂：95%乙醇、石英砂和碳酸钙试验方法：分光光度法三、实验步骤1、叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片（或番茄幼苗叶片）0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆,再加95%乙醇10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。
2、吸光度的测定取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长665、649和470nm下测定吸光度。
3、结果计算依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
附录：722分光光度计的使用1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法## 叶绿素含量测定方法叶绿素是植物体内重要的色素分子，对于植物光合作用起着关键的作用。
因此，测定叶绿素含量是植物生理学和植物生态学研究中常用的重要参数。
下面介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
### 1. 委派-法（Wet-Ox）法测定叶绿素含量Wet-Ox法是一种简单、快速的叶绿素含量测定方法，适用于大多数植物。
该方法使用乙醇和二氧化碳溶液将植物细胞中的叶绿素从叶片中提取出来。
提取液中的叶绿素含量可以通过测量其吸收的光强来确定。
测定步骤如下：- 从待测样品的叶片中取0.1克左右的叶片切碎；- 将切碎的叶片加入10毫升的乙醇和二氧化碳溶液中，然后用果汁机将其搅拌均匀；- 将混合液倒入离心管中，离心10分钟；- 取上清液，放入紫外可见分光光度计中，测量在663和645纳米波长的吸光度；- 根据波长吸光度值计算叶绿素含量。
### 2. 非溶剂测定法非溶剂测定法是一种不使用有机溶剂的测定方法，广泛应用于叶绿素含量测定。
该方法使用光度计或多光束分光光度计测量叶片的透射和反射光谱，然后使用数学模型计算叶绿素含量。
测定步骤如下：- 将待测样品的叶片置于光谱仪中，测量叶片的透射光谱；- 测量叶片的反射光谱；- 使用数学模型计算叶绿素含量。
### 3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种准确而有效的叶绿素含量测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪测量样品中叶绿素的峰值，通过对照峰面积或峰高计算叶绿素含量。
测定步骤如下：- 将待测样品的叶片切碎，加入提取液中，震荡均匀；- 过滤提取液，将过滤液注入高效液相色谱仪中；- 设置色谱检测条件，进行色谱分离；- 通过对比样品峰值与标准品峰值计算叶绿素含量。
### 4. 气相色谱法气相色谱法是一种基于叶绿素与有机溶剂的分配系数不同而进行测定叶绿素含量的方法。
该方法需要使用气相色谱仪进行测量。
测定步骤如下：- 从待测样品的叶片中提取叶绿素；- 使用有机溶剂溶解叶绿素，并注入气相色谱仪中；- 设置气相色谱仪的条件，并进行测定；- 根据样品峰面积或峰高计算叶绿素含量。
叶绿体色素含量的测定 ----分光光度法
依据下列乙醇提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶 绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
计算公式
95%乙醇提取液中色素浓度的计算
Ca（叶绿素a）=13.95A665 – 6.8A649 Cb（叶绿素b）=24.96A649 – 7.32A665 CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 – 2.05Ca-114.8Cb)/248
叶绿体色素含量= 色素浓度（mg.L1） 提取液体积（L） 稀释倍数 样品鲜重（或干重、面积，g或m2）
实验结果
（1）菠菜吸光值
波长（nm） 665 649 470
1 0.249 0.111 0.278
2 0.234 0.104 0.262
3 0.238 0.105 0.268
平均 0.241 0.107 0.269
类胡萝卜素总含量=0.52mg/g
实验结果
（2）全素培养番茄
波长/组别 1
2
3
平均
665nm 0.302 0.306 0.300 0.303
649nm 0.132 0.132 0.131 0.132
470nm 0.359 0.358 0.352 0.356
各色素含量 Ca（叶绿素a）=13.95A665 – 6.8A649=3.33mg/l Cb（叶绿素b）=24.96A649 – 7.32A665 =1.08mg/l CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665=4.41mg/l Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 – 2.05Ca114.8Cb)/248=0.91mg/l 叶绿素总含量=11.025mg/g 类胡萝卜素总含量=2.275mg/g
叶绿体色素含量的测定
叶绿体色素含量的测定----分光光度法中文摘要：本实验利用菠菜叶作为原料用80%的丙酮提取叶绿体色素，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度，带入公式计算出色素溶液中各色素浓度。
英文摘要：In this experiment , we used spinach leaves as raw material and used 80% of acetone to extract pigments from them ,and apply spectrophotometer at a particular wavelength to determine absorbance, then take the absorbance into the formula to calculate concentration of each pigment.实验原理：利用80%丙酮提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是663nm、646nm和470nm。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验器材和试剂：1、材料：菠菜叶片2、用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙实验步骤：1.叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成匀浆,再加80%丙酮10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。
2.吸光度的测定取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以80%丙酮注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长663、646和470nm下测定吸光度。
3.结果计算依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
叶绿素的定量测定实验报告
叶绿素的定量测定实验报告叶绿素的定量测定实验报告引言：叶绿素是一种广泛存在于植物和藻类中的绿色色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。
叶绿素的含量和浓度对于植物的生长和发育具有重要影响。
因此，准确测定叶绿素的含量对于研究植物生理过程和环境适应性具有重要意义。
本实验旨在通过分光光度法测定叶绿素的含量，探究其在不同环境条件下的变化规律。
材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片样品、酒精、丙酮、乙醚、二氧化碳、叶绿素提取液、分光光度计。
2. 实验步骤：a. 将取自不同植物的叶片样品切碎并置于离心管中；b. 加入适量酒精和丙酮，使叶片完全浸泡在溶液中；c. 将离心管放入离心机中，离心10分钟，以使叶绿素溶于溶液中；d. 将上清液转移到试管中，用分光光度计测定其吸光度；e. 重复以上步骤，分别在不同环境条件下提取叶绿素。
结果与讨论：通过分光光度法测定不同植物叶片中叶绿素的含量，得到了如下结果。
在光照充足的条件下，叶绿素的含量较高，而在光照不足的条件下，叶绿素的含量明显减少。
这是因为光照是植物进行光合作用的重要条件，光合作用是植物合成有机物质的过程，其中叶绿素起到了吸收光能的关键作用。
因此，在光照充足的环境下，植物叶片能够更好地进行光合作用，从而合成更多的叶绿素。
此外，实验还发现，二氧化碳浓度对叶绿素的含量有一定影响。
在高浓度二氧化碳的环境下，植物叶片的叶绿素含量较低，而在低浓度二氧化碳的环境下，叶绿素的含量较高。
这是因为二氧化碳是光合作用的底物之一，植物通过光合作用将二氧化碳转化为有机物质，而叶绿素是光合作用的催化剂。
因此，在低浓度二氧化碳的环境下，植物叶片能够更好地进行光合作用，从而合成更多的叶绿素。
结论：通过本实验的定量测定，我们发现叶绿素的含量在不同环境条件下有所变化。
光照和二氧化碳浓度是影响叶绿素含量的重要因素。
在光照充足和二氧化碳浓度适宜的条件下，植物叶片能够更好地进行光合作用，从而合成更多的叶绿素。
大学植物生物学实验——叶绿素含量的测定
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验五、 实验五、叶绿体含量的 测定（分光光度法） 测定（分光光度法）
一，实验目的与要求
三、实验步骤
• 提取：叶片洗净、吸干、称重 称重后于研钵中加入 5mL 95%乙醇、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀 浆后过滤，再用5mL 95%乙醇冲洗滤渣，定容 混匀； 到10mL，混匀 • 测定：充分过滤后，以95%乙醇调零，测定叶 绿素提取液在649 649nm和664 664nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=13.95A664-6.88A649 叶绿素b：C=24.96A649-7.32A665
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解不同生境下植物的叶绿素含量和叶 绿素a、b比值。
二、实验材料与试剂
• 95%乙醇。 • 不同生境下的植物叶片。
三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b乙醇提取液的光吸收总 和在649nm 665nm处各有一峰值。 649nm和665nm •Lambert-Bear定律： A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。 •吸光度的相加性 吸光度的相加性： 吸光度的相加性 混合液在某一波长下的吸光度等于各组分 在相应波长下吸光度的总和。
•计算叶绿素含量
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b（mg/gFW)=? 叶绿素a：叶绿素b=?
四、数据分析
• 统计植物生境与叶绿素含量、叶绿素a： b值之间的关系，并分析其生理意义；
பைடு நூலகம்
测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法
植物叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，能够在吸收光子的过程中将光能转化为化学能。
因此，测定植物叶绿素含量是衡量植物光合作用效率的重要指标之一。
1. 乙醇提取法
将待测叶片粉碎后加入适量的95%乙醇中，放置于暗处浸泡数小时或过夜，然后离心收集上清液。
测定上清液吸光度，通过比较不同波长下的吸光度值，可计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量。
将待测叶片粉碎后加入1.5mL 80%乙醇和0.5mL 1mol/L HCl的混合液中，振荡10分钟后加入玻璃珠摇匀，含有叶绿素的乙醇溶液将变为红褐色。
用0.22µm微孔滤纸过滤，取上清液，用分光光度计测定吸光度值后计算叶绿素含量。
3. 醋酸铜法
将待测叶片加入0.05%醋酸铜溶液中，用滚轴摇匀10分钟后过滤，取上清液后测定吸光度并计算叶绿素含量。
4. 液相色谱法
将待测叶片加入甲醇或乙腈中，使用高效液相色谱仪分析样品中的叶绿素和类胡萝卜素含量。
这种方法需要更为精确的仪器和技术，但可以同时测定多种色素。
无论使用哪种方法测定植物叶绿素含量，都需要注意以下几点：
1. 样品采集应在相同的时间、地点和光照条件下进行，以保证结果可比性。
2. 需要控制乙醇、醋酸铜等试剂用量、摇匀时间和过滤条件等因素，以获得准确的结果。
3. 对于不同种类和部位的植物，可能需要针对性地选择不同的测定方法，并对结果进行修正和比较。
叶绿素含量的测定具体方法
一、叶绿素的测定：乙醇提取比色法，参考陈建勋、王晓峰等方法，有改动。
将实验材料去除大主脉，在0.0001的天平上称取0.5g左右的叶片至于50ml离心管中，依次加入25ml95%的乙醇密封，在黑暗条件下室温提取24-36h，将提取液稀释一定的倍数（根据具体情况而定），随后在UV754N紫外可见分光光度计，波长665、649、470nm下分别进行比色。
根据各波长的OD 值按照李合生的方法计算叶绿素a、b 和类胡萝卜素的浓度（mg·L-1），根据求得的浓度计算出各色素含量（mg·g-1鲜重表示）。
C a=13.95D665－6.88D649
C b=24.96D649－7.32D665
C x.c=(1000D470－2.05Ca－114.8Cb)/245
色素在叶片中的含量(mg /g)=色素浓度(mg /L)×提取液总体积(m l)×稀释倍数/样品质量(g)。
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一.实验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α比例常数。当溶液浓度以百分 浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的 吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的 吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同 波长下的吸光度而求得。
80%丙酮提取液中色素浓度计算公式: (浓度单位：mg/L） Ca= 12.21A663 – 2.81A646 Cb= 20.13A646 – 5.03A663 CT = Ca+ Cb = 17.32A646 – 7.18A663 Cx.c =(1000A470 –3.27 Ca – 104 Cb)/229
三. 实验步骤
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用丙酮研磨 ↓ 匀过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至10mL ↓ 适当稀释后测A645、A663
四. 结果计算
4.1 结果计算
C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数
Chl = (mg/g叶)
材料鲜重（g）
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在 某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长 下吸光度的总和。就是吸光度的加和性。如欲 测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类 胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三特定 波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝 卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。 在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干 扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的 最大吸收峰。
植物组织中单位鲜重各色素的含量(mg.g/L) 叶绿体色素的含量=
色素的浓度(mg.L-1) ×提取液体积 提取液体积(L) ×稀释倍数 色素的浓度 样品鲜重(或干重,面积 样品鲜重(或干重,面积,g或m2) 或干重 面积,g或
二. 试剂与材料
2.1 试剂： 丙酮、石英砂、碳酸钙 2.2材料： 菠菜的新鲜叶片。 2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、 漏斗、大试管
从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得 叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出 提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按 下式进行计算： 叶绿素含量（mg·g-1或mg·dm-2）= C×V A×1000 式中：C为叶绿素浓度（mg·L-1）或mg·dm-2）； V为提取液总体积（ml）；A为取样鲜重（g）或取样 面积（dm-2）。
叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示： A663=82.04Ca+9.27Cb A645=16.76Ca+45.60Cb Ca=12.7 A663—2.59 A645 Cb=22.9 A645—4.67 A663 Ca十b＝20.3 A645—8.04 A663 （1） （2） (3) (4) (5)
4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异。
五. 注意事项
注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂， 如果浓度太高可进行适当稀释 注意分光光度计的规范使用
六. 思考题
为什么植物在不同生长环境下其 Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？
植物叶绿素含量测定----丙酮提取法 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法
高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿 体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶 绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、 分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第 一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏 叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生 理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要 指标。
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶 液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液的厚度；c为溶液浓度。