胶体金试纸条的制备_图文
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• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
不显色 显色
胶体金免疫层析试纸质量检测
胶体金免疫层析试纸的应用
• 在兽药残留检测中的应用
Zhang等用克伦特罗制备的单克隆抗体标记胶体金作为检测探针，然后将偶 联 BSA的克伦特罗作为 T 线，以竞争模式组装成试纸，用于样品的克伦特罗 残留检测，为我国食品安全检测提供了有效的工具。之后 Zhang 的团队采用 同样的模式制备并组装成功两类兽药残留检测试纸，分别为磺胺间甲氧嘧啶 、恩诺沙星残留检测胶体金免疫层析试纸，为我国兽药残留快速检测技术的 发展奠定了基础。
定其pH即可.
常见蛋白标记条件
最小蛋白用量的确定
（1）光电比色法：制备一系列不
同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml） ，分别加入5ml胶体金中，迅速混匀 ，然后，各加入1ml 10% NaCl溶液 ，摇匀，静置5min后测各管。根据 胶体金颗粒的大小，OD在520～ 580nm之间测定，以OD值为纵坐标 ，蛋白质用量为横坐标作一曲线， 取曲线最先与横轴相接近的那一点 处的蛋白质用量为最适稳定量。图 中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最 适稳定量为45μg/ml。
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白 带正电时，能与胶体金所带的负 电荷相互作用；而蛋白中的疏水 氨基酸能通过疏水作用将蛋白结 合至金颗粒表面；有些蛋白则可 通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共 轭连接。
金标样本程序
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
胶体金调整正确的pH值
胶体金的合成
• ①白磷还原法(1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒； • ②白磷还原法(1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的
金颗粒；
• ③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒 ；
• ④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm 、60nm大小的金颗粒；
硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)：
一般使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等国外公司 的硝酸纤维素膜。
NC膜的作用： - 在检测线和对照线条带区域固定抗体； - 样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应； - 反应在NC膜上显色，读检测结果
NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、
4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白 质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg ～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系 列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管 内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
60
胶体金免疫层析法试剂的组成
样品垫(Sample pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
样品垫的作用：
减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布 ；
去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。
样品垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差 异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂 、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使 用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜 ，标记结合物为免疫金。
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy，
ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定 ，与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析 法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于 层析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动 过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或 者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被 分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体 金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型
的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包
被过程。
胶体金技术的发展
1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电
子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结
不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。
最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
纯化
超速离心法、凝胶过滤法
几种免疫金探针离心纯化条件
胶体金颗粒 /nm 5 10 15 20 10
pH 标记蛋白质 离心力/g 时件/min
9.0 羊抗人IgG 45000
45
8.2
McAb
45000
30
6.5 链霉亲和素 120000
45
6.0
Leabharlann Baidu
SPA
120000
30
9.0 羊抗兔IgG 120000
结合垫(Conjugate pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
结合垫的作用主要为：
- 吸附一定量的金标结合物颗粒； - 吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； - 保持金标结合物颗粒的稳定性； - 保证金标结合物颗粒定量完全释放等。
玻璃纤维膜/聚酯纤维膜
强度、表面质量、厚度、批间均一性等。
硝酸纤维膜的选择
膜的分类标准(μm和s)
µm: 指的是膜孔径 换算情况大致为：8μm=135s；6μm=180s
不同秒数的膜对反应的影响
通过速度越快和包被在T线的物质反应时间也就越短，读 数快，那么灵敏度也就越低。反之，反应时间长，读数慢 ，也就灵敏度高。同时还有一个问题是，反应时间越长， 发生非特异性结合的可能性就越大，所以过长时间的反应 不一定就能够真正的提升灵敏度。
免疫胶体金技术的特点
优点：
• 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； • 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； • 试剂稳定，适用于单份测定； • 无污染； • GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室
即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸 。 （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 （4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可 能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
胶体金免疫层析试纸模式
• 双抗体夹心模式 疫病抗原检测
• 竞争模式 小分子物质检测
• SPA/蛋白G模式 疫病抗体检测
双抗体夹心模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
不显色 显色
竞争模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 不显色 显色
显色 显色
SPA/G蛋白模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。
1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了
间接免疫金染色法
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前
胶体金试纸条的制备_图文.ppt
目录
1
胶体金技术的发展
2
胶体金技术的种类
3
胶体金的合成
4
胶体金的标记与纯化
5 胶体金免疫层析法试剂的组成
6 胶体金免疫层析试纸的检测模式
7 胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金免疫层析（Gold Immune – Chromatographic Assay, GICA）技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术 发展而来的，其本质为一种固相反应的 ELISA,并用胶体 金来代替底物显色。
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 粒径（ nm） 16
24.5
41
71.5
1％柠檬酸 三钠加入量 （ml）* 2.00
1.50
1.00
0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
胶体金的质量鉴定
透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等 ，均匀一致，无椭圆形及多 角形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一，且
非球形，有凝集现象， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。
胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
不显色 显色
胶体金免疫层析试纸质量检测
胶体金免疫层析试纸的应用
• 在兽药残留检测中的应用
Zhang等用克伦特罗制备的单克隆抗体标记胶体金作为检测探针，然后将偶 联 BSA的克伦特罗作为 T 线，以竞争模式组装成试纸，用于样品的克伦特罗 残留检测，为我国食品安全检测提供了有效的工具。之后 Zhang 的团队采用 同样的模式制备并组装成功两类兽药残留检测试纸，分别为磺胺间甲氧嘧啶 、恩诺沙星残留检测胶体金免疫层析试纸，为我国兽药残留快速检测技术的 发展奠定了基础。
定其pH即可.
常见蛋白标记条件
最小蛋白用量的确定
（1）光电比色法：制备一系列不
同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml） ，分别加入5ml胶体金中，迅速混匀 ，然后，各加入1ml 10% NaCl溶液 ，摇匀，静置5min后测各管。根据 胶体金颗粒的大小，OD在520～ 580nm之间测定，以OD值为纵坐标 ，蛋白质用量为横坐标作一曲线， 取曲线最先与横轴相接近的那一点 处的蛋白质用量为最适稳定量。图 中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最 适稳定量为45μg/ml。
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白 带正电时，能与胶体金所带的负 电荷相互作用；而蛋白中的疏水 氨基酸能通过疏水作用将蛋白结 合至金颗粒表面；有些蛋白则可 通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共 轭连接。
金标样本程序
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
胶体金调整正确的pH值
胶体金的合成
• ①白磷还原法(1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒； • ②白磷还原法(1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的
金颗粒；
• ③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒 ；
• ④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm 、60nm大小的金颗粒；
硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)：
一般使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等国外公司 的硝酸纤维素膜。
NC膜的作用： - 在检测线和对照线条带区域固定抗体； - 样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应； - 反应在NC膜上显色，读检测结果
NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、
4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白 质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg ～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系 列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管 内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
60
胶体金免疫层析法试剂的组成
样品垫(Sample pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
样品垫的作用：
减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布 ；
去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。
样品垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差 异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂 、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使 用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜 ，标记结合物为免疫金。
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy，
ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定 ，与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析 法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于 层析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动 过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或 者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被 分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体 金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型
的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包
被过程。
胶体金技术的发展
1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电
子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结
不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。
最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
纯化
超速离心法、凝胶过滤法
几种免疫金探针离心纯化条件
胶体金颗粒 /nm 5 10 15 20 10
pH 标记蛋白质 离心力/g 时件/min
9.0 羊抗人IgG 45000
45
8.2
McAb
45000
30
6.5 链霉亲和素 120000
45
6.0
Leabharlann Baidu
SPA
120000
30
9.0 羊抗兔IgG 120000
结合垫(Conjugate pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
结合垫的作用主要为：
- 吸附一定量的金标结合物颗粒； - 吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； - 保持金标结合物颗粒的稳定性； - 保证金标结合物颗粒定量完全释放等。
玻璃纤维膜/聚酯纤维膜
强度、表面质量、厚度、批间均一性等。
硝酸纤维膜的选择
膜的分类标准(μm和s)
µm: 指的是膜孔径 换算情况大致为：8μm=135s；6μm=180s
不同秒数的膜对反应的影响
通过速度越快和包被在T线的物质反应时间也就越短，读 数快，那么灵敏度也就越低。反之，反应时间长，读数慢 ，也就灵敏度高。同时还有一个问题是，反应时间越长， 发生非特异性结合的可能性就越大，所以过长时间的反应 不一定就能够真正的提升灵敏度。
免疫胶体金技术的特点
优点：
• 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； • 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； • 试剂稳定，适用于单份测定； • 无污染； • GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室
即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸 。 （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 （4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可 能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
胶体金免疫层析试纸模式
• 双抗体夹心模式 疫病抗原检测
• 竞争模式 小分子物质检测
• SPA/蛋白G模式 疫病抗体检测
双抗体夹心模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
不显色 显色
竞争模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 不显色 显色
显色 显色
SPA/G蛋白模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。
1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了
间接免疫金染色法
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前
胶体金试纸条的制备_图文.ppt
目录
1
胶体金技术的发展
2
胶体金技术的种类
3
胶体金的合成
4
胶体金的标记与纯化
5 胶体金免疫层析法试剂的组成
6 胶体金免疫层析试纸的检测模式
7 胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金免疫层析（Gold Immune – Chromatographic Assay, GICA）技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术 发展而来的，其本质为一种固相反应的 ELISA,并用胶体 金来代替底物显色。
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 粒径（ nm） 16
24.5
41
71.5
1％柠檬酸 三钠加入量 （ml）* 2.00
1.50
1.00
0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
胶体金的质量鉴定
透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等 ，均匀一致，无椭圆形及多 角形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一，且
非球形，有凝集现象， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。
胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。