白细胞、血小板显微镜计数法

白细胞显微镜计数法

（一）原理

取稀释酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，滴入计数池，计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。

（二）试剂

白细胞稀释液：冰乙酸1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释液。

（三）器材

1.显微镜：普通生物显微镜。

2.微量吸管：吸管上刻有10和20ul两个刻度（误差<+-1%）。微量吸管由于生产厂家

不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经严格校正，且应做到每位患者1支。

3.细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数池。在计数池

两侧各有一条支柱，与计数池高度差是0.1mm。所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离为0.1mm。

目前国内通用的是改良Neubauer计数板。这类计数板中，每个计数池的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成9个大方格，每个大方格长宽各为1.0mm，其

面积为1m㎡。加盖玻片后的容积为1m㎡×0.1mm.其中四角上的大方格用单线划

成16个中方格，作白细胞计数用；中央1大方格则用双线划成25个小中方格，每

个小中方格又用单线划成16个小格，总计为400个小格。大方格每边长的误差是

+-1%；盖片与计数池面之距离误差为+-2%。

4.白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面平整度为

0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。其厚度应为0.4—0.7mm，通

常大小为24×20×0.6mm。

盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气泡。

（四）操作

1.取小试管（12×75mm）一支，加白细胞稀释液0.38ml。

2.采指血20ul，吸入稀释液中，混匀。

3.用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止2—3min.

4.用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定顺序，对压线的白细胞应按数

上不数下，数左不数右的原则计数。

（五）计算

白细胞/L=四大方格白细胞数（N）/4×10×10 6×20

=N×5/100×10 9

=N/20×10 9/L

式中：1/4标示平均一大方格中白细胞数。

×10表示10大方格内白细胞数。

×10 6表示1升稀释液中白细胞数。

×20为稀释倍数。

血小板显微镜计数

（一）原理

利用能保护血小板的稀释液，将血液稀释一定倍数，滴入计数池，计数一定范围内血小板数，即可换算成每升血中血小板数。

（二）稀释液

1.草酸铵稀释液

草酸铵 1.0g

EDTA-Na2 0.012g

蒸馏水加至100.0ml

配好后用数层滤纸过滤，清亮后使用。此液对红细胞破坏力较强，血小板形态清楚。

但只加草酸铵，不加EDTA盐，则易产生草酸钙结晶。

2.许汝和式稀释液

尿素（AR或GR）10.0g

柠檬酸钠0.5g

甲醛溶液0.1ml

蒸馏水加至100.0ml

混合后过滤即可备用。

此稀释液破坏红细胞完全，视野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室温升高

和保存过久而失效。一般只能使用10d，4摄氏度冰箱中保存，可稍延长使用期。

一次配量不宜过多。

归纳血小板稀释液的成分包括抗凝剂，如柠檬酸盐、EDTA盐等；固定防腐剂，如甲醛等；溶血剂，如尿素、草酸铵等，以及等渗剂等。

一种好的稀释液应具备：（1）能有效地防止血液凝固；（2）迅速固定血小板，防止其聚集和形态改变；（3）要求红细胞破坏完全；（4）组成简单，易保存，不生长细菌。（三）操作

1.取稀释液0.38ml，采末梢血20ul加入稀释液中，混匀，静置10min左右。

2.混匀后取出少许滴入计数池，在温室中静置10—15min。

3.在显微镜下（低倍或高倍）计数中央大方格中5个小中方格（与红细胞同）的血小

板数。

（四）5小中方格血小板数（N）×5×10×20×10 6

=N×10 9/L

（五）注意事项

1.如血小板数过低，可计数25个中方格中的血小板数，结果×200.

2.凡影响红白细胞计数的技术因素都应注意。

3.全部器材和稀释液应十分清洁。因为血小板形态不规则且细小，任何灰尘斑点都可

给计数造成困难，甚至误认。

4.刺入皮肤深度要适当（2—3mm）,血液应自然流出，避免挤压。动作要快，以防止

血小板聚集。

5.如和血常规一起做，应先采血小板计数用血。

6.因血小板易聚集，所以滴入计数池之前应充分混匀，但又不能用力过度，以防止破

坏血小板。

7.血小板在计数池中，完全下沉后方可计数。沉积时间短，结果偏低。但过长，计数

池中稀释液容易蒸发，尤其是夏季。所以最好将计数板放入温室中。

8.用尿素稀释液，一般应在1h内计数完毕，放置时间过长，计数结果偏低..

（六）质量控制

血小板计数质控较难，但应按操作规程，并认真参照注意事项，减少血小板聚集，破坏，排除干扰，切实辨认血小板形态，减少误认。此外，还可根据经验进行质控，即在血片上观察血小板与红细胞密度比例，估计血小板数量。根据陈缃介绍：梅10个油镜视野血小板之和乘以2000，约为每微升血中血小板数。